榼藤子总皂苷改善胰岛素抵抗机制的初步研究

目的:研究榼藤子总皂苷对2型糖尿病大鼠模型胰岛素敏感性的影响,利用HepG-2胰岛素抵抗细胞模型初步研究其可能的分子机制。方法:①通过高脂饲料喂养结合注射小剂量链脲佐菌素(STZ)建立II型糖尿病大鼠模型。实验大鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组(二甲双胍,200 mg.kg-1)、榼藤子总皂苷低、中、高剂量组(25,50,100 mg.kg-1)。待约4周模型成立后,各组ig给药观察榼藤子总皂苷对糖尿病模型大鼠胰岛素敏感性的影响。②用含0.25 mmol.L-1软脂酸和3%BSA的DMEM培养基刺激HepG-2细胞48 h建立胰岛素抵抗细胞模型,实验分正常组、模型组、阳性对照组(二甲双胍,2 mmol.L-1)、榼藤子总皂苷低、高质量浓度组(50,100 mg.L-1)。采用Western blot方法比较各种处理下蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(PTP-1B)蛋白的表达水平。结果:2型糖尿病大鼠ITT数据显示,同模型组相比,榼藤子总皂苷各给药组的胰岛素敏感性均有所提高。在正常情况下,HepG-2细胞内PTP-1B的表达水平能被胰岛素下调;而在HepG-2细胞胰岛素抵抗模型细胞中,PTP-1B较正常组表达增加,且其表达水平不再受胰岛素调控,榼藤子总皂苷处理可以明显缓解这种状况。结论:榼藤子总皂苷能够改善2型糖尿病大鼠模型的胰岛素耐受,可能是通过影响PTP-1B的表达水平改善肝细胞胰岛素耐受。     

傣药榼藤子仁及榼藤子总皂苷的镇痛作用研究

目的：对傣药榼藤子仁生品、炮制品以及榼藤子皂苷进行镇痛作用研究。方法：一次性灌胃小鼠O．5h、1h后,分别测定实验小鼠对热板致疼痛、红外辐射致疼痛、压痛致疼痛痛阈,以及给药0．5h后ip0．6％醋酸10ml／kg,25min内的扭体次数,观察榼藤子仁生品、炮制品以及榼藤子皂苷对小鼠的镇痛作用。结果：当灌胃小鼠给药0．5h后,榼藤子生品剂量8．0g生药／k时,实验小鼠对热板致疼痛、红外辐射致疼痛以及压痛致疼痛,均显示显著镇痛作用,但与此生药剂量相当的榼藤子炮制品及皂苷未见显著镇痛作用;给药后1．0h,榼藤子生品、炮制品及皂苷未见显著镇痛作用。对于醋酸致小鼠扭体实验,榼藤子生品、炮制品、皂苷均能显著减少醋酸引起的扭体反应次数,抑制活性与剂量相关。榼藤子生品和炮制品剂量4．0g生药／k时即显示显著镇痛作用,但与此生药剂量相当的榼藤子皂苷未见显著镇痛作用;当剂量增加至相当于10．0、20．0生药／kg时,榼藤子皂苷具有显著镇痛作用。结论：榼藤子生品、炮制品以及榼藤子皂苷均有不同程度的镇痛作用,其作用机理有待于进一步研究。     

榼藤子生品和炮制品总皂苷体内抗肿瘤作用

目的:考察榼藤子生品和炮制品总皂苷体内抗肿瘤作用.方法:荷瘤小鼠随机分为8组,接种后第2天给药,连续10 d,模型对照组ig以等量生理盐水,阳性对照组腹腔注射顺铂3 mg· kg -1,低、中、高剂量榼藤子生品、炮制品总皂苷组分别ig 0.25,0.5,1 g·kg-1剂量.观察榼藤子总皂苷的肿瘤抑制作用;计算抑瘤率、胸腺指数、脾指数、肝脏指数;测定血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平.结果:榼藤子生品高、中、低剂量组的抑瘤率分别为58.86％,49.52％,43.45％,榼藤子炮制品高、中、低剂量组的抑瘤率分别为59.41％,48.81％,44.59％,榼藤子生品及炮制品总皂苷还能提升荷瘤小鼠血清SOD的活力,降低MDA水平.结论:榼藤子生品和炮制品总皂苷具有抗小鼠肿瘤作用,并可增强抗氧化能力.     

榼藤子种仁化学成分研究

 目的研究豆科植物植藤子[Entada phaseoloides(L.)Merr.]种仁的化学成分。方法采用硅胶,Sephadex LH-20等分离纯化,通过理化常数测定和现代波谱学技术(MS、¹H-NMR、¹³C-NMR)进行结构鉴定。结果分离得到8个化合物,分别为2,5-二羟基苯乙酸乙酯(1),2,5-二羟基苯乙酸甲酯(2),5-羟基-苯并呋喃-2-酮(3),榼藤酰胺A(4),硬脂酸甲酯(5),β-谷甾醇(6),胡萝卜苷(7),豆甾醇(8)。结论化合物1,3,5,7,8为首次从该属植物中分离得到,6为首次从该植物中分离得到。     

穿山龙总皂苷对哮喘小鼠BRP-39表达及PI3K/AKT信号通路的影响

目的观察穿山龙总皂苷对哮喘小鼠乳腺回归蛋白(BRP-39)表达及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路的影响。方法采用卵白蛋白(OVA)注射、雾化吸入致敏BALB/c小鼠复制慢性哮喘模型,将造模成功的50只小鼠随机分成空白组、模型组、穿山龙总皂苷组、醋酸泼尼松组和联合治疗组,每组10只。在实验第18～55天,空白组和模型组以生理盐水灌胃,穿山龙总皂苷组予穿山龙总皂苷40 mg/(kg·d)灌胃,泼尼松组给醋酸泼尼松5 mg/(kg·d)灌胃,联合治疗组予穿山龙总皂苷20 mg/(kg·d)加醋酸泼尼松2.5 mg/(kg·d)灌胃。采用HE染色观察各组小鼠气道重塑情况;采用免疫组化和Western Blot检测各组肺组织BRP-39表达及PI3K/AKT信号通路激活水平。结果与空白组比较,模型组小鼠可见气道重塑改变,经穿山龙总皂苷或醋酸泼尼药物干预后各组均有改善。免疫组化和Weston Blot检测显示:与空白组比较,模型组BRP-39、PI3K、AKT蛋白表达均升高(P<0.01);与模型组比较,各药物干预组BRP-39、PI3K、AKT蛋白表达均降低(P...     

基于PI3K/Akt信号通路探讨龙牙楤木总皂苷抗心肌缺血再灌注损伤的机制

目的 基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路探讨龙牙楤木总皂苷抗心肌缺血再灌注损伤的机制。方法 将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、龙牙楤木总皂苷组、LY29004组、LY29004+龙牙楤木总皂苷组，每组10只。除假手术组外，其余组利用Langendorff离体心脏灌流装置，通过结扎左冠状动脉前降支30 min、复灌75 min的方法构建离体大鼠心脏再灌注模型。模型组采用K-H液恒速灌流；龙牙楤木总皂苷组和LY29004组分别采用含5 mg/L龙牙楤木总皂苷的K-H液和含15μmol/L LY29004的K-H液恒速灌流；LY29004+龙牙楤木总皂苷组先给予含15μmol/L LY29004的K-H液灌流15 min,再以含5 mg/L龙牙楤木总皂苷的K-H液灌流60 min。采用Western blot法检测心肌组织中PI3K/Akt信号通路相关蛋白[Akt、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、糖原合酶激酶3β(GSK-3β)、磷酸化糖原合酶激酶3β(p-GSK-3β)]表达情况，免疫组化法检测心肌组织中凋亡相关蛋白[半胱氨酸天门冬氨酸酶3(Caspase-...     

鹰嘴豆总皂苷对2型糖尿病大鼠的抗氧化作用

目的:观察鹰嘴豆总皂苷(TSCA)对2型糖尿病大鼠抗氧化作用的影响。方法:以高脂饲料喂养后的雄性Wister大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病模型,造模动物分别灌胃给予鹰嘴豆总皂苷低剂量100 mg/kg、高剂量300 mg/kg,4周后,测定各组大鼠肝脏、肾脏、肺、骨骼肌等组织中相关抗氧化指标。结果:与糖尿病模型组相比,鹰嘴豆总皂苷100 mg/kg、300mg/kg剂量均能升高肝脏、肾脏、骨骼肌、肺组织中的TSOD、GSH-Px活力,升高肝脏、肾脏、骨骼肌中CAT活力,降低MDA含量,降低肺组织中的CAT活力。结论:鹰嘴豆总皂苷能够改善2型糖尿病大鼠的抗氧化能力。     

基于网络药理学和实验验证黄芪甲苷和三七总皂苷配伍调控血管生成抗脑缺血作用机制

采用网络药理学结合体内、外实验验证探讨黄芪甲苷(astragalosideⅣ,ASTⅣ)配伍三七总皂苷(Panax notoginseng saponins, PNS)调控血管生成治疗脑缺血的作用机制。运用网络药理学预测ASTⅣ和PNS通过介导血管生成治疗脑缺血的可能机制。体内实验：SD大鼠随机分为假手术组、模型组、ASTⅣ(10 mg·kg^-1)+PNS(25 mg·kg^-1)组,大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)法建立脑缺血模型。ASTⅣ及PNS灌胃给药,每天2次。采用Longa法测定神经功能缺损症状;苏木素-伊红(HE)染色观察脑组织病理损伤;免疫组化测定血友病因子(von Willebrand factor, vWF)的表达;免疫荧光测定血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)的表达;蛋白质印迹法检测脑组织血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor recept...     

基于网络药理学的四君子汤治疗2型糖尿病的作用机制研究

目的通过网络药理学预测四君子汤治疗2型糖尿病(T2DM)的主要活性成分和作用靶点,探讨其多成分-多靶点-多通路的潜在作用机制;并选取AMPK信号通路中的Ins R、PI3K进行动物实验验证。方法通过中医药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)、文献挖掘和本课题组已有研究收集四君子汤及其4味中药党参、白术、茯苓、甘草的化学成分,经口服生物利用度(OB)、类药性(DL)、半衰期(HL)3个条件筛选得到药物的有效成分,通过Swiss Target Prediction数据库进行有效成分靶点预测;同时从TTD、Drugbank和Dis Ge NET数据库对T2DM的靶点进行检索及筛选;成分靶点与疾病靶点映射后使用Cytoscape3.2.1软件构建药物有效成分-靶点蛋白相互作用网络,对该网络进行拓扑学分析筛选节点自由度(degree)≥平均自由度的节点得到核心有效成分-核心靶点网络,同时使用String数据库绘制核心靶点蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络;对核心靶点基因利用DAVID数据库进行GO分析和KEGG分析,构建核心有效成分-核心靶点-代谢通路网络图,探讨四君子汤治疗T2DM的潜在作用机制。采用系统对接网站进行相关度前3蛋白对相关度前5成分的分子对接。并进一步采用动物实验进行验证:选取SD大鼠,运用高糖高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导T2DM模型,5.65 g/kg四君子汤ig给药28 d,检测各组大鼠的空腹血糖(FBG)及口服葡萄糖耐量(OGTT),RT-PCR法检测AMPK信号通路中Ins R、PI3Km RNA的表达量。结果从四君子汤中筛选出113个化学成分,涉及治疗T2DM的47个靶点;根据节点自由度≥平均自由度,筛选出核心成分22个,核心靶点27个;GO分析结果表明其涉及血糖稳态、脂肪组织发育的正调控等7个生物过程,涉及类固醇激素受体活化、药物结合等4个分子功能,包括质膜、核常染色质2个细胞组成;KEGG分析结果表明其可能通过AMPK信号通路、PPAR信号通路、胰岛素抵抗等14个信号通路治疗糖尿病。分子对接60%成分具有强烈的结合活性,40%成分具有较强的结合活性。四君子汤可显著改善T2DM大鼠OGTT(P<0.001),同时降低FBG(P<0.01),显著升高Ins R、PI3K mRNA(P<0.001)的表达量,验证了网络药理学的部分预测结果。结论四君子汤通过多靶点、多通路治疗T2DM,为其分子机制的研究奠定一定的基础。     

榼藤子生品与炮制品HPLC指纹图谱研究

目的:建立榼藤子生、炮制品HPLC指纹图谱的评价方法,分析各样品指纹图谱的变化。方法:采用HPLC-UV分别对榼藤子生品和炮制品的指纹图谱进行研究,用HPLC-ESI-MS对其生品共有峰进行鉴定。结果:标示出生品16个共有峰,炮制品21个共有峰,应用HPLC-MS和对照品保留时间的对应初步鉴定了其中9个共有峰,主要为榼藤子三萜皂苷类和其他糖苷类成分的吸收峰。结论:榼藤子生品炮制后,60%甲醇提取液中部分化学成分含量有不同程度的下降或上升,指纹图谱的主峰数目也有变化,说明该法可以较全面地反映榼藤子炮制前后化学成分的差异,用于控制生品和炮制品的内在质量。     

盾叶薯蓣药材甾体总皂苷成分HPLC-ELSD指纹图谱的研究

建立不同产地盾叶薯蓣药材中甾体总皂苷成分HPLC-ELSD指纹图谱的方法.采用Welchrom C₁₈(4.6 mm ×250 mm,5 μm)色谱柱,乙腈(A)-水(B) 作为流动相,梯度洗脱;柱温室温;体积流速1.0 mL·min^-1;蒸发光散射检测器条件:漂移管温度90.0℃,载气(N₂)流速2.8 L·min^-1;进样体积10 μL.通过检测10个批次盾叶薯蓣药材,首次建立了盾叶薯蓣甾体总皂苷成分HPLC-ELSD指纹图谱的共有模式,确定了25共有峰,并利用对照品对照法对其中的10个共有峰进行了成分指认.以共有模式对10批药材进行相似度评价,其相似度全部大于0.80.该方法准确、可靠、重复性好,为全面评价和控制盾叶薯蓣药材的质量提供了科学依据.     

合欢皮总皂苷抗肿瘤作用靶点鉴定与分子机制解析

合欢皮作为常用中药,临床常用于治疗失眠、焦虑、肿瘤等。现代药理中针对合欢皮总皂苷(TSAJ)抗肿瘤活性多有报道,但由于单体成分分离困难,药理机制难以开展。该研究采用MTT法和Hoechst 33258染色法,确认了TSAJ对肝癌细胞的生长抑制作用,构建了表面修饰有TSAJ的固相亲合微球,利用该固相微球特异性地从人肝癌细胞裂解液中富集靶点蛋白,再利用高分辨质谱对富集到的靶点蛋白进行鉴定。采用Matabo Analyst 3.0处理数据,筛选并确定了Exportin-2,Beta-actin-like protein 2,Myosin-9,Protein transport protein Sec61 subunit beta,Cytochrome c oxidase copper chaperone等5个靶点蛋白。这些蛋白分别具有调控细胞凋亡及细胞生长、分化、运动等功能,提示TSAJ的抗肿瘤机制可能与诱导细胞凋亡及抑制肿瘤血管生成有关。综上所述,该研究利用TSAJ修饰的固相亲和微球,特异性富集并鉴定了TSAJ的靶点蛋白,从靶点源头上解释了TSAJ抗肿瘤作用机制,同时也为中药复杂体系的分子药理机制研究提供了一种全新的思路。     

不同采收期及加工条件对川麦冬总黄酮和总皂苷含量的影响

目的:研究川麦冬Ophiopogon japonicus块根生长发育期总黄酮和总皂苷的动态积累规律,比较不同加工条件对其含量的影响。方法:应用紫外-可见分光光度法对不同生长期以及不同加工条件的麦冬药材进行总皂苷和总黄酮的含量测定。结果与结论:川麦冬总黄酮和总皂苷的含量在12月至次年1月的块根形成初期中稍有降低;2月至3月底是麦冬总黄酮和总皂苷的主要积累期;进入4月份后麦冬总黄酮和总皂苷的含量趋于稳定,5月初麦冬总黄酮和总皂苷的含量下降,此后,麦冬总黄酮和总皂苷的含量有所起伏;部分加工方法对麦冬总黄酮和总皂苷含量也有一定影响。     

牛膝总皂苷对卒中型自发性高血压大鼠的影响

目的:牛膝总皂苷对卒中型自发性高血压大鼠(SHRsp)卒中后血压、存活时间及平均寿命、神经症状、脑系数的影响.方法:将SHRsp大鼠随机分为牛膝总皂苷高、中、低剂量组(0.40,0.20,0.10 g·kg-1)、华佗再造丸组(2.5 g·kg-1)和模型组,正常组为SD大鼠,每组10只,连续给药20 d.观察牛膝总皂苷对SHRsp卒中后血压、神经状态变化、死亡率、脑系数及对海马区神经元的影响.结果:牛膝总皂苷可降低SHRsp大鼠血压,改善SHRsp脑卒中后的神经症状,延长卒中后存活时间,降低脑系数,降低脑卒中后大鼠死亡率,保护海马区神经元.结论:牛膝总皂苷对实验性SHRsp脑卒中有一定治疗作用.     

鹰嘴豆总皂苷对2型糖尿病大鼠血糖及胰腺病理结构的影响

目的:观察鹰嘴豆总皂苷(TSCA)对2型糖尿病大鼠血糖及胰腺病理结构的影响。方法:高糖高脂饲料喂养加链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型。将造模成功大鼠随机分为模型组和鹰嘴豆总皂苷治疗组,灌胃给药,另设正常对照组,给药2周后,检测空腹血糖值(FPG)、并对胰腺组织进行病理学观察。结果:与模型组相比,鹰嘴豆总皂苷各剂量组均可有效降低2型糖尿病大鼠的血糖,对损伤的胰岛有一定的修复作用。结论:鹰嘴豆总皂苷各剂量组可有效降低2型糖尿病大鼠空腹血糖,并改善损伤胰岛的病理结构。     

滇重楼总皂苷含量和菌根侵染率与土壤因子的关系

目的:通过滇重楼总皂苷含量和AM菌根侵染率与根际土壤性质的相关研究和通径分析,探讨土壤因子在滇重楼品质形成中的作用.方法:测定了25个主要分布区滇重楼根茎总皂苷含量、土壤理化性质和养分状况、根系AM菌根侵染率,并应用相关分析和通径分析研究了滇重楼总皂苷含量和菌根侵染率与土壤因子的关系.结果:在自然条件下,滇重楼根系能与AM真菌形成良好的共生关系,侵染率在36.41％～83.37％.总皂苷与脲酶活性、碱性磷酸酶活性、有机质含量呈显著正相关,与土壤容重呈显著负相关.AM菌根侵染率与碱解氮呈显著正相关.通径分析结果表明,滇重楼总皂苷含量主要受其根际土壤碱解氮的影响,其次为土壤有机质和脲酶活性.而菌根侵染率主要受土壤pH制约,其次为碱解氮、脲酶活性和速效磷.结论:滇重楼品质形成与土壤因子密切相关,通径分析更能反映土壤因子对滇重楼总皂苷含量和菌根侵染率的贡献.