miRNA在下咽癌中的作用机制及其研究进展

下咽鳞状细胞癌是较为常见的头颈部侵袭性恶性肿瘤之一,尽管医疗水平已有较大进步,但由于其发病位置隐蔽,症状出现较晚,易发生淋巴结转移,导致患者预后较差.微小RNA已被报道参与广泛的生物学过程,成为癌症发生和发展过程中的关键调控者.本文就在下咽癌中异常表达的微小RNA调控机制及研究进展做一综述.     

长链非编码RNA在头颈肿瘤中的异常表达

头颈肿瘤是全球最常见的恶性肿瘤之一，主要有喉癌、鼻咽癌、下咽癌和甲状腺癌等。长链非编码RNA（long noncoding RNAs，lncRNAs）已被报道参与广泛的生物学过程，特别是癌症发生和发展过程中的关键调控者。本文就在头颈肿瘤中异常表达的lncRNAs调控机制及研究进展做一综述。     

下咽癌远处转移的相关因素研究进展

下咽癌是头颈部最常发生远处转移的肿瘤,一旦发生远处转移往往预后极差。远处转移是影响下咽癌预后的主要决定因素,也是临床决策的重要因素。然而,下咽癌远处转移的预防或早期治疗策略仍然是一个极大的挑战。因此,探索下咽癌远处转移相关影响因素,对下咽癌的临床诊断、治疗及改善预后问题至关重要。本文就下咽癌远处转移的部位,下咽癌远处转移的相关因素以及下咽癌远处转移的过程做一综述。     

下咽癌中差异表达的蛋白激酶及其抑制剂的生物信息学筛选

目的 筛选下咽癌中差异表达的激酶基因及其选择性抑制剂,为下咽癌的分子靶向治疗提供新的参考。 方法 利用GEO数据库和SAM软件筛选下咽癌中差异表达的激酶基因,体外培养人下咽癌FaDu细胞系。为验证GEO数据库中芯片结果的准确性,利用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测差异表达激酶在FaDu细胞中的表达量,通过KEGG数据库获得激酶调控的通路,利用激酶抑制剂数据库和文献挖掘筛选获得在下咽癌FaDu细胞系中差异表达激酶的选择性抑制剂。 结果 (1)在GEO数据库的下咽癌基因组表达谱中,共筛选出3个高表达的激酶基因,分别为PKC-β、CDK6和CDC42(差异倍数≥2.0且P<0.05);(2)Real-time PCR结果显示在人下咽癌FaDu细胞中这3个上调激酶基因也出现高表达(P<0.05),证明全基因组的结果准确;(3)KEGG通路分析的结果显示3个高表达激酶调控复杂的通路网络;(4)激酶抑制剂的筛选结果显示共有5个激酶抑制剂调控PKC-β, 4个激酶抑制剂调控CDK6,3个激酶抑制剂调控CDC42。文献挖掘的结果显示在这12个激酶抑制剂中,有4个在癌症方面的研究较少,文献<10篇。 结论 下咽癌中共有3个激酶PKC-β、CDK6和CDC42发生高表达,并发挥促癌作用。它们的激酶抑制剂可能有潜在的抗癌作用,为下咽癌的分子治疗提供新的切入点。     

CD44基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建CD44基因RNA干扰（RNA interference,RNAi）慢病毒表达载体并在下咽癌FaDu细胞株上鉴定其沉默效率,为研究目的基因沉默后下咽癌肿瘤细胞致瘤性的改变提供稳定可靠的载体。方法针对目的基因CD44mRNA的序列,按照RNA干扰序列的设计原则,设计、合成4个CD44基因特异性小分子干扰iRNA（small interference RNA,siRNA）靶点,将其合成短发卡hRNA（short hairpin RNA,shRNA）并退火成双链DNA,与慢病毒载体重组形成shRNA表达载体,利用PCR和测序鉴定获取正确克隆。将筛选出的最有效重组载体与慢病毒包装质粒共转染293T细胞并测定病毒滴度。随后将其感染下咽癌FaDu细胞株细胞,采用Real-time PCR检测靶基因的沉默效率。结果对LV-CD44-shRNA载体进行双酶切鉴定,证实短发夹RNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入序列正确,CD44基因RNA干扰重组慢病毒载体经293T细胞成功包装后,其病毒滴度为8E＋8TU/ml。RNA干扰下咽癌FaDu细胞CD44基因后,CD44 mRNA水平显著下降,干扰效率大于70%。结论成功构建了CD44基因的shRNA慢病毒表达载体,能够在细胞水平有效沉默靶基因,为CD44基因沉默后下咽癌肿瘤细胞生物学改变的研究打下了较坚实的基础。     

长链非编码RNA在下咽鳞状细胞癌发病机制中的作用[综述]

长链非编码RNA（long non-coding RNAs,lncRNA）几乎参与了细胞生物学的各个方面,异常表达的lncRNA可以导致多种人类疾病,包括癌症。下咽鳞状细胞癌是常见的头颈部恶性肿瘤之一,研究发现多种lncRNA在该肿瘤中异常表达,可作为下咽鳞状细胞癌早期诊断及评估预后的标志物。本文对国内外相关文献中报道与下咽鳞状细胞癌关系紧密的lncRNA进行综述,期望为找到下咽癌的生物标志物和基因靶向治疗提供依据。     

RKIP在下咽癌中的表达及意义

目的探讨Raf 1激酶抑制蛋白（Raf 1 kinase inhibitor protein, RKIP）在下咽癌中的表达及其临床意义,通过与癌旁组织RKIP的表达比较,分析RKIP在下咽癌的发生、发展及转移中的作用以及癌旁下咽鳞状上皮中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化方法检测46例下咽鳞癌及13例癌旁下咽鳞状上皮组织中RKIP的表达情况。对实验结果进行χ2检验及Wilcoxon检验。结果RKIP在下咽鳞癌中的表达低于癌旁下咽鳞状上皮,差异具有统计学意义（P=0.034）。RKIP在有转移的下咽癌中表达低于无转移的下咽癌,差异具有统计学意义（P=0.020）。RKIP在高、中、低不同分化程度的下咽癌中表达阳性率逐渐下降,差异具有统计学意义（P=0.005）。结论下咽癌的分化程度与RKIP的表达有关,下咽癌淋巴结转移的发生与RKIP低表达及缺失有关。     

衣被蛋白复合体-亚基β2调控ERK/MEK通路在下咽癌中作用的研究[论著]

目的　分析衣被蛋白复合体-亚基β2（coatomer protein complex subunit β2,COPB2）在下咽癌发生发展中的作用及机制。方法　应用TCGA数据库分析COPB2在下咽癌中的表达水平,并在下咽癌细胞系（FaDu）中检测COPB2基因敲减后对细胞增殖的影响,探索COPB2在下咽癌细胞增殖中的作用。Western blot分析COPB2基因可能的作用机制及通路。结果　通过TCGA数据库数据分析566例组织样本测序信息,相较于癌旁组织,COPB2基因在下咽癌组织中高表达（t =-3.098,P =0.005）,并在肿瘤组织样本中得到验证。体外实验显示,COPB2敲减后抑制细胞增殖（敲减组平均表达量为43.400,空白对照组为105.600,P =0.000）,过表达后促进细胞增殖（P =0.011）。COPB2的调控可能是通过ERK/MEK信号通路发挥作用。结论  COPB2基因在下咽癌的发生发展中起到一定的作用,并对ERK/MEK通路产生影响。     

下咽癌中差异表达的蛋白激酶及抑制剂的研究进展

在头颈恶性肿瘤中,下咽癌恶性程度高,患者生存质量较差且通常预后不良。下咽癌的治疗采用手术为主的方式,并辅助以放化疗。术后患者喉功能受损严重,寻找能够尽量保护喉功能的治疗方法是目前研究的重点。靶向治疗对下咽癌患者保护喉功能、提高生存质量意义重大。研究发现,下咽癌发生过程中涉及多种蛋白激酶介导的信号通路及基因,对可能在这一过程中有重要意义的蛋白激酶PKC-β、CDK4/6、Cdc42、Rac1、STK33、CK2和PHLPP作一综述,以期为蛋白激酶抑制剂作为下咽癌治疗的靶点提供新的方向。     

GSK-3β和MIF蛋白在下咽癌组织中的表达及意义

目的研究糖原合成酶激酶-3β（giycogen syntlase kinase 3β,GSK 3β）和巨噬细胞移动抑制因子（macrophage migration inhibitory factor,MIF）蛋白在下咽癌组织中的表达,探讨二者在下咽癌发生、发展中的作用及二者相关性。方法应用免疫组织化学方法检测46例下咽癌组织、癌旁组织及20例下咽正常黏膜组织中GSK 3β和MIF蛋白表达情况。结果①GSK 3β蛋白在下咽癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织和正常下咽黏膜组织（P<0.05）;② MIF蛋白在下咽癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织和正常下咽黏膜组织（P<0.05）;③GSK 3β蛋白在下咽癌组织中的表达与淋巴结转移、临床分期、病理分级有相关性（P<0.05）;④MIF蛋白在下咽癌组织中的表达与淋巴结转移、临床分期有相关性（P<0.05）;⑤GSK 3β和MIF蛋白在下咽癌组织中表达无相关性。结论GSK 3β和MIF蛋白表达与下咽癌的发生、发展可能有关。     

谷胱苷肽S转移酶M1和T1基因多态性与喉及下咽癌易感性的关系

目的：研究谷胱苷肽S转移酶M1（GSTM1）、谷胱苷肽S转移酶T1（GSTT1）基因多态性与喉及下咽癌易感性的关系。方法：采用多重PCR技术,对76例喉、下咽癌患者（患者组）和与之匹配的76例对照组进行GSTM1、GSTT1基因型检测。结果：患者组与对照组GSTM1基因缺失频率分别为59.2%和42.1%,差异有统计学意义（P〈0.01）,GSTM1基因缺失与喉、下咽癌易感性有关（OR=1.935,95%CI=1.069～3.510）;GSTT1基因缺失频率分别为57.9%和51.3%,差异无统计学意义。联合分析未发现两种基因在喉、下咽癌发生中具有协同作用。GSTM1基因缺失同时暴露于吸烟者患喉、下咽癌的风险性显著增加（OR=5.545,95%CI=2.158～13.528）。结论：GSTM1基因缺失可能增加个体患喉、下咽癌的易感性,且与吸烟在喉、下咽癌的发生中具有协同作用。GSTT1基因型可能与本市区喉、下咽癌发生无关。     

诱导化疗在局部晚期下咽癌治疗中的意义

下咽癌发生位置隐蔽,早期症状不明显,超过2/3的下咽癌临床上初诊时为中晚期,是头颈肿瘤中预后较差的一种恶性肿瘤。近年来,倡导手术、放疗与化疗相结合的综合治疗模式以改善预后。诱导化疗在器官保留以及减少远处转移上的治疗价值日渐受到重视。但在实际临床工作中,主管医师对指南和各治疗手段利弊的理解以及临床经验的差异,诱导化疗在局部晚期下咽癌治疗中的作用仍存在争议。如何根据患者的全身和局部情况在众多的治疗方法中选择最合理的治疗手段是下咽癌治疗过程中一直在探讨的问题。通过文献回顾和个案剖析讨论诱导化疗在局部晚期下咽癌治疗中的作用。     

CDK4与下咽癌病变的相关性及其生物学行为的初步研究

目的探讨CDK4与下咽癌病变的相关性及其生物学行为的关系.方法应用免疫组化S-P法检测下咽鳞状细胞癌53例,癌旁正常黏膜11例中CDK4在下咽癌组织及正常黏膜中的表达.结果CDK4在下咽癌中呈弥漫性细胞核表达,阳性率高于正常黏膜,CDK4与T分级、N分级呈明显的正相关,相关系数分别为0.524、0.316,经统计学分析与下咽癌其他临床指标间差异无显著性.结论CDK4在下咽癌病变过程中可能起重要作用.     

基质金属蛋白酶-2，9在下咽癌中的表达及其与淋巴结转移的相关性

目的 :探讨基质金属蛋白酶 2 ,9(MMP 2 ,9)与下咽癌组织生物学行为及其与淋巴结转移的相关性。方法 :运用免疫组织化学二步法检测下咽癌组织中MMP 2 ,9抗体的表达。结果 :32例下咽癌组织中MMP 2表达阳性率为 5 3.12 % ,MMP 9为 5 9.38%。MMP 2 ,MMP 9在癌旁正常黏膜中与下咽癌组织中的表达差异均具有统计学意义 (均P <0 .0 1) ;发生淋巴结转移者与未发生转移者的染色差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论 :MMP 2 ,9可能与下咽癌的淋巴结转移有关。     

衣被蛋白复合体-亚基β2调控ERK/MEK通路在下咽癌中作用的研究

目的 分析衣被蛋白复合体-亚基β2(coatomer protein complex subunitβ2,COPB2)在下咽癌发生发展中的作用及机制.方法 应用TCGA数据库分析COPB2在下咽癌中的表达水平,并在下咽癌细胞系(Fa D u)中检测COPB2基因敲减后对细胞增殖的影响,探索COPB2在下咽癌细胞增殖中的...     

整合素β1在下咽鳞癌组织中的表达及其临床意义

目的研究下咽鳞状细胞癌中整合素β1（Integrinβ1）表达及其与临床病理特征的关系,探讨其在下咽鳞状细胞癌发生、发展过程中的作用。方法采用免疫组化PV-9000二步法,检测50例下咽鳞状细胞癌及20例癌旁黏膜组织中的Integrinβ1表达水平,应用Image-ProPlus图像分析软件测定免疫组化图像的平均光密度（mean optical density,MOD）。结果 Integrinβ1蛋白在下咽鳞状细胞癌及癌旁黏膜组织中的阳性表达率分别为78.00%和35.00%,两者比较差异具有统计学意义（P=0.001）,两组MOD值差异具有统计学意义（P〈0.05）;Integrinβ1的表达与不同临床分期、组织学分级和是否伴淋巴转移相关（P〈0.05）;Integrinβ1与年龄、性别、吸烟史和原发部位的下咽鳞癌组别间的表达无关（P〉0.05）。结论 Integrinβ1在下咽鳞状细胞癌组织中高表达可能介导了癌组织黏附和浸润,检测Integrinβ1可能对评估下咽鳞癌的生物学特性和临床特点有一定意义。     

P63和MDM2在下咽癌中的表达

目的探讨下咽癌中蛋白质P63和MDM2的表达及其与癌增殖和分化的关系.方法采用免疫组化(envision)法分析33例下咽癌中P63和MDM2的表达.结果P63蛋白表达阳性率正常上皮为55.0%,癌旁组织为93.3%,下咽癌组织为90.9%;MDM2蛋白表达阳性率正常上皮为5.0%,癌旁组织为66.6%,下咽癌组织为51.5%,P63蛋白与MDM2蛋白表达在正常上皮、癌旁组织、下咽癌组织差异均有显著性(P＜0.05).P63与MDM2无显著相关性.结论P63和MDM2基因在下咽癌发生、发展中有重要作用.     

下咽部狭窄

下咽部狭窄是喉全切除术后比较常见的合并症。本文对1976年至1982年中的112例喉癌手术做了回顾性研究。其内容包括:癌的侵犯部位、瘘的发生率、放射治疗及喉全切除术后重建方法,从而提出造成下咽部狭窄的可能因素。作者指出,98%的下咽部狭窄发生在术后一年内,而不是癌的复发。下咽部狭窄依据病人主诉吞咽困难、吞服钡剂明确狭窄部位、及需扩张维持吞咽功能作出诊断。分析结果表明,下咽部狭窄的发生和部位与术腔重建方法有关。对放射治疗和瘘的形成未做更多的研究,似乎与下咽部狭窄的关系不大。从资料中得知发生下咽部狭窄的百分率:声门癌术后有20%,声门上癌术后有31%,而梨状窝     

人喉癌下咽癌组织中转化生长因子β1基因的检测

目的 :检测喉癌下咽癌组织中转化生长因子 β1(TGF β1)mRNA的表达 ,探讨其在喉癌、下咽癌发生发展中的可能作用。方法 :取 2 0例喉癌、下咽癌患者术后新鲜组织标本 ,用半定量的逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测TGF β1的mRNA表达。结果 :检测 2 0例标本 ,其中 17例TGF β1表达阳性 ,且Ⅲ～Ⅳ期表达较Ⅰ～Ⅱ期强。结论 :TGF β1在喉癌、下咽癌中的表达可能是导致喉癌、下咽癌患者免疫功能低下 ,促进肿瘤生长的原因之一     

用带血管蒂粘膜瓣及上段气管修理下咽和重建食管上段

目的：探讨广泛侵犯的下咽癌或原发于咽后壁癌术后创面的修复和食管上段重建的方法。方法：报告２例广泛下咽癌同时有食管上段侵犯和１例咽后壁癌,在切除下咽及颈段食管肿瘤后,利用未被肿瘤侵犯的喉和气管上段粘膜修复缺损区。结果：２例广泛侵犯的下咽癌术后均发生短时间咽瘘,其中１例随访３年健康,１例２年后局部复发放弃治疗;另１例咽后壁癌随访１年半健在。结论：广泛侵犯的下咽癌术后利用未被肿瘤侵犯的喉和气管修复创面和