CD8~+T细胞耗竭及靶向CD8~+T细胞免疫治疗的研究进展

T细胞耗竭是慢性感染和肿瘤状态下T细胞发生的一种功能障碍状态。耗竭T细胞效应功能低下,持续高表达抑制性受体,表达转录因子谱与效应和记忆T细胞明显不同。耗竭状态削弱T细胞对感染和肿瘤的有效控制,导致慢性持续感染和肿瘤发生。耗竭T细胞的分化特征、表型标志和功能逆转对临床抗感染和抗肿瘤具有重要的指导意义。靶向耗竭T细胞的免疫治疗已经在实验动物模型和临床治疗研究中获得了较为理想的效果。为此,本文对CD8~+T细胞耗竭特点、影响因素、表型功能与临床治疗等作一综述。     

CD8+ T 细胞活化与分化的分子机制

CD8+ T 细胞识别由MHC玉分子递呈的抗原肽,由于大多数有核细胞都表达MHCⅠ分子,因此CD8+ T 细胞在清除被病毒、胞内菌、寄生虫等感染的细胞或突变的肿瘤细胞中发挥着重要作用。识别病原微生物等抗原后,CD8+ T 细胞活化并分化形成多种类型的效应和记忆细胞,不仅能及时清除被感染的细胞,也能形成长期保护。各亚群CD8+ T 细胞的表面分子、功能和定位不同,细胞存活的时间、再次感染时的增殖能力和效应功能也有所差别。本文主要讨论CD8+ T 细胞如何受到多条信号通路和转录因子调控,活化和分化成不同类型的效应和记忆细胞,并对临床应用T 细胞抵御肿瘤和病原微生物的进展作一简单概述。     

CD4~+和CD8~+T细胞亚群经CD3和CD2途径活化后白细胞介素2产生的诱导

纯化的静息T 细胞经CD3途径活化后能导致白细胞介素2(IL-2)受体表达,但无IL-2合成,IL-2的合成需第二个活化信号,即辅助细胞或PMA。此外,经CD3活化的T 细胞若加入抗CD2单抗能合成IL-2并进行DNA 合成。如果加入识别CD2分子不同表位的两种单抗亦可诱导T 细胞的DNA 合     

献血员CD8+T细胞的增加对CD4+T细胞的抑制作用

实验发现 6 5 %体检合格的献血员外周血CD8+T细胞数量明显增加 ,并伴随CD16 +淋巴细胞数量的增加。这些异常的淋巴细胞与葡萄球菌肠毒素B (SEB )共同培养 6d ,CD4+T细胞无增殖反应。预先用抗CD8抗体去除CD8+T细胞 (去除率 >90 % )再用SEB刺激淋巴细胞 ,其应答能力恢复正常。增殖的细胞是CD4+T细胞 ,它们由 34 0 4%增加到 99 34%。CD8+T细胞由最初的 9 5 7%降低到 0 12 %。这些结果显示过量的CD8+T细胞有可能是被外原性抗原活化的T细胞。它们直接抑制CD4+T细胞对SEB的免疫应答反应 ,但不破坏CD4+T细胞的TCRVβ结构。     

趋化因子CXCL12及其配体CXCR4、CXCR7对HER2阳性乳腺癌细胞生物学功能的影响北大核心CSCD

目的:探究趋化因子CXCL12及其配体CXCR4、CXCR7对HER2阳性乳腺癌细胞增殖、细胞周期、迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的影响。方法:体外培养HER2阳性乳腺癌细胞BT474,应用siRNA转染技术单独或联合沉默CXCR4、CXCR7,RT-PCR与Western blot检测转染效率;应用CXCL12刺激上述转染细胞,并将其分为5组,A组:正常培养的BT474细胞;B组:CXCL12处理的BT474细胞;C组:CXCL12处理的转染si-CXCR4细胞;D组:CXCL12处理的转染si-CXCR7细胞;E组:CXCL12处理的联合转染si-CXCR4与si-CXCR7细胞;应用CCK-8、流式细胞术、划痕实验、侵袭实验及Western blot分别检测沉默CXCR4和(或)CXCR7对CXCL12诱导的乳腺癌细胞增殖、细胞周期进展、迁移、侵袭和EMT行为的影响。结果:转染siRNA能显著降低BT474细胞中CXCR4和(或)CXCR7的mRNA和蛋白表达水平(P<0.01);单独或联合沉默CXCR4与CXCR7均能明显抑制CXCL12对乳腺癌细胞增殖、细胞周期进展、迁移、侵袭行为的促进作用(P<0.05或P<0.01),并以联合沉默CXCR4与CXCR7时效果最为显著(P<0.01),与单独沉默CXCR7相比,沉默CXCR4更能抑制CXCL12对乳腺癌EMT的促进(P<0.05)。结论:沉默CXCR4或CXCR7表达均能抑制CXCL12对HER2阳性乳腺癌细胞增殖、细胞周期进展、迁移、侵袭的促进功能,但CXCL12主要通过与CXCR4相互作用来促进乳腺癌的EMT行为,而同时抑制CXCR4或CXCR7能更有效地抑制CXCL12的上述功能。     

二十碳五烯酸对HER2阳性乳腺癌细胞焦亡的影响

目的:探讨二十碳五烯酸（EPA）对HER2阳性乳腺癌细胞焦亡的影响。方法:用EPA处理HER2阳性乳腺癌细胞,检测EPA对HER2阳性乳腺癌细胞的细胞毒性作用。Annexin V/PI分析EPA诱导的细胞存活率下降是否因细胞死亡增加而发生。EPA处理后检测细胞焦亡通路中关键分子标志物的表达状态。结果:EPA处理HER2...     

CD86对CD8+T细胞分化的影响

目的：探讨CD86(B7-2)对CD8^ T细胞分化的影响。方法：用限制性内切酶Xho Ⅰ酶切质粒pCDM8得到CD86基因,并将其插入pCDNA3,用BamH Ⅰ酶切鉴定。用脂质体法介导pCDNA3-CD86真核表达载体转染人肝癌细胞株HMCT／21,600μg/ml G418筛选,稳定且高表达CD86的抗性克隆用流式细胞仪进行鉴定。从健康志愿者血中分离外周血单个核细胞(PB-MC),使PBMC与靶细胞之比为20：1,共同培养48h后,用流式细胞仪检测CD3^ T细胞内IL-4和IFN-γ的表达率。结果：成功构建pCDNA3-CD86真核表达载体;CD86在HMC7721-CD86细胞中的表达率为30．8％,而在HMC7721细胞中的表达率为0．98％;健康志愿者CD3^ T细胞内IL-4和IFN-γ的表达率分别为1．92％和24．4％;PBMC与靶细胞共同培养48h后,无论是否用IFN-α刺激,IL-4,IFN-γ的阳性比值在HMC7721-CD86转染组均大于1,而在HMC7721未转染组均小于1。结论：在细胞培养中,CD86可诱导CD8^ T细胞活化,并向Tc2表型转化。     

抗CD28单克隆抗体诱导T细胞活化

为研究ＣＤ２８单抗对正常人外周血Ｔ细胞活化的诱导作用，用免疫磁性阴极选择法从外周血单个核细胞中分离出Ｔ细胞经ＣＤ２８单抗及Ｐｈｏｒｂｏｌ１２－ｍｙｒｉｓｔａｔｅ１３－ａｃｅｔａｔ（ＰＭＡ）分别或复合刺激。     

CD4+CD25+T细胞在CD8+T细胞抗肿瘤免疫中的调节作用

实验旨在研究CD4^＋CD25^＋T细胞在CD8^＋T细胞抗肿瘤免疫中的调节作用。将小鼠脾脏中分离的单个核细胞分为两组．即去除CD4^＋CD25^＋T细胞组和未去除CD4^＋CD25^＋T细胞组,测定树突状细胞提呈的肿瘤抗原多肽刺激不同T细胞增殖活性、细胞因子IFN一1分泌,以及多肽特异性CD8^＋T细胞对同源性胃癌细胞株MFC的杀伤活性。结果显示预先去除未致敏T细胞中的CD4^＋CD25^＋T细胞,所诱导的特异性CD8^＋CTL对肿瘤细胞免疫应答增强,表现为反应性T细胞对树突状细胞提呈的肿瘤抗原多肽增殖反应增强,IFN-γ分泌量提高及CD8＋T细胞对MFC杀伤活性增强。这些结果表明。预先去除未致敏T细胞中的CD4^＋CD25^＋T细胞,肿瘤抗原多肽修饰的树突状细胞肿瘤疫苗效能可明显增加。CD4^＋CD25^＋T细胞在CD8^＋T细胞抗肿瘤免疫中起下调作用。     

CD8(T8)细胞毒细胞的产生首先需要CD4~+2H4~-诱导细胞的诱导

本文报导CD4~+T细胞在活化CD8~+细胞毒前体细胞使之成为细胞毒效应细胞中的作用。作者应用两种新的单抗2H4和4B4将T细胞(CD~+)区分为CD4~+2H4~+、CD4~+2H4~-及CD4~+4 B4~+和CD4~+4 B4~-几种亚类,证明主要是由CD4~+2 H4~-/CD4~+4B4~-细胞诱导CD8~+前体细胞成为同种异体抗原特异性效应细胞毒细胞。作者通过采用荧光激活细胞分检器     

T细胞CD2活化途径研究进展

Ｔ细胞ＣＤ２活化途径是Ｔ细胞激活的非特异途径，Ｔ细胞表面分化抗原ＣＤ２分子与其配体ＬＡＦ－３相互作用，不仅介导了Ｔ细胞与其他细胞之间非抗原依赖的粘附，激活，尚参与胸腺细胞的分化，发育，调控Ｔ细胞细胞因子产生及诱导免疫耐受。此外，ＣＤ２系统与某些疾病的发展，转归密切相关。     

T细胞CD2活化途径研究进展

Ｔ细胞ＣＤ２活化途径是Ｔ细胞激活的非特异途径，Ｔ细胞表面分化抗原ＣＤ２分子与其配体ＬＡＦ－３相互作用，不仅介导了Ｔ细胞与其他细胞之间非抗原依赖的粘附、激活，尚参与胸腺细胞的分化、发育，调控Ｔ细胞细胞因子产生及诱导免疫耐受。此外，ＣＤ２系统与某些疾病的发展、转归密切相关。     

雷公藤甲素对诱导CD4+、CD8+T细胞凋亡的作用

目的 探讨雷公藤甲素对ＣＤ４＾＋、ＣＤ８＾＋Ｔ细胞凋亡的作用。方法 分离后的正常人外周血ＣＤ４＾＋、ＣＤ８＾＋Ｔ细胞在外培养条件下,加入雷公藤甲素处理,然后用３末端脱氧核苷酸基（ＴｄＴ）介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）检测凋亡细胞。结果 雷公藤甲素处理后ＣＤ４和ＣＤ８＾＋细胞凋亡率比对照组显著增加,但ＣＤ４＾＋、ＣＤ８＾＋Ｔ细胞凋亡率则针显著差别。结论 雷公藤甲素诱导诱活化的ＣＤ４＾＋、Ｃ     

CD8+T调节细胞的研究进展

调节性T细胞(Regulation T cell, Treg)是参与外周耐受性调节的一个重要细胞群。目前发现具有耐受调节作用的T细胞包括了CD4+ Treg细胞、 Th3细胞、 Treg1细胞、 NKT(nature killer cells)细胞、 Th17细胞和CD8+Treg细胞等[1]。     

CD8+T细胞的调节性特性

随着免疫学,内科学及移植学的发展,CD8+T细胞日益受到重视.它不仅是细胞毒性效应T细胞,而且也是具有免疫抑制作用的调节性T细胞.CD8+调节性T细胞在生理条件下对机体自身稳态的维持,以及在器官移植,自身免疫性疾病及病毒感染和肿瘤等病理状态下都起着较为重要的作用.     

负载灭活口蹄疫病毒树突状细胞对CD8+T细胞的旁位活化效应

目的:探讨在体外条件下负载灭活口蹄疫病毒(FMDV)树突状细胞活化CD8+T细胞的机制.方法:用重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和白介素-4(rmIL-4) 将小鼠外周血单核细胞诱导分化成树突状细胞(MoDCs),以信号阻断法从淋巴结T细胞制备CD8+T细胞,利用负载灭活FMDV的MoDCs与CD8+T细胞共培养,以FMDV+MoDCs+淋巴结T细胞作为对照,用ELISA检测不同时间培养上清液中IFN-γ的含量.用蛋白酶体抑制剂和溶酶体抑制剂处理MoDCs,2小时后再负载灭活FMDV,并与CD8+T细胞共培养,对照组则用FMDV+MoDCs+CD8+T细胞和FMDV+MoDCs,用ELISA检测不同时间培养上清液中IFN-γ的含量.结果:在共培养9小时,CD8+T细胞的IFN-γ释放量约为淋巴结T细胞IFN-γ释放量的1/6,随后,淋巴结T细胞和CD8+T细胞均产生少量IFN-γ.用灭活FMDV负载被lactacystin和氯喹处理的DCs与CD8+ T细胞共培养后9～12小时,CD8+T细胞产生IFN-γ显著减少,在共培养24小时,IFN-γ释放显著增多,并在36小时达到峰值,与对照组相比,差异有统计学意义.结论:负载灭活FMDV的MoDCs可以活化淋巴结T细胞,而且,还可通过非MHCⅠ和非MHCⅡ类分子依赖途径激活CD8+T细胞,此即旁位活化效应.     

CD8~+T_H2细胞和抑制性T细胞的关系

[日]／山村昌弘／／临床免疫．－1996，28（2）.－245～249小鼠CD4+T细胞分为TH1T细胞和TH2细胞。TH1细胞能产生IL－2，IFN－γ，LT，并参与调节细胞免疫；TH2细胞能产生IL－4，IL－5及IL－6，并具有增强体液免疫的功能．小鼠CD8＋T细胞也存在能产生细胞罔子的亚群，对免疫应答起着重要的调节作用．关于CDS“THZ细胞的分化及其功能，实验表明，在IL－4存在下，由CD3抗体和IL－2刺激CDS十细胞分化的细胞，如受CD3抗体和IL－2再刺激时也能产生IL－4．IL一毛不仅能分化CD4”THZ细胞，也能降低CDS＋T细胞的细胞杀伤活性…     

谷氨酰胺缺乏诱导CD8+ T细胞铁死亡促进肿瘤生长北大核心CSCD

目的 探究谷氨酰胺(glutamine,Gln)对CD8+T细胞抗肿瘤免疫反应的影响及机制。方法 TCGA数据库分析肿瘤Gln代谢与浸润CD8+T细胞数量及功能的关系。利用CRISPR/Cas9敲低MC38细胞GLS表达,构建小鼠肿瘤模型。流式细胞术检测肿瘤增殖和凋亡,分析肿瘤浸润免疫细胞数量和功能。用Gln缺乏的培养基、完全培养基或添加GSH、RSL3的培养基分别处理CD8+T细胞,检测GSH含量,细胞凋亡,GPX4和Lipid-ROS及效应功能蛋白表达,并进行RNA-seq分析。结果 肿瘤Gln代谢与肿瘤浸润CD8+T细胞数量和功能负相关。敲低MC38细胞GLS表达抑制了C57BL/6肿瘤的生长及Ki67的表达,促进了Caspase3表达,提高了肿瘤浸润免疫细胞的数量,抑制了肿瘤浸润CD8+T细胞PD-1、TIM-3和LAG-3表达,并提高了CD8+T细胞CD137、CD107a、IFN-γ及TNF-α表达。RNA-seq结果显示,Gln缺乏后CD8+T细胞铁死亡相关基因TFRC、HMOX1、CYBB、SLC7A11表达上调。Gln缺乏后CD8+T细胞死亡增多、CD137、CD107a、IFN-γ、GSH和GPX4表达下调,Lipid-ROS表达上调;补充GSH后CD8+T细胞GPX4上调,Lipid-ROS下调,CD8+T细胞分泌的IFN-γ增多。结论 Gln缺乏诱导CD8+T细胞铁死亡抑制其效应功能。