姜黄素对非小细胞肺癌细胞A549和H460放射敏感性的影响

目的 探讨姜黄素对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞A549和H460放射敏感性的影响,并探索长链非编码RNA（lncRNA）同源异型盒基因转录的反义基因间RNA（HOTAIR）在其中的调节机制。 方法 将培养的NSCLC细胞A549和H460根据处理方法的不同,采用4种方式进行分组。（1）分别将NSCLC细胞A549和H460分为6组:0、15、30、60、120和240 μmol/L姜黄素组,采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）实验检测各组细胞的增殖活力;（2）分别将NSCLC细胞A549和H460分为8组:0、2、4、6 Gy γ射线照射组及其与30 μmol/L姜黄素联合组,采用CCK-8实验和平板克隆形成实验检测各组细胞的增殖活力;（3）将NSCLC细胞A549分为4组:空白对照组、30 μmol/L姜黄素组、4 Gy γ射线照射组和30 μmol/L姜黄素+4 Gy γ射线照射联合组,采用实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）实验检测各组细胞中5种促癌lncRNA和5种抑癌lncRNA的表达情况;（4）将NSCLC细胞A549分为6组:空白对照组、30 μmol/L姜黄素组、30 μmol/L姜黄素+lncRNA HOTAIR过表达组、4 Gy γ射线照射组、4 Gy γ射线照射+30 μmol/L姜黄素联合组和4 Gy γ射线照射+30 μmol/L姜黄素+lncRNA HOTAIR过表达组,采用CCK-8实验和平板克隆形成实验检测各组细胞的增殖活力。采用学生t检验进行统计学分析。 结果 （1）CCK-8实验结果显示,不同浓度的姜黄素处理可以剂量和时间依赖的方式降低NSCLC细胞A549和H460的增殖活力,且除了15 μmol/L姜黄素作用24 h之外,其余浓度和时间的姜黄素组与对照组相比,差异有统计学意义（t=3.884~5.731,P=0.000~0.043）。（2）CCK-8实验和克隆形成实验结果显示,30 μmol/L姜黄素+不同剂量的γ射线照射联合处理可使γ射线照射单独处理下的NSCLC细胞A549和H460的增殖活力和克隆形成能力进一步降低,差异有统计学意义（t=2.503~12.418,P=0.000~0.044）。（3）qRT-PCR实验结果显示,与空白对照组相比,lncRNA HOTAIR在γ射线单独处理后表达升高（t=3.317,P=0.040）,而30 μmol/L姜黄素单独处理和30 μmol/L姜黄素+4 Gy γ射线联合处理均可下调A549细胞中促癌lncRNA HOTAIR的表达（t=3.205、5.916,P=0.038、0.000）。（4）对HOTAIR进行过表达处理,可消除姜黄素对NSCLC细胞A549增殖的抑制并增强其放射敏感性（t=3.584~5.802,P=0.000~0.004）。 结论 姜黄素可以通过下调促癌lncRNA HOTAIR的表达从而抑制NSCLC细胞的增殖活力,并增强其放射敏感性。     

99Tcm标记反义肽核酸探针的制备及其荷瘤裸鼠体内分布

目的 探讨99Tcm标记反义肽核酸(PNA)探针的新方法及其在生物体内的分布.方法 合成12mer且5'端含有四肽G-(D)-A-G-G的c-myc mRNA反义、无义PNA片段,利用G-(D)-A-G-G形成的N4结构为螯合基团进行99Tcm标记,用聚酰胺薄膜层析法和高效液相色谱仪法(HPLC)测定其标记率和标记物的稳定性,并行人结肠癌荷瘤裸鼠体内分布[每克组织百分注射剂量率(%ID/g)]及显像研究.采用SAS 6.22软件对数据进行分析.结果 反义、无义PNA片段合成物的纯度>95%.99Tcm标记c-myc mRNA反义、无义PNA的标记率>95%,标记物室温放置18 h测定其标记率仍可达95%以上.c-myc mRNA反义、无义PNA片段4～8℃下放置3个月标记率仍>95%.HPLC测定标记物呈单峰.99Tcm标记c-myc mRNA反义PNA主要分布在荷瘤鼠肾、脾、肿瘤、肠道、肝组织中,99Tcm标记c-myc mRNA无义PNA在荷瘤鼠血液、脾、肾、肝及肺组织中分布较多;注射后4 h两者在荷瘤鼠肿瘤组织中的分布差异有统计学意义[(1.11±0.12)%ID/g和(0.14±0.02)%ID/g;t=14.75,P<0.01].99Tcm标记c-mycmRNA反义PNA在小鼠体内肿瘤/肌肉、肿瘤/肺的摄取比值较高,肿瘤显像明显.结论 用99Tcm标记c-myc mRNA反义、无义PNA的方法简单,标记率高,标记物稳定,前者有望成为一种新型肿瘤显像剂.     

^99Tc^m标记MDM2反义寡核苷酸对人前列腺癌细胞目的基因表达的影响

目的探讨99Tcm标记的小鼠双微体扩增基因2（MDM2）mRNA的ASON和错义寡核苷酸（ASONM）对前列腺癌细胞株LNCaP目的基因表达的影响,为后续的前列腺癌基因显像奠定基础。方法人工合成一段针对MDM2mRNA的ASON和ASONM,以HYNIC为螯合剂,对ASON和ASONM进行99Tcm标记,检测标记率、放化纯、稳定性及分子杂交活性。用脂质体包裹驰TcTM-HYNIC．ASON（0、100和500nmol／L）和99Tcm-HYNIC-ASONM（500nmol／L）,于LNCaP细胞中培养24h,再行RT-PCR和Westernblot实验,观察探针对MDM2、p53mRNA和相应蛋白质表达的影响。各组间计量资料比较采用单因素方差分析和g检验。结果ASON的标记率为（65．15±2．05）％（n=5）,ASONM的标记率为（64．93±2．18）％（n=5）,两者放化纯均达90％以上。99Tcm-HYNIC-ASON稳定性好,保留了与互补链结合的能力。0、100、500nmo]／L99Tcm-HYNIC-ASON组和500nmol／LTcmHYNIC-ASONM组MDM2mRNA含量分别为0．458±0．035、0．250±0．026、0．174±0．032、0．463±0．033。除0nmol／L99Tcm．HYNIC-ASON组与500nmol／L99Tcm-HYNIC-ASONM组间外,余差异均有统计学意义（F=33．69,q=24．32-91．45,均P〈0．01）;各组MDM2蛋白的平均密度分别为90．712±3．042、71．2184-2．915、32．775±3．062、88．121±2．710,同样除0nmol／L99Tcm．HYNIC．ASON组与500nmol／L99Tcm-HYNIC-ASONM组间外,余差异均有统计学意义（F=235．93,g：6．43～19．14,均P〈0．01）。4组p53mRNA含量分别为0．185±0．046、0．203±0．040、0．213±0．027、0．163±0．049,差异无统计学意义（F=2．18,P〉0．05）;各组p53蛋白平均密度分别为33．865±2．213、70．445±2．180、99．025±3．012、38．351±3．271,除0nmol／L99Tcm-HYNIC-ASON组与500nmol／L99Tcm-HYNIC-ASONM组间外,余差异均有统计学意义（F=53．98,g=3．32-6．74,均P〈0．01）。结论MDM2反义探针能与MDM2mRNA链上的目的序列特异结合,并抑制目的基因的表达,具备活体内前列腺癌反义显像的实验条件,有望为在基因水平上诊断前列腺癌提供一种新方法。     

99Tc^m标记抗粘蛋白McAb乳腺癌放射免疫显像的临床研究

目的 评价＾９９Ｔｃ＾ｍ标记抗乳腺癌粘蛋白单克隆抗体放射免疫显像（ＲＩＩ）诊断乳腺癌的临床价值。方法 选择１７例乳腺肿瘤患者进行ＲＵ 结果 ９例原发性乳腺癌中８例ＲＵ阳性，灵敏度８８．８９％，５例原发性乳腺癌伴腋淋巴结转移及１例右乳腺浸润性导和癌根治术５ａ后出现右腋淋巴结转移，ＲＵ发现其中５例出现淋巴结转移；而６例乳腺良性病变和１例右乳腺单纯癌根治术７ａ后随访，ＲＩＩ阴性。结论 ＾９９Ｔｃ＾ｍ标记     

99Tcm-MIBI脂质体的制备及特征分析

目的 研究99Tcm-甲氧基异丁基异腈（MIBI）脂质体的制备方法,并对其特征进行分析。方法 采用乙醇注入-超声法制备99Tcm-MIBI脂质体,测定脂质体粒径大小和包封率,对超声时间、大豆卵磷脂与胆固醇的质量比等条件进行优化,观察99Tcm-MIBI脂质体的稳定性。结果 当制备的99Tcm-MIBI质量浓度为0.01 mg/mL时,平均粒径大小为（171.4±25.2）nm,包封率的平均值为（8.5±1.3）%。大豆卵磷脂与胆固醇的质量比为4:1和超声时间为5 min为最佳条件。电镜图显示,制备第1天后粒径较小,形态较为规则、均匀,呈完整球形或椭圆形;30 d后粒径大小及形态未见明显改变。结论 采用乙醇注入-超声法制备的99Tcm-MIBI脂质体粒径较小、包封率高,且较稳定。     

99Tcm-PPM及99Tcm-MIBI肺显像诊断原发性肺癌

目的　探讨     

99Tcm-HL91与99Tcm-MIBI显像在实体肿瘤和炎症模型中的对比研究

目的用     

乏氧组织显像剂^99Tc^m—DTPA—甲硝唑的制备和荷瘤动物实验研究

目的　进行新型乏氧组织显像剂DTPA-甲硝唑的化学合成、药盒制备、99Tcm标记、质量控制以及药理研究。方法　合成的DTPA-甲硝唑用氯化亚锡作还原剂,99Tcm标记,用多元正交法确立99Tcm标记一步法药盒的最佳配方。纸层析法鉴定99Tcm-DTPA-甲硝唑的标记率、标记稳定性,完成了H22肝癌小鼠体内生物分布实验及显像研究。结果　DTPA-甲硝唑一步法药盒与99TcmO-4混合,沸水浴反应10min,放化纯度大于99%。H22肝癌小鼠生物分布显示,肿瘤/血液比值1、2h分别为3.43、6.40,肿瘤/肌肉比值1、2h分别为5.24、7.42;注射血管舒张药肼苯哒嗪组肿瘤组织摄取明显高于对照组（P<0.01）。结论　研制的99Tcm-DTPA-甲硝唑有望成为一种新型的肿瘤乏氧组织显像剂。     

原位脑胶质瘤99Tcm-Galacto-RGD2 microSPECT/CT靶向显像研究

目的 合成 ⁹⁹Tc^m-半乳糖化精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽(⁹⁹Tc^m-HYNIC-Galacto-RGD₂-tricine-TPPTS, ⁹⁹Tc^m-Galacto-RGD₂),探讨其用于原位胶质瘤靶向显像的价值。方法 一步法制备⁹⁹Tc^m-Galacto-RGD₂,考察其体内外稳定性及体内生物学分布;构建荷人原位脑胶质瘤(U87MG)动物模型,⁹⁹Tc^m-Galacto-RGD₂尾静脉注射后行microSPECT/CT显像,勾画肿瘤感兴趣区,定量肿瘤的放射性摄取,病理学检查肿瘤整合素α_Ⅴβ₃表达水平,与放射性摄取进行相关性分析。结果⁹⁹Tc^m-Galacto-RGD₂放射化学纯度为(97.7±0.8)%,体内外稳定性好,能与脑胶质瘤细胞特异性结合,IC₅₀为(18±3)nmol/L。裸鼠尾静脉注射后血液清除快,脑组织放射性摄取少。静脉注射60 min后,肿瘤放射性摄取明显高于30 min(t=7.13, P<0.05),1 h肿瘤/脑组织放射性摄取比为13.92±3.43。microSPECT-CT显像阻断2 min后,肿瘤放射性摄取显著低于非阻断组(t=11.36,P<0.05);基于microSPECT-CT显像勾画肿瘤感兴趣区获得的肿瘤体积与肿瘤参考体积具有较好的一致性(95%CI=-11.94%~11.92%)。肿瘤⁹⁹Tc^m-Galacto-RGD₂摄取与整合素α_Ⅴβ₃表达水平呈线性相关(R²=0.896)。结论 ⁹⁹Tc^m-Galacto-RGD₂易于合成,理化性质好,microSPECT-CT融合显像可用于脑胶质瘤病灶的感兴趣区勾画和评价肿瘤组织整合素α_Ⅴβ₃的表达水平。     

HER-2受体放射性配体99Tcm-TP1623的制备及其在正常动物体内的分布

目的 探讨HER-2受体放射性配体 ⁹⁹Tc^m-B2-S22-AFA(⁹⁹Tc^m-TP1623)在健康小鼠体内的生物分布和健康家兔体内的动态显像分布.方法 采用氯化亚锡间接法 ⁹⁹Tc^m标记TP1623,3MM色谱纸层析测定 ⁹⁹Tc^m-TP1623标记率,计算其比活度;通过体外稳定性实验、血清蛋白结合实验和油/水分配实验,鉴定标记产品理化性质;研究 ⁹⁹Tc^m-TP1623于1、5、10、30、60和120 min在健康小鼠体内的生物分布特性;通过SPECT显像,结合感兴趣区(ROI)时间-放射性曲线分析,观察 ⁹⁹Tc^m-TP1623在健康家兔体内的动态分布变化.结果 ⁹⁹Tc^m-TP1623标记率为(96.4±0.1)%,比活度为(24.35±0.06)TBq/mmol,室温下放置6 h后放化纯度为(95.03±0.97)%.油/水分配系数P为－(2.51±0.15).小鼠血液放射性清除快,通过肾脏排泄较快,心、肺、肝、肌肉、骨骼等放射性随时间延长逐渐减低,60 min后放射性呈明显低水平,肠道放射性则随时间缓慢增加.脑放射性始终呈最低水平.健康家兔体内 ⁹⁹Tc^m-TP1623血池影消退迅速,主要通过肾脏排泄,见胆囊、肠道排泄影,胃区和颈部未见放射性浓聚,脑组织始终呈低本底.结论 ⁹⁹Tc^m-TP1623制备方法简便,标记率及产品比活度高,体内、外稳定性好,具有优良的动物体内动力学特性.     

^99Tc^m—BPHA的肾排泄机制研究及肾功能显像

目的 探讨^99Tc^m-二胺乙基丙二胺六乙酸（BPHA）的肾排泄机制及临床应用的可能性。方法 用丙磺舒抑制实验确定^99Tc^m-BPHA的肾排泄机制;用γ射线测量装置测量一定时间内^99Tc^m-BPHA在动物体内的残存率;用γ相机对家兔和正常人进行肾动态显像;同时进行^99Tc^m-BPHA和^99Tc^m-DTPA的对比研究。 结果^99Tc^m-BPHA和^99Tc^m-DTPA生物学性能相似,为肾小球滤过型显像剂。24h后^99Tc^m-BPHA体内残留极少。对家兔和人的显像表明,肾显影清晰,排泄迅速。结论 自行研制的^99Tc^m-BPHA为一种可满足临床要求的肾小球滤过型显像剂,可望替代^99Tc^m-DTPA。     

靶向TSPO显像剂99Tcm-DTPA-CB86的制备及其对关节炎症的SPECT/CT显像研究

目的制备99Tcm标记的转运蛋白（TSPO）配体CB86[99Tcm-DTPA（二亚乙基三胺五乙酸）-CB86],探讨其作为TSPO靶向关节炎症显像新型分子探针的可行性。方法通过偶联双功能螯合剂制备DTPA-CB86,进行99Tcm标记,经高效液相色谱纯化,测定其放化纯度和体外稳定性。选用巨噬细胞RAW264.7进行体外细胞结合实验,测定99Tcm-DTPA-CB86的结合率和外排率。采用弗氏佐剂建立左踝关节炎症小鼠模型,对其行99Tcm-DTPA-CB86 Micro SPECT/CT显像,并观察探针的体内分布情况。采用SPSS 18.0统计软件对符合正态分布及方差齐性的数据进行t检验。结果99Tcm-DTPA-CB86的标记率为（95.86 ±2.45）%,放化纯度为（97.45 ±0.69）%,其在室温下的磷酸盐缓冲液中的稳定性良好,放置4 h后,其标记率仍>90%。99Tcm-DTPA-CB86能与巨噬细胞RAW264.7特异性结合,3 h的摄取率达到最高峰[（36.45 ±2.18）%],在加入过量未标记的DTPA-CB86后,RAW264.7细胞对99Tcm-DTPA-CB86的摄取明显受到抑制[（10.43 ±2.01）%],与未阻断时相比差异具有统计学意义（t=6.217,P < 0.05）;RAW264.7细胞对99Tcm-DTPA-CB86外排较少,摄取率从4.5 h时的（33.31 ±2.34）%到8 h时的（19.32 ±2.01）%,减少了13.99%。Micro SPECT/CT显像结果显示,99Tcm-DTPA-CB86在小鼠左踝关节炎症部位清晰可见,且能被过量的DTPA-CB86明显抑制;体内生物学分布结果表明,其具有较好的炎症靶向性;注射后3 h踝关节炎症部位的摄取仍可达（2.35 ±0.10）% ID/g。结论99Tcm标记CB86易于制备,具有较好的理化性质及体内代谢学性质,同时具有较好的关节炎症摄取,有望发展成新的TSPO靶向SPECT关节炎症显像分子探针。