CD4+CD25+调节性T 细胞对乳腺癌细胞上皮间质转化和ALDH1+干样细胞的影响*

目的:研究CD4+CD25+调节性T 细胞（regulatory T cells ,Tregs）对乳腺癌细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition ,EMT ）、细胞迁移侵袭能力,及ALDH1+干样细胞比例的影响。方法:采用免疫磁珠法分离乳腺癌患者外周血中CD4+CD25+Tregs,CD4+CD25+Tregs与乳腺癌BT474、MCF-7 细胞系共培养（共培养组）,BT474、MCF-7 单独培养（对照组）。 检测共培养组和对照组乳腺癌细胞EMT 相关标志物表达的变化,及细胞迁移和侵袭能力的变化。此外,检测BT474 细胞中ALDH1+干样细胞、微球形成能力和自我更新能力的变化。结果:CD4+CD25+Tregs诱导BT474 和MCF-7 细胞间质性标志物表达增高,诱导MCF-7 细胞上皮性标志物E-cadherin 表达降低。CD4+CD25+Tregs诱导BT474 和MCF-7 细胞迁移和侵袭能力上调。共培养组BT474 细胞中ALDH1+干样细胞比例、微球体形成能力、自我更新能力较对照组增强。结论:CD4+CD25+Tregs可诱导乳腺癌细胞发生EMT ,增强细胞体外迁移和侵袭能力,同时促进ALDH1+干样细胞增加。      

浸润性乳腺癌上皮-间质转化1例

0 引言上皮-间质转化( epithelial-mesen chymal transition,EMT)是胚胎发育、组织重建和伤口修复中的基础过程,同时也是肿瘤浸润、转移的一个非常重要的机制.在EMT过程中,上皮细胞之间连接松散,细胞失去基底面至表面的极性排列,形态呈梭形;上皮标志物E-钙黏素表达下降,间质标志物N-钙黏素、波形蛋白等表达增加;细胞侵袭和转移能力增强[1].这些EMT典型变化通常都是在细胞培养或动物移植瘤实验中发现的.     

乳腺癌干细胞上皮-间质转化标志物表达变化及意义

目的 探讨乳腺癌干细胞上皮．间质转化标志物表达变化及其临床意义。方法采用无血清悬浮培养法,从MCF-7细胞培养乳腺癌微球体细胞,应用流式细胞仪检测微球体细胞中CD44和CD24的表达,采用Westernblot方法检测微球体细胞中E-钙黏素、N-钙黏素、纤维连接蛋白、波形蛋白的表达水平,体外穿膜实验检测肿瘤细胞的迁移、侵袭能力。结果乳腺微球体富集了CD44＋CD24-的乳腺癌干细胞,并能在含血清培养基中增殖分化。该微球体细胞的上皮标志物E-钙黏素表达水平下调,而间质标志物N-钙黏素、纤维连接蛋白、波形蛋白的表达水平上调,同时乳腺癌干细胞的迁移、侵袭能力显著增强。结论乳腺癌干细胞具有上皮-间质转化的特征,具有显著增强的迁移、侵袭能力。     

白藜芦醇通过下调POLD1抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化

目的 探讨白藜芦醇(RSV)通过下调POLD1对MDA-MB-231细胞上皮间质转化的影响.方法 CCK-8检测RSV对MDA-MB-231细胞活性的抑制能力.使用重组慢病毒转染MDA-MB-231细胞构建POLD1-OE及POLD1-NC细胞系,RSV分别刺激各细胞后,蛋白印迹法检测POLD1、EMT相关蛋白E-ca...     

HER-2通过ZEB1促进乳腺癌细胞上皮间质转化

背景与目的：人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)是表皮生长因子受体家族中的一员,它参与细胞多个生物过程,如细胞增殖、侵袭和凋亡等。有研究表明,HER-2与细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程相关,但具体机制有待进一步探讨,本研究旨在探讨HER-2对EMT的调节机制。方法：用Transwell小室模拟细胞的迁徙侵袭能力;采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time lfuorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测目的基因的表达;用活性氧检测试剂盒检测细胞活性氧的水平。结果：Transwell小室模拟实验发现,HER-2过表达能促进乳腺癌细胞的侵袭转移;机制研究表明,HER-2能上调ZEB1,用siRNA降低ZEB1表达使HER-2过表达细胞的侵袭能力受损;此外,HER-2过表达乳腺癌细胞中活性氧水平较低。结论：HER-2可以上调ZEB1的表达而赋予乳腺癌细胞EMT相关特性,ZEB1可作为进一步研究HER-2与EMT调节关系的靶点。     

LSD1抑制剂抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭、迁移及上皮间质转化

目的:探究赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1（lysine-specific demethylase 1,LSD1）抑制剂对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）A549细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响。方法:将体外培养的人非小细胞肺癌A549细胞分为对照组和LSD1抑制剂组,在细胞进入对数生长期时,向实验组细胞中分别加入不同浓度的LSD1抑制剂,培养24 h。CCK-8法用于细胞增殖检测,划痕实验用于细胞迁移检测,Transwell小室法用于细胞侵袭检测,裂解细胞提取总蛋白后通过蛋白质免疫印迹技术（Western blot,WB）检测A549细胞中上皮细胞标志物E型钙黏蛋白（E-cadherin）、间充质细胞标志物N型钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的表达水平。结果:与对照组相比,LSD1抑制剂组细胞增殖率、穿膜细胞数和划痕愈合率显著降低（P＜0.05）;LSD1抑制剂组相较于对照组,E-cadherin表达量升高,N-cadherin和Vimentin的表达量均降低（P＜0.05）。结论:LSD1抑制剂可抑制非小细胞肺癌A549细胞的侵袭、迁移及上皮间质转化。     

STC1诱导上皮-间质转化促进肺癌细胞的侵袭和迁移

背景与目的：斯钙素1（stanniocalcin 1,STC1）与癌症的发展和不良预后相关,但STC1对肺癌细胞转移的影响及其作用机制目前还未完全阐明。探讨STC1对肺癌细胞侵袭和迁移的影响及其可能的内在分子机制。方法：构建STC1过表达的细胞系HLEC-STC1及对照细胞系HLEC-EV,STC1沉默的细胞系A549-STC1 siRNA及对照细胞系A549-EV;采用Transwell和划痕实验检测细胞的侵袭和迁移能力;采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）标志物的mRNA和蛋白质水平变化;并使用细胞免疫荧光技术进一步验证细胞EMT标志物的表达和定位;采用Western blot检测EMT相关信号通路蛋白和转录因子的水平。结果：与对照细胞相比,过表达STC1的HLEC-STC1细胞的侵袭和迁移能力增强,STC1沉默的A549-STC1 siRNA细胞的侵袭和迁移能力减弱（P＜0.05）;过表达STC1的HLEC-STC1细胞中上皮标志物上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）的表达下调,间质标志物神经型钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（vimentin）及肿瘤干细胞标志物上皮细胞黏附分子（epithelial cell adhesion molecule,EpCAM）表达上调（P＜0.05）;低表达STC1的A549-STC1 siRNA细胞中E-cadherin的表达上调,N-cadherin、vimentin及EpCAM的表达下调（P＜0.05）;同时,HLEC-STC1细胞中细胞外调节蛋白激酶信号通路（extracellular signal-regulated protein kinase,ERK）及Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路激活相关的磷酸化（p）-ERK和β-catenin的水平升高,转录因子E盒结合锌指蛋白1（zinc finger E-box-binding homeobox 1,ZEB1）和锌指转录因子1（Snail1）的表达水平上调,A549-STC1 siRNA细胞中的结果则相反（P＜0.05）。结论：STC1可能通过激活ERK和Wnt/β-catenin信号通路上调转录因子ZEB1和Snail1的表达水平,从而诱导EMT促进肺癌细胞的侵袭和迁移。     

沉默PD-L1基因表达抑制胃癌细胞黏附、迁移、侵袭及上皮间质转化

目的:初步探讨程序性死亡受体配体（programmed death-ligand 1,PD-L1）对胃癌细胞SGC7901侵袭、迁移的影响及PD-L1表达对上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响。方法:采用siRNA干扰技术,下调SGC7901细胞株中PD-L1的表达,采用RT-PCR法及Western blot法验证PD-L1的沉默,并将后续实验分为空白对照组、空载体组（siRNA-NC组）及PD-L1沉默组（siRNA-PD-L1组）。采用RT-PCR法及Western blot法分别对各组细胞EMT相关指标（E-cadherin、Vimentin、Snail）的mRNA和蛋白表达情况进行检测。利用MTT实验比较各组细胞的黏附能力,Transwell小室实验比较各组细胞的迁移能力及侵袭能力。结果:下调PD-L1表达后,siRNA-PD-L1组Vimentin及Snail 两项指标的mRNA和蛋白表达量,细胞的黏附能力、迁移能力及侵袭能力均低于空白对照组和siRNA-NC组,E-cadherin mRNA和蛋白表达量高于其他两组,差异均具有统计学意义（P＜0.001）,而空白对照组和siRNA-NC组之间上述指标的差异无统计学意义。结论:PD-L1的表达影响胃癌细胞黏附、迁移、侵袭等生物学行为,促进胃癌细胞的上皮间质转化,与胃癌的预后可能存在相关性。     

SPON1促进胆管癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化

目的:探讨SPON1对胆管癌细胞迁移、侵袭能力和上皮间质转化的影响。方法:通过生物信息学和免疫组织化学分析SPON1的表达。将SPON1过表达质粒、SPON1敲低质粒和阴性对照质粒转入胆管癌细胞系(QBC939、HCCC-9810),通过划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;免疫印迹检测SPON1对胆管癌细胞中上皮间质转化相关蛋白表达的影响。结果:生信分析结果和免疫组化结果均提示SPON1在胆管癌组织中高表达(P<0.05);过表达SPON1能够有效增强胆管癌细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05);相反,沉默SPON1则抑制了胆管癌细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05);SPON1通过上调Vimentin、下调E-cadherin促进胆管癌细胞上皮间质转化(P<0.05)。结论:SPON1在胆管癌中被上调,并促进胆管癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化。     

短程低氧条件下乳腺癌BT549细胞表达beclin 1基因对上皮间质转化的影响

目的： beclin 1基因慢病毒表达载体稳定感染三阴性乳腺癌BT549细胞后,于短程低氧条件下探讨beclin 1基因对上皮间质转化（ EMT）的影响。方法用带有pLenO-GTP Vector及pLenO-GTP-beclin 1 Vector的慢病毒以感染复数（ MOI）为20分别感染BT549细胞,即实验对照组及实验组,未感染细胞作为空白对照。感染96 h后用倒置荧光显微镜观察荧光,估计感染效率;用Western blot法检测beclin 1基因是否在 BT549细胞中稳定表达;将各组细胞低氧培养12、24 h 后采用荧光定量 PCR、Western blot法及激光共聚焦显微镜检测EMT相关标志物;用Western blot法检测低氧培养24 h后的各组细胞Wnt/β-catenin信号通路的相关蛋白表达水平。用两样本t检验分析低氧时间对细胞EMT相关标志物的表达情况,余计量资料用方差分析进行统计。结果慢病毒感染BT549细胞96 h后,感染效率约为100%,实验组beclin 1蛋白高效稳定表达（F=107．200,P=0．000）;低氧条件下,相对于空白对照组、实验对照组,实验组细胞的上皮标志物E-cadherin mRNA和蛋白表达水平上调（12 h：F=122．451、P=0．000,F=29．651、P=0．001;24 h：F=108．783、P=0．000,F=41．232、P=0．000）,而间皮标志物 N-cadherin、vimentin及 fibronectin表达水平下调（12 h：N-cadherin F=92．918、P=0．000、F=138．034、P=0．000,vimentin F=135．313、P=0．000、F=39．765、P=0．000,fibronectin F=144．275、P=0．000;24 h：N-cadherin F=76．064、P=0．000、F=40．614、P=0．000, vimentin F=206．576、P=0．000、F=46．658、P=0．000,fibronectin F=411．405、P=0．000）;相对于低氧培养12 h,各组细胞低氧培养24 h后E-cadherin表达水平下调（空白对照组：t=4．266、P=0．013,t=11．235、P=0．000;实验对照组：t=10．463、P=0．000,t=4．092、P=0．009;实验组：t=28．208、P=0．000,t=7．262、P=0．001）,而 N-cadherin（实验组除外）、vimentin和fibronectin表达水平上调（空白对照组：N-cadherin t=3．072、P=0．037、t=7．146、P=0．002, vimentin t=6．384、P=0．003、t=7．476、P=0．002,fibronectin t=8．389、P=0．001;实验对照组：N-cadherin t=2．805、P=0．049、t=5．352、P=0．006,vimentin t=12．701、P=0．000、t=5．923、P=0．004,fibronectin t=7．318、P=0．002;实验组：N-cadherin t=7．849、P=0．001、t=1．987、P=0．184,vimentin t=11．097、P=0．000、t=13．626、P=0．000,fibronectin t=11．003、P=0．000）;beclin 1基因与低氧环境对 BT549细胞E-cadherin、N-cadherin的表达水平有交互效应（ E-cadherin： F=19．175、P=0．000,F=5．588、P=0．015;N-cadherin：F=8．238、P=0．006,F=5．934、P=0．016）;低氧培养24 h后,实验组Wnt/β-catenin信号通路的β-catenin、Snail蛋白水平下调（β-catenin： F=18．169, P=0．003;Snail： F=11．098, P=0．010）,而p-GSK-3β的蛋白水平上调（F=36．096, P=0．000）。结论 beclin 1基因在短程低氧条件下抑制BT549细胞EMT,而随时间的增加低氧促进 EMT;beclin 1基因在短程低氧环境下抑制 EMT 的机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。     

miR-375靶向YAP1调控上皮-间质转化参与乳腺癌细胞曲妥珠单抗的耐药

背景与目的:曲妥珠单抗作为人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)常用靶向抗体药物,其耐药问题日益凸显.探讨miR-375靶向Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1,YAP1)介导上皮-间质转化(epithelial-...     

过表达巨噬细胞移动抑制因子对子宫颈癌SiHa细胞上皮间质转化的影响

目的 探讨过表达巨噬细胞移动抑制因子（MIF）对子宫颈癌SiHa细胞发生上皮间质转化 （EMT）的影响.方法 应用基因转染方法将重组质粒pEGFP-N1-MIF转入SiHa细胞,构建过表达MIF的SiHa细胞;用实时荧光聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫细胞化学方法分别检测各组细胞中E-cadherin、vimentin mRNA及蛋白的表达水平.结果 RT-PCR检测结果显示,转染pEGFP-N1-MIF的细胞中MIF mRNA相对表达量升高（F=2950.278,P＜ 0.01）;转染pEGFP-NI-MIF的细胞中vimentin的mRNA高于各对照组,而E-cadherin的mRNA低于各对照组（F值分别为2 135.048,1 893.563,均P＜0.01）;转染pEGFP-N 1-MIF的细胞中vimentin的蛋白表达水平高于各对照组,而E-cadherin的蛋白表达水平低于各对照组（F值分别为2 348.021,1 789.421,均P＜ 0.01）.结论 过表达MIF促进SiHa细胞中vimentin表达,抑制E-cadherin表达,说明过表达MIF促进子宫颈癌SiHa细胞发生上皮间质转化.     

白花丹素抑制上皮间质转化对卵巢癌细胞SKOV3侵袭和迁移能力影响

目的 探讨白花丹素(PB)通过对上皮间质转化的抑制从而调控卵巢癌细胞SKOV3侵袭和迁移能力的作用和机制.方法 将卵巢癌细胞分为Control组、PB(1 μmol/L)组、PB(2 μmol/L)组和PB(5 μmol/L)组,各组加入相应浓度的PB处理细胞,CCK8检测细胞增殖,Hoechst检测细胞凋亡,蛋白质印...