lncRNA-CCAT1通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路对宫颈癌HeLa细胞自噬的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录因子1(CCAT1)对宫颈癌HeLa细胞自噬的影响及其可能作用机制.方法:培养宫颈癌HeLa细胞,将CCAT1过表达质粒pcDNA3.1-CCAT1转染至HeLa细胞中,采用qRT-PCR检测转染后细胞中CCAT1的表达水平;CCK8法检测细胞增殖活性;单丹磺酰戊...     

mTOR信号通路参与系统性红斑狼疮发病机制的研究进展

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种常见自身免疫性疾病,常累及皮肤、肾脏、肺脏等全身各器官系统。其发病机制多与免疫耐受功能紊乱有关,但具体机制尚不明确。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,其信号通路在细胞代谢、生长、增殖及分化等方面起重要作用。近年来已有文献报道mTOR信号通路参与SLE发病机制中的免疫细胞分化、自噬、炎性细胞因子分泌、氧化应激等过程。因此,进一步阐明mTOR信号通路在SLE发病中的作用,对其诊断及靶向治疗具有重要意义。本文就近期mTOR信号通路在SLE中的研究进展作一综述讨论。     

基于AMPK/mTOR信号通路的细胞自噬对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨在低氧高二氧化碳(hypoxia and hypercapnia,HH)条件下,基于AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的细胞自噬的变化及其对大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖和凋亡的影响。方法：以大鼠PASMCs为研究对象,饥饿24 h后随机分为5组：正常对照(normal control,N)组、模型组(HH组)、溶剂二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)组(D组)、AMPK激动剂阿卡地新(acadesine;5-aminoimidazole-4-carboxamide riboside,AICAR)组(AI组)和AMPK抑制剂dorsomorphin(compound C,CC)组(CC组)。N组置于常氧环境(21%O₂、5%CO₂和74%N2)下培养24 h,其余4组预先...     

丹酚酸B 通过mTOR / Ulk1 信号通路诱导胶质瘤细胞C6 自噬性死亡

目的:探究丹酚酸B(Salvianolic acid B,Sal B)对胶质瘤细胞自噬的作用机制。方法:不同浓度的Sal B 处理细胞,CCK8 检测细胞活性,流式检测细胞凋亡情况,Western blot 检测增殖、凋亡及自噬标记蛋白表达,免疫荧光检测LC3 含量。结果:Sal B 浓度达到100 μmol/ L 时能明显抑制细胞活性,因此,选择10、20、50 μmol/ L 三个剂量进行后续试验;Sal B 能显著促进C6 细胞凋亡和凋亡标记蛋白caspase-3、Bax 的表达,降低Bcl-2 及增殖标记蛋白Ki67 的表达水平,并具有量效关系;同时,Sal B 能显著促进自噬标记蛋白(Atg5、Atg7、Atg12、Beclin1)的表达,升高LC3Ⅱ/ Ⅰ的比值,促进LC3 荧光斑点的形成并降低p62 的表达水平;此外,Sal B 可明显抑制mTOR/ Ulk1 通路蛋白mTOR 的表达,促进Ulk1 的表达。结论:Sal B 可通过mTOR/ Ulk1 信号通路诱导胶质瘤细胞自噬性死亡。     

AMPK/mTOR信号通路介导的自噬在血根碱抑制鼻咽癌细胞增殖中的作用研究北大核心CSCD

目的:研究血根碱(SAN)对人鼻咽癌5-8F细胞自噬和增殖的影响,并探讨5-8F细胞自噬与增殖的关系及作用机制。方法:MTT和实时无标记细胞分析技术(RTCA)检测细胞增殖;单丹磺酰戊二胺(MDC)染色和透射电镜观察自噬情况;Western blot检测蛋白表达。结果:与Control组相比,SAN可显著抑制鼻咽癌细胞增殖,降低PCNA表达,诱导自噬小体形成,降低P62表达,提高Beclin-1表达、LC3Ⅱ/Ⅰ;而抑制自噬后(3-MA预处理),SAN诱导自噬和抑制细胞增殖作用显著减弱,同时,SAN对Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、PCNA的影响改变;SAN可激活AMPK/mTOR信号通路关键蛋白AMPK、p-AMPK并抑制mTOR表达;而抑制AMPK/mTOR信号通路后(抑制剂Compound C预处理),SAN诱导自噬和抑制细胞增殖作用显著减弱。结论:SAN能够抑制人鼻咽癌5-8F细胞增殖并诱导自噬,可能通过诱导细胞自噬抑制细胞增殖,其机制可能与激活AMPK/mTOR信号通路有关。     

mTOR和ERK/MAPK信号通路调控自噬在孤独症发病中的作用

<正>孤独症是一种以重复刻板样行为和社交缺陷为主要特征的神经发育障碍性疾病,发病率高的特点使其逐渐成为研究的热点。中国与西方国家孤独症的发病率相似,约为1%,位于儿童精神疾病的前列^[1]。目前认为孤独症由环境和遗传因素共同决定,病因复杂,具体机制尚不明确。随着研究的深入,自噬在孤独症发病机制中的作用受到广泛关注。     

成纤维细胞生长因子受体4基因沉默对口腔鳞癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制

目的：探讨成纤维细胞生长因子受体4（FGFR4）基因沉默介导RAS/RAF/MAPK信号通路对口腔鳞癌细 胞增殖和凋亡的影响。方法：收集本院2018 年4 月至2019 年8 月收治的口腔鳞癌患者32 对肿瘤组织样本和癌旁 非癌组织,利用免疫组织化学和免疫印迹检测FGFR4蛋白的表达;免疫印迹检测正常口腔上皮细胞HOEC和口 腔鳞癌细胞（HSC-2、CAL-27 和SACC-83）中FGFR4蛋白的表达水平。通过基因沉默技术下调FGFR4表达,利 用qRT-RCR 和免疫印迹检测SACC-83 细胞的FGFR4表达的变化,克隆形成实验检测SACC-83 细胞的增殖能力, 流式细胞术检测SACC-83 细胞的凋亡和细胞周期,免疫印迹检测SACC-83 细胞的RAS/RAF/MAPK信号通路。 结果：与癌旁非癌组织相比,口腔鳞癌组织的FGFR4表达升高;与正常口腔上皮细胞HOEC相比,口腔鳞癌细 胞（HSC-2、CAL-27 和SACC-83）的FGFR4表达量高;下调FGFR4表达可抑制SACC-83 细胞的增殖,抑制抗 凋亡蛋白Bcl-2 的表达,上调凋亡蛋白Bax 的表达,促进SACC-83 细胞的凋亡,同时抑制周期蛋白P21 的表达, 使SACC-83 细胞停滞于G0/G1 期;下调FGFR4表达可抑制RAS、RAF及p-MEK和p-ERK1 蛋白的表达。结论： 下调FGFR4表达可抑制口腔鳞癌细胞增殖,促进细胞凋亡,使其停滞于G0/G1 期,可能与抑制RAS/RAF/MAPK 信号通路有关。     

AM激活mTOR信号通路对人卵巢癌细胞增殖的影响

目的探讨肾上腺髓质素(Adrenomedullin,AM)通过激活mTOR(哺乳动物雷帕霉素靶蛋白)信号途径对人卵巢癌细胞HO8910增殖的影响。方法应用AM及mTOR拮抗剂(雷帕霉素)诱导卵巢癌细胞,CCK8法检测AM及雷帕霉素对卵巢癌细胞增殖的影响,进一步采用Western印迹法,测定AM对mTOR磷酸化的激活作用结果 AM可促进卵巢癌细胞的增殖,并呈剂量依赖关系及受体依赖关系,而这种促增殖作用可被mTOR信号通路的拮抗剂雷帕霉素所抑制;随着AM浓度的增加,卵巢癌细胞mTOR磷酸化水平随之升高。结论AM介导的mTOR信号通路促进卵巢癌细胞增殖,为卵巢癌的分子靶向治疗提供新的思路。     

葛根素通过调节PINK1-parkin信号通路介导的线粒体自噬抑制慢性阻塞性肺疾病大鼠肺泡上皮细胞凋亡

目的：建立大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型,探讨葛根素是否能够通过调控PTEN诱导假定激酶1(PINK1)-parkin信号通路介导的线粒体自噬,发挥肺保护作用。方法：气管滴注脂多糖+烟熏法建立COPD大鼠模型,建模成功后随机分为模型组、低剂量(50 mg/kg)葛根素组、中剂量(100 mg/kg)葛根素组、高剂量(200 mg/kg)葛根素组和3-甲基腺嘌呤(3-MA;10 mg/kg)组,每组15只;另取15只大鼠作为对照组。连续给药8周后进行大鼠肺功能检测;ELISA法检测大鼠肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β和IL-6水平;HE染色观察大鼠肺组织病理变化;TUNEL染色观察大鼠肺泡上皮细胞凋亡情况;免疫组化法检测肺组织中BECN1和LC3B蛋白表达;Western blot法检测肺组织中PINK1、parkin、Bax和Bcl-2蛋白表达。结果：与对照组比较,模型组大鼠肺组织病变明显,肺泡腔严重充血,炎症细胞大量浸润,肺泡间隔与肺泡壁增厚,病理评分显著升高(P<0.05),用力肺活量(FVC)、0.1 s用力呼气容积(FEV0.1)和呼气流量峰值(PEF)水平均显著...     

mTOR信号通路与细胞凋亡

哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)主要通过上游信号转导通路磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB/Akt)/mTOR信号通路及下游信号通路mTOR/ eIF4E结合蛋白1(4EBP1)、mTOR/p70S6激酶(p70S6K)在细胞生长、增值与分化和在血管再生、蛋白合成与降解中发挥作用.细胞凋亡是细胞的一种程序性死亡,在机体发育、组织代谢中有着重要作用,而细胞凋亡的异常调节与许多疾病的发生和发展紧密相连.近年研究发现,mTOR信号通路在细胞凋亡过程中扮演了重要角色,并已被作为新的药物治疗靶点.     

藏红花素调节Hippo信号通路对病理性瘢痕成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的:初步探讨藏红花素(Crocin)调节Hippo信号通路对病理性瘢痕成纤维细胞增殖和凋亡的影响。方法:体外分离培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKF),免疫荧光鉴定成纤维细胞;MTT法计算细胞增殖抑制率,筛选Crocin最佳干预浓度,将HKF细胞分为control组和Crocin低、中、高剂量组(Crocin浓度分别为20、50、100μmol/L);细胞转染实验中将HKF细胞分为control组、Crocin组(100μmol/L)、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1)、pcDNA3.1+Crocin组(转染pcDNA3.1+100μmol/L Crocin干预)、pcDNA3.1-YAP/TAZ组(转染pcDNA3.1-YAP/TAZ)、pcDNA3.1-YAP/TAZ+Crocin组(转染pcDNA3.1-YAP/TAZ+100μmol/L Crocin干预)。qRT-PCR法检测YAPmRNA、TAZ mRNA表达;EdU染色、流式细胞仪分别检测细胞增殖、凋亡情况;Western blot检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞抗凋亡因子B...     

白花丹醌对人结肠腺癌Caco-2细胞凋亡、自噬及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的:探讨白花丹醌是否诱导人结肠腺癌Caco-2细胞凋亡和自噬及其对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB/Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响.方法:体外培养Caco-2细胞,分别加入2.5、5、7.5、10、12.5和15μmol/L的白花丹醌作用12、24和36 h后,采用MTT...     

Sesn2通过激活mTOR信号通路调节LPS诱导的巨噬细胞M1极化和炎症反应

目的：探讨sestrin 2 (Sesn2)在巨噬细胞中的功能及其通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路对巨噬细胞极化和炎症的影响。方法：用小干扰RNA构建Sesn2沉默（si-Sesn2）的RAW264.7小鼠巨噬细胞胞株,通过脂多糖（LPS）处理RAW264.7细胞建立体外炎症模型。RT-qPCR评估白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、CD86和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的mRNA水平;ELISA检测培养液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平;流式细胞术确定CD86标记的M1型巨噬细胞百分比;Western blot分析mTOR、p70核糖体蛋白S6激酶（p70S6K）和真核翻译启动因子4E结合蛋白1(4EBP1)的蛋白表达水平。结果：在LPS诱导的体外炎症模型中,Sesn2在RAW264.7细胞中的表达上调,IL-1β、IL-6、TNF-α以及M1型巨噬细胞标志物CD86和iNOS的表达显著增加,伴随mTOR、p70S6K和4EBP1蛋白表达水平的升高。而si-Sesn2进一步促进了上述效应,但这些变化可通过雷帕霉素预处理减轻。结论：S...     

抑制Hedgehog信号通路对前列腺癌DU125细胞增殖及凋亡的影响

目的研究Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环王巴明对前列腺癌Dul45细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养DU145细胞,以10、50、100μmol/L的环王巴明作用24 h,MTT法检测环王巴明对DU145细胞增殖的影响,流式细胞技术检测环王巴明对DU145细胞凋亡的影响,RT-PCR检测环王巴明对DU145细胞Gli-1 m RNA表达的变化,Westernblot检测环王巴明对DU145细胞Gli-1蛋白表达的变化。结果 MTT检测结果表明10μmol/L环王巴明组(85.01±2.61)%、50μmol/L环王巴明组(76.71±3.13)%和100μmol/L环王巴明组(69.10±4.11)%细胞活性较空白对照组(99.97±0.21)%降低(P0.05);流氏细胞技术检测结果表明10μmol/L环王巴明组(15.12±0.21)%、50μmol/L环王巴明组(24.97±0.24)%和100μmol/L环王巴明组(31.26±0.26)%细胞总凋亡率较空白对照组(2.56±0.28)%升高(P0.05);RT-PCR检测结果表明10μmol/L环王巴明组(0.69±0.06)%、50μmol/L环王巴明组(0.69±0.06)%和100μmol/L环王巴明组(0.69±0.06)%Gli-1m RNA表达水平较空白对照组(0.92±0.11)%降低(P0.05);Western blot检测结果表明10μmol/L环王巴明组(0.79±0.06)%、50μmol/L环王巴明组(0.59±0.05)%和100μmol/L环王巴明组(0.41±0.04)%Gli-1蛋白表达水平较空白对照组(0.94±0.11)%降低(P0.05)。结论 Hedgehog信号通路阻断剂环王巴明可以抑制DU145细胞增殖、诱导DU145细胞凋亡,其作用机制可能与下调GLi-1表达有关。     

粉防己碱通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导卵巢癌细胞自噬

目的:研究粉防己碱(tetrandrine)对人卵巢浆液性囊腺癌SKOV3细胞活力及自噬的影响,并初步探讨其作用机制。方法:采用MTT法检测不同作用浓度的粉防己碱对SKOV3细胞活力的影响。采用吖啶橙染色法观察粉防己碱对SKOV3细胞中自噬溶酶体形成的影响。Western blot法检测粉防己碱处理前后SKOV3细胞自噬相关蛋白LC3的表达情况及相关信号通路的变化。最后,采用MTT法检测粉防己碱单用及联合自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对SKOV3细胞活力的影响。结果:粉防己碱可显著抑制SKOV3细胞的活力(P<0.01),作用24 h其半数抑制浓度为15.21μmol/L。吖啶橙染色结果显示,粉防己碱明显促进SKOV3细胞中自噬溶酶体的生成。Western blot实验结果显示,粉防己碱干预后,SKOV3细胞中LC3-Ⅱ和P62蛋白的表达水平明显上调;同时,粉防己碱能明显降低PI3K/AKT/mTOR信号通路中p-mTOR和p-AKT蛋白的水平(P<0.01)。自噬抑制剂3-MA增强了粉防己碱对SKOV3细胞活力的抑制作用。结论:粉防己碱可通过抑制PI3K/AKT/m...     

抑制mTOR信号通路对幼鼠肺损伤时p-AKT1分子的影响及意义

目的:探讨抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路在高体积分数氧(高氧)致SD幼鼠肺损伤时对磷酸化AKT1(p-AKT1)分子的影响和意义。方法:72只SD幼鼠(3周龄)随机分为空气+生理盐水组、高氧+生理盐水组、高氧+OSI-027组及高氧+雷帕霉素组(n=18),分别构建动物模型。高氧选择90%氧气持续干预,生理盐水、OSI-027和雷帕霉素干预分别在观察期第1、3、6、8、10和13天时经腹腔注射给药。在造模第3、7和14天时取各组幼鼠进行体重测量、肺湿干重比(wet/drg weight ratio,W/D)计算、肺组织病理学检查、肺泡间隔宽度测定和肺损伤评分,肺组织免疫组化和Western blot检测磷酸化S6K1(p-S6K1)和p-AKT1的分布与水平。结果:与空气组比较,高氧组幼鼠体重明显下降(P0.05),肺损伤急性期肺W/D增高(P0.05),肺泡间隔宽度及肺损伤评分明显增加(P0.05),肺组织p-S6K1阳性细胞增多(P0.05),肺组织p-AKT1阳性细胞减少(P0.05),p-S6K1蛋白显著升高(P0.01),p-AKT1蛋白明显减低(P0.01);与高氧组比较,高氧+OSI-027组的肺组织损伤减轻,肺组织p-S6K1阳性细胞减少(P0.05),p-AKT1阳性细胞增多(P0.05),p-S6K1蛋白水平显著降低(P0.05),p-AKT1蛋白水平增加(P0.05);高氧+雷帕霉素组的肺损伤进一步加重(P0.05),p-S6K1阳性细胞减少(P0.05),p-AKT1阳性细胞增加(P0.05),p-S6K1蛋白水平显著降低(P0.05),p-AKT1蛋白水平显著增加(P0.05)。与高氧+雷帕霉素组比较,高氧+OSI-027组的肺组织损伤减轻(P0.05),肺组织p-AKT1阳性细胞减少(P0.05),p-AKT1蛋白水平降低(P0.05)。结论:p-AKT1参与了高氧肺损伤的发生发展,其调控机制可能与抑制mTOR信号通路的活化有关。高氧肺损伤时,p-AKT1蛋白水平下降,mTOR抑制剂能增加p-AKT1蛋白水平,但只有mTORC1/2双重抑制剂OSI-027能减轻高氧所致SD幼鼠的肺损伤及纤维化。     

五味子乙素通过Wnt/β-catenin信号通路调节人胰腺癌细胞增殖、凋亡和侵袭

目的 研究五味子乙素对人胰腺癌细胞Panc-1细胞增殖,凋亡和侵袭的调控作用及对Wnt/β-catenin信号通路的影响.方法 不同、浓度的五味子乙素(12、24、48μg/ml)处理胰腺癌Panc-1细胞后,采用CCK8法检测Panc-1细胞增殖变化,Transwell法检测细胞侵袭情况,流式细胞术检测细胞凋亡的变化...     

姜黄素通过ATK/FoxM1信号通路调控胃癌干细胞增殖及凋亡

BACKGROUND:Curcumin has crucial inhibitory effects on various cancer cells and cancer stem cells. However, its effect on gastric cancer stem cells and the underlying mechanism of this effect are unclear. OBJECTIVE:To explore the effect of curcumin on gastric cancer stem cells and the underlying mechanism. METHODS:Tumor sphere-forming assay and gastric cancer stem cell markers (EpCAM and CD44) were used to separate gastric cancer stem cells from gastric cancer SGC7901 cell lines. Effects of curcumin on the proliferation and apoptosis of gastric cancer stem cells were determined by MTT and flow cytometry analysis, respectively. Western blot analysis was used to detect the expression levels of FoxM1, p-AKT, and AKT. LY294002, an inhibitor of the PI3K/AKT pathway, was used to determine the regulatory relationship between AKT and FoxM1 signaling pathways. RESULTS AND CONCLUSION:The EpCAM+/CD44+ gastric cancer stem cells were successfully isolated from SGC7901 cells. MTT assay showed that curcumin inhibited the proliferation of gastric cancer stem cells, while flow cytometry analysis showed that curcumin induced apoptosis in gastric cancer stem cells. In addition, the expression levels of p-AKT and FoxM1 were decreased by curcumin treatment. After being treated by LY294002, the expression levels of p-AKT and FoxM1 were down-regulated markedly. In conclusion, curcumin can inhibit cell proliferation and induce apoptosis in gastric cancer stem cells via the ATK/FoxM1 signaling pathway.     

MiR-634 通过mTOR 通路抑制宫颈癌细胞c4-1、caski 增殖并促进其凋亡的研究

目的:探讨MiR-634 通过mTOR 通路抑制宫颈癌细胞c4-1、caski 增殖并促进其凋亡的相关机制。方法:选取30 例宫颈癌组织标本和宫颈癌细胞c4-1、caski 作为研究对象,分析正常组织和宫颈癌组织的MiR-634 和mTOR 表达,MiR-634对宫颈癌细胞mTOR 的表达水平以及对宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。结果:宫颈癌组织MiR-634 相对表达水平显著低于正常组织(P<0.05),宫颈癌组织mTOR 相对表达水平显著高于正常组织(P<0.05),宫颈癌组织mTOR 的IS 得分显著高于正常组织(P<0.05);过表达MiR-634 显著降低mTOR 的RNA 和蛋白表达水平(P<0.05),抑制MiR-634 的表达显著提高mTOR 的RNA 和蛋白表达水平(P<0.05);过表达MiR-634 显著降低宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05),抑制MiR-634的表达显著提高细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05);抑制mTOR 的表达均显著降低细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。结论:MiR-634 通过抑制mTOR 的表达来抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭,是宫颈癌基因靶向治疗的潜在靶点。