TLR2基因敲除下调高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织炎症因子表达和细胞凋亡

目的研究Toll样受体2(TLR2)基因敲除对高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织炎症因子表达和细胞凋亡的影响。方法雄性C57BL6小鼠和TLR2基因敲除小鼠分为:正常对照组、肥胖组、TLR2基因敲除组和TLR2基因敲除肥胖组,并给予普通饮食或高脂饮食喂养。16周后检测各组小鼠空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和游离脂肪酸水平。分光光度计法检测小鼠脂肪组织Caspase3活性,Western blot检测Bcl2、Bax、MyD88和p65NFκB蛋白相对表达量。荧光实时定量PCR检测小鼠脂肪组织IL-6和TNF-αmRNA相对表达量。结果与正常对照组相比,肥胖组小鼠空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白水平降低和游离脂肪酸水平升高;脂肪组织Caspase3活性、Bax蛋白、MyD88蛋白、p65NFκB蛋白、IL-6 mRNA和TNF-αmRNA相对表达量升高,Bcl2蛋白相对表达量减少。与肥胖组相比,基因敲除肥胖组小鼠空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白水平降低和游离脂肪酸水平降低;脂肪组织Bcl2蛋白相对表达量增加,Caspase3活性、Bax蛋白、MyD88蛋白、p65NFκB蛋蛋白、IL-6 mRNA和TNF-αmRNA相对表达量减少。结论 TLR2基因敲除下调了高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织炎症因子的表达和细胞凋亡。     

IL-33对人永生化角质形成细胞系和模型小鼠银屑病样皮损的影响

目的观察白细胞介素-33(IL-33)对人永生化角质形成细胞系(HaCAT)和咪喹莫特(IMQ)诱导的小鼠银屑病样皮损的影响,并对其可能的机制进行探讨。方法不同浓度IL-33刺激HaCAT细胞;CCK8法检测细胞增殖;Western blot检测细胞中LC3、Beclin1和p-STAT3的表达。将BALB/c雌性小鼠随机分为:正常对照组、IMQ组(背部外涂5%咪喹莫特乳膏,建立银屑病样皮损模型)和IL-33处理组(腹腔注射IL-33)。Western blot检测皮损组织中自噬相关蛋白的表达。结果与对照组相比,25 ng/mL的IL-33处理组促进HaCAT细胞的增殖作用最明显(P<0.05),同时,IL-33可促进LC3、Beclin1和p-STAT3蛋白的表达(P<0.05)。在小鼠银屑病样模型中,与正常对照组相比,IMQ组小鼠背部出现鳞屑和红斑伴有表皮增厚,而IL-33处理组与IMQ组相比小鼠背部皮损鳞屑、红斑及增厚更明显(P<0.01)。IL-33处理组皮损中自噬相关蛋白的表达水平低于IMQ组(P<0.05),p-STAT3蛋白的表达水平均高于正常对照组和IMQ组(P<0.05)。结论IL-33促进HaCAT细胞的增殖,诱导细胞自噬,加重咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损的发生和发展,其机制可能是通过引起STAT3信号通路的活化而实现的。     

FAT/CD36在高脂喂养小鼠脂肪组织炎症中的作用

目的:探讨脂肪酸转运酶/白细胞分化抗原36(fatty acid translocase/CD36,FAT/CD36)在高脂饮食诱导的小鼠脂肪组织炎症中的作用。方法:将6周龄雄性C57BL/6J小鼠分别随机分为普通饮食组和高脂饮食组,喂养14周后,ELISA测定血清游离脂肪酸(FFA)含量,应用荧光实时定量PCR和Western blotting检测脂肪组织中FAT/CD36及炎症/趋化因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1、MIP-1)mRNA和蛋白的表达,免疫组织化学染色检测脂肪组织巨噬细胞浸润,比较高脂喂养14周的野生型小鼠和CD36基因敲除小鼠的脂肪组织炎症反应情况。结果:与普通饮食组相比,高脂饮食能增强C57BL/6J小鼠脂肪组织的FAT/CD36及炎症/趋化因子的表达,促进巨噬细胞在脂肪组织的浸润。与高脂饮食喂养的野生型小鼠相比,CD36基因敲除小鼠的脂肪组织炎症因子、趋化因子表达明显降低,脂肪组织巨噬细胞浸润减少。结论:高脂饮食通过上调脂肪组织FAT/CD36的表达激活了脂肪组织炎症。     

T淋巴细胞对高脂饮食引起的肠道炎症的影响

目的:探讨T淋巴细胞在高脂饮食导致的肠道炎症中所起的作用。方法:采用了T淋巴细胞缺失(CD3ε敲除)的小鼠模型,C57BL/6J野生型小鼠作对照,高脂喂养16周。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结肠组织中的炎性因子水平,苏木精-伊红(HE)染色直接观察肠道形态,检测肠道肌层厚度,同时通过免疫组织化学技术(IHC)观察肠道组织中免疫细胞的浸润情况。结果:高脂饮食饲喂小鼠16周后,小鼠体重明显增加。qRT-PCR检测显示,与正常饮食的野生型小鼠组相比,高脂饮食的野生型小鼠结肠组织中IL-1β(P0. 01)、IL-5(P0. 05)、TNF-α(P0. 05)、IFN-γ(P0. 05)以及IL-6(P0. 05)表达水平明显上调; HE染色显示高脂饮食组结肠肌层明显变薄,同时免疫组化的结果显示结肠组织中巨噬细胞浸润增强。以高脂饮食野生型小鼠为对照,高脂饮食的T淋巴细胞缺失小鼠的结肠组织中IL-1β(P0. 01)、IL-6(P0. 05)、IFN-γ(P0. 05)、IL-5(P0. 05)以及TNF-α(P0. 01)基因水平下调; HE染色显示高脂饮食的T淋巴细胞缺失小鼠结肠肌层增厚,同时免疫组化结果显示结肠组织中巨噬细胞浸润减少。结论:T淋巴细胞对高脂饮食导致的肠道炎症有促进作用。     

香栓菌抑制NLRP3炎症小体活化改善过敏性鼻炎北大核心CSCD

目的:研究不同剂量的香栓菌Trametes suaveolens不同提取物对豚草花粉诱导的小鼠季节性过敏性鼻炎(SAR)的影响。方法:将C57BL/6J小鼠随机分为9组:空白组、模型组、氟雷他定(LT)组、香栓菌水提物(TSW)高、低剂量组、香栓菌多糖(TSD)高、低剂量组、香栓菌石油醚提取物(TSPE)高、低剂量组,采用豚草花粉构建小鼠SAR模型,并对小鼠行为学评价,HE染色观察小鼠鼻黏膜组织病理学变化,ELISA检测小鼠血清和鼻腔灌洗液(NALF)中炎症因子水平。Western blot检测小鼠鼻黏膜组织中NLRP3、Caspase-1、IL-18、IL-1β蛋白表达水平。结果:与模型组相比,TSPE可减少炎症细胞浸润,降低小鼠血清中IgE、IL-18、IL-1β和NALF中IL-6、IL-18、IL-1β水平(P<0.05),显著下调鼻黏膜组织中NLRP3、Caspase-1、IL-18、IL-1β蛋白表达水平。结论:TSPE可改善豚草花粉诱导的小鼠SAR,其机制可能通过抑制小鼠鼻黏膜上皮细胞中NLRP3炎症小体活化,从而减轻炎症损伤。     

伊洛前列素对ILC2s 介导的小鼠急性过敏性气道炎症的作用研究

目的:探讨伊洛前列素(Iloprost)对IL-33 诱导的小鼠急性过敏性气道炎症中2 型固有淋巴细胞(ILC2s)的作用。方法:C57BL/6 小鼠随机分为DMSO 对照组、IL-33 刺激组、IL-33+iloprost 干预组和单独iloprost 组。HE 染色观察肺组织中炎性细胞浸润情况,PAS 染色观察黏液分泌情况,流式细胞术检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)以及肺组织中嗜酸性粒细胞(EOS)和ILC2s 的数量,real-time PCR 检测IL-5、IL-13、GATA3 和ST2 mRNA 的表达量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF 和肺匀浆上清中IL-5 和IL-13 的含量。结果: IL-33 刺激组小鼠肺组织切片可见大量炎性细胞浸润且黏液分泌增加;同时,小鼠BALF 和肺组织EOS 和ILC2s 的数量、细胞因子分泌量和mRNA 相对表达量均显著高于DMSO 对照组和单独iloprost 组,差异有统计学意义(P<0.05)。于IL-33+iloprost 干预组小鼠肺组织切片中炎性细胞浸润程度明显减轻且黏液分泌减少;同时,小鼠BALF 和肺组织中EOS 和ILC2s 的数量、细胞因子分泌量和mRNA 相对表达量均显著低于IL-33 刺激组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Iloprost 可能是ILC2s 的负调节因子,在一定程度上可减轻小鼠肺部急性过敏性炎症反应。     

G1254023X对白细胞介素6受体、趋化因子CX3CL1的抑制作用及其对冠心病的影响

目的 通过检测G1254023X干预的冠心病(CHD)小鼠主动脉血管直径及白细胞介素6受体(IL-6R)、趋化因子Chemokine(C-X3-C motif) ligand 1(CX3CL1)的表达,初步探究去整合素和金属蛋白酶10(ADAM10)影响CHD的机制.方法 用高脂高糖饲料饲养ApoE基因敲除小鼠制备CHD小鼠模型;采用B超法测量G1254023X组、模型组及空白对照组小鼠的主动脉血管直径;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)分别检测三组小鼠外周血IL-6R、CX3CL1的浓度;采用苏木素-伊红染色法(HE)检测小鼠主动脉组织的病理变化;分别用蛋白免疫印记法(WB),免疫组织化学法(IHC)检测三组小鼠主动脉组织中IL-6R、CX3CL1的表达差异.测量G1254023X组、模型组及空白对照组小鼠的主动脉血管直径.结果 模型组小鼠主动脉血管直径显著大于G1254023X组;模型组小鼠主动脉组织病理学变化大于G1254023X组;外周血样本和主动脉组织中IL-6R、CX3CL1浓度G1254023X组显著低于模型组;各项指标G1254023X组与空白对照组无显著差异.结论 特异性ADAM10抑制剂G1254023X可以有效缓解CHD小鼠主动脉血管直径狭窄,抑制IL-6R、CX3CL1的表达,延缓冠心病发展.     

TLR4/MyD88/AMPK通路参与调节高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织炎症和细胞凋亡北大核心CSCD

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)基因敲除对高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织炎症和细胞凋亡的影响。方法:雄性C57BL/6J和TLR4基因敲除小鼠随机分为正常对照组(NC)、肥胖组(OB)、TLR4基因敲除组(TK)、TLR4基因敲除肥胖组(TO),NC组给予正常饲料喂养,其他组给予高脂饲料喂养。16周后取血检测各组小鼠空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)和游离脂肪酸(FFA)水平;HE染色观察各组小鼠脂肪细胞形态变化;Western blot检测TLR4、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶α(p-AMPKα)、髓样分化因子88(MyD88)、Bax和Bcl-2蛋白表达;ELISA检测小鼠血清单细胞趋化因子-1(MCP-1)、IL-6、TNF-α、IL-10水平。结果:与NC组相比,OB组小鼠脂肪细胞明显增大,FPG、TC、TG、LDL、FFA、MCP-1、IL-6和TNF-α水平明显升高(P<0.01),HDL和IL-10水平明显降低(P<0.01,P<0.05),TLR4、MyD88和Bax表达明显增加(P<0.01),p-AMPKα和Bcl-2表达明显减少(P<0.05);与OB组相比,TO组小鼠上述检测指标表达明显逆转。结论:TLR4基因敲除可通过MyD88依赖的AMPK缓解高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织慢性炎症和细胞凋亡。     

非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型的建立

目的:建立并研究高脂饲料(HFD)联合不同浓度葡聚糖硫酸钠(DSS)饮水导致小鼠非酒精性脂肪肝炎(NASH)的动物模型,确定最适DSS浓度。方法:雄性昆明小鼠80只,随机分为8组,即正常对照组、HFD组、2%DSS组、2%DSS+HFD组、2.5%DSS组、2.5%DSS+HFD组、3%DSS组、3%DSS+HFD组。高脂组均给予高脂饲料,饲养1周后给予5 d相应浓度的DSS溶液,再换正常饮水。2周后处死,HE染色观察结肠和肝脏组织形态,油红O染色观察肝脏脂质沉积情况,RT-PCR检测肝脏chREBF、IL-6的表达情况。结果:组织病理结果显示,3种浓度DSS联合高脂组肝脏均有脂质沉积,并且与DSS浓度呈正相关;3种浓度DSS联合高脂组的结肠损伤与肝损伤结果一致。3种浓度DSS联合高脂组的脂代谢相关基因表达增加,与肝脏组织学结果一致,同时炎症因子表达升高,其中2.5%DSS高脂联合组IL-6表达显著上调(P0.001)。结论:给予DSS可加速高脂饮食诱导小鼠NASH模型的建立,且在本研究中确立2.5%DSS为最适浓度。     

miR-350-3p/IL-6/STAT3信号通路在脂肪性肝纤维化进展中的作用

目的探讨miR-350-3p/IL-6介导的STAT3/c-myc信号通路在脂肪性肝纤维化进展中的作用及相关机制。方法20只Balb/c雄性小鼠随机分为正常对照组和HFD+CCl_4组,正常对照组予以普通饮食,HFD+CCl_4组予以高脂高糖饮食并采用腹腔注射2%CCl4油溶液,每周2次,持续5周后处死小鼠,检测血清相关指标,HE及Masson染色观察肝组织形态及纤维化改变,免疫组化检测ki-67表达情况,qRT-PCR检测miR-350-3p、IL-6及肝细胞异常增生相关指标,Western blot检测STAT3/cmyc表达情况。结果与正常对照组比较,HFD+CCl_4组小鼠肝指数增加,血清中ALT与TG含量显著增加;HE及Masson染色显示HFD+CCl_4组小鼠肝脏脂质变性明显,并出现纤维沉积;在m RNA水平上,HFD+CCl_4组中miR-350-3p、IL-6显示良好的负调控关系;肝细胞异常增生相关基因PDGFRb、c-myc、TGF-β、Epcam、CD133、CD44、CD105的表达量明显高于正常对照组;Western blot结果显示,HFD+CCl_4组中p-STAT3及c-myc表达水平较正常对照组明显增加。结论高脂饮食联合CCl_4能够诱导肝脏发生纤维化病变且有肝细胞异常增生,其可能是通过miR-350-3p/IL-6介导的STAT3/c-myc信号通路发挥作用。     

高脂饮食诱导肥胖小鼠表达卵泡抑素样蛋白1与脂肪组织炎症和棕色脂肪的功能

目的 探讨卵泡抑素样蛋白1（FSTL1）在高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪炎症中的作用,以及对棕色脂肪功能的影响。 方法 6周龄C57BL/6 J小鼠分为两组,每组8只,给予12周正常饮食（RD）和高脂饮食（HFD）饲养,每周称量小鼠体重,记录小鼠摄食量;12周后,进行糖耐量和胰岛素耐量的检测并取材,称量小鼠的皮下白色脂肪、肾周白色脂肪、附睾白色脂肪和棕色脂肪的重量;HE染色观察小鼠白色脂肪中的冠状结构（CLS）及小鼠棕色脂肪组织变化,RT-PCR分析小鼠附睾白色脂肪炎症因子、肿瘤坏死因子α（TNF-α)、白细胞介素6（IL-6）和白细胞介素10（IL-10）的表达,以及FSTL1的表达;Western blotting检测棕色脂肪解耦联蛋白1（UCP1）与FSTL1蛋白的表达。 结果 与RD小鼠相比,HFD组小鼠的体重增加,摄食量减少,不同部位脂肪重量显著增加,葡萄糖耐受能力显著降低,胰岛素敏感性显著下降,附睾白色脂肪观察到炎症反应CLS且附睾白色脂肪中炎症因子TNF-α、IL-6及IL-10表达显著增高, FSTL1表达亦显著增加。Western blotting结果显示,HFD小鼠的棕色脂肪组织中UCP1与FSTL1表达水平均显著性高于RD组。 结论 在高脂饮食诱导的肥胖小鼠中,FSTL1的表达可能与脂肪炎症因子的分泌增加及棕色脂肪的功能有一定相关性。     

高脂饲养C57BL/6J小鼠肾周脂肪组织炎性反应的评估

目的评估高脂饲养C57BL/6J小鼠肾周脂肪组织炎性反应。方法将小鼠随机分为对照组(control组,n=6)和高脂饲养组(HFD组,n=6)。用RT-qPCR检测肾周脂肪组织中TNF-α、CD11c、IL-1β、IL-10、TGF-β1、CD206等mRNA的表达;免疫组织化学法检测肾周脂肪组织及肾实质F4/80、CD68、LCA的水平。结果与对照组比较,HFD组小鼠肾周脂肪组织TNF-α、IL-1β等mRNA相对含量升高(P0.05);HFD组的肾周脂肪巨噬细胞标志物F4/80,CD68及炎细胞广谱标志物LCA的表达均呈高表达(P0.05)。结论高脂饲养的C57BL/6J小鼠肾周脂肪组织确实存在明显的炎性反应。     

硫辛酸改善高脂小鼠氧化应激和慢性炎症的研究

目的:探讨由长期喂饲高脂引发的小鼠机体氧化应激对细胞因子的分泌以及炎症相关基因表达的影响,评价通过添加抗氧化剂硫辛酸对长期氧化应激和慢性炎症的改善作用。方法:30只C57BL/6雄性小鼠,随机分为3组:对照组,高脂模型组(HFD),硫辛酸组(LA)。喂饲10周后测定血浆和脾脏的氧化应激指标。酶联免疫法检测血浆中IFN-γ、IL-4、IL-6、TNF-α、IL-10的含量。荧光定量PCR检测脾脏炎症相关基因C-Jun、NF-κB以及与抗氧化相关基因Mt-1的表达。结果:长期高脂喂饲可导致小鼠免疫器官抗氧化酶活性显著降低,MDA含量显著升高,形成氧化应激。机体长期处于氧化应激态可使血浆IL-4和IL-10显著降低,IFN-γ、IL-6和TNF-α水平显著升高,同时C-Jun和NF-κB炎症反应相关基因表达上调、Mt-1的表达水平下调。添加0.1%LA可有效地防止机体氧化应激的形成。结论:长期高脂喂饲导致的氧化应激可影响机体的免疫功能并诱发慢性炎症反应,LA通过直接清除自由基、恢复氧化还原平衡解除慢性氧化应激从而保护小鼠的免疫功能免受损伤。     

NLRP3炎症小体及其下游分子在幽门螺杆菌感染小鼠的表达

目的 研究NLRP3炎症小体信号通路相关分子在幽门螺杆菌(H.pylori)感染C57BL/6小鼠胃组织和血清中的表达情况,初步探讨NLRP3炎症小体信号通路在H.pylori致病中的作用.方法 将C57BL/6小鼠分为H.pylori感染组和PBS对照组,于感染后不同时间点处死小鼠,RT-PCR检测小鼠胃组织中NLRP3炎症小体和下游信号通路分子mRNA表达,Western blot法检测小鼠胃组织中caspase-1蛋白表达,ELISA测定小鼠血清中IL-1β、IL-18和IL-33含量.结果 与对照组相比,H.pylori感染组小鼠胃黏膜均呈慢性炎症改变,且随时间延长,炎症程度逐渐加重.NLRP3炎症小体信号通路相关分子mRNA及caspase-1蛋白表达水平显著升高,血清中IL-1β、IL-18、IL-33的含量均显著增高.结论 H.pyori感染可以激活NLRP3炎症小体信号通路.     

TRPC6和α-actinin-4在高脂饮食C57BL/6J幼鼠肾小球中的表达及意义

目的探讨高脂饮食对幼鼠肾小球TRPC6和α-actinin-4蛋白表达的影响及意义。方法 36只3周龄雄性C57BL/6J幼鼠随机分为正常饮食组和高脂饮食组,分别给予标准饲料与高脂饲料喂养12周。通过免疫组织化学和免疫印迹技术检测TRPC6和α-actinin-4蛋白在小鼠肾小球中的表达变化。结果与正常饮食组相比,TRPC6蛋白在高脂饮食组C57BL/6J小鼠肾小球中表达显著升高,而α-actinin-4蛋白的表达却显著降低。结论在高脂饮食诱导的肾小球损伤中,TRPC6蛋白的高表达可能干扰了骨架蛋白α-actinin-4的正常表达,破坏了肾小球结构的稳定性,进而导致肾小球损伤。     

姜黄素通过IL-6/STAT3信号通路调控Th17/Treg平衡治疗溃疡性结肠炎

目的:观察姜黄素对溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠的疗效及对IL-6/STAT3信号通路中相关分子表达和结肠组织中Treg、Th17细胞水平的影响,探究姜黄素是否通过IL-6/STAT3信号通路调控Th17/Treg平衡以有效治疗UC。方法:采用葡聚糖硫酸钠(DSS)制备UC小鼠模型,将50只健康雌性BALB/c小鼠随机分为5组:正常对照组,UC模型组及姜黄素低、中、高剂量组。HE染色观察小鼠结肠黏膜组织损伤程度并评分,Western blot检测结肠组织中IL-6、STAT3及p-STAT3的蛋白水平,流式细胞术分析结肠组织中Treg和Th17细胞的水平,Western blot检测结肠组织中Treg转录因子FOXP3和Th17转录因子RORγt的表达情况。结果:UC小鼠结肠部位溃疡形成,镜下可见炎症和充血等病理改变,姜黄素中剂量组的黏膜损伤基本恢复正常,只有少量炎性细胞。与正常组相比,UC小鼠结肠组织IL-6、STAT3和p-STAT3的蛋白水平均显著增高;与模型组相比,姜黄素中剂量组IL-6、STAT3和p-STAT3的蛋白水平均明显降低,接近正常组,并且中剂量姜黄素能显著降低Th17细胞的水平和转录因子RORγt的表达,而显著升高Treg细胞的水平和转录因子FOXP3的表达。姜黄素低剂量组和高剂量组对上述指标均无明显影响。结论:姜黄素可以有效治疗DSS诱导的小鼠UC,其作用机制可能是通过IL-6/STAT3信号通路来调控Th17/Treg平衡。     

Bach2对Th2细胞内IL-33生物学功能的影响

目的：探讨Bach2与Th2细胞内IL-33生物学功能的关系。方法：构建Bach2基因的条件敲除小鼠(Bach2-CKO小鼠),将Bach2-CKO小鼠与正常小鼠分为两组,IL-33经鼻诱导Th2型免疫应答,对比分析两组小鼠肺部炎症情况;从小鼠脾脏中分离na?ve CD4~+T细胞并诱导分化为Th2细胞;下调(或上调)细胞内Bach2表达后给予IL-33刺激,检测Th2型细胞因子表达。结果：与正常小鼠相比,IL-33显著增加Bach2-CKO小鼠肺组织内炎症细胞浸润、黏液腺分泌以及IL-4、IL-5和IL-13mRNA表达;与正常Th2细胞相比,IL-33更加显著地促进Bach2-/-Th2细胞IL-5和IL-13表达(P<0.01);上调细胞内Bach2表达显著抑制IL-33相关IL-5和IL-13表达(P<0.01)。结论：Bach2参与Th2细胞内IL-33/ST2信号通路调控,可有效抑制该细胞内IL-33的生物学功能。     

IL-18在脓毒症肺损伤发生发展过程中的作用及机制研究北大核心CSCD

目的:研究IL-18在脓毒症肺损伤发展过程中的作用及调控机制。方法:成年雄性野生型C57BL/6(WT)和IL-18基因敲除(IL-18-/-)小鼠分为野生型小鼠对照组(WT组)、脂多糖(LPS)处理的野生型小鼠组(WT LPS组)、IL-18基因敲除的小鼠对照组(IL-18-/-组)、LPS处理的IL-18基因敲除小鼠组(IL-18-/-LPS组)。腹腔注射LPS(15 mg/kg)建立小鼠脓毒症模型,对照组注射等量生理盐水。观察各组小鼠72 h生存率并处死小鼠,HE染色观察肺部病理组织变化,RT-PCR及Western blot检测各组小鼠肺组织IL-18 mRNA及蛋白表达,免疫荧光检测肺组织IL-18表达及定位,TUNEL染色检测肺组织细胞凋亡,流式细胞术检测肺组织Treg/Th17比例,ELISA检测炎症因子TNF-α、IL-17A、TGF-1β、IL-10表达。Western blot检测各组小鼠肺组织RORγt、FoxP3蛋白表达及STAT3磷酸化水平。结果:LPS诱导后,小鼠肺组织高表达IL-18。与WT LPS组相比,IL-18-/-LPS组小鼠生存率显著提高,肺组织病理损伤减轻,凋亡细胞显著减少,Treg/Th17比例提高,抑炎因子TGF-1β、IL-10表达增加,而促炎因子TNF-α、IL-17A表达明显减少,肺组织RORγt蛋白表达增加,而STAT3磷酸化水平降低。结论:IL-18可通过上调STAT3磷酸化水平,促进Treg/Th17免疫失衡及炎症因子分泌,从而加剧脓毒症急性肺损伤。     

肥胖小鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化

背景:骨髓间充质干细胞分化受到多种因素的影响,肥胖小鼠骨髓间充质干细胞具有更佳的成骨分化能力。目的:探究正常饮食小鼠与高脂饮食诱导的肥胖小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的差异。方法:将4-6周龄Balb/c小鼠随机分为正常饮食组和高脂饮食组,饲养20周后,通过全骨髓培养法得到骨髓间充质干细胞,成骨诱导7 d后进行碱性磷酸酶染色以及qRT-PCR检测成骨相关基因的表达,成骨诱导14 d后进行茜素红染色。高脂饲养20周后,Micro-CT分析股骨骨量的变化,小鼠股骨切片进行苏木精-伊红染色。结果与结论:(1)与正常饮食组小鼠相比,高脂饮食饲养20周后小鼠体质量显著增加;(2)与正常饮食组小鼠骨髓间充质干细胞相比,高脂饮食组小鼠骨髓间充质干细胞中碱性磷酸酶阳性表达和钙结节数目显著增加,成骨相关基因碱性磷酸酶、骨桥蛋白和RUNT相关转录因子2表达水平升高;(3)Micro-CT重建和骨形态参数量化结果显示,与正常饮食组小鼠相比,高脂饮食组小鼠骨量显著增加,其中骨密度、骨体积分数、骨面积与骨体积比值、骨小梁厚度和骨小梁数目均显著增加,而骨小梁分离度显著减小,苏木精-伊红染色显示高脂饮食组小鼠股骨内含...     

天抗(TK)对脂多糖诱导小鼠炎症模型的抗炎作用及其机制

目的研究天抗(TK)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠炎症模型的抗炎作用及机制研究。方法将42只昆明小鼠随机分为正常对照(NC)组、模型对照(LPS)组、地塞米松(DXM)组、天抗低(TK-L)、中(TK-M)和高(TK-H)剂量组(0.2,0.8和3.2 g/kg)。各组分别灌胃给药7 d后,腹腔注射30 mg/kg的LPS诱导小鼠急性炎性模型,6 h后处死小鼠,检测小鼠脾脏指数,ELISA测定小鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平;生化法检测小鼠血清中SOD和MDA的表达;qRT-PCR检测小鼠脾脏TLR4、MyD88、TRAF6、p65、IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA的表达水平;Western blot检测小鼠脾脏TLR4、MyD88、TRAF6、p-p65和p65蛋白表达水平。结果与LPS组相比,TK组小鼠的脾脏指数明显降低,血清和脾脏组织中IL-1β、IL-6、TNF-α和MDA水平显著下降,SOD水平明显升高,小鼠脾脏组织的TLR4、MyD88、TRAF6和p-p65等蛋白及mRNA表达水平均明显降低。结论天抗对LPS诱导的小鼠急性炎症模型具有抗炎作用,其作用机制可能是通过TLR4/MyD88/NF-κB(p-65)信号通路抑制炎症因子的释放。