EMP1基因对口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭影响的体外研究

目的:体外观察EMP1基因对口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:构建pEGFP-N1-EMP1表达载体,稳定转染口腔鳞癌细胞系Tb3.1,并以野生型Tb3.1和pEGFP-N1稳转的Tb3.1为对照,用MTT检测细胞增殖,绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期变化;用Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭能力;组间比较采用单因素方差分析。结果:相比野生型Tb3.1和Tb3.1-pEGFP-N1细胞,Tb3.1-pEGFP-N1-EMP1细胞生长受到抑制,同时其S+G2-M期细胞比例减少(P＜0.05),迁移和侵袭细胞数目减少(P＜0.05)。结论:EMP1在口腔鳞癌的发生、发展中作为抑癌基因可能对口腔鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭起抑制作用。     

PD-L1下调对口腔鳞癌细胞生物学行为的影响

目的 研究PD-L1基因对口腔鳞癌细胞生物学行为的影响,初步探讨PD-L1在口腔鳞癌进展过程中发挥的作用.方法 采用脂质体2000(lipofectamine 2000)转染小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)的方法,对口腔鳞癌细胞系细胞中PD-L1基因进行敲减,real-time PCR检测敲减效果.利用MTT法比较PD-L1敲减组与对照细胞增殖能力的差异.克隆形成实验评价PD-L1对肿瘤细胞克隆形成能力的影响.划痕实验研究PD-L1对细胞迁移能力的影响.Transwell实验验证PD-L1对细胞侵袭能力的影响.提取口腔鳞癌病人组织标本RNA并通过real-time PCR的方法比较PD-L1的表达差异.结果 转染siRNA后,细胞PD-L1表达明显下降,PD-L1敲减细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力都较对照组细胞减弱.在临床标本的检测中,证实了PD-L1在口腔鳞癌组织中高表达.结论 PD-L1能对口腔鳞癌细胞的增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力都具有明显影响,可能在口腔鳞癌的进展过程中发挥一定作用.     

扁塑藤素对口腔鳞癌细胞侵袭和迁移的影响

目的:探讨扁塑藤素对人口腔鳞癌细胞侵袭和迁移能力的影响及其可能的作用机制.方法:体外培养人口腔鳞癌细胞系CAL-27和SCC-15,不同浓度扁塑藤素诱导两种细胞后,CCK-8实验检测扁塑藤素对两种细胞增殖能力的影响,计算扁塑藤素不同作用时间的半数抑制浓度IC50;划痕实验及Transwell小室实验分别检测扁塑藤素对口...     

ADAR1对口腔鳞癌细胞生物学特征的影响

检测RNA编辑酶1（ ADAR1）在口腔鳞癌细胞中的表达,探讨其对口腔鳞癌细胞生物学行为特征的影响及作用机制。方法：利用实时定量RT?PCR、Western Blot检测ADAR1在口腔鳞癌细胞中的表达;化学合成siRNA（ si?ADAR1）转染细胞,观察其迁移和侵袭能力;检测ADAR1敲减后口腔鳞癌细胞中上皮间质转化指标（ Vimentin、E?cadherin）、干性指标（ Sox2、Oct4）以及 onco?microRNAs （ miR?21?3p、miR?18a?3p、miR?210?3p、miR?155?5p、miR?181a?3p、miR?19a?3p ）表达水平。结果：ADAR1在口腔鳞癌细胞中高表达;ADAR1敲减后的口腔鳞癌细胞迁移和侵袭能力下降（P＜0．05）,上皮间质转化指标 E?cadherin低表达、Vimentin高表达,干性指标（ Sox2、Oct4）及口腔鳞癌相关onco?MicroRNAs低表达。结论：ADAR1与口腔鳞癌细胞的生物学行为密切相关,推测 ADAR1可能通过促进口腔鳞癌相关 onco?microRNAs成熟影响口腔鳞癌细胞的生物学行为。     

干扰MT1-MMP表达对口腔鳞癌细胞增殖、侵袭的影响

目的：检测膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)在口腔鳞癌（OSCC）中的表达,探讨其对OSCC细胞增殖、侵袭的影响。方法：选取40例OSCC及癌旁组织样本,实时荧光定量PCR检测样本中MT1-MMP及上皮细胞钙黏蛋白（E-cadherin）mRNA表达。采用小干扰RNA(siRNA)靶向干扰HSC3细胞MT1-MMP基因,实验分为siControl、siMT1-MMP、siControl+转化生长因子-β1(TGF-β1)及siMT1-MMP+TGF-β1组。采用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测MT1-MMP、E-cadherin、TGF-β信号通路相关蛋白CUTL1及Wnt5a的表达。结果：相对于癌旁组织,OSCC组织中MT1-MMP mRNA水平为高表达,E-cadherin为低表达（P<0.05）;在干扰MT1-MMP表达后,HSC3细胞的增殖能力无明显变化（P>0.05）;与siControl和siMT1-MMP组比较,siControl+TGF-β1组和siMT1-MMP+TGF-β1组细胞侵袭能力...     

非转移性黑色素瘤糖蛋白B对口腔鳞癌细胞增殖、侵袭影响的研究

目的研究非转移性黑色素瘤糖蛋白B(glycoprotein(transmembrane)nonmetastatic melanoma protein b,GPNMB)对口腔鳞癌细胞增殖、侵袭的影响。方法采用RT-PCR及Western blot法检测口腔鳞癌组织、口腔鳞癌细胞中GPNMB的表达变化;构建GPNMB-siRNA载体,转染细胞后分别采用MTT法、Transwell小室法观察其对Tca-8113细胞增殖、侵袭的影响。结果 GPNMB在口腔鳞癌组织及口腔鳞癌细胞中均呈现高表达;增殖实验结果表明GPNMB-siRNA可显著抑制Tca-8113增殖;细胞侵袭结果表明GPNMB-siRNA可显著抑制Tca-8113侵袭。结论 GPNMB在口腔鳞癌细胞的增殖和侵袭中起着重要作用。     

G蛋白信号调节因子2在调控口腔鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭中的作用及分子机制

目的 探讨G蛋白信号调节因子2(RGS2)对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭的影响及调控机制.方法 基于TCGA数据库,评估RGS2在头颈鳞状细胞癌及配对癌旁组织中表达情况,并分析其临床病理相关性;口腔鳞状细胞癌细胞系(SCC-9、Cal-27、Fadu)分别稳定过表达RGS2和空载对照基因,通过Transwell侵袭实验...     

KLF4转染对口腔鳞癌细胞侵袭能力的影响

目的 观察KLF4转染对人口腔鳞癌细胞系SCC15侵袭能力的影响.方法 培养人口腔鳞癌细胞系SCC15,构建pReceiver-Lv105/KLF4慢病毒表达载体,包装病毒颗粒,感染SCC15后,puromycin筛选KLF4稳定表达的细胞系.荧光显微镜和免疫荧光细胞化学鉴定病毒感染成功.然后通过划痕实验检测KLF4转导对细胞体外迁移能力的影响.Transwell细胞侵袭实验检测KLF4转导对细胞侵袭能力的影响.实时荧光定量PCR检测与细胞侵袭和迁移密切相关的因子MMP-9和Twist1的表达.结果 与对照载体转导组SCC15/Lv105细胞相比,SCC15/KLF4细胞中KLF4的表达明显增强.SCC15/KLF4细胞的相对迁移率显著高于SCC15/Lv105细胞(P＜0.01).SCC15/KLF4组的侵袭穿膜细胞数明显多于SCC15/Lv105组(P＜0.05).另外,SCC15/KLF4细胞中MMP-9和Twist1 RNA的表达也高于对照组SCC15/Lv105细胞,其中MMP-9 RNA的表达升高更为显著(P＜0.01).结论 KLF4转导SCC15细胞后,可能通过增强MMP-9和Twist1的表达促进细胞的迁移和侵袭能力.     

SREBP2对口腔鳞癌细胞增殖和迁移的影响及其调控机制

目的:探讨胆固醇调节元件结合蛋白2(SREBP2)在口腔鳞癌(OSCC)中的调控机制,通过敲低和过表达SREBP2,分析其对口腔鳞癌细胞CAL27增殖、迁移、侵袭的影响及作用机制.方法:采用实时定量反转录PCR(qRT-PCR)检测SREBP2在OSCC中的表达量.构建siRNA和过表达质粒并转染CAL27细胞,通过细...     

c-fos调控p16/CyclinD1信号途径并促进口腔鳞状细胞癌增殖和迁移

目的:探讨c-fos对口腔鳞状细胞癌增殖和迁移的影响及作用机制.方法:免疫组化法分别检测口腔鳞状细胞癌组织标本和正常口腔黏膜组织标本(n=60)中的CyclinD1、p16和c-fos.根据不同处理将HN6和SCC9细胞分为空白对照组、siRNA-scramble组、siRNA-c-fos组.检测各组细胞中CyclinD1和p16 mRNA和蛋白表达量的变化,以及细胞增殖和迁移能力的变化.结果:与正常组比较,病例组中c-fos和CyclinD1表达增加,p16表达降低;与空白对照组相比,siRNA-c-fos组HN6和SCC9细胞中CyclinD1表达显著降低,p16表达明显上升,细胞的增殖能力和迁移能力都显著下降.结论:c-fos可以通过p16/CyclinD1信号途径增强口腔鳞状细胞癌增殖和迁移.     

Bmi1对舌鳞癌侧群细胞迁移、侵袭和增殖能力的调控作用及机制探讨

目的: 探讨Bmi1如何调控舌鳞癌侧群细胞的迁移、侵袭和增殖能力。 方法: 首先采用Hoechst33342法,利用流式细胞仪分选舌鳞癌细胞株UM1（高转移株）中的侧群细胞（side population cell, SP）和非侧群细胞（non-side population cell, Non-SP）。Transwell 实验检测沉默Bmi1后SP细胞的迁移、侵袭能力。球囊形成和平板克隆实验检测沉默Bmi1后SP细胞的球囊和克隆形成率;CCK8 实验检测沉默Bmi1后SP细胞的增殖能力。Western免疫印迹检测沉默Bmi1后SP细胞中侵袭、转移相关基因（SOD2、Slug）及干细胞标志物（ABCG2、Nanog）的表达水平。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学处理。 结果: 转染Bmi1 siRNA使SP细胞中Bmi1表达水平下调后,SP细胞的迁移和侵袭能力显著下降;球囊形成率和克隆形成率也显著低于对照组;增殖能力受到抑制;SOD2、Slug和干细胞标志物ABCG2和Nanog的表达水平显著下降。 结论: 沉默Bmi1可调控舌鳞癌侧群细胞的迁移、侵袭和增殖。     

热疗联合Id-1基因沉默对舌鳞癌CAL-27细胞增殖及侵袭的影响

目的: 探讨热疗联合Id-1基因沉默对舌鳞癌细胞增殖及侵袭的影响及其机制。方法: 将培养的舌鳞癌细胞株CAL-27分为4组。①沉默Id-1组（Id-1-siRNA）—用siRNA基因转染法沉默舌鳞癌CAL-27细胞中Id-1的表达,RT-PCR法检测其Id-1的mRNA表达变化;②热疗组（HT）—细胞置于42.5℃恒温培养箱内40min;③联合组（HT+ Id-1-siRNA）—siRNA基因转染法沉默细胞内Id-1的表达后进行42.5℃、40 min的热疗处理;④空白对照组—常规培养细胞。通过CCK8和Transwell侵袭实验,分别检测CAL-27细胞的增殖能力和侵袭能力变化; Western免疫印迹法检测CAL-27细胞中PI3K、磷酸化Akt（p-Akt）蛋白表达变化。采用SPSS19.0软件包对数据进行统计学分析。结果: siRNA能成功沉默CAL-27细胞内Id-1的表达,沉默Id-1组与空白对照组相比,Id-1的mRNA表达水平下降81.6%。沉默Id-1和热疗均可抑制CAL-27细胞的增殖和侵袭能力,下调PI3K、p-Akt蛋白表达（P<0.05）,热疗联合沉默Id-1作用于CAL-27细胞后的结果更为显著（P<0.01）。结论: 热疗协同沉默Id-1可显著抑制人舌鳞癌细胞的增殖及侵袭能力,其作用是通过PI3K/Akt信号通路来实现。     

基质金属蛋白酶9抑制剂对人舌鳞癌SCC-25细胞侵袭、迁移能力的影响及机制探讨

目的:探讨基质金属蛋白酶9(MMP-9)抑制剂对人舌鳞状细胞癌(TSCC)SCC-25细胞侵袭、迁移能力的影响及其相关机制.方法:取对数生长期SCC-25细胞,分别采用0、5、10、20μmol/L的MMP-9抑制剂BB-94干预,分别设为对照组、实验A组、实验B组和实验C组.采用RT-qPCR和Western免疫印迹...     

miR-22 regulates cell invasion,migration and proliferation in vitro through inhibiting CD147 expression in tongue squamous cell carcinoma

ObjectivesTongue squamous cell carcinoma (TSCC) is the most common type of head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) in China, and its survival rate remains unsatisfactory. miR-22 has been identified as a tumor suppressor in many human cancers, and high expression of CD147 occurs in many tumors. The aim of the present study was to investigate the expression and function of miR-22 in TSCC and its relationship with the expression of CD147.MethodsTCA8113 cells were transiently transfected with a miR-22 mimic/inhibitor. Subsequently, a validation with Real-time RT-PCR was performed to analyze the miR-22 expression level, and a CCK-8 proliferation assay and transwell migration and invasion assays were carried out. Cotransfections using As-miR-22/si-CD147 mRNA or a miR-22/CD147 overexpression vector were applied, and we investigated the biological effects on cotranscribed TCA8113 cells.ResultsqRT-PCR confirmed that miR-22 or As-miR-22 were successfully transfected into TCA8113 cells. Suppressing miR-22 resulted in a promotion of cell proliferation and motility and an up-regulation of CD147 in TCA8113 cells in vitro. In contrast, increasing miR-22 inhibited cell proliferation and motility and down-regulated CD147. Furthermore, the reduction or overexpression of CD147 can reverse the promoting or suppressive effects of miR-22, respectively.ConclusionsThe down-expression of miR-22 can regulate cell growth and motility in TSCC cells, which indicates that miR-22 acts as a tumor suppressor in TSCC. Additionally, CD147 is subsequently up-regulated when miR-22 inhibited. Taken together, the findings of this research defined a novel relationship between the down-regulation of miR-22 and the up-regulation of CD147 and demonstrated that CD147 is a downstream factor of miR-22.     

shRNA沉默LASP-1对舌鳞状细胞癌SCC9细胞增殖和迁移的影响

目的：探讨LASP?1在人舌鳞状细胞癌细胞中的表达,并应用shRNA沉默人舌鳞状细胞癌细胞SCC9中LASP?1基因,研究LASP?1对SCC9细胞增殖和迁移能力的影响。方法构建携带绿色荧光蛋白的LASP?1 shRNA质粒及阴性对照组质粒LASP?1 shNC,通过脂质体转染SCC9细胞,采用MTT法检测细胞增殖;RT?PCR法检测细胞LASP?1 mRNA表达;Western blot检测细胞LASP?1蛋白的表达;运用Transwell小室实验检测细胞迁移能力。结果 LASP?1在舌鳞状细胞癌细胞中高表达;实验组和阴性对照组分别转染相应质粒48 h后细胞均有绿色荧光蛋白表达,表明质粒转染成功;实验组SCC9细胞LASP?1 mRNA和LASP?1蛋白表达明显降低;与空白对照组相比,实验组细胞培养48 h和72 h细胞存活率分别降低了（51.23±1.47）%和（50.07±2.11）%;Transwell实验结果显示, LASP?1基因被沉默后细胞迁移能力明显下降,比对照组降低约43%。结论 LASP?1在舌鳞状细胞癌细胞中高表达,下调LASP?1基因表达可抑制SCC9细胞的增殖和迁移。     

口腔鳞癌中MMP-1、MMP-2、uPA的表达与肿瘤侵袭和转移的关系

目的:探讨基质金属蛋白酶-1、2(MMP-1、MMP-2)、尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)在口腔鳞癌中的表达及与肿瘤侵袭和转移的关系。方法:采用免疫组织化学通用型两步法检测80例口腔鳞癌患者的癌旁正常组织和癌组织中MMP-1、MMP-2、uPA的表达。结果:口腔鳞癌组织中MMP-1、MMP-2、uPA的表达明显高于口腔癌旁正常组织(P<0.05)。中低分化鳞癌中MMP-1的表达明显高于高分化鳞癌(P<0.05),高分化鳞癌中MMP-1的表达明显高于癌旁正常组织(P<0.05);高分化鳞癌与中低分化鳞癌中MMP-2、uPA的表达明显高于癌旁正常组织(P<0.05),高分化鳞癌与中低分化鳞癌中MMP-2、uPA的表达水平基本一致(P>0.05)。MMP-1的表达与口腔鳞癌的T分期、生长部位无明显的相关性,与生长方式、病理学分级、临床分期、淋巴结状况有明显的正相关性(r分别是0.363、0.375、0.479、0.506);MMP-2的表达与口腔鳞癌的生长方式、生长部位、病理分级无明显的相关性,与T分期、临床分期、淋巴结状况有明显的正相关性(r分别是0.300、0.552、0.626);uPA的表达与口腔鳞癌的生长部位、病理分级无明显的相关性,与T分期、生长方式、临床分期、淋巴结状况有明显的正相关性(r分别是0.292、0.279、0.525、0.524)。结论:MMP-1、MMP-2、uPA的表达与口腔鳞癌的侵袭、转移关系密切,有望在临床上成为判断侵袭、转移指标。MMP-1是口腔鳞癌颈淋巴结转移的危险因子。     

Claudin-1在口腔鳞状细胞癌中的表达

目的:探讨Claudin-1在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达水平、分布特征及其与临床病理因素之间的关系。方法:采用免疫组化SP法检测67例OSCC与10例癌旁口腔上皮中Claudin-1的表达信号。采用SPSS 13.0软件包进行计数资料χ2检验。结果:Claudin-1在口腔上皮中以强阳性表达为主。在高分化鳞癌中,阳性表达近似于口腔上皮,信号分布于细胞膜;在中、低分化鳞癌中,信号分布趋向细胞质,其表达水平呈递减趋势。Claudin-1在OSCC间质纤维增生区域阳性表达信号呈增强趋势;在OSCC淋巴细胞密集区表达水平升高。Claudin-1的表达与临床分期、组织分型、是否有淋巴结转移均有相关性(P<0.05)。临床分期中,Ⅲ+Ⅳ期癌组织Claudin-1阳性表达水平明显低于Ⅰ+Ⅱ期组;组织分型中,中、低分化组Claudin-1阳性表达水平显著低于高分化组;有颈淋巴结转移组,Claudin-1阳性表达水平显著低于无转移组(P<0.05)。结论:Claudin-1在OSCC不同临床分期及组织分型中均有不同程度表达,随着肿瘤分化程度降低,表达信号下调,且Claudin-1的表达水平与肿瘤细胞微环境相关。