miR-182靶向调控PI3K/AKT/FOXO3a信号通路对胶质瘤干细胞生物学行为的影响及其机制研究

目的 观察miR-182靶向调控PI3K/AKT/FOXO3a信号通路对胶质瘤干细胞(GSCs)生物学行为的影响,并研究其作用机制.方法 成功从胶质瘤患者病灶组织中分离出GSCs并予以培养、传代及鉴定,分为空白对照组(生理盐水溶液)、miR-182 mimics组(细胞转染miR-182 mimics)及阴性对照组(细...     

脑胶质瘤PI3K信号通路的研究进展

脑胶质瘤是最常见的颅内原发性肿瘤,因多数呈浸润性生长,治疗效果不佳,寻找有效的治疗手段势在必行。目前研究表明,胶质瘤的恶性进展涉及信号转导通路的异常,这为开辟新的治疗手段提供了新思路。现已初步证实,磷酸磷脂酰肌醇-3-羟基激酶信号转导通路异常与胶质瘤的发生、发展关系最为密切,故本文着重对该通路的相关内容作简要介绍。     

miR-101-3p在胃癌中的表达及其靶向STC-1基因调控PI3K/AKT信号通路对癌细胞侵袭转移和血管生成的影响

目的 探究miR-101-3p在胃癌中的表达及其靶向STC-1基因调控PI3K/AKT信号通路对癌细胞侵袭转移、血管生成的作用机制。方法 qRT-PCR检测胃癌组织及BGC-823细胞中miR-101-3p和STC-1 mRNA的表达,并分析miR-101-3p表达与患者临床病理因素的关系;通过LipofectamineTM 2000将miRNA模拟物和质粒分别或者联合转染细胞;TargetScanHuman预测及双荧光素酶报告验证miR-101-3p对STC-1的靶向调控关系;划痕实验、Transwell小室实验、Matrigel体外成管实验及Westernblot检测验证miR-101-3p靶向STC-1基因对癌细胞的侵袭转移和血管生成的影响及可能的机制,并通过裸鼠致瘤实验检测移植瘤的发展。结果 胃癌组织中STC-1的表达水平高于正常组织。与正常胃组织和GES-1细胞相比,胃癌组织和BGC-823细胞中miR-101-3p下调,STC-1 mRNA上调,且miR-101-3p水平与STC-1水平负相关,miR-101-3p水平与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移显著相关（P<0.05）;过表达miR-101-3p可抑制STC-1的表达,下调p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、MMP-2、MMP-9、VEGF、Ang2水平,抑制肿瘤细胞的侵袭转移和血管生成,降低移植瘤体积和重量（P<0.05）。结论 miR-101-3p在胃癌中表达下调,能够靶向STC-1基因调控PI3K/AKT信号通路抑制胃癌细胞BGC-823的侵袭转移和血管生成及体内移植瘤的进展。     

PFKFB3在胃癌中的表达及对胃癌细胞生长和凋亡的影响研究

背景与目的:6-磷酸果糖激酶-2同工酶3(6-phosphofructo-2-kinase 3,PFKFB3)与肿瘤的发生、发展密切相关,且对肿瘤细胞的生物学行为具有重要的调节作用。分析PFKFB3在胃癌组织及癌旁组织中的表达,并观察其对胃癌细胞生长和凋亡的作用及机制。方法:采用TCGA数据库分析72例在南昌大学第二附属医院及第三附属医院经外科手术切除的新鲜胃癌标本及其相应的癌旁组织中PFKFB3的表达,并分析PFKFB3的表达与胃癌预后的关系。进一步通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)及免疫组织化学法分析胃癌组织标本及癌旁组织标本中PFKFB3的表达。shNC及shPFKFB3质粒转染至胃癌细胞中,采用RTFQ-PCR和Western blot验证转染效率。分别通过细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)实验、EdU实验、流式细胞术和Western blot分析PFKFB3下调后对胃癌细胞的增殖能力、细胞周期变化和细胞凋亡的影响。最后采用Western blot分析PFKFB3影响胃癌细胞生长的机制。结果:TCGA数据库分析显示,胃癌组织中PFKFB3的表达明显高于癌旁组织(P<0.05),且PFKFB3高表达与胃癌患者较差的预后密切相关。另外,RTFQ-PCR、Western blot及免疫组织化学检测也同样证实PFKFB3在胃癌组织中高表达(P<0.01),且PFKFB3的表达升高与淋巴结转移及TNM分期密切相关(P<0.05)。沉默胃癌细胞中PFKFB3的表达后,其生长能力明显减弱(P<0.01),胃癌细胞凋亡比例增加(P<0.01),细胞周期G1期阻滞(P<0.01)。PFKFB3通过激活磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路而调控胃癌细胞的生长。结论:PFKFB3在胃癌组织中高表达,且与患者预后密切相关,沉默PFKFB3的表达后抑制胃癌细胞的生长并促进其凋亡,PFKFB3可能是胃癌靶向治疗的潜在生物标志物。     

趋化因子受体CCR7与PI3K/Akt通路在胃癌组织中的表达及意义

目的 观察趋化因子受体CCR7和磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（PKB或Akt）在胃癌组织中的表达情况,探讨CCR7与PI3K/Akt通路的关系。方法 采用RT-PCR法检测32例胃癌及相应癌旁对照组织中CCR7mRNA、PI3KmRNA、AktmRNA的表达;Western Blotting法检测CCR7、p-Akt蛋白的表达。结果 胃癌组织中CCR7mRNA、PI3KmRNA、AktmRNA与癌旁对照组织的表达水平相比,差异均有显著性（P〈0.001）,且CCR7mRNA与PI3KmRNA、AktmRNA表达呈正相关（P〈0.05）。CCR7、P-Akt蛋白在胃癌组织中的表达水平明显高于癌旁对照组织（P〈0.05）,两者表达与肿瘤TNM分期、浸润深度、分化程度、淋巴结转移与远处转移有关（P〈0.05）,并且CCR7、P-Akt表达水平呈正相关（P〈0.05）。结论 胃癌组织中高表达的CCR7可能通过PI3K/Akt通路促进胃癌的侵袭转移。     

LINC AC004463.6通过PI3K/AKT/BCL-2通路对肝细胞癌细胞生物学行为的影响

目的:探索LINC AC004463.6通过PI3K/AKT/BCL-2通路对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞生物学行为的影响。方法:运用细胞转染技术构建细胞系,实时荧光定量PCR验证,运用CCK8法、Transwell实验、EdU实验和流式细胞仪检测凋亡技术观察细胞功能学变化,运用Western blotting和ELISA技术探索其可能作用机制。结果:LINC AC004463.6在HCC中异常上调,在HCC细胞系和L02细胞中均检测到LINC AC004463.6的水平。选取SMCC7721和QGY7701作为LINC AC004463.6高表达细胞。CCK8和EdU实验结果表明,LINC AC004463.6表达降低显著抑制了SMCC7721和QGY7701细胞的增殖。而LINC AC004463.6基因敲除细胞中过表达LINC AC004463.6可使细胞增殖恢复和增强。Transwell实验检测表明shRNA处理的SMCC7721和QGY7701细胞侵袭性显著降低;经Lv-Rescue质粒处理后,细胞侵袭恢复并增强。LINC AC004463.6表达降低的细胞凋亡水平较高;LINC AC004463.6基因在LINC AC004463.6基因敲低的细胞中过表达后,细胞的凋亡水平有所恢复。Western blotting和ELISA检测提示shRNA组细胞BCL-2蛋白表达水平明显下调,同时PI3K和AKT蛋白表达水平明显下降;与此相反BAX蛋白表达水平升高。结论:LINC AC004463.6可能通过PI3K/AKT/BCL-2通路改变肿瘤细胞的生物学行为。LINC AC004463.6可能是诊断HCC的一个前瞻性生物标志物。     

长链非编码RNA PWRN1通过PI3K/Akt信号通路对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA Prader-Willi区域非蛋白质编码RNA 1(PWRN1)是否通过磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)通路调控乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移过程。方法 采用实时荧光定量PCR(q PCR)检测正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞(BT474、BT549、T47D、MCF7、MDA-MB-453、MDA-MB-231)的PWRN1水平。选择MDA-MB-231细胞并分为空白对照组(不进行转染)、阴性对照组(转染空载体pc DNA3.1)和PWRN1过表达组(转染过表达载体pc DNA3.1-PWRN1)。细胞计数法(CCK-8)、划痕愈合实验和Transwell小室实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。Western blotting和q PCR检测Snail、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)和磷酸化丝氨酸苏氨酸蛋白激酶1(p-Akt1)的水平。结果 乳腺癌细胞的PWRN1水平均低于MCF-10A细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组和阴性对照组相比,PWRN1过表达...     

微小RNA-766对肝细胞癌细胞生物学行为和PI3K/AKT/FOXO1通路的影响

目的 探讨微小RNA-766(miR-766)对肝细胞癌(HCC)细胞生物学行为和磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶信号/叉头盒O1(PI3K/AKT/FOXO1)通路的影响。方法 实时定量PCR(qPCR)检测HCC细胞的miR-766表达;向SMMC-7721细胞转染miR-766抑制剂来下调其表达,随后采用MTT和流式细胞术检测miR-766表达抑制对SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响,划痕和Transwell小室实验检测miR-766表达抑制对SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响,qPCR或Western blot检测B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(CC3)和磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)的表达,双荧光素酶报告基因实验鉴定miR-766和FOXO1的靶向关系。结果 MiR-766在HCC细胞中的表达异常增高(P<0.05),下调miR-766明显抑制SMMC-7721细胞的增殖、迁移和侵袭能力且促进细胞凋亡(P<0.05)。MiR-766直接靶向调控FOXO1表达,下调miR-766表达能够增加FOXO1和CC3表达,...     

阻断PI3K/AKT通路对乳腺癌细胞放射敏感性影响的研究

目的 研究抑制磷脂酰肌醇3激酶和（或）蛋白激酶B（P13K／AKT）生存传导路径是否改变乳腺癌细胞的放射敏感性。方法 用乳腺癌细胞细胞株MCF7为实验对象，分别接受单纯放射、Ly294002（P13K抑制剂）和二者结合处理。通过Western印记法证实Ly294002可下调AKT活性。采用成克隆法定量分析细胞增殖性死亡。通过半胱天冬酶-3（easpase-3）活性评估细胞凋亡。结果 单纯Ly294002（5μmol／L）可抑制AKT的磷酸化，而单纯放射对AKT的活性无明显影响，二者结合可提高对AKT活性的抑制作用。Ly294002（5μmol／L）在放射前与细胞作用1h及放射后作用10d均可提高MCF7细胞对放射的敏感性。Ly294002结合放射可增加MCF7细胞增殖性死亡，SF4值的放射增敏比为1．25，D0值的放射增敏比为1．42。Ly294002可增加MCF7细胞放射后诱导的细胞凋亡。结论 抑制P13K通过降低AKT活性，增加MCF7细胞对放射的敏感性，为筛选放射敏感剂进行临床实验提供了依据。     

nm23-H1基因转染对人高转移大细胞肺癌细胞株生物学行为的影响及作用机理

背景与目的nm23-H1基因已被证明是一个肿瘤转移抑制基因,但其相关作用机理仍不明确。本研究通过比较nm23-H1基因转染前后人高转移大细胞肺癌细胞株L9981生物学行为的变化,探讨nm23-H1基因影响人高转移大细胞肺癌细胞株生物学行为的可能机理。方法应用细胞体外增殖活性检测(MTT法)和体外侵袭力检测(改良Boyden小室法)技术分别检测nm23-H1基因转染前后人高转移大细胞肺癌细胞株L9981、L9981-pLXSN和L9981-nm23-H1肺癌细胞株体外增殖活性和侵袭力的变化;同时加入PKC特异抑制剂Calphostin C作用后,再次观察三株细胞株抑制剂作用前后细胞侵袭力、增殖力的变化。结果nm23-H1基因缺失的人高转移大细胞肺癌细胞株L9981和L9981-pLXSN体外侵袭力和增殖活性明显高于转染nm23-H1基因的L9981-nm23-H1肺癌细胞株(P<0.001);L9981和L9981-pLXSN细胞间体外侵袭力和增殖活性则无统计学差异(P>0.05)。用PKC抑制剂Calphostin C处理L9981、L9981-pLXSN和L9981-nm23-H1肺癌细胞株后,细胞体外侵袭力和增殖活性下降(P<0.001),而转染nm23-H1基因的L9981-nm23-H1细胞体外侵袭力和增殖活性仍低于L9981和L9981-pLXSN(P<0.001),L9981和L9981-pLXSN细胞间则无统计学差异(P>0.05)。结论nm23-H1基因可明显抑制L9981肺癌细胞株的细胞增殖力和侵袭力。nm23-H1基因对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的生物学行为的影响可能与其抑制PKC信号传导有关。     

下调视黄醇结合蛋白2基因表达对顺铂耐药卵巢癌细胞生物学特性的影响及其机制

目的探讨下调视黄醇结合蛋白2(RBP2)基因表达对卵巢癌细胞生物学特性的影响及其机制。方法建立稳定下调RBP2表达的顺铂(DDP)耐药卵巢癌细胞株SKOV3/DDP-RBP2i, 并设置阴性对照组和空白对照组。采用细胞计数盒8(CCK-8)法检测细胞增殖能力, 流式细胞术检测细胞凋亡情况, 划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力, 实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot法检测上皮-间质转化(EMT)相关分子标志物的表达。通过裸鼠移植瘤实验验证RBP2对卵巢癌生长的影响, 采用美国TCGA数据库中的卵巢癌临床数据分析RBP2表达与肿瘤转移和患者预后的关系。结果下调RBP2的表达后, SKOV3/DDP细胞的增殖能力明显下降, 第5天时, SKOV3/DDP-RBP2i组、阴性对照组和空白对照组的增殖活性分别为(56.67±4.16)%、(84.67±3.51)%和(87.00±4.00)%, 差异开始有统计学意义(P<0.001)。SKOV3/DDP-RBP2i组的凋亡率为(14.19±1.50)%, 高于阴性对照组[(8.77±0...     

Significance of the expression of green fluorescent protein on detection of glioma invasion in vivo

Objective: To investigate the invasion and metastasis of glioma in vivo by xenotransplanted tumor established by implanting C6 glioma cells transfected with green fluorescent protein (GFP) gene in vitro into the brain of SD rats. Methods: C6 cells were transfected with a plasmid vector (pEGEP-N3) containing the GFP gene. Stable GFP-expressing clones were isolated and performed examination by flow cytometry and electron microscope. GFP-expressing cells were stereotactically injected into the brain parenchyma of SD rats to establish xenotransplanted tumor. Four weeks later rats were killed and continuous brain sections respectively were examined by HE staining, immunohistochemistry method and fluorescence microscopy for detection of tumor cell invasion. Xenotransplanted tumor was primarily cultured to determine the storage of exotic GFP gene in vivo. Results: There were not obvious changes in cell cycle and ultrastructure for the cells transfected with GFP gene. C6 cells transfected with GFP gene maintained stable high-level GFP expression in the central nervous system during their growth in vivo. GFP fluorescence clearly demarcated the primary tumor margin and readily allowed for the detection of distant invasion on the single-cell level, which was evidently superior to HE and immunohistochemistry staining. There was not GFP gene loss of transfected cells in vivo. Conclusions: It is suggested that C6 cells transfected with GFP gene can be visualized by fluorescent microscopy after intracranial implantation. This model is an excellent experimental animal model in research on invasion of glioma. Foundation item: This work was supported by a grant from the National Natural science foundation of China (No. 39970752). Biography: LI Xia (1975–), master of neurosurgery, Xijing Hospital, the Fourth Military Medical University, majors in gene diagnosis and gene therapy of brain malignant tumor.     

沉默CHD1L对前列腺癌PC3细胞恶性生物学行为的影响及其可能机制

目的:探讨染色质解旋酶DNA结合蛋白1样基因(chromodomain helicase/ATPase DNA binding protein 1-like gene,CHD1L)对前列腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响及其可能的作用机制.方法:采用实时荧光定量PCR技术检测前列腺癌细胞株LNCAP、PC3、DU145以及前列腺上皮细胞株RWPE-1中CHD1L mRNA表达水平;转染siRNA干扰前列腺癌PC3细胞CHD1L的表达,并用Transwell侵袭实验和划痕实验分析沉默CHD1L对前列腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响;Western blotting 检测PC3细胞MMP-9、N-钙黏蛋白和E-钙黏蛋白的表达水平.结果:CHD1L mRNA在前列腺癌细胞中的表达水平明显高于前列腺上皮细胞(P＜0.01),其中以前列腺癌PC3细胞的表达水平最高.侵袭实验中,干扰组的穿膜细胞数明显低于阴性对照组和空白对照组[(49.67 ±6.67)vs(113.67 ±5.69)和(112.00±12.49)个,P＜0.05).划痕实验中,干扰组48 h伤口愈合率也低于阴性对照组和空白对照组[(21.27 ±3.27)％ vs(48.47±5.72)％和(49.93±3.35)％,P＜0.05].干扰组细胞MMP-9和N-钙黏蛋白表达下调,E-钙黏蛋白表达上调.结论:沉默CHD1L可降低前列腺癌PC3细胞的侵袭迁移能力,该作用可能是通过调控MMP-9和EMT相关蛋白表达实现的.     

2017年福建省肿瘤登记地区肝癌发病和死亡分析

 目的 分析2017年福建省肿瘤登记地区肝癌发病和死亡数据,为肝癌防治策略制定和评估提供科学依据。方法 根据全国肿瘤登记中心制定的数据审核和评价方法,对福建省12个肿瘤登记处上报的2017年数据进行评价,将符合要求的10个登记处数据合并分析。按城乡、性别和年龄组分别计算肝癌发病和死亡粗率、标化率、累积率（0~74岁）。中国人口标化率（简称中标率）根据2000年中国标准人口构成计算,世界人口标化率（简称世标率）按照Segi's标准人口构成计算。结果2017年福建省10个肿瘤登记处共覆盖登记人口6 588 959人,城市地区占43.89%,农村地区占56.11%。2017年福建省肿瘤登记地区肝癌发病率为31.14/10万（男性48.02/10万,女性13.70/10万）,中标率为22.51/10万,世标率为21.70/10万。农村地区发病率（中标率23.87/10万,世标率22.90/10万）高于城市地区（中标率20.81/10万,世标率20.16/10万）。2017年福建省肿瘤登记地区肝癌死亡率为28.09/10万（男性43.78/10万,女性11.88/10万）,中标率为20.04/10万,世标率为19.45/10万。农村地区死亡率（中标率20.91/10万,世标率20.18/10万）高于城市地区（中标率18.99/10万,世标率18.56/10万）。结论 福建省肝癌流行呈现地区和性别差异,应从一级预防和二级预防方面开展针对性防控工作。     

Blockade of EGFR signaling promotes glioma stem-like cell invasiveness by abolishing ID3-mediated inhibition of p27 and MMP3 expression

Aberrant epidermal growth factor receptor (EGFR) signaling is a typical oncogenic signature in glioblastoma. Here, we show that EGFR inhibition in primary glioma stem cells (GSCs) with oncogenic EGFRvIII and EGFRvIII-transduced glioma stem-like cells promotes invasion by decreasing ID3 levels. ID3 suppresses GSC invasiveness by inhibiting p27^KIP1-RhoA-dependent migration and MMP3 expression. Xenograft and human glioblastoma specimens show that ID3 localizes within glioblastoma cores, whereas p27^KIP1 and MMP3 are predominantly expressed in glioma cells in invasive fronts. Together, our findings show that EGFR inhibition induces GSC invasiveness by abolishing ID3-mediated inhibition of p27^KIP1 and MMP3 expression.     

shRNA沉默Sp1对胶质瘤细胞放射敏感性的影响

目的 探讨下调Sp1基因表达对胶质瘤细胞放射敏感性的影响。方法 设计并合成编码shRNA的寡核苷酸序列,克隆入LV3（H1/GFP&Puro）载体中构建重组体。然后重组慢病毒分别感染U251和U87细胞,嘌呤霉素筛选得到稳定转染细胞株。荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测细胞中Sp1 mRNA和蛋白表达水平;克隆存活法检测细胞存活;流式法检测细胞周期;免疫荧光法检测DNA损伤程度。结果 两株胶质瘤细胞在感染72 h后荧光显微镜观察Sp1慢病毒载体均高表达,RT-PCR和蛋白质印迹法结果显示转染后shRNA-U87和shRNA-U251细胞Sp1 mRMA和蛋白表达量均明显降低（P<0.01）,Sp1敲除率达90%以上。shRNA-U251和shRNA-U87细胞在10%细胞存活水平下的放射增敏比（SER）分别为1.39和1.18;两株Sp1敲除组细胞经辐照后G₂/M期比率及γ-H2AX foci数目与对照组相比均极显著增大。结论 shRNA沉默Sp1增大了X线诱导的G₂/M期阻滞,加重了DNA双链断裂程度,提高了胶质瘤细胞的放射敏感性。