细胞凋亡的形态学和生物化学特征与基因调控

细胞凋亡(apoptosis)是在多种因素刺激诱导下，由特定基因自主调控有规则地使细胞程序化死亡(programmedcell death)。细胞凋亡从形态学变化来看是形成胞膜完整的凋亡小体(apoptotic bodies)，从生物化学变化看有细胞染色体DNA的片段化和大分子DNA片段生成的明显特征。细胞凋亡受基因调控已得到验证并成为研究热点，主要集中在beL—2，c—myc，p53和Fas基因，它们通过转录和编码特异的功能蛋白引导细胞走向凋亡。     

生精细胞的凋亡研究进展

<正>凋亡(apoptosis)是由澳大利亚病理学家Johnkerr于1972年提出的,指细胞由基因控制的主动死亡过程。形态上表现为核固缩、染色质浓集、细胞膜皱折、胞体变小,细胞成断片后,最后成为被膜包绕的凋亡小体而被邻近的细胞吞噬与降解。组织学表现为单个细胞缺失,周围没有炎症反应。生物化学表现为活化Ca~(2+)依赖的核酸内切酶,在核小体连接处将染色质DNA降解成单或寡核苷酸小体,其大小均为长度180～200bp的倍数。凋亡可以是一种生理现象,也可以是病理现象。它与因缺血、缺氧而引起的病理性细胞坏死明显不同,后者细胞器和细胞膜出现肿胀、溶解、破裂,细胞内含物释放到细胞间隙可引起炎症反应。     

细胞凋亡相关基因与肺癌

<正>细胞凋亡(Apoptosis)又称程序性细胞死亡(Pro-grammed Cell,PCD),是一种细胞的生理性死亡.近年来的研究发现,细胞凋亡在许多疾病的发生,尤其是在肿瘤的发生、发展和转归中起重要作用,而且许多基因参与细胞凋亡的调控过程.已有证据表明凋亡抑制基因表达增强或(和)凋亡促进基因受抑是肺癌发生的机制之一,而凋亡相关基因研究也为肺癌治疗提供了新思路和靶点.本文就这方面研究作简要综述:1 细胞凋亡的特征及检测细胞凋亡是在某些生理或病理条件下,细胞接受到某种信号的触发后主动参与并遵循一定程序的较慢的死亡过程,在整个过程中发生一系列特殊基因的表达以及生化和形态学改变.细胞凋亡具有独特的形态学特征,主要表现在细胞萎缩、核固缩、染色质凝集、细胞形成凋亡小体及被吞噬等,不引起周围组织炎症反应和损伤.细胞凋亡还具有典型的生化特征,即在凋亡早期染色体DNA被钙、镁依赖性核酸内切酶裂解成不连续的,不同倍数的180bp～200bP的寡核小体片段,在琼脂糖凝胶电泳上呈现特征性“DNA Ladder”图谱.     

HL—60细胞凋亡小体体外负载树突状细胞的实验研究

目的：证实树突状细胞(Dendrmc cells,DCs)可通过吞噬凋亡小体获取抗原物质,探讨其在肿瘤免疫治疗中的意义。方法：利用吸附单克隆抗体-磁珠分离系统(MACS),从人脐血中分离出CD34^ 细胞,体外以重组hGM—CSF hSCF hTNF—α hFL诱导培养DCs,光镜观察诱生细胞的形态,流式细胞术(FACS)检测其表型。电镜观察和流式细胞仪检测三氧化二砷(As2O3)诱导凋亡的HL-60细胞,将凋亡的HL-60细胞与培养早期的DCs共育4～8h,电镜观察DCs吞噬凋亡小体的现象。结果：CD34^ 细胞经诱生后生成了大量具有典型形态和表型的成熟DCs;电镜下见凋亡的HL-60细胞内凋亡小体形成,流式细胞仪检测DNA含量,见亚二倍体峰形成。凋亡细胞与DCs共育后,电镜下见DCs吞噬凋亡小体的现象。结论：DCs可通过吞噬凋亡小体摄取抗原物质。     

全反式维甲酸诱导HL60细胞凋亡及相关信号途径的改变

目的 研究全反式维甲酸(ATRA)诱导早幼粒细胞白血病细胞株(HL60细胞)凋亡及其分子机制。方法 HL60细胞经ATRA诱导不同时间，用活细胞记数法检测细胞增殖情况；用流式细胞术(FCS)检测HL60细胞凋亡及细胞周期的改变；用核酸提取及电泳技术检测细胞DNA分子的变化；用透射电镜技术观察了凋亡细胞的结构改变；用Western blot技术检测了ATRA诱导HL60细胞与凋亡有关的分子改变。结果 ATRA诱导HL60细胞第3天出现细胞增殖抑制且FCS发现细胞出现S期阻滞，开始出现凋亡，第5天出现明显的细胞增殖抑制及更高的凋亡比例，核酸电泳发现DNA“梯带”现象；对照组细胞在透射电镜下核大而圆，折光性低，染色质均匀；而ATRA处理5d的细胞出现核固缩、染色质浓缩边集及出现凋亡小体。同时细胞内ATRA核受体在诱导第3天开始表达增加，相应地与细胞凋亡相关的酶——半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)也表达增加，而磷酸化的Erk／STAT水平明显下调。结论 ATRA可以诱导HL60细胞发生凋亡，其机制可能为：ATRA诱导细胞后，RAR信号途径被激活，导致与凋亡相关的信号途径被激活(Caspase3表达上调)，而与细胞增殖相关的信号途径被阻断(p-Erk／p-STAT水平下降)，引起细胞增殖阻滞，发生凋亡。     

细胞凋亡在肝脏肿瘤中的研究进展

<正>细胞凋亡(Apoptosis)或细胞程序性死亡(PCD)是一种主动耗能多基因参与调控的细胞自我灭亡的过程。是组织发育形成和功能维持的必需生理现象,它在维持组织、器官的正常形态和功能方面起重要作用。其特征为:保持完整膜结构的细胞固缩,细胞浆大泡形成,染色体浓聚,核碎裂,凋亡小体形成,核酸内切酶激活将DNA切割成为180～200bp片断,琼脂糖凝胶电泳显示特征DNA梯形等。越来越多的研究表明,肿瘤的生物学特性不仅与瘤细胞的增殖而且与其凋亡密     

中药诱导肿瘤细胞凋亡研究进展

细胞凋亡(apoptosis)又称为程序性死亡,是由基因控制的细胞自我消亡过程.其特征是质膜保持完整性,而核染色质固缩,内源性内切酶激活,将染色质DNA降解成寡聚小体,电泳带谱表现为特征性梯状带,无整个组织的破坏和炎性反应.     

细胞凋亡与糖尿病并发症的研究进展

<正>细胞凋亡(apoptosis)是指细胞在分化和发育过程中,由基因调控而发生的主动的自发性的死亡方式。1972年,Kerr等首次提出了细胞凋亡的概念。90年代后,随着凋亡检测方法学的不断进展,人们逐渐意识到细胞凋亡与坏死(necrosis)具有本质上的差异。发生凋亡的细胞,细胞膜皱缩,染色体致密,随后断裂。进而胞膜内陷,将细胞分割包围,形成多个膜结构完整、含有染色质断片的凋亡小体(apoptotic body),最终为巨噬细胞吞噬清除。细胞凋亡的生化特征:核DNA被非随机切     

NIDRAN诱导脑胶质瘤细胞凋亡

目的　探讨宁得朗 (NIDRAN)对人脑胶质瘤细胞凋亡的诱导作用 .方法　用含 10 μmol· L- 1 NIDRAN的 RPMI16 40培养液 ,作用于 SHG44细胞 3h,收集细胞用于形态学检测 ,DNA电泳及流式细胞分析 .结果　 1形态学观察 :大部分瘤细胞体积缩小 ,核固缩 ,染色质浓缩在核模边缘呈月牙状聚集 ,有凋亡小体形成 . 2 DNA电泳 :在 80 0 bp以下可见明显的 DNA梯状带 . 3流式细胞分析 :出现典型的细胞凋亡峰 ,凋亡细胞占细胞总数的 32 .1% .结论　 NIDRAN可诱导人胶质瘤细胞发生凋亡 .     

动脉粥样硬化血管平滑肌细胞凋亡相关因素研究进展

<正>细胞凋亡是不同于细胞坏死的一种死亡形式,是受基因控制的细胞主动性“自杀”过程.它的主要特征是,内源性核酸内切酶被激活,导致DNA在核小体间断裂,同时发生了基因的转录和蛋白质合成.射线、化学药物等刺激因素都可激发细胞凋亡.细胞凋亡在胚胎发育、造血、免疫系统成熟以及维持正常组织和器官的细胞数目恒定与生长平衡,乃至机体衰老诸方面均起着重要作用.而动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)中也发现了细胞凋亡,且以血管平滑肌细胞(Vascular SmoothMuscle Cell.VSMC)和巨噬细胞为主,血管壁中膜层的平滑肌细胞(Smooth Muscle Cell.SMC)向内膜迁移及过度增殖是AS和再狭窄共同的病理特征.增殖了的VSMC,有些摄取脂质,转变为泡沫细胞,有些合成胶原等细胞外间质,参与AS损伤向脂质损伤、纤维斑块的转变.阻止或减弱平滑肌细胞过度增殖一直是人们设法解决的难题.近年来,随着有关细胞凋亡的研究在基础和临床领域的广泛展开,也促进了As中细胞凋亡的研究.同时,使得对As病理发展有了新认识.As     

HL-60细胞凋亡小体体外负载树突状细胞的实验研究

目的 :证实树突状细胞 (Dendritic cells,DCs)可通过吞噬凋亡小体获取抗原物质 ,探讨其在肿瘤免疫治疗中的意义。方法 :利用吸附单克隆抗体 -磁珠分离系统 (MACS) ,从人脐血中分离出 CD34+ 细胞 ,体外以重组 h GM- CSF+ h SCF+ h TNF-α+ h FL诱导培养 DCs,光镜观察诱生细胞的形态 ,流式细胞术 (FACS)检测其表型。电镜观察和流式细胞仪检测三氧化二砷 (As2 O3 )诱导凋亡的 HL - 6 0细胞 ,将凋亡的 HL- 6 0细胞与培养早期的 DCs共育 4～ 8h,电镜观察 DCs吞噬凋亡小体的现象。结果 :CD34+细胞经诱生后生成了大量具有典型形态和表型的成熟 DCs;电镜下见凋亡的 HL- 6 0细胞内凋亡小体形成 ,流式细胞仪检测 DNA含量 ,见亚二倍体峰形成。凋亡细胞与 DCs共育后 ,电镜下见 DCs吞噬凋亡小体的现象。结论 :DCs可通过吞噬凋亡小体摄取抗原物质。     

雄激素应答元件陷阱DNA诱导前列腺癌细胞LNCaP凋亡

目的：研究雄激素应答元件陷阱DNA(ARE decoy DNA)对前列腺癌细胞LNCaP生长活性和凋亡的影响。方法：人工合成双链硫代ARE decoy DNA并提取LNCaP细胞核蛋白．应用电泳迁移率变动分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测ARE decoy DNA与雄激素受体的特异结合。2μg／ml ARE decoy DNA转染LNCaP细胞。48h后相差显微镜观察细胞超微结构变化：MTT比色法检测细胞生长活性;DNA Ladder检测细胞凋亡;流式细胞技术(FCM)测定细胞凋亡率。结果：EMSA显示．ARE decoy DNA能特异与核蛋白中雄激素受体结合。LNCaP细胞转染ARE decoy DNA后．镜下可见部分细胞出现凋亡形态学的改变,有凋亡小体形成,细胞体外生长受到抑制．DNA Ladder可见明显梯形条带。转染后48h的凋亡率为22．5％。结论：ARE decoy DNA能竞争结合雄激素受体(androgen receptor,AR)。阻断AR的作用而诱导LNCaP细胞凋亡。     

细胞凋亡在器官移植中的作用

凋亡 (apoptosis) ,亦称程序性细胞死亡 (pro grammedcelldeath) ,主要表现为细胞萎缩 ,胞膜皱摺或起泡 ,染色质致密或边聚 ,完整的细胞膜包裹细胞器及其碎片形成凋亡小体。细胞凋亡后其基因组DNA被特异性核酸内切酶分解为具有特征性的180～ 2 2 0bp核苷酸片段。多种因素可启动细胞内部基因 ,调控细胞凋亡。细胞凋亡在许多领域均有重要作用 ,对其在器官移植中的作用研究正成为现代移植免疫学的热点之一。1　细胞凋亡在各器官移植中的作用1.1　心脏移植与细胞凋亡在大鼠同种异体心脏移植模型中 ,Szabolcs等[1] 发现移植后 3～ 5天心肌细胞…     

Fas介导的细胞凋亡与乙型丙型肝炎

细胞凋亡 (ａｐｏｐｔｏｓｉｓ) ,又称细胞程序性死亡 (Ｐｒｏ ｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ ,ＰＣＤ) ,是不同于细胞坏死的另一种细胞死亡形式。二者不仅在形态上具有显著差别 ,而且内在的发生机制完全不同 ,受多种基因的分子调控是它有别于细胞坏死的显著特征。在凋亡过程中 ,由于内源性核酸内切酶的激活 ,使ＤＮＡ在核小体连接区断裂 ,形成以 180～ 2 0 0ｂｐ整倍数的ＤＮＡ片段 ,电泳时出现特征性梯形区带图谱 ;电镜下观察凋亡的细胞呈现胞体变小 ,皱缩 ,染色质浓集 ,核固缩 ,进而核碎裂形成被膜包围的凋亡小体 (ａｐｏｐｔｏｔｉ…     

鸡有核红细胞凋亡的电镜观察

利用透射电镜观察了正常成年鸡脾内红细胞的凋亡现象。结果显示，鸡脾内凋亡红细胞核染色质先呈现网眼样变化，后浓缩、边聚。凋亡红细胞整个被巨噬细胞吞噬，在其中分解变小成为凋亡小体。凋亡小体电子密度有的升高，有的降低，最后均被巨噬细胞消化清除。结果表明，有核的红细胞发生细胞凋亡，并借助于巨噬细胞的膜系统完成凋亡过程。     

细胞凋亡抑制蛋白及其与疾病的关系研究进展

细胞凋亡(Apoptosis)又称程序性细胞死亡(Programmed cell death，PCD)，是一种不同于细胞坏死的细胞主动性死亡，其由许多启动因素激发、基因调控，伴新蛋白质合成，需要消耗能量的细胞自杀过程。表现为：细胞体积整体缩小，细胞膜皱缩，形成许多突起，分割包囊胞质，核体皱缩，形成凋亡小体，最后被巨噬细胞所吞噬。由于整个过程细胞完整，没有内容物外露，因而不伴有局部的炎症反应，其中细胞核的改变是细胞凋亡与细胞坏死的根本区别。     

三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞作用的体外观察

目的 探讨三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞(HCSMC)的促凋亡作用及其对损伤动脉再狭窄防治的意义.方法 将人冠状动脉平滑肌细胞传代培养,将细胞分为正常对照组、三氧化二砷(浓度分别为1.0、2.0、3.0、4.0及5.0 μmol/L)组,通过透射电镜、DNA电泳、原位细胞凋亡检测试剂盒(TUNEL)、四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞活性观察三氧化二砷促细胞凋亡作用,Western印迹检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达变化.结果 随三氧化二砷浓度的增加能够抑制HCSMC的增殖并且该作用与时间及三氧化二砷浓度呈正相关,观察第7天、浓度为5.0μmol/L时细胞生存数为[(4.41±0.10)×105/ml,正常对照组(30.11±0.93)×105/ml差异有统计学意义,P<0.05],透射电镜下可见凋亡小体、DNA电泳可见典型凋亡后梯形条带、TUNEL可见凋亡细胞由(16.0±3.1)%增至(38.7±2.7)%(P<0.05),三氧化二砷上调凋亡促进基因Bax的表达而下调凋亡抑制基因Bcl-2表达.正常对照组均不见典型上述变化.结论 三氧化二砷可促进HCSMC的凋亡,抑制其过度增殖.     

DNA拓扑异构酶与细胞凋亡

细胞凋亡 (又称细胞程序性死亡 )的调控由多种基因、核内外酶、信号蛋白等成分协同完成 ,其中DNA拓扑异构酶认为是细胞凋亡过程中核内相关的调控因素。作者就近年来对DNA拓扑异构酶的认识及其抑制物诱导细胞凋亡的机制和在细胞凋亡中的作用作一综述     

大鼠黄体萎缩时期细胞超微结构的研究

本实验以ＰＭＳＧ和ｈＣＧ处理后黄体萎缩时期大鼠为实验材料研究黄体萎缩与细胞凋亡关系。经电镜细胞超微结构分析发现黄体组织萎缩时大量黄体细胞发生调亡，其染色质浓缩，边集，被膜包裹形成表面光滑有的凋亡小体，而这一过程中细胞器却基本完整，这些凋亡小体的所吞噬。以上均上显示出细胞凋亡所具有的形态学特征，从而有力地证明了细胞凋亡参与了黄体组织萎缩，为深入了解黄体退化机制提供了依据。     

Fas系统与肝细胞凋亡

<正>人们已经知道,细胞死亡与凋亡在形态学、生物学以及分子生物机制等方面都有本质的差别。病毒性肝炎细胞凋亡与坏死常同时发生,凋亡的组织病变,如嗜酸性小体即是凋亡小体,碎屑样坏死则是细胞毒性T细胞(CTL)对受损肝细胞的凋亡效应。随着细胞凋亡研究的深入,慢性肝炎、重症肝炎与细胞凋亡之间的联系研究逐渐增多,Fas系统作为重症肝炎的发病的一个重要因素而引人注目。