溃疡性结肠炎磷脂酰肌醇3激酶的表达及其抑制剂对肿瘤坏死因子α表达的影响

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）／Akt信号传导通路在溃疡性结肠炎（UC）发病中的作用并为沃特曼宁（wortmannin）作为UC治疗新药物提供实验依据。方法收集UC患者30例,15例结肠癌旁正常组织作为对照,采用免疫组化法检测UC肠黏膜组织中磷酸化Akt（p-Akt）的表达情况;体外组织培养观察P13K／Akt信号传导通路抑制剂wortmannin对UC肠黏膜活检组织肿瘤坏死因子（TNF）-α表达的影响。结果①UC肠黏膜组织中p-Akt的表达明显高于正常对照组（A值分别为73．6±5．2、18．0±2．6,阳染面积分别为720±58、133±29,均P〈0．05）。②与未用wortmannin处理的UC对照组比较,wortmannin处理后UC肠黏膜组织分泌TNF-α的水平明显较低（分别为296±39、138±11、26±5,均P〈0．05）。③用wortmannin处理后UC患者肠黏膜组织中p-Akt的表达低于未用wortmannin处理的UC对照组（A值分别为：72．3±6．2、35．3±5．6、18．0±2．2,阳染面积分别为716±94、351±50、129±30,均P〈0．05）。结论①PI3K／Akt信号转导通路参与了促炎性细胞因子TNF-α的调控与释放,可能在UC的发生发展中起着重要作用。②P13K的抑制剂wortmannin能阻断P13K／Akt信号转导通路,进而减少细胞因子的释放。wortmannin有可能成为治疗UC的新药物。     

Shh、Glil和p-Akt在食管癌中的表达及临床意义

目的观测SHh信号通路关键因子Shh、Glil和P13K／Akt信号通路的父键因子p-Akt在食管鳞状细胞癌（ESCC）中的表达情况,探讨上述因子的表达与ESCC各临床病理特征的关系和意义。方法采用免疫组织化学EnVision法检测108例手术治疗的ESCC组织及相应的癌旁正常食管黏膜标本Shh、Glil和p-Akt的表达情况。结果存108例ESCC组织中Shh、Glil和p-Akt的阳性表达率分别为70．1％（76／108）、76．9％（83／108）和65．7％（71／108）。108例癌旁正常食管黏膜中Shh、Glil和p-Akt的阳性表达率分别为13．9％（15／108）、13％（14／108）和15．7％（17／108）。ESCC组织中Shh、Glil锄p-Akt的阳性表达率显著高于相应的癌旁正常食管黏膜的表达（P〈0．05）;Shh、Glil和p-Akt表达与肿瘤是否有淋巴结转移密切相关（P〈0．05）,ESCC中Shh的表达与Glil的表达成正相关（r1=0．750,P〈0．01）,Glil表达与p-Akt表达呈正相关（r2=0．621,P〈0．01）。结论ESCC中SHh通路和P13K／Akt通路是普遍激活的,Glil与p-Akt可作为预测转移潜能和预后状况的有价值的指标,联合抑制SHh通路和P13K／Akt通路对于治疗食管癌可能更有效。     

雷帕霉素抑制人神经母细胞瘤细胞株生长及诱导凋亡的机制研究

目的研究雷帕霉素对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y的生长抑制和诱导凋亡作用,以及对靶向信号通路磷脂酰肌醇3-激酶／蛋白激酶B／哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（P13K／AkCmTOR）的影响。方敞用不同浓度的雷帕霉素（10、15、20μmol／L）处理SH-SY5Y细胞（雷帕霉素干预组）,以加入相同体积二甲基亚砜（DMSO）的SH-SY5Y细胞作为阴性对照组,设立空白对照组。CCK．8法测定细胞生长率;采用流式细胞仪检测细胞周期,通过AnnexinV-FITC／PI双染法检测细胞凋亡率;Westernblotting检测easpase-3剪切体及P13K／Akt/mTOR信号通路上下游分子PDKp85、Akt、mTOR、4E-BPl表达及其磷酸化水平的变化。结果与阴性对照组和空白对照组比较,雷帕霉素干预组细胞生长率显著降低（P〈0．05或P〈0．01）;G。／G,期细胞百分比显著增高（P〈0．05）;细胞凋亡率显著升高（P〈0．01）。Westernblotting检测结果显示：与阴性对照组和空白对照组比较,雷帕霉素干预组easpase-3剪切体表达水平较高;P13K／Akt/mTOR信号通路上下游分子的活性均被抑制,P13Kp85、Akt、mTOR、4E-BP1的磷酸化水平均明显降低。结论雷帕霉素对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y具有抑制生长和诱导凋亡的作用,其机制可能与抑制P13K／Akt/mTOR信号通路有关。     

艾迪注射液对乳腺癌患者血清VEGF水平的影响

目的观察艾迪注射液对乳腺癌患者血清血管内皮生长因子（VEGF）的影响,探讨其对乳腺癌的治疗作用。方法46例乳腺癌患者随机分为对照组（单纯化疗）、实验组（化疗加艾迪注射液）,每组23例。另收集30例健康人做为健康对照组。应用双抗体夹心EMSA法检测两组乳腺癌患者治疗前后血清VEGF水平变化。结果化疗前乳腺癌患者血清VEGF水平明显高于对照组（P〈0．01）,其水平与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级无关（P均〉0．05）,与患者淋巴结转移、临床分期有关（P均〈0．01）。新辅助化疗前乳腺癌患者血清VEGF明显高于健康对照组[（285．17±57．58）pg／ml傩（152．17±26．45）pg/ml,P〈0．01];实验组治疗前、后血清VEGF水平分别为（289．30±61．50）、（210．13±52．12）pg／ml,差异有统计学意义（P〈0．01）;对照组治疗后血清VEGF水平与治疗前相比差异无统计学意义（P〉0．05）;实验组治疗后VEGF水平低于对照组[（210．13±52．12）pg／mlvs（261．46±54．29）pg／ml,P〈0．01]。结论艾迪注射液可以降低乳腺癌患者血清VEGF水平,通过抑制肿瘤血管生成进而抑制肿瘤细胞的增殖、浸润及转移,从而发挥抗肿瘤作用,在乳腺癌辅助抗肿瘤治疗中起着重要作用。     

胰高血糖素样肽-1对高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及相关机制

目的：探讨胰高血糖素样肽-1（glucagon—like peptide-1,GLP—1）对高糖诱导人脐静脉内皮细胞huma numbilica lvein endothelial cells,HUVECs）凋亡的影响及相关机制。方法：HUVECs加入不同处理因素后分组,分别培养48h后,MTT检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞早期凋亡率;Westernl印迹测定细胞P-Akt,p-eNOS水平;NO试剂盒检测NO浓度。结果：高糖（33mmol／L）培养48h后HUVECs细胞活力下降p〈0．05）,细胞凋亡率增加（p〈0．01）,细胞p-Akt,p-eNOS,NO水平均下降（P〈0．05）;高糖条件下加人GLP．1（3nmol／L）培养48h,与高糖组相比较,HUVECs细胞活力增加（P〈0．01）,细胞凋亡率减少（p〈O．05）,细胞p-Akt,p-eNOS,NO水平均增／JH（V〈0．05）;P13K抑制剂wortmannine（100nmol／L）可以阻断GLP-1的抗凋亡作用及其对P—Akt蛋白、p-eNOS蛋白及NO水平的影响;eNOS抑制剂L—NAME（100umol／L）仅能阻断GLP-1的抗凋亡作用及对NO水平的影响,不影响p-Akt蛋白的表达。结论：GLP．1可改善高糖诱导的HUVECs凋亡,该抗凋亡作用可能与P13K／Akt／eNOS通路的上调相关。     

LY294002抑制PI3K/Akt信号通路对人胃癌SGC-7901细胞的影响

目的探讨低氧环境下PI3K抑制剂2-（4-吗啉基）-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮（LY294002）对人胃癌SGC-7901细胞中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）／丝氨酸苏氨酸激酶（Akt）信号通路、细胞生长、细胞凋亡及低氧诱导因子-1α（HIF-1α）mRNA表达的影响。方法应用LY294002作用于低氧环境中的人胃癌SGC-7901细胞（低氧＋LY294002组）,采用CCK-8试剂盒检测SGC-7901细胞生长;流式细胞仪检测细胞凋亡百分比;Western blotting检测P13K和p-Akt蛋白表达;RT—PCR检测HIF-1α mRNA表达。以低氧环境中未加LY294002的细胞作为对照（低氧组）。结果LY294002能抑制低氧环境中SGC-7901细胞增殖,抑制效果在药物作用后第2～6天时最为明显（P〈0．05）,低氧＋LY294002组中细胞凋亡百分比明显高于低氧组（P〈0．01）。LY294002能明显抑制PI3K、p-Akt蛋白以及HIF-1α mRNA的表达,与低氧组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论LY294002能抑制低氧环境中人胃癌SGC-7901细胞生长,促进细胞凋亡,抑制PI3K／Akt信号通路及其下游HIF-1α mRNA的表达。     

真核细胞始动因子4E结合蛋白1在乳腺癌信号传导通路中的作用及其与预后的关系

对本院48例乳腺癌患者术后肿瘤组织的细胞信号传导通路的人类表皮生长因子受体2（HEPO）、丝氨酸与苏氨酸激酶（Akt）、真核细胞始动因子4E结合蛋白1（4EBP1）、核糖体蛋白S6激酶1（p70S6K1）和核糖体S6行免疫组化染色检测。HER2阳性与阴性表达的肿瘤比较,Akt表达率更高（P〈0．01）。Akt表达的水平与其下游因子4EBP1、p70S6K1的表达呈正相关（P〈0．01,P〈0．05）。4EBP1主要表达在低分化的肿瘤中（P〈0．01）,并与肿瘤大小（P〈0．05）、淋巴结的转移（P〈0．01）及局部复发相关（P〈0．01）。提示4EBP1与乳腺癌的肿瘤分级和预后密切相关。     

高迁移率蛋白B1对血管平滑肌细胞迁移的影响及分子机制研究

目的：探讨高迁移率蛋白B1（HMGB1）对血管平滑肌细胞（VSMCs）迁移的影响及 TLR4依赖的 TLR4／PI3K／Akt信号通路介导的分子机制。方法体外分离培养大鼠胸主动脉VSMCs ,采用不同浓度 HMGB1（0．1～1000．0 ng ／mL）处理,分为对照组（未经任何处理）、HMGB1组、HMGB1＋ TLR4 siRNA转染组、Control siRNA转染组和磷脂酰肌醇3‐激酶（PI3K）抑制剂（LY294002）干预组,观察各组细胞活性及 HMGB1对 VSMCs 迁移的影响;实时定量 RT‐PCR与 Western blot 分别检测TLR4、Akt、p‐Akt、PI3K mRNA和蛋白的表达;ELISA测定PI3K的活性。结果 HMGB1（0．1～1000．0 ng／mL）呈剂量依赖性促进VSMCs迁移（P＜ 0．05）;经细胞活性测定,HMGB1在使用的浓度范围内对 VSMCs未造成细胞毒性作用（P＜ 0．05）;HMGB1（100 ng／mL）处理的 VSMCs细胞组 PI3K 活性及 Akt磷酸化水平明显增加（P＜ 0．05）;经 TLR4 siRNA 转染发现, HMGB1引起的VSMCs迁移明显减弱（P＜0．05）,同样在PI3k抑制剂干预组,PI3K／Akt途径活化和HMGB1介导的VSMCs迁移也被明显抑制（P＜0．05）。结论 HMGB1呈剂量依赖性促进VSMCs迁移,TLR4依赖的 TLR4／PI3K／Akt信号通路参与了此过程,提示以TLR4依赖的PI3K／Akt途径为靶点,可为阻塞性血管疾病的治疗提供新思路。     

姜黄素逆转P—gp介导卵巢癌多药耐药机制的研究

目的探讨姜黄素对P糖蛋白（P—gP）介导的卵巢癌多药耐药的逆转作用及其可能机制。方法采用二苯基溴化四氮唑蓝（MTT）法检测人卵巢癌癌细胞株加药后的增殖,碘化丙啶（PI）染色法检测细胞凋亡率,western blot法检测P—Akt和P-gP的表达量。结果姜黄素合用顺铂处理细胞（OVCAR-3／DDP细胞株）48h,顺铂的浓度在0．05—5μg／ml时,加入姜黄素25μmol／L,耐药细胞生存率下降明显（P〈0．05）,尤以顺铂0．25μg／ml和姜黄素25μmol／L作用时耐药细胞生存率下降最明显。单用顺铂组细胞的凋亡率为（13．2±2．5）％,采用在顺铂基础上联合使用姜黄素后细胞凋亡率为（21．8±3．5）％,与单独使用顺铂相比,顺铂与姜黄素联合使用诱导细胞凋亡的作用显著增强（P〈0．05）。与单用顺铂0．25μg/ml相比,联合使用姜黄素后p-Akt和P-gP的表达量明显降低（P〈0．05）,2组间Akt的表达量差异无统计学意义（P〉0．05）。结论姜黄素不增加顺铂对OVCAR-3细胞毒性作用;对于OVCAR-3／DDP细胞株,姜黄素明显增加顺铂细胞毒性;姜黄素明显抑制了p-Akt和P—gP蛋白的表达。姜黄素可能通过抑制Akt信号通路降低P—gP的表达进而逆转多药耐药。     

姜黄素对肺腺癌A549细胞P13K/Akt/Bcl-2信号通路的作用

目的：研究姜黄素对肺腺癌A549细胞增殖率、凋亡和P13K/Akt/Bcl-2信号通路的影响。方法：采用细胞计数法绘制肺腺癌A549细胞生长曲线,MTF法测定姜黄素对肺腺癌A549细胞抑制率。将不同浓度姜黄素作用于肺腺癌A549细胞24h后,显微镜下观察细胞形态;TUNEL法检测细胞凋亡率;免疫组化法检测P13K/Akt/Bcl-2蛋白表达。结果：姜黄素能够抑制肺腺癌A549细胞增殖,且呈一定剂量和时间依赖性;随着药物浓度上升细胞凋亡率明显增高（P〈0．05）;P13K、Akt和Bcl-2蛋白表达明显下降（P〈0．05）。结论：姜黄素对肺腺癌A549细胞增殖具有抑制作用,其作用可能是诱导细胞凋亡及抑制P13K/Akt/Bcl-2信号通路来实现的。     

乳腺癌患者化疗前后血清sVCAM-1和CA15-3表达及其临床意义

目的观察可溶性血管细胞粘附分子-1（sVCAM-1）和癌相关糖蛋白抗原（CAl5-3）在乳腺癌患者化疗前后浓度的变化，探讨二者水平与临床分期、转移部位的关系，并初步探讨晚期转移性乳腺癌患者治疗效果与二者水平变化的关系。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和化学发光免疫法（CLIA）测定15例健康人、30例早期乳癌患者（Ⅰ、Ⅱ）、40例晚期乳癌患者（Ⅲ、Ⅳ）化疗前后sVCAM-1、CAl5-3血清水平。结果治疗前，Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌患者血清sVCAM-1和CAl5-3浓度与健康者比较差异无显著性（P〉0．05）；Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌患者血清sVCAM-1和CAl5-3浓度均显著高于健康者，并随着分期渐晚二者浓度逐渐升高，差异有显著性（P〈0．05），其中，乳腺癌患者各组血清CAl5-3阳性率均显著高于正常对照组（P〈0．05）。检测了12例内脏转移和7例骨转移晚期乳腺癌患者血清sVCAM-1和CAl5-3水平，发现内脏转移组二者水平高于骨转移组，但差异无显著性（P〉0．05）。治疗后，各乳腺癌患者组血清sVCAM-1和CAl5-3水平均较前降低，Ⅰ、Ⅱ组差异无显著性，Ⅲ、Ⅳ组差异显著（P〈0．05），转移复发乳腺癌患者下降尤为明显。24例晚期转移患者采用以TA为主的联合方案化疗，治疗后19例患者疗效评价为PR＋CR，化疗后sVCAM-1和CAl5-3水平均下降，差异显著（P〈0．001）。结论乳腺癌患者血清sVCAM-1和CAl5-3水平与病期早晚及治疗反应相关，与转移部位关系不明显，二者有可能成为评价乳腺癌临床分期和血清学疗效的指标。     

PI3K/Akt/mTOR信号通路在非小细胞肺癌中作用的研究进展

肺癌是当今世界上严重威胁人类健康与生命的恶性肿瘤，每年有超过100万人死于肺癌。P13K／Akt通路在肿瘤治疗方面已经有了比较广泛的研究，活化受体酪氨酸激酶和它们下游信号递质的研究也已经为肺癌的治疗打开了一个非常有前号的领域。由于P13K／Akt通路在下游多点活化受体酪氨酸激酶，因此被广泛地研究并开发新的抗肿瘤制剂。mTOR已经被确定是P13K／Akt的下游靶点。雷帕霉素及其衍生物具有高度选择性，mTOR的抑制剂对于多种肿瘤的治疗效果已取得了很好的研究结果。在此我们将对肺癌中P13K／Akt／mTOR信号通路的分子基础做一综述，并进一步讨论有关肺癌的多靶点治疗策略。     

肝纤维化自发逆转的相关信号转导通路研究

探讨肝纤维化自发逆转过程中不同信号转导通路的改变。方法通过四氯化碳（CCl4）注射SD大鼠8周，随后停药6周建立肝纤维化自发逆转的动物模型。采用cDNA微阵列杂交、逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）等检测多种信号通路成员的表达变化。结果除MAPK／EKR信号通路外，与肝纤维化自发逆转相关的差异表达基因属于数条信号转导通路，包括：SAPK／JNK信号通路中的SAPKβ．Jun B原癌基因．Jun D原癌基因、p53；MEK5信号通路中的MAPKK5；P13K／Akt信号通路中的1，4，5-三磷酸肌醇3-激酶、1，4，5-三磷酸肌醇3-激酶B、HSP90β、v—akt；Notch信号通路中的PS2。针对SAPK β、MAPKK5、1，4，5-三磷酸肌醇3-激酶及PS2的RT—PCR检测，结果与cDNA微阵列杂交相吻合。SAPK／JNK及Notch信号通路中的关键基因表达降低，MEK5、P13K／Akt信号通路中的核心激酶表达水平上升，均可能促进肝细胞增殖、抑制其凋亡，从而诱导肝纤维化逆转。结论SAPK／JNK、MEK5、P13K／Akt及Notch信号通路可能通过协同效应，在肝纤维化的自发逆转过程中发挥重要作用。     

乳腺癌凝血纤溶指标与生物学行为关系的研究

目的研究乳腺癌凝血纤溶异常与其转移、激素受体状态、分期等生物学行为的密切关系。方法检测30例乳腺癌血浆6项凝血和纤溶指标,统计分析其变化与淋巴结转移、细胞增殖、受体状态等的关系。结果良性对照组与乳腺癌组FiB由（3．05±0．44）g／L增高至（3．39±0．52）g/L（P〈0．05）、D—Di由（0．27±0．06）μg／ml增高至（0．36±0．16）μg／ml（P〈0．05）、PAI-1由（26．14±3．30）ng／ml增高至（34．59±3．68）ng／ml（P〈0．01）,差异均有统计学意义。腋窝淋巴结转移阳性者的血浆FiB（3．70±0．47）g／L和PAI-1（37．36±2．71）ng／ml较无转移者增多（P〈0．05）;细胞增殖抗原Ki67表达≥30％者PAI-1含量增加（36．40±3．57）ng/ml（P〈0．05）。t-PA含量在不同激素受体状态下的差别有统计学意义（P〈0．05）。不同TNM病理分期乳腺癌患者之间APTF（P〈0．01）、FiB（P〈0．01）、D—Di（P〈0．05）和PAI（P〈0．05）差异有统计学意义。结论凝血纤溶指标与乳腺癌增殖、转移、分期等生物学行为有密切关系,可作为判断预后和术后复发转移的监测指标,并有利于血栓前状态的判断。     

基于 PI3K／A kt信号转导通路探讨电针足三里、曲池对脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡的影响

目的：观察电针干预对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用,应用磷脂酰肌醇‐3激酶／丝氨酸‐苏氨酸蛋白激酶（PI3K／Akt）信号转导通路抑制剂LY294002,深入探讨电针的神经保护作用与 PI3K／Akt信号转导通路的关系。方法本研究采用Zealonga线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）缺血再灌注模型。将60只SD大鼠随机分为5组：假手术（SC）组、模型（IC）组、电针（EA）组、电针＋溶剂（DMSO）组,电针＋抑制剂（LY294002）组,每组各12只。术后24 h开始电针治疗30 min ,1次／天,治疗3 d。采用Zealonga 5分评价方法观察神经功能缺损恢复程度;氯化三苯四唑（TTC）法脑组织染色计算脑梗死体积;TUNEL法观察皮质区缺血周围神经细胞凋亡的情况;应用Western blot检测脑组织中PI3K、Akt、p‐Akt、bad、p‐bad蛋白表达水平。结果神经功能评分、TTC染色显示EA组与DMSO组的神经功能恢复及脑缺血改善明显优于IC组和LY294002组（P＜0．05）;EA组与DMSO组凋亡阳性细胞数少于IC组和LY294002组,差异有统计学意义（P＜0．01）;与 IC组及 LY294002组比较,EA组与DMSO组提高了PI3K、p‐Akt及p‐bad的蛋白表达（P＜0．05）。结论 PI3K／Akt信号转导通路参与了电针足三里穴、曲池穴对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。     

浸润性乳腺癌组织中P-糖蛋白以及肺耐药蛋白和多药耐药相关蛋白表达的临床意义

目的探讨浸润性乳腺癌组织中P-糖蛋白（P—gp）、肺耐药蛋白（LRP）和多药耐药相关蛋白（MRP）表达的临床意义。方法应用流式细胞术（FCM）定量分析68例原发浸润性乳腺癌患者癌组织、相应癌旁组织中上述蛋白的表达。结果浸润性乳腺癌组织P-gp、LRP和MRP表达的相对荧光强度（RFI）以中位数（M）表示分别为0．58、0．51和0．56,而相应癌旁组织分别为0．26、0．33和0．30,癌组织耐药相关蛋白表达与相应癌旁组织比较差异有统计学意义（P〈0．05）。3种耐药相关蛋白的表达与患者的年龄、肿瘤大小、病理类型、临床分期和雌、孕激素受体均无相关性（P〉0．05）。有淋巴结转移组患者P—gp和MRP的表达分别为0．61和0．69,无淋巴结转移组患者分别为0．54和0．45,两者比较差异无统计学意义（P〉0．05）。但LRP表达在有淋巴结转移组患者（M=1．49）显著高于无淋巴结转移组患者（M=0．50,P〈0．05）。相关分析显示,乳腺癌组织LRP与MRP表达间存在正相关性（P〈0．05）。结论3种耐药相关蛋白在浸润性乳腺癌组织中表达的临床意义存在差别。LRP表达与淋巴结转移状况有关且与MRP表达呈正相关,可作为预测乳腺癌预后的指标。     

消增合剂预防乳腺癌术后复发转移临床研究

目的：研究“消增合剂”预防乳腺癌术后复发转移作用。方法：112例乳腺癌患者术后随机分为术后单纯化疗或配合放疗（对照组）和对照组基础上配合消增合剂治疗（观察组），比较两组复发转移率、复发转移时间、Karnofskys评分、免疫指标。结果：两组复发转移率、5年生存率比较，治疗组均优于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。两组远处转移病例中位转移时间对照组为20．7±4．63个月，观察组为26．7±6．28个月，观察组优于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。对照组治疗后CD3、CD4明显降低，P〈0．05；观察组治疗后CD8明显下降，P〈0．05；CD4／CD8明显增高，P〈0．01。结论：“消增合剂”可减少肿瘤复发转移率，推迟复发时间，提高5年生存率；并通过稳定CD3、CD4，降低CD8，提高CD4／CD8比值，达到调整患者细胞免疫功能的作用。     

LY294002对人乳腺癌细胞株MCF-7／ADR的耐药逆转作用

目的探讨P13K／Akt信号转导通路特异性阻滞剂LY294002在体外对人乳腺癌细胞株MCF-7／ADR的耐药逆转作用。方法乳腺癌细胞MCF-7和MCF-7／ADR各自分为未加LY294002的对照组及加入不同浓度的LY294002组,MTF法观察各组药物的细胞毒作用。选用流式细胞术（FCM）检查细胞凋亡率、细胞分布周期的变化。结果①LY294002在浓度10umol／L以下时对两种细胞基本无毒性,为安全有效的逆转剂量。②阿霉素对MCF-7和耐药细胞MCF-7／ADR的半数抑制浓度（IC50）分别为（0．14±0．02）μmol／L和（15．74±0．08）μmol／L,耐药倍数为112倍。③LY294002能够增强阿霉素对MCF-7／ADM的细胞毒作用,LY294002浓度0．1、2．5、5．0、10μmol／L分别作用于MCF-7／ADM细胞48h后,耐药细胞株的IC50分别降至（13．53±0．10）μmol／L、（10．24±0．08）μmol／L、（5．53±0．16）μmol／L、（2．29±0．12）μmol／L,差异有统计学意义（P〈0．01）。④LY294002可显著增加MCF-7／ADR细胞凋亡率（P〈0．01）。细胞周期分布显示,加用LY294002对各个细胞周期影响不明显。结论LY294002能够增加MCF-7和MCF-7／ADR的化疗敏感性,部分逆转耐药细胞MCF-7／ADR的多药耐药性。     

醛糖还原酶抑制剂影响PDGF-BB促系膜细胞增殖作用的机制研究

目的探讨醛糖还原酶抑制剂（ARI）影响血小板源性生长因子-BB（PDGF-BB）促体外培养大鼠系膜细胞（MsC）增殖作用的机制。方法用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期,对比PDGF-BB刺激MsC生长速度与MAPK3条信号通路（ERK、JNK及p38）抑制剂及PI3K信号通路抑制剂对PDGF促MsC增殖作用的影响。用半定量RT-PCR检测醛糖还原酶抑制剂（ARI）对MsC合成内源性PDGF-B链的影响。蛋白印迹法观察ARI对PDGF引起的信号通路磷酸化的影响。结果（1）ERK抑制剂U0126、JNK抑制剂SP600125及PI3K抑制剂LY294002能明显抑制PDGF对MsC的促增殖作用（P〈0.05）,而p38抑制剂SB203580不能抑制PDGF的促MsC增殖作用;（2）ARI在转录水平对MsC合成内源性PDGF-B链没有明显影响。（3）PDGF刺激MsC后引起ERK、JNK及PI3K/Akt信号通路的磷酸化,而ARI仅能抑制JNK及PI3K/Akt两条信号通路的磷酸化（P〈0.05）,对ERK信号通路的磷酸化没有明显影响。结论ARI部分抑制PDGF促MsC增殖作用可能与其影响JNK和PI3K/Akt信号通路活化有关。     

胰岛素样生长因子1受体及环氧化酶一2在乳腺癌中表达及意义

目的探讨胰岛素样生长因子受体1（IGF-IR）、环氧化酶-2（COx-2）在乳腺癌组织中的表达情况及其相互关系。方法应用免疫组织化学Eenvision两步法对50例乳腺癌组织、20例乳腺良性疾病组织中IGF-IR和C0Ⅺ2的表达进行检测及分析。结果（1）IGF—IR在乳腺癌和乳腺良性疾病表达率分别为80．00％、50．00％,乳腺癌组织中IGF-IR的表达率高于乳腺良性疾病组织,表达差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）IGF-IR的表达与,临床病理特征的关系：有淋巴结转移组IGF-IR的表达率为92．59％（25／27）,无淋巴结转移组IGF-IR的表达率为65．22％（15／23）,表达差异有统计学意义（P〈O．05）。IGF_IR的表达与患者的病理类型、临床分期、肿块大小和ER、PR、HER-2间,均差异无统计学意义（P〉O．05）。（3）COX-2在乳腺癌和乳腺良性疾病表达率分别为98．OO％、65．00％,表达差异有统计学意义（P〈0．05）。（4）IGF-IR、COx-2在乳腺癌中的表达成正相关。结论IGF—IR、COx-2的高表达可能与乳腺癌的发生、发展有关。IGF—IR、cox_2表达呈正相关,可能在乳腺癌发生发展过程中起到协同作用。IGF-IR可能参与了乳腺癌的转移过程。