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在单个细胞水平上分析抗原特异性Th1/Th2细胞因子产生的关联性 总被引:6,自引:2,他引:4
目的 在单个细胞水平上 ,观察抗原特异性Th1和Th2细胞因子产生的关联性 ,为进一步阐明CD4 T细胞的分化 ,细胞因子产生的相互关系及其特征提供理论依据。方法 从OVA TCR转基因小鼠的脾和淋巴结中分离CD4 T细胞 ,在体外在抗原提呈细胞存在下 ,用卵白蛋白 (OVA)抗原多肽刺激 3d后 ,再以同样的培养条件刺激 5~ 6h ,固定细胞 ,然后进行细胞表面和细胞内细胞因子染色 ,最后利用流式细胞仪在单个细胞水平上分析Th1和Th2细胞因子产生的关联性。结果 抗原特异性CD4 T细胞经抗原再一次刺激后 ,分泌Th1(IFN γ和IL 2 )和Th2 (IL 4、IL 5和IL 10 )细胞因子。IL 12促进IFN γ的表达 ,控制Th2细胞的分化。此外 ,大多数抗原特异性CD4 T细胞只产生 1种细胞因子 ,1个细胞同时产生 2种细胞因子极少见。结论 在单个细胞水平上的研究结果表明 ,经抗原短暂刺激后 (3d) ,不同的CD4 T细胞亚群只产生 1种Th1和 或Th2细胞因子 ,同时产生两种以上者占有很低的比率 相似文献
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调节性T细胞(regulation T cells,简称Treg)是不同于Th1和Th2的具有调节功能的T细胞群体,在多种免疫性疾病中起重要调节作用.根据其表面标记、分泌的细胞因子及其作用机制不同,Treg可分为CD4 CD25 调节性T细胞(CD4 CD25 Treg)、Tr1和Tr3等多种亚型. 相似文献
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抗原特异性初始CD4+T细胞的体内分化及特性 总被引:1,自引:0,他引:1
为了探讨抗原特异性CD4+T细胞在体内的分裂、表型、Th1细胞因子的产生和组织器官的分布。将CFSE标记的抗原特异性初始CD4+T细胞静脉被动输给小鼠后,进行免疫,3d后处死小鼠取其脾脏、淋巴结和肺组织,分离单个核细胞,利用流式细胞计数仪在单个细胞水平上,观察细胞的分裂、表型、Th1细胞因子的产生和组织分布。结果显示在没有抗原刺激的情况下,未见初始CD4+T细胞分裂,其主要分布于淋巴结和脾脏。当受到抗原刺激后,CD4+T细胞分裂1~5次,主要分布于脾脏和肺组织,CD25的表达增加,CD62L的表达随着细胞分裂次数的增加而减少。IL-12促进CD25的表达和细胞的分裂。促进Th1细胞的分化和IFN-γ的表达。研究的结果提示,在体内,当CD4+T细胞活化后,主要分布于脾和非淋巴组织发挥其免疫效应。 相似文献
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调节性T细胞对于维持机体免疫自稳、防止自身免疫病具有极其重要的作用,也涉及抗感染免疫、肿瘤免疫、移植免疫、变态反应等许多病理性免疫过程。CD4^ CD25^ 调节性T细胞是调节性T细胞中最为重要的一群,此外,Tr1,Th3等细胞也归属于调节性T细胞。调节性T细胞是外周免疫耐受的新的重要机制,它可通过细胞接触或者抑制性细胞因子作用于抗原呈递细胞或效应性T细胞,从而发挥调节作用。 相似文献
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目的:深入研究过敏性哮喘病人(轻到中度)急性发作期的调节性T细胞对Th17和Th9细胞功能影响的异常。方法:招募30例过敏性哮喘病人(轻到中度)急性发作期和30例健康者,采集外周静脉血30 ml,分离PBMC,然后应用磁珠法体外分离CD4+CD25+CD127-/low调节性T细胞(Tregs)和CD4+CD25-效应T细胞(选取分离纯度90%以上的标本继续下一步试验)。在PHA刺激下体外培养,检测效应T细胞增殖情况和Th17细胞、Th9细胞特异性基因(RORC和PU.1)表达及特异性细胞因子(IL-17和IL-9)分泌情况,检测哮喘病人Th17细胞和Th9细胞的异常情况;并给予Tregs干预,检测Tregs对Th17细胞和Th9细胞分化的影响。结果:哮喘组和健康对照组的Tregs均可以抑制CD4+CD25-效应细胞增殖反应,但哮喘组Tregs的抑制功能较健康对照组明显下降(P=0.03)。哮喘病人RORC表达和IL-17分泌均高于对照组(P0.05),Tregs对RORC表达的抑制能力在哮喘组有所下降(P0.05),但对IL-17分泌的抑制能力在哮喘组和对照组没有显著差别(P0.05);哮喘病人IL-9分泌无论是否加入Tregs干预均高于对照组(P0.05),但PU.1表达只有在加入Tregs干预后才高于对照组(P=0.04);Tregs对PU.1表达和IL-9分泌的抑制能力在哮喘组和对照组没有显著差别(P0.05)。结论:过敏性哮喘病人(轻到中度)急性发作期Tregs数量和功能下降,而Th17细胞和Th9细胞的特异性基因表达和特异性细胞因子生成增加,哮喘病人的Tregs在体外对Th17细胞的抑制功能有所下降,但尚未发现Tregs对Th9细胞的抑制功能明显降低。 相似文献
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病毒的慢性感染与机体的免疫耐受有关。近年来的研究发现,Notch信号通路与机体的免疫系统存在着密切的关系,它从多个方面参与T细胞功能的调控,包括T细胞的活化和增殖、细胞因子的分泌和Th1/Th2分化,也参与调节性T细胞(Treg)的产生、扩增和功能发挥等,表明Notch信号途径不仅参与免疫系统发育,同时在成熟免疫细胞功能调节中也具有重要的作用。 相似文献
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Th1细胞亚群和Th1记忆细胞在体内的功能和组织分布 总被引:1,自引:1,他引:1
目的:检测抗原特异性Th1细胞亚群和记忆性Th1细胞在体内的功能和分布。方法:抗原特异性Th1细胞在体外分化的不同时期,在单个细胞水平上同时检测细胞因子IL-2、IFN-r和IL-4的表达和细胞膜表面分子表达。将标记的初始CD4^ T细胞和Th1细胞被动输给小鼠后,观察Th1记忆细胞在体内组织器官的分布和IFN-r的产生。结果:根据细胞因子产生的不同,可将Th1细胞分为不同的亚群。随着Th1细胞分化次数的增加,IFN-r产生细胞的百分率也随之增加,但IL-2阳性细胞的百分率下降。CD62L随着Th1细胞分化次数的增加而减少。当细胞被动输给小鼠2周后,初始CD4^ T细胞几乎等数量地分布于淋巴结、脾和肺组织,随着Th1细胞分化次数的增加,效应/记忆T细胞优先地分布于非淋巴器官肺组织。当再次受到抗原刺激后,迅速产生IFN-r。结论:Th1细胞是一群非均一细胞,效应/记忆性Th1细胞在细胞膜分子标记、组织器官的分布和功能等方面均与初始CD4^ T细胞不同。 相似文献
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初始CD4+T和记忆性Th1细胞在淋巴器官的分布和IFN-γ的表达 总被引:2,自引:1,他引:1
目的比较观察抗原特异性初始CD4^ T细胞和效应性,记忆性。Th1细胞在体内外IFN-γ的产生和在淋巴组织的分布。方法将标记相同数量的OVA-抗原受体转基因小鼠(OVA-TCR-Tg)的初始CD4^ T细胞和Th1细胞被动输给正常小鼠后,利用流式细胞仪在单个细胞水平上观察初始CD4^ T细胞和Th1细胞在体内淋巴组织器官的分布和IFN-γ的产生。结果体外经抗原刺激后,大于98%的Th1细胞和4.1%的初始CD4^ T细胞表达IFN-γ。当被动输入机体后,初始CD4^ T细胞主要分布于淋巴结,而Th1细胞主要分布于脾脏。当再次受到抗原的刺激后,记忆性Th1细胞能迅速产生IFN-γ。初始CD4^ T细胞与效应,记忆Th1细胞在淋巴结和脾脏不同的分布,可能与CD62L的表达有关。结论本研究在我们以前研究的基础上进一步探讨了CD4^ T细胞和记忆性Th1细胞的差异。此结果为进一步揭示初始CD4^ T细胞与Th1细胞的差异提供了实验和理论依据。 相似文献
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观察CD4+CD25+T和CD4+CD25-T细胞的表型和细胞因子的表达。自小鼠脾脏制备单个细胞悬液,分离CD4+T细胞、CD4+CD25+和CD4+CD25-T细胞,进行细胞表面标记,激活后进行细胞内细胞因子染色,利用流式细胞仪在单个细胞水平上分析细胞表面分子、转录因子和细胞因子表达之间的关系。结果:在CD4+T细胞中,约有7.8%的细胞同时表达CD25分子。与CD4+CD25-T细胞相比,CD4+CD25+T细胞CD44的表达略有增加,CD45RB的表达明显下降,CTLA-4和Foxp3明显增加。以同时表达CTLA-4和Foxp3的细胞为主,其次为单独表达Foxp3的细胞。细胞因子的研究结果表明,与CD4+CD25-T细胞相比,CD4+CD25+T细胞IL-2、IFN-γ明显减少,而只产生IL-10的细胞略有增加。CD4+CD25+调节性T细胞无论在表型、转录因子的表达以及细胞因子表达方面均于非调节性T细胞不同。 相似文献
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调节性T细胞(Treg)是体内存在的一类抑制免疫应答的T细胞亚群,分为天然调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)和诱导型调节性T细胞(iTreg),通过细胞-细胞互相接触、分泌细胞因子(IL-10、TGF-β1)等途径抑制B细胞、效应性T细胞的增殖、活化和免疫效应,在抑制自身免疫性疾病发展、移植耐受、肿瘤免疫逃逸等方面发挥重要作用。新的调节性T细胞亚群:CD4+LAP+调节性T细胞(CD4+LAP+Treg),已经被证实在多种动物模型中发挥保护作用,可能是Treg发挥免疫抑制功能关键细胞之一,目前已引起国内外学者的关注。本文对CD4+LAP+Treg的发现及其与疾病关系的研究进展进行综述。 相似文献
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目的 研究CD4+CD25+调节性T细胞对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)激活的巨噬细胞功能的影响及其机制.方法 磁性细胞分离器(MACS)分离CD4+CD25+T细胞及CD4+CD25-T细胞,在oxLDL作用下,将巨噬细胞分别与CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25-T细胞共培养48 h.采用流式细胞术检测巨噬细胞HLA-DR、CD86的表达;ELISA检测上清液MCP-1、MMP-9、TNF-α、TGF-β和IL-10细胞因子的表达;采用Griess反应测定NO生成量,RT-PCR测定iNOS表达.结果 与对照组比较,CD4+CD25+T细胞可显著抑制oxLDL激活的巨噬细胞HLA-DR及CD86的表达、减少NO生成、抑制iNOS mRNA表达和促炎细胞因子生成.结论 调节性T细胞可促使oxLDL激活的巨噬细胞由具有促炎表型的M1型向具有抗炎表型的M2型转化. 相似文献
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ConA对CD4~+CD25~+调节性T细胞早期活化和功能的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:观察常用丝裂原ConA对CD4+CD25+调节性T细胞抑制功能的影响与早期活化标志CD69之间的关系。方法:用免疫磁珠分离BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞、CD4+CD25-效应性T细胞,加入不同浓度的ConA,12 h后收集细胞,流式细胞术分析其CD69的表达。CFSE标记CD4+CD25-效应性T细胞,按2∶1比例与CD4+CD25+调节性T细胞共同培养,培养同时加ConA,3 d后流式细胞仪分析ConA对CD4+CD25+调节性T细胞抑制CD4+CD25-效应性T细胞增殖的影响。结果:ConA能剂量依赖性地升高CD4+CD25+调节性T细胞和CD4+CD25-效应性T细胞CD69的表达,对两群细胞CD69的升高表现出了相似的作用;另外,ConA在上述浓度能剂量依赖激活CD4+CD25+调节性T细胞的抑制功能。结论:ConA在体外对CD4+CD25+调节性T细胞活化和功能具有促进作用。ConA能一定程度模拟抗原,因而可用于评价药物对调节性T细胞的活化和功能影响。 相似文献
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《现代免疫学》2016,(2)
探讨CD4~+CD25~+调节性T细胞及其转录因子Foxp3在结核病发病机制中的作用。研究对象为肺结核患者22例(病例组)以及健康对照者23例(对照组)。采用FACS检测外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的百分率,采用real-time PCR检测外周血单个核细胞Foxp3mRNA的表达以及CD4~+CD25~+调节性T细胞与CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、IFN-γ和IL-4的相关性。结核病患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞占CD4~+T细胞的百分率,病例组(3.38±1.23)%高于对照组(1.97±0.62)%,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。血清单个核细胞Foxp3 mRNA相对表达水平为134.54±6.76,高于对照组(40.98±2.34,P0.05)。CD4~+CD25~+调节性T细胞与CD4~+T细胞、CD8~+T细胞以及与IFN-γ和IL-4的表达呈负相关。结核病CD4~+CD25~+调节性T细胞数量增加、特异性转录因子Foxp3 mRNA表达上升,由此引发的免疫抑制效应可能是结核病发生发展的重要原因之一。 相似文献
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结核胸液中ESAT-6多肽特异性多功能CD4+T细胞数量及功能分析 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:检测ESAT-6多肽刺激后,结核性胸膜炎患者胸液细胞中CD4+T细胞细胞因子产生及多功能CD4+T细胞频率,了解ESAT-6特异性CD4+T细胞在结核局部细胞免疫应答中的作用.方法:分离结核性胸膜炎患者胸液细胞(PFCs),ESAT-6混合多肽刺激后检测CD4+T细胞细胞因子分泌、细胞亚群、多功能性CD4+T细胞频率及细胞因子平均荧光强度.结果:BCG、ESAT-6混合多肽和ESAT-6组蛋白刺激PFCs后,主要是CD4+T细胞分泌Th1细胞因子(IFN-γ、IL-2和TNF-α),而CD8+T细胞几乎不产生细胞因子.进一步分析ESAT-6混合多肽刺激PFCs后Th1细胞的亚群组成,依据细胞因子分泌的类型及数量,该特异性Th1细胞可以分为7个不同亚群,且各亚群所占比例不同,其中多功能性T细胞亚群(同时分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α)比例较高.细胞因子荧光强度分析表明,依据细胞因子分泌类型的增加,单个细胞水平上不同Th1亚群中各细胞因子表达的量也逐渐增加,即3+>2+>1+细胞.结论:ESAT-6混合多肽刺激结核性胸膜炎患者胸液细胞后,主要诱导CD4+T细胞分泌细胞因子,且Th1亚群中包含多功能性CD4+T细胞,该细胞在单细胞水平上分泌细胞因子的类型和数量也显著高于其他亚群.可能在结核局部感染中发挥关键保护性作用. 相似文献
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目的:检测多发性骨髓瘤(MM)患者外周血T辅助细胞亚群(Th1/Th2)及调节性T细胞(CD4+CD25+Tregs)数量和比例的变化,探讨其T细胞免疫功能状态及临床意义。方法:流式细胞术(FCM)检测31例MM患者及20例健康志愿者外周静脉血Th1/Th2及CD4+CD25+Tregs的比例并分析比较。结果:(1)II、III期MM患者Th1细胞比例较对照组降低,III期Th2细胞比例较对照组及I期降低,差异具有显著性;II、III期MM患者CD4+CD25+、CD4+CD25high、CD4+CD25highCD127low细胞比例均高于正常组,III期CD4+CD25high、CD4+CD25highCD127low较I期增高,差异具有显著性。(2)化疗后复发组MM患者Th1细胞比例较对照组降低,初诊组及化疗后复发组Th2细胞比例较对照组及稳定期组降低,差异具有显著性;初诊组及化疗后复发组CD4+CD25+、CD4+CD25high、CD4+CD25highCD127low细胞比例均高于正常组,复发组CD4+CD25+、CD4+CD25high、CD4+CD25highCD127low明显高于稳定组及初诊组,差异具有显著性。(3)相关性分析Th1、Th2细胞与CD4+CD25+Tregs存在不同程度的负相关(均P0.05或0.01)。结论:MM患者外周血Th1、Th2细胞比例降低,调节性T细胞比例增高,两者相互调节,并与疾病临床分期、病情进展相关,对指导治疗也有一定的价值。 相似文献
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移植免疫耐受中调节性T细胞的研究进展 总被引:1,自引:1,他引:0
调节性T细胞(Tr)在诱导和维持移植免疫耐受过程中的作用越来越受到人们的重视。根据不同的细胞表型和功能已将Tr分为若干亚类,首先是胸腺内T细胞发育过程中自然产生的CD4^+T细胞亚群,能够构成性表达IL-2受体的仅链(CD25)存在于外周,体内体外均可抑制效应性T细胞的增殖和功能;其次是产生于正常的免疫应答过程中的诱导性Tr亚群,包括Tr1和Th3通过分泌细胞因子如IL-10和TGF—β发挥抑制作用。除此之外,也有报道CD8^+Tr、双阴性T(DNT)细胞和NKT细胞在移植耐受的不同模型中亦发挥重要作用。因而研究各种Tr亚群的生物学特征、调节机制及其在移植耐受中的作用非常必要。 相似文献
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目的:研究特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg)及相关细胞因子转化生长因子β1(TGF-β1)的表达水平,探讨二者在ITP发病机制中的作用。方法:流式细胞术(FCM)检测31例ITP患者及25例健康志愿者外周血Treg细胞的数量,ELISA方法检测血清中TGF-β1的含量,并进行相关性分析。结果:ITP患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞数量显著低于正常对照组(P0.05),血清TGF-β1的含量也较正常对照组明显减低(P0.05),差异有统计学意义。但CD4+ CD25+调节性T细胞比例与TGF-β1的含量无相关性(P0.05)。结论:ITP患者CD4+ CD25+调节T细胞数量减少与ITP的细胞免疫失调有关,CD4+ CD25+调节性T细胞和TGF-β1在ITP中作用机制复杂,还需要进一步研究。 相似文献