异丙酚对肿瘤坏死因子损伤内皮细胞的保护作用

目的 观察肿瘤坏死因子(TNF)对人脐静脉内皮细胞(HUVIC)的损伤作用及不同浓度异内酚对该损伤的保护作用.方法 将原代培养的内皮细胞分为A(正常培养组)、B(TNF损伤组)两组,根据加入异丙酚浓度的不同再将各组分为4个亚组:A1(不加异丙酚)、A2～4(12.5,25,50 μmol/L异丙酚);B1(12 500 mol/LTNF),B2～4(12.5 μmol/L异丙酚 12 500 mol/LTNF,25 μmol/L异丙酚 12 500 mol/LTNF,50μmol/L异丙酚 12 500 mol/LTNF).测定各组超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)及内上素(ET-1)的含量.结果 TNF可降代内皮细胞SOD的活性(P＜0.01),增加MDA,ET-1的含量(P＜0.01);异丙酚可提高TNF损伤组SOD活性,降低MDA及ET-1的含量;异丙酚对正常培养组SOD活性影响不大,高浓度异丙酚可降低MDA及ET-1的含量.结论 异丙酚对TNF损伤的内皮细胞有保护作用,并且当浓度较大时,效果最佳.     

消渴丸对人血管内皮细胞保护作用的研究

目的探讨消渴丸对人血管内皮细胞（EC）的保护作用及其可能的机制,进一步研究其药理作用。方法原代培养获取人脐静脉内皮细胞,通过体外细胞培养,采取直接添加药物的方法,观测消渴丸对人血管内皮细胞功能的影响,以及消渴丸中药成分对内皮细胞增殖的作用。结果不同浓度下,消渴丸成品组和消渴丸纯中药成分组一氧化氮（NO）含量相对于格列本脲组和空白对照组均明显升高（P〈0．001）,消渴丸成品组与消渴丸纯中药成分组相比,NO含量差异无统计学意义（P〉0．05）,并且随着药物浓度的递增,NO含量也明显上升（P〈0．05）。结论消渴丸在体外细胞培养环境中,可以明显提高NO的含量,对EC增殖有一定的抑制作用,提示消渴丸有一定的防治血管并发症的作用。     

健胎液对人脐静脉内皮细胞分泌血管活性物质的影响

采用血清药理学方法观察健胎液对缺氧人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分泌血管活性物质——内皮素（ET）、前列环素（PGI2)、一氧化氮（NO)的影响,以及对缺氧HUVEC形态结构的保护作用,旨在探讨健胎液防治胎儿宫内生长迟缓（IUGR）的机理。结果表明健胎液可显著提高缺氧HUVEC合成分泌PGI2、NO（P<0.05,P<0.01）,同时减少ET的释放(P<0.05);从超微结构上观察,健胎液能明显减轻缺氧对HUVEC细胞器和细胞核的损伤。结果提示健胎液通过增强HUVEC对缺氧的耐受性,调节血管活性物质的分泌是其防治胎儿宫内生长迟缓的机制之一。     

齐墩果酸对损伤血管内皮细胞的保护作用及其机制探讨

目的:探讨齐墩果酸(oleanic acid,OA)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)诱导人血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用及其机制?方法:培养HUVECs,分为正常组?H2O2模型组?H2O2+OA (0.25 ?滋mol/L)组?H2O2+OA (0.50 ?滋mol/L)组?H2O2+OA (1.00 ?滋mol/L)组?H2O2+维生素C(1.50 mmol/L)组?各组培养24 h后,通过MTT法检测细胞增殖能力,酶生化法测定上清液中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,酶生化法测定细胞裂解液中的丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量?谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力,流式细胞仪测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)和细胞凋亡率?结果:OA能够恢复H2O2损伤的细胞活力,减轻H2O2诱导的LDH释放,减少H2O2诱导的MDA生成,恢复H2O2损伤的GSH-Px和SOD活力,清除H2O2诱导的ROS,减轻H2O2诱导的细胞凋亡,提高HUVECs细胞NO的生成?结论:OA对损伤血管内皮细胞有保护作用,这与OA能够启动HUVECs细胞内抗氧化防御机制,清除细胞内的ROS,提高HUVECs细胞NO的生成,抑制H2O2诱导的HUVECs细胞凋亡有关?     

芍药醇对叔丁基过氧化氢损伤的血管内皮细胞的保护作用

目的：探讨芍药醇（PAE）对叔丁基过氧化氢（TBHP）损伤的血管内皮细胞的保护作用及其机制。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）分为对照组（Control组）、造模组（TBHP组）和PAE处理组（各浓度PAE+THBP组）;用CCK8法及乳酸脱氢酶（LDH）检测各组HUVECs细胞增殖抑制情况,Transwell实验检测细胞的迁移能力,流式细胞仪和Cleaved-caspase 3免疫荧光染色检测HUVECs细胞凋亡情况。结果：与Control组比较,TBHP组细胞存活率和细胞迁移数明显降低,细胞凋亡率、LDH释放量和Cleaved-caspase 3蛋白的表达明显升高（均P＜0.05）。与TBHP组比较,PAE处理组细胞的存活率和细胞迁移数均随着给药浓度的增加而逐渐升高,细胞凋亡率、LDH释放量和Cleaved-caspase 3蛋白的表达均随着给药浓度的增加而逐渐下降（均P＜0.05）。结论：PAE通过抑制TBHP诱导的HUVECs细胞存活率降低、LDH释放量升高、细胞凋亡增多、Cleaved-caspase 3蛋白表达的上调,发挥其对TBHP损伤的血管内皮细胞的保护作用,且呈剂量依赖性。     

甘肃黄芪异黄酮化合物对血管内皮细胞凋亡的影响

目的 观察甘肃黄芪异黄酮化合物对血管内皮细胞凋亡的影响及其可能机制。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,将细胞分为对照组（A组）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）（1μmol／L）组（B组）、AngⅡ（1μmol／L）＋毛蕊异黄酮（1μg／mL）组（C组）、AngⅡ（1μmol／L）＋2’-OH-3’,4＇-二甲氧基异黄烷-7-O-β-D-吡喃葡萄糖（1μg／mL）组（D组）;荧光显微镜和激光共聚焦显微镜技术观察细胞的形态;Annexin—V／PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率及凋亡相关基因Fas蛋白的表达。结果 B组与A组比较,B组HUVECs凋亡率、Fas蛋白表达率和平均荧光强度增加（P〈0．001）,激光共聚焦显微镜可观察到典型的凋亡细胞;C组与B组比较,毛蕊异黄酮抑制了AngⅡ的促HUVECs凋亡作用（P〈0．001）,降低了Fas蛋白表达率（P〈0．001）;两种黄芪异黄酮单体毛蕊异黄酮和2＇-OH-3’,4＇-二甲氧基异黄烷-7-O-β-D-吡喃葡萄糖的组间比较,HUVECs凋亡率（P=0．195）和Fas蛋白表达率（P=1．000）均无显著性差异。结论 黄芪异黄酮化合物可以抑制AngⅡ所致的体外培养HUVECs的凋亡。     

低氧状态下血管内皮细胞HIF-1α表达及与细胞凋亡的关系

目的探讨低氧对人脐静脉内皮细胞ECV304凋亡及低氧诱导因子-1α表达的影响及意义。方法人脐静脉内皮ECV304细胞分为低氧处理组和对照组,处理后MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术和TUNEL染色检测细胞凋亡;应用荧光实时定量PCR(QPCR)和Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和HIF-1α的mRNA和蛋白表达。结果与对照组比较,低氧处理能明显抑制细胞的增殖,且抑制作用随着低氧处理时间的延长而增强(P<0.05);低氧处理细胞后凋亡率明显增加,且呈时间依赖性(P<0.05);QPCR和Western blot结果显示,低氧处理组细胞Caspase-3、Bax的mRNA和蛋白表达均显著升高(P<0.05),Bcl-2则明显下降(P<0.05),Bcl-2/Bax比值显著降低,且呈时间依赖性(P<0.05)。低氧呈时间依赖性上调HIF-1α的mRNA和蛋白水平(P<0.05)。结论低氧能促进人脐静脉内皮细胞ECV304细胞凋亡,其机制可能与HIF-1α表达上调及Bcl-2的表达降低、Caspase-3和Bax的表达升高有关。     

黄芪皂苷注射液对糖尿病肾病血管内皮细胞功能保护临床研究

目的:探讨黄芪皂苷注射液对糖尿病肾病患者血管内皮功能的影响.方法:60例糖尿病肾病患者,随机分为治疗组和对照组,在常规治疗基础上,治疗组加用黄芪皂苷注射液,对照组用生理盐水代替给药,另选20例健康体检者作为正常组.检测治疗组和对照组治疗前及治疗后10天血浆ET、NO及主要生化指标.结果:治疗组患者治疗后较治疗前ET及ET/NO水平明显降低,同时部分主要生化指标也有所下降;治疗后治疗组较对照组其降低幅度明显高于对照组.结论:黄芪皂苷注射液对糖尿病肾病患者血管内皮细胞功能具有保护作用.     

人参皂甙Rg1对同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的逆转作用

目的人参皂甙Rg1对同型半胱氨酸(homocy steine,Hcy)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的逆转作用。方法体外培养HUVECs,采用台盼蓝染色方法筛选人参皂甙Rg1最适浓度。将细胞分为对照组(无任何诱导物)、Hcy组(10μmol·L-1Hcy)、Hcy+Rg1组(10μmol·L-1Hcy和40mg·L-1Rg1)和Rg1组(单独用40mg·L-1Rg1处理的细胞),作用时间为24h。琼脂糖凝胶电泳和末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色检测细胞凋亡情况。结果台盼蓝染色结果显示:人参皂甙Rg1的最适浓度40mg·L-1。琼脂糖凝胶电泳结果显示:对照组和Rg1组未见凋亡条带,Hcy组可见清楚的细胞凋亡特征性的"梯状"条带,而Hcy+Rg1组可见不明显的细胞凋亡特征性的"梯状"DNA断裂条带。TUNEL染色结果显示:与对照组和Rg1组相比,Hcy组细胞凋亡数量显著增加(P<0.01);与Hcy组相比,Hcy+Rg1组细胞凋亡数量显著减少(P<0.01),凋亡百分比由33.733%下降至9.200%,但仍高于对照组和Rg1组(P<0.01)。结论 40mg·L-1人参皂甙Rg1可一定程度逆转Hcy诱导的HUVECs凋亡。     

登革病毒感染对人血管内皮细胞血管细胞黏附分子-1表达的影响

目的:研究登革病毒2型(DV2)体外感染对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的影响.方法:原代分离、纯化、培养人HUVEC细胞,用生长良好的2～3代细胞进行实验.分别用病毒感染复数(MOI)为1、2、4、8、16的DV2病毒液感染HUVEC,阴性对照组直接以RPMI 1640培养,应用细胞计数试剂-8(CCK-8)法测定DV2感染前和感染后6、12、24、48、72和96 h的细胞活性.另以MOI=2的DV2病毒液感染细胞,阴性对照组直接以RPMI 1640培养,于感染后6、12、24、48、72、96 h分别收集病毒感染的HUVEC,采用流式细胞术测定细胞表面VCAM-1表达水平;采用RT-PCR法检测细胞中VCAM-1 mRNA转录水平.结果:当病毒MOI=2时对细胞活力的影响与对照组相比差异无统计学意义.DV2感染可以促进HUVECs中VCAM-1 mRNA的转录,96 h内均有增加,与对照组相比有显著性差异(P<0.05).其中,正常状态下HUVEC基本无VCAM-1 mRNA转录,感染12 h达到最高峰,12～48 h表达量显著高于其他时间(P<0.05).DV2 感染HUVEC后, VCAM-1蛋白表达在12～72 h显著升高(P<0.05),与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:DV2感染上调HUVEC的VCAM-1 mRNA转录和蛋白表达.这可能是DV2感染诱发患者血管通透性升高和血浆渗漏的重要分子机制之一.     

黄芪注射液对烟碱损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用

观察黄芪注射液对烟碱损伤人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用及分子机制.方法 MTT法检测烟碱、黄芪对HUVEC细胞生长的影响,硝酸还原酶法检测总NO水平、化学比色法检测HUVEC细胞总NOS水平、酶联免疫法检测ET-1的水平. 结果烟碱作用后的HUVEC细胞总NO水平和总NOS水平均降低显著(P＜0.01),而...     

Changes in human umbilical vein endothelial cells induced by endothelial nitric oxide synthase traffic inducer

This study investigated the changes in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) induced by overexpression of endothelial nitric oxide synthase traffic inducer (NOSTRIN) and its role in cellular injury. Recombinant NOSTRIN-expressing and empty vectors were transfected into cultured HUVECs, and factor Ⅷ-related antigen was examined by using immunohistochemical analysis. Growth curves were generated for both transfected and untransfected cells and these indicated that the proliferative ability of cells overexpressing NOSTRIN was significantly decreased. The expression of NOSTRIN and eNOS proteins was detected by using Western blot analysis, endothelial NOS (eNOS) activity was assayed by using spectrophotometry, and NO 2 /NO 3 levels were measured using nitrate reductase. Immunohistochemical analysis demonstrated that all groups expressed NOSTRIN in the plasma membrane and cytoplasm, and Western blot analysis confirmed that NOSTRIN levels were significantly higher in cells transfected with the NOSTRIN plasmid (P<0.01). The activity of eNOS and the levels of NO 2 /NO 3 were significantly decreased in NOSTRIN overexpressing cells as compared with empty vector and untransfected cells (P<0.01 and P<0.01, respectively). Morphological and ultrastructural changes were observed under light and electron microscopy, and it was found that NOSTRIN-overexpressing cells were elongated with deformities of the karyotheca, injury to the plasma membrane, increased lipids in the cytoplasm, and shortened microvilli. This study showed that overexpression of NOSTRIN had a significant effect on eNOS activity in HUVECs and resulted in significant cellular damage.     

还原型谷胱甘肽和黄芪对ESWL肾损伤保护作用的临床观察

目的探讨还原型谷胱甘肽和黄芪对体外冲击波碎石(ESWL)致肾损伤的保护作用和可能机制。方法将60例单侧肾结石患者随机分成4组:还原型谷胱甘肽(GSH)组、黄芪组、GSH+黄芪组和对照组,于ESWL治疗开始时及术后1 d、2 d、3 d、4 d各组分别静点GSH、黄芪、GSH+黄芪和生理盐水,测定ESWL前后不同时间点血清SOD、MDA、GSH-Px及尿NAG/肌酐变化。结果ESWL治疗后GSH组和黄芪组SOD降低及MDA升高幅度低于对照组(P<0.05),且两组之间无显著差异(P>0.05);GSH+黄芪组ESWL前后SOD与MDA变化无统计学意义(P>0.05),且变化幅度低于其他三组(P<0.05);黄芪组与GSH+黄芪组GSH-Px无显著差异(P>0.05),但术后明显高于术前(P<0.05),其他两组ESWL前后GSH-Px无明显变化(P>0.05);GSH+黄芪组尿NAG/肌酐升高幅度低于其他三组(P<0.05),术后4 d恢复正常,其他三组术后7 d恢复正常。结论还原型谷胱甘肽和黄芪对ESWL致肾损伤有相同的保护作用,但联合用药效果优于单独用药。     

黄芪注射液联合顺铂对HeLa细胞生长的影响

目的研究不同浓度黄芪注射液单独或联合顺铂对HeLa细胞生长的影响。方法单独或联合应用不同浓度的黄芪注射液、顺铂作用于人宫颈癌HeLa细胞系,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测其对细胞生长的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白p53、Bax、Bcl-2的表达。结果 MTT法检测结果显示黄芪注射液对HeLa细胞生长影响的最佳作用浓度为1 000 g.L-1,最佳作用时间为48 h。黄芪注射液组、顺铂组、黄芪注射液联合顺铂组HeLa细胞凋亡率均高于对照组,且黄芪注射液联合顺铂组HeLa细胞的凋亡率显著高于黄芪注射液组和顺铂组,各组之间的差异均有统计学意义(P<0.05)。各组间比较,黄芪注射液联合顺铂组Bax、p53蛋白的表达量最高,Bcl-2蛋白的表达量最低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论高浓度的黄芪注射液对HeLa细胞有促凋亡作用,可协同顺铂增强对HeLa细胞的促凋亡作用,其作用机制与增强p53、Bax蛋白的表达、减弱Bcl-2蛋白的表达有关。     

蒙古黄芪中黄酮类成分的研究

目的研究蒙古黄芪的化学成分,为该中药的开发利用和质量评价提供依据。方法利用多种色谱方法分离纯化,通过理化常数测定和波谱分析鉴定其化学结构。结果从蒙古黄芪中分离鉴定了9个黄酮类化合物,分别为芒柄花素(formononetin,Ⅰ)、(3R)-8,2′-二羟基-7,4′-二甲氧基异黄烷[(3R)-8,2′-dihydroxy-7,4′-dimethoxy-isoflavane,Ⅱ]、毛蕊异黄酮(calycosin,Ⅲ)、(6aR,11aR)9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷[(6aR,11aR)9,10-dimethoxypterocarpan-3-O-β-D-glucoside,Ⅳ]、7,2′-二羟基-3′,4′-二甲氧基异黄烷-7-O-β-D-葡萄糖苷(7,2′-di-hydroxy-3′,4′-dimethoxy-isoflavane-7-O-β-D-glucoside,)、芒柄花素-7-O-β-D-葡萄糖苷(formononetin-7-O-β-D-glucoside,Ⅴ)、毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(calycosin-7-O-β-D-glucoside,Ⅵ)、红车轴草异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(pratensein-7-O-β-D-glucoside,Ⅶ)和染料木苷(genistin,(Ⅸ))。结论化合物为首次从黄芪属植物中分得,化合物为首次从该种植物中获得,化合物～具有促进细胞增殖的活性。-     

非诺贝特对LPC诱导脐静脉内皮细胞增殖、凋亡及eNOS基因表达的影响

目的：探讨非诺贝特对LPC诱导的脐静脉内皮细胞增殖、凋亡及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）基因表达的影响。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs），根据非诺贝特不同浓度分为正常对照组、LPC组、低浓度非诺贝特（10μmol／L）组、中浓度非诺贝特（50μmol／L）组、高浓度非诺贝特（100μmol／L）组，根据非诺贝特不同干预时间分为正常对照组、LPC组、非诺贝特（50μmol／L）干预6h组、12h组、24h组、48h组进行实验。分别观测不同浓度及不同时间非诺贝特内皮细胞增殖、凋亡、NO浓度及eNOS mRNA表达的变化。结果：与正常对照组比较，LPC抑制内皮细胞增殖，促进细胞凋亡，并使HUVECs eNOS mRNA表达降低，NO合成减少。非诺贝特可干预LPC对内皮细胞的作用，使内皮细胞增殖增强，细胞凋亡减少，eNOS mRNA表达升高，NO合成增加，且其作用呈时间-效应、浓度-效应依赖关系。结论：非诺贝特可改善LPC对HUVECs的影响，使内皮细胞增殖增强，凋亡减少，eNOS mRNA表达升高，NO合成增加，从而起到抗动脉硬化作用。     

软脂酸引起血管内皮细胞损伤机制的探讨

目的　探讨软脂酸 (PA)引起血管内皮细胞损伤的机制。方法　选择 1 3种可能阻断PA引起血管内皮细胞损伤作用的物质 ,与PA共同培养人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) ,用MTT比色法测定HUVEC在不同条件下的存活率。结果　①一氧化氮合酶阻断剂 (-N 硝基L 精氨酸 ,L NNA)能部分阻断PA引起血管内皮细胞死亡 [1 5 μmol LL NNA+2 0 0 μmol LPA组与 2 0 0 μm LPA单独作用组比较细胞生存率增加了 4 3.5 % ,两者差异显著 (P <0 .0 1 ) ]。②一氧化氮供体 (硝普钠 ,SNAP)可加重细胞死亡 [5 μmol LSNAP +2 0 0 μmol LPA组细胞生存率较 2 0 0 μmol LPA单独作用组减少了 32 .5 % ,两者差异显著 (P <0 .0 1 ) ]。④Ca2 + 阻断剂、Ca2 + 通道拮抗剂、PPARr激动剂、PKC阻断剂、PKA抑制剂、神经酰胺 (CER)阻断剂、抑制K内流的异黄酮、前列腺素 (PGE)、VitE、抑制蛋白合成的ML 7均未能阻断PA诱导的细胞死亡。结论　过量的NO生成与软脂酸引起的血管内皮细胞损伤有关。Ca2 + 、PKC、PKA、CER、PPARr、PGE均未参与软脂酸引起的血管内皮细胞死亡过程     

他汀类药物对培养的血管内皮细胞VEGF和bFGF等因子表达的影响

目的观察Pitavastatin对血管内皮细胞VEGF、bFGF等因子表达的影响,探讨他汀类药物可能具有的独立于血脂调节作用以外的促血管新生作用.方法体外培养HUVEC,加入不同浓度的Pitavastatin后用蛋白印迹杂交法检测VEGF,bFGF,p-Akt及p-eNOS蛋白表达水平;镉还原Griess测定培养基中NO含量.结果在培养的HUVEC中加入Pitavastatin后,VEGF,bFGF,p-Akt及p-eNOS蛋白呈现高表达,培养基中NO含量明显增高.结论 Pitavastatin能诱导内皮细胞VEGF,bFGF,p-Akt及p-eNOS蛋白的表达及增加NO含量,推测其可能通过VEGF-p-Akt-eNOS(NO)径路而发挥非调脂的作用.