小檗碱对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察小檗碱对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响。方法:将组织贴块法培养的大鼠PASMCs随机分为对照组,AngⅡ模型组,小檗碱高、中、低剂量组,硝苯地平组和溶剂组。用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法检测各组PASMCs的生长情况,以流式细胞术检测细胞周期构成比和增殖指数(PI),以乳酸脱氢酶(LDH)法检测小檗碱对细胞的毒性作用。结果:小檗碱可明显降低AngⅡ诱导PASMCs的增殖能力,使PASMC3的G0/G1期构成比显著升高(P<0.05),PI显著下降(P<0.05),且对PASMCs释放LDH无影响。结论:小檗碱能抑制AngⅡ诱导的PASMCs增殖,且与细胞毒性作用无关。     

高糖对血管紧张素Ⅱ促系膜细胞增殖作用的影响及其机制

目的　为了探讨高糖对血管紧张素Ⅱ促系膜细胞增殖作用的影响及其机制。方法　采用体外人肾小球系膜细胞培养 ,系膜细胞增殖能力采用MTT法 ,蛋白激酶C(PKC)α、β2 、ε表达应用免疫细胞化学检测。结果　高糖对AngⅡ促系膜细胞增殖有正相调节作用 ,高糖和AngⅡ可刺激系膜细胞PKCβ2 表达增强 ,PKC抑制剂可阻断高糖和AngⅡ的促增殖作用。结论　高糖和AngⅡ促系膜细胞增殖作用是通过PKC依赖途径介导的 ,应用PKC抑制剂可能是防治糖尿病肾病发生发展的手段之一。     

牛磺酸对肺动脉内皮和肺动脉平滑肌细胞增殖的双向调节作用

目的探讨肺动脉高压发生发展的细胞机制和牛磺酸对缺氧性肺动脉高压的防治作用。方法体外培养新生雄性小牛肺动脉内皮细胞(PAECs)及肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),用3H-TdR掺入法比较缺氧时PASMCs与PAECs的增殖情况,同时测定在培养液中加入牛磺酸后其增殖的改变。结果2.5%O2和<1%O2条件下培养6~24 h,PAECs的3H-TdR掺入量均显著低于常氧对照组(降低15%~48%,P<0.05);而PASMCs于缺氧12 h后3H-TdR掺入量均显著高于常氧对照组(增加19%~34%,P<0.05)。牛磺酸对细胞增殖的影响与浓度有关,高浓度(10~20 mmol/L)的牛磺酸抑制缺氧的内皮及平滑肌细胞的3H-TdR掺入,而低浓度的牛磺酸促进缺氧时PAECs的3H-TdR掺入(P<0.05),抑制缺氧时PASMCs的3H-TdR掺入(P<0.05)。结论缺氧抑制内皮细胞的增殖而促进平滑肌细胞的增殖,适当的牛磺酸可以对抗缺氧对PAECs和PASMs的作用,减弱缺氧对PAECs的增殖抑制作用,抑制缺氧的促PASMCs增殖作用,使之接近常氧水平。     

依那普利拉抗心肌成纤维细胞增殖的分子机制

目的：观察血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）依那普利拉（Ena）和蛋白激酶C（PKC）抑制剂白屈菜红（Chele）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的新生鼠心肌成纤维细胞（CFb）增殖、细胞周期、Ⅰ型胶原纤维（collagen Ⅰ）、PKC和细胞周期蛋白cyclinD₁蛋白表达的影响,阐明Ena抗CFb增殖的分子机制。方法：培养的新生Wistar大鼠CFb分为对照组、AngⅡ组、Chele+AngⅡ组、Chele+AngⅡ＋Ena组和AngⅡ＋Ena组,采用胰酶消化、差速贴壁法培养CFb,四氮唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖;免疫细胞化学染色（IC）法测定collagen Ⅰ含量;流式细胞术（FCM）检测细胞周期;免疫印迹法检测PKC和细胞周期蛋白cyclinD₁表达。结果：与AngⅡ组比较,Chele和Ena组及Chele+AngⅡ＋Ena组CFb增殖率均显著降低（P<0.05或P<0.001）,collagen Ⅰ含量降低（P<0.05或P<0.01）,CFb G₀/G₁期细胞百分率升高,S期细胞百分率降低（P<0.05　或P<0.01）,PKC和cyclinD₁蛋白表达水平降低（P<0.05或P<0.01）。结论：Ena和Chele能抑制AngⅡ诱导的CFb增殖和胶原蛋白分泌,其机制可能是通过抑制PKC-cyclinD₁转导通路实现的。     

DPP-4抑制剂通过Nrf2/HO-1/P21信号通路抑制肺动脉平滑肌细胞增殖的分子机制研究

目的 明确DPP-4抑制剂西格列汀对肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响,并探讨相关的分子机制.方法 体外培养大鼠PASMCs并随机分为对照组、5-HT组、不同浓度(2.5,5,10,20,40μmol/L)西格列汀预处理+5-HT组,应用BrdU试剂盒检测各组细胞增殖情况并筛选西格列汀作用浓度;用西格列汀刺激P...     

线粒体ALDH2通过调控自噬对缺氧性肺动脉高压的保护机制研究

目的：探讨激活线粒体乙醛脱氢酶2(ALDH2)可以降低因缺氧所引起的平滑肌细胞自噬,并降低肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的增殖,分析ALDH2对缺氧性肺动脉高压平滑肌增殖的调控关系。方法：将SPF级雄性SD大鼠分4组：正常对照组(N组)、常氧+ALDH2特异性激动剂Alda-1组(N+Alda-1组)、缺氧组(H组)、缺氧+Alda-1组(H+Alda-1组),将PASMCs分为6组：常氧组(N组)、常氧+Alda-1组(NA组)、缺氧组(H组)、缺氧+Alda-1组(HA组)、缺氧+ALDH2抑制剂Daidzin组(HD组)、缺氧+Alda-1+Daidzin组(HAD组)。HE染色观察各组动物肺组织中肺动脉病理变化;免疫荧光鉴定肺动脉平滑肌细胞;CCK-8测定各组细胞增殖能力;Annexin V-FITC/PI双染测定细胞凋亡水平;Western blotting检测各组ALDH2、p62、Beclin1、LC3B等蛋白的表达。结果：与N组相比,H组肺小动脉管壁增厚,管腔变窄;与HC组相比,H+Alda-1组的肺小动脉管壁厚度减轻,管腔狭窄程度有所改善;与N组相比,H组的ALDH...     

MAPK在葡萄糖及AngⅡ致血管平滑肌细胞增殖反应中的作用

目的: 研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径在葡萄糖(GS)和/或血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)介导大鼠动脉平滑肌细胞促增殖中的作用及其可能的调控机制. 方法: 实验以平滑肌细胞蛋白合成速率和蛋白含量为平滑肌细胞增殖的指标,以平滑肌细胞3H-亮氨酸掺入率表示细胞蛋白质合成速率,通过3H-胸苷(3H-TdR)反映平滑肌细胞DNA的代谢及细胞增殖情况;并通过给予PD098059及高浓度葡萄糖(HG)预处理,观察它们对细胞蛋白合成、DNA代谢及细胞增殖的影响. 结果: ① AngⅡ(10-7 mol/L)处理平滑肌细胞,3H-胸苷掺入率明显增高;HG (25×10-3 mol/L)处理平滑肌细胞,3H-胸苷掺入率明显增高;AngⅡ HG处理平滑肌细胞3H-胸苷掺入率显著增高. ② AngⅡ增加3H-胸苷掺入的作用可明显被PD098059所抑制;AngⅡ HG增高3H-胸苷掺入的作用也可被PD098059所抑制. ③ AngⅡ(10-7 mol/L)处理平滑肌细胞,3H-亮氨酸掺入率明显增高;HG (25×10-3 mol/L)处理平滑肌细胞,3H-亮氨酸掺入率增加;AngⅡ HG处理平滑肌细胞3H-亮氨酸掺入率显著增加. ④ AngⅡ增加3H-亮氨酸掺入的作用可部分被PD098059所抑制;AngⅡ HG增加3H-亮氨酸掺入的作用可显著被PD098059所抑制. 结论: 应用MAPK的特异性抑制剂PD098059抑制血管平滑肌细胞的增殖,证明MAPK激活在GS和/或AngⅡ导致平滑肌细胞增殖反应中有重要作用.     

清达颗粒对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨清达颗粒（QDG）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和迁移的影响。方法采用组织贴块法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,用表型标志蛋白α-SM-actin对VSMCs进行免疫荧光染色鉴定,取3～6代的VSMCs用于实验。将VSMCs分为对照组、AngⅡ组、AngⅡ+QDG 0.125 mg/m L组、AngⅡ+QDG 0.25 mg/m L组、AngⅡ+QDG 0.5 mg/m L组,共5组。以10-6 mol/L AngⅡ作为诱导剂,干预建立VSMCs增殖、迁移的模型。采用CCK-8法检测VSMCs的细胞活力,计算AngⅡ对VSMCs的增殖率以及QDG对AngⅡ诱导VSMCs增殖的抑制率;采用划痕实验检测VSMCs划痕损伤修复情况;transwell法检测VSMCs迁移情况。结果与对照组比较,AngⅡ能显著促进VSMCs的增殖和迁移;不同浓度QDG可在一定程度上抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖和迁移,且随着浓度的升高,抑制作用越明显。结论 QDG具有抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖与迁移的作用。     

血管紧张素Ⅱ对培养人血管平滑肌细胞钙化的影响

目的:观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对培养人血管平滑肌细胞钙化的影响,以探讨血管钙化发生的机制。方法:体外培养人动脉平滑肌细胞,用β甘油磷酸(βGP)诱导细胞钙化。培养细胞分4组:正常对照组;βGP组:βGP终浓度为10mmol·L-1;AngⅡ组:AngⅡ终浓度为10-7mol·L-1;βGP+AngⅡ组:同时加入相同浓度的βGP和AngⅡ,连续培养10d。采用Vonkossa染色、细胞层钙沉积定量和细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性测定判断钙化程度,用流式细胞仪测细胞周期分布和细胞凋亡率。结果:βGP组细胞Vonkossa染色见大量黑色颗粒状沉积物弥漫分布于细胞层,βGP+AngⅡ组细胞之间散在分布黑色沉着点;βGP+AngⅡ组细胞钙沉积显著低于βGP组[分别为(1.336±0.096)和(2.056±0.441)μmol·L-1,P<0.01];βGP+AngⅡ组细胞内ALP活性显著低于βGP组[分别为(277.57±87.81)和(691.27±128.06)IU·L-1,P<0.01]。正常对照组与AngⅡ组细胞比较,Vonkossa染色、细胞钙沉积量和ALP活性均无显著性差异。流式细胞仪结果显示,βGP+AngⅡ组细胞凋亡率显著低于βGP组,G0/G1期细胞比例降低,S期的比例升高(P<0.05)。结论:10-7mol·L-1的AngⅡ可抑制钙化血管平滑肌细胞的体外钙化进程。其作用可能与抑制ALP活性和促进细胞增殖、抑制凋亡有关。     

血管周围脂肪组织中AngⅡ介导VSMCs增殖的机制

  目的 探讨血管周围脂肪组织(PVAT)中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）介导血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的相关机制。方法 培养大鼠平滑肌细胞,MTT试验检测AngⅡ处理后细胞增殖率,检测AngⅡ处理后活性氧（ROS）、H2O2及HOCL水平; 预先给予NADPH抑制剂（apocynin）、H2O2水解酶（catalase）、ERK1/2抑制剂（PD98059）分别作用于AngⅡ处理的细胞,观察其对细胞总蛋白、细胞周期的影响,并检测H2O2及HOCL含量的变化。结果 AngⅡ（终浓度100 nmol/L）处理24 h后细胞与未予AngⅡ处理比较可明显诱导细胞增殖（P＜0.05）,且ROS随着升高;预先给予NADPH抑制剂apocynin、H2O2水解酶catalase、ERK1/2抑制剂PD98059分别作用于AngⅡ处理的细胞与单用AngⅡ处理的细胞比较可抑制细胞增殖（P＜0.05）;预先给予NADPH抑制剂（apocynin）、H2O2水解酶（catalase）与单用AngⅡ处理的细胞比较可降低H2O2及HOCL含量（P＜0.05）,但ERK1/2抑制剂（PD98059）与单用AngⅡ处理组比较无此效应（P>0.05）。结论 在PVAT中ROS在介导AngⅡ诱导VSMCs增殖的通路可能为Nox/H2O2/HOCL/ERK1/2。     

钙信号在尾加压素-Ⅱ促血管平滑肌增殖中的作用

目的:探讨钙信号在尾加压素-Ⅱ(urotensin-Ⅱ,UⅡ)促血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell, VSMC)增殖中的作用.方法:在离体培养的VSMC上,用流式细胞仪和3H-TdR参入的方法探讨UⅡ的促增殖效应;在离体孵育的大鼠主动脉平滑肌组织上观察UⅡ对平滑肌45Ca2+摄入的影响;应用激光共聚焦显微镜检测UⅡ作用后细胞内游离钙的改变.结果:UⅡ(10-9～10-7molL-1)浓度依赖地刺激VSMC的DNA合成,并诱导细胞由静止向增殖状态转化.与对照组相比10-8 mol*L-1 UⅡ使细胞的增殖指数[(G2-M+S)%]增加192%(P<0.01).钙通道阻断剂尼卡地平和Ca2+螯合剂EDTA均可阻断UⅡ对VSMC的促增殖效应,其中UⅡ(10-8 mol*L-1)与尼卡地平(10-5 mol*L-1)共同孵育的VSMC DNA合成量仅为单纯UⅡ(10-8 mol*L-1)组的59.0%. UⅡ(10-10～10-8 mol*L-1)可浓度依赖地使胸主动脉对45Ca2+的摄入增加,尼卡地平(10-5 mol*L-1)也可显著对抗UⅡ(10-8 mol*L-1)对45Ca2+摄入的诱导作用(P值均小于0.01).用激光共聚焦显微镜观察发现UⅡ作用后细胞内Ca2+浓度迅速升高,持续约3 min,形成钙波.结论: UⅡ可通过促进细胞Ca2+摄取和增加细胞内Ca2+浓度,发挥其促进VSMC增殖的作用.     

骨桥蛋白通过PI3K/AKT/mTOR信号通路调控低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞自噬和增殖的机制探讨

背景 骨桥蛋白(osteopontin,OPN)可参与低氧引起的血管重塑,使肺动脉压力升高。但OPN调控低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)自噬在低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension,HPH)形成中的作用机制尚不明确。目的 探讨低氧条件下OPN对PASMCs增殖及通过PI3K/AKT/mTOR通路对PASMCs自噬的调控作用。方法 原代分离PASMCs,采用免疫细胞化学法进行平滑肌细胞鉴定。将细胞分为常氧对照组(Normoxia)、低氧对照组(Hypoxia)、低氧+OPN干扰空病毒组(H+OPN EV)、低氧+OPN干扰慢病毒组(H+OPN shRNA)、低氧+PI3K抑制剂LY294002组(H+LY)。各组分别用EdU阳性标记率法检测细胞增殖能力;Western blot法检测各组PASMCs中的OPN、PI3K、AKT、mTOR及自噬相关蛋白Beclin1、LC3B的表达;透射电镜、免疫荧光法观察各组PASMCs自噬情况。结果 与Normoxia组相比,...     

反义AT1R重组腺病毒对人肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的:研究腺病毒介导反义AT1R cDNA转染对人肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响。方法:构建重组反义人AT1R腺病毒(AdCMVahAT1)和表达β-半乳糖苷酶的对照载体AdCMVLacZ,将培养的PASMCs分为DMEM组、ATⅡ组、AdCMVLacZ+ATⅡ组和AdCMVahAT1+ATⅡ组,分别给予相应的干预因素,用RT-PCR和免疫组化检测AT1R的表达,用流式细胞仪检测各组PASMCs的增殖指数。结果:转染病毒后48 h AT1R蛋白表达在AdCMVahAT1组显著低于AdCMVLacZ组和DMEM组。给予ATⅡ刺激48 h,ATⅡ组PASMCs的增殖指数(59.69±3.46)高于DMEM组(50.25±1.34,P<0.01),转染AdCMVahAT1后再用ATⅡ刺激48 h的AdCMVahAT1+ATⅡ组PASMCs的增殖指数(24.67±3.19)则显著低于3个对照组(P<0.01),而AdCMVLacZ+ATⅡ组(59.53±3.26)和ATⅡ组比较无显著性差异。结论:反义AT1R通过抑制AT1R的表达而抑制PASMCs增殖。     

乌司他丁通过上调PPAR-γ抑制低氧诱导的肺血管平滑肌细胞表型转换

目的探讨乌司他丁对低氧诱导的肺血管平滑肌细胞（PASMCs）表型转化的影响及其分子机制。方法体外培养SD大鼠 PASMCs,随机分组4组：正常组（N组）,常氧+乌司他丁组（NU组）,低氧组（H组）,低氧+乌司他丁组（HU组）,各组培养24 h后 采用免疫荧光检测SM-α-actin和Calponin表达水平,应用CCK-8法、3H-TdR和Transwell小室检测各组PASMCs增殖和迁移。 并分别利用Western blotting和荧光素酶报告质粒检测PPAR-γ蛋白表达和转录活性。采用PPAR-γ抑制剂GW9662进行预处理 干预乌司他丁对低氧诱导的PASMCs表型转化的影响,分析干预后PASMCs增殖和迁移改变。结果低氧条件下,乌司他丁能 促进PASMCs 中SM-α-actin 和Calponin 的表达（P<0.05）,抑制PASMCs 的增殖和迁移能力（P<0.05）,同时乌司他丁上调 PPAR-γ的表达（P<0.05）。采用GW9662预处理后,乌司他丁对低氧诱导的PASMCs表型转换的抑制作用显著下降（P<0.05）。 结论乌司他丁通过上调PPAR-γ抑制低氧诱导的PASMCs表型转换。     

血管紧张素转换酶2基因转染抑制平滑肌细胞增殖

目的 通过血管紧张素转换酶2(ACE2)基因转染大鼠血管平滑肌细胞(VSMC),观察其对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)促VSMC增殖的影响.方法 将大鼠VSMC分为正常细胞组、AngⅡ组、空载体+AngⅡ组及pm-ACE2+AngⅡ组,通过CCK8细胞计数试剂盒和流式细胞仪检测各组细胞周期,观察ACE2基因转染对AngⅡ促VSMC增殖效应的影响.结果 与正常细胞组相比,AngⅡ组细胞计数明显增高,pm-ACE2+AngⅡ组与AngⅡ组相比显著降低(0.535±0.004比0.866±0.026,P＜0.05);同时,AngⅡ组在G0/G1期细胞的百分率明显降低(58.80%±2.00%,P＜0.05),S期的则显著增高(35.90%±1.00%,P＜0.05),与AngⅡ组相比,pmACE2+AngⅡ组在G0/G1期的百分率明显升高(63.90%±1.40%,P＜0.05),S期则显著降低(27.80%±0.46%,P＜0.05).结论 ACE2基因转染能抑制AngⅡ的促VSMC异常增殖效应.

Abstract：

Objective To investigate the effect of Ang Ⅱ on the proliferation of vascular smooth muscle cell (VSMC) in rats after the transfection of ACE2 gene. Methods pm-ACE2 was transfected into the cultured VSMC by Lipofectamine 2000. The normal cell group, Ang Ⅱ group and pcDNA3. 1/Hygro( + )transfected + Ang Ⅱ group were taken as controls respectively. After the transfection of ACE2 gene, the cell proliferative effect of Ang Ⅱ on VSMC was investigated by cell counting kit-8 (CCK8) and cell cycle detection by fluorescence activated cell sorter (FACS). Results The (optical density) OD value of Ang Ⅱgroup was obviously higher than that of other groups. And it was obviously lower in the pm-ACE2 + Ang Ⅱgroup than the Ang Ⅱ group (0. 535 ± 0. 004 vs 0.866 ± 0.026, P ＜ 0. 05 ). Compared with other groups, the G0/G1 stage percentage of VSMC was obviously lower in the Ang Ⅱ group(58. 80% ±2. 00%, P ＜0. 05)while the percentage of S stage was obviously higher ( 35.90% ± 1.00%, P ＜ 0.05 ). Compared with the Ang Ⅱ group , the G0/G1 stage percentage of VSMC was obviously higher( 63. 90% ± 1.40%, P ＜ 0. 05 ) in the pm-ACE2 + Ang Ⅱ group while the percentage of S stage was obviously lower( 27.80% ± 0. 46%, P ＜0. 05 ). Conclusion The over-expression of ACE2 gene can inhibit the proliferation of Ang Ⅱ-induced VSMC.     

缬沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导的牛主动脉血管平滑肌增殖及迁移的影响

目的 :观察血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )及缬沙坦对培养的牛主动脉血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖、迁移的作用。方法 :取新生小牛胸主动脉采用贴块法培养平滑肌细胞 ,分成对照组、AngⅡ组、缬沙坦组、缬沙坦加AngⅡ组 ,干预后分别测定3 H 胸腺嘧啶 (3 H TdR)掺入量和计数迁移的细胞。结果 :AngⅡ (1μmol/L)作用 2 4h能使VSMC的3 H TdR的掺入量、细胞迁移数较对照组增多 ;与AngⅡ组相比 ,AngⅡ加用缬沙坦 (10 0 μmol/L)使3 H TdR的掺入量与细胞迁移数明显减少 ;与对照组相比 ,单用缬沙坦使3 H TdR的掺入量亦明显减少。结论 :AngⅡ对VSMC有促增殖、迁移作用 ,能被缬沙坦拮抗 ,而且缬沙坦在没有AngⅡ作用时亦能单独发挥抗增殖作用     

脂联素对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞分化和增殖的影响

目的：观察脂联素（APN）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导人颈动脉平滑肌细胞α‐SMA表达及增殖的影响。方法：体外培养人颈动脉平滑肌细胞,免疫蛋白印迹法和实时荧光定量PCR检测A PN 对AngⅡ刺激人颈动脉平滑肌细胞后α‐SMA蛋白和mRNA表达;EdU 标记法检测APN 对AngⅡ诱导人颈动脉平滑肌细胞增殖活性的影响。结果：（1）1、10μM 的A n gⅡ可诱导人颈动脉平滑肌细胞增殖;（2）1、10μM 的AngⅡ可诱导人颈动脉平滑肌细胞α‐SMA蛋白和mRNA的表达;（3）5μg／mL的APN可抑制AngⅡ诱导人颈动脉平滑肌细胞α‐SMA表达和增殖。结论：APN可抑制AngⅡ诱导人颈动脉平滑肌细胞的分化和增殖。     

miR-155抑制AngⅡ诱导的主动脉血管平滑肌细胞周期转换

目的： 观察转染miR-155后对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）诱导小鼠主动脉血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC）细胞周期转换的影响并探讨其机制。方法：原代培养小鼠VSMC,用1×10-6 mol/L AngⅡ作用于VSMC 48 h后,采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,q-RT-PCR）检测空白对照组及AngⅡ组miR-155表达水平。用q-RT-PCR及Western blot检测分别转染miR-155及阴性对照后各组AngⅡ 1型受体（angiotensin Ⅱ type 1 receptor,AT1R）的mRNA及蛋白表达水平;用Western blot检测转染miR-155 mimic及阴性对照后对AT1R下游细胞外信号调节激酶1/2（extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2）、核糖体蛋白S6激酶（P70S6K1）通路的影响。分别检测转染miR-155 mimic及使用血管紧张素受体阻滞剂缬沙坦、mTOR通路抑制剂雷帕霉素、ERK1/2抑制剂U0126对细胞周期素D1（Cyclin D1）的表达影响,并使用流式细胞分析检测细胞周期变化,探讨miR-155对细胞周期的影响及其机制。结果：AngⅡ可显著降低miR-155的表达。miR-155可从mRNA及蛋白水平抑制AT1R表达,并抑制AngⅡ促AT1R表达的作用。转染miR-155 mimic后可显著抑制AngⅡ促进ERK1/2、P70S6K1通路激活的作用。转染miR-155 mimic、使用缬沙坦、雷帕霉素、U0126抑制AngⅡ促Cyclin D1表达的作用,并使细胞周期阻滞在G0/G1期。结论：miR-155可通过抑制AT1R间接抑制AngⅡ促进ERK1/2、P70S6K1通路激活及Cyclin D1表达的作用,抑制AngⅡ促进细胞周期转换的作用。     

血管紧张素Ⅱ对大鼠血管平滑肌细胞T型钙通道及其信号转导通路的影响

目的 研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管平滑肌细胞Cav3.1表达的影响及其作用机制.方法 酶消化法原代培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,应用第5代传代细胞,实验随机分为7组:对照组(不加任何药物)、AngⅡ组[加入AngⅡ(0.1μmol/L)培养24 h]、AngⅡ+氯沙坦钾组[加入氯沙坦钾(1μmol/L)培养1h,再加入AngⅡ(0.1 μmol/L)共同培养24 h]、AngⅡ+PD98059组[加入PD98059(10 μmol/L)预刺激1h,再加入AngⅡ(0.1 μmol/L)共同培养24 h]、PD98059组[加入PD98059(10 μmol/L)培养1h]、AngⅡ+氯沙坦钾+PD98059组[先加入氯沙坦钾(1μmol/L),PD98059(10 μmol/L)培养1h,再加入AngⅡ(0.1 μmol/L)共同培养24 h]、氯沙坦钾组[加入氯沙坦钾(1μmol/L)培养4h].RT-PCR、Western blot方法测定各组T型钙通道的表达.结果 PCR结果显示:与对照组(1.000±0.315)比较,AngⅡ组Cav3.1表达量(17.930±0.954)明显增加(P＜0.01);PD98059组、氯沙坦钾组Cav3.1表达量为0.928±0.262、0.978±0.292,与对照组比较差异无统计学意义(P＞ 0.05);AngⅡ+氯沙坦钾组、AngⅡ+PD98059组、AngⅡ+氯沙坦钾+PD98059组的Cav3.1表达量分别为0.125±0.007、0.066±0.015、0.109±0.018,明显低于AngⅡ组(P＜0.01).Western blot结果显示:与对照组比较,AngⅡ+氯沙坦钾组、AngⅡ+PD98059组及AngⅡ+氯沙坦钾+PD98059组Cav3.1蛋白表达明显降低(P＜0.05);而PD98059组及氯沙坦钾组Cav3.1蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 AngⅡ通过Ras/PKCξ/MEK/ERK 1/2路径增加血管平滑肌细胞Cav3.1的表达.     

心脉隆对肺动脉平滑肌细胞缺氧损伤的保护作用

目的:研究心脉隆(XML)注射液对人源性肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)缺氧损伤的保护作用,探讨XML降低肺动脉高压(PAH)的可能机制?方法:利用Na2S2O4建立缺氧模拟肺动脉高压细胞缺氧模型,流式细胞术观察缺氧刺激下细胞凋亡率,实时定量PCR检测凋亡相关基因表达,采用激光共聚焦法检测细胞膜电位?胞浆钙离子的表达变化?结果:在缺氧情况下,与对照组比较,PASMCs 增殖显著,Bcl-2基因表达增高,Bax表达下调,具有显著性差异(P < 0.05)?而XML能显著抑制缺氧过程中Bcl-2基因表达上调及Bax基因表达的下调,差异具有统计学意义(P < 0.05)?此外,XML能稳定细胞膜电位和降低胞浆钙浓度,抑制缺氧诱导的PASMCs增殖?结论:XML可减轻因缺氧引发的PASMCs凋亡减少而导致的平滑肌增殖重塑,为XML用于临床肺动脉高压的治疗提供实验依据?