放线菌素D引起HEPG2细胞的核仁蛋白移位

目的：观察放线菌素D作用下HEPG2细胞中与增殖相关的核仁蛋白B23（nucleophosmin or NPM，numatrin，NO38）定位和表达水平的改变，并探讨其可能机制和意义。方法：应用低浓度的放线菌素D处理HEPG2细胞，采用流式细胞仪技术、免疫印迹、免疫荧光、双向电泳及免疫共沉淀等实验方法检测HEPG2生长周期、B23蛋白表达水平及其定位、B23的等电点及磷酸化状态变化。结果：放线菌素D处理后，HEPG2细胞出现生长抑制，细胞周期阻滞于S／G2期；B23蛋白表达量没有变化，但定位改变，即从核仁移位到核浆，撤药后，B23又从核浆回到核仁上；B23在加药前后未检测到等电点和磷酸化状态改变。结论：低浓度放线菌素D抑制HEPG2细胞生长、阻滞细胞在S／G2期并引起可逆性的B23蛋白移位，而B23蛋白的表达量及磷酸化水平没有改变，这些实验结果对肿瘤药物治疗及分子肿瘤学研究可提供参考的研究模型。     

放线菌素D处理V79 细胞的条件培养液对旁观者细胞p53 mRNA和蛋白表达 及细胞周期的影响

目的： 观察放线菌素D (actinomycin D,ACTD)处理V79靶细胞获得的条件培养液 (conditioned medium,CM)对V79旁观者细胞p53 mRNA和蛋白表达及细胞周期的影响,以研究ACTD诱导旁观者效应发生的可能机制。方法：4.0 mg/L ACTD处理V79靶细胞1 h,PBS洗3次,加入新鲜培养液后开始计时,分别在第4、8、12和24 h获取靶细胞不同时段的CM。用不同时段CM培养正常V79细胞24 h后,分别采用RT-PCR检测旁观者细胞中p53的mRNA水平;免疫组化法检测p53蛋白的表达;流式细胞术测定旁观者细胞的细胞周期分布。结果：与对照组比较,p53 mRNA水平在4、8和24 h CM处理组均增加 (P<0.01),在4~12 h CM时段,p53 mRNA水平随着时段的延后呈逐渐降低趋势,12 h组降至最低,与阴性对照的水平接近 (P>0.05)。各CM处理组p53蛋白平均灰度值和积分光密度,除12 h CM组外均较对照组显著增加 (P<0.05)。随着时段的延后(4~12 h),p53蛋白表达逐渐减少,12 h组降至最低,与阴性对照间的差异无统计学意义 (P>0.05),p53蛋白表达与p53 mRNA表达结果一致。不同时段CM处理组旁观者细胞G0/G1期比阴性对照组增多 (P<0.05),4 h CM组增加最明显;各CM处理组S期细胞均较阴性对照组减少 (P<0.01),但组间差异无统计学意义 (P>0.05);而G2/M期细胞在4 h CM 组下降明显,与阴性对照间的差异有统计学意义 (P<0.01);8~12 h逐渐增加,12 h组接近对照水平(P>0.05);24 h又下降,与阴性对照间的差异有统计学意义(P<0.01)。结论：ACTD 诱导旁观者效应可能是通过靶细胞的CM影响旁观者细胞p53 mRNA和蛋白的表达,并影响细胞周期的进展而引起的,以4 h CM诱导的效应最强。     

放线菌素D对仓鼠成纤维细胞V79靶细胞和旁观者细胞活力和染色体畸变的影响

目的:观察放线菌素D(actinomycin D,ACTD)对中国仓鼠成纤维细胞V79靶细胞和旁观者细胞的细胞活力和染色体畸变的影响,以确定ACTD能否诱导旁观者效应的发生。方法:用不同剂量ACTD(0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0和8.0 mg/L)处理V79靶细胞1 h,并选择其中4 mg/L ACTD作用1 h开始计时,分别在第4、8、12和24 h时取靶细胞去细胞培养液(conditionedmedium,CM),培养正常细胞24 h后,进行旁观者效应的观察。用MTT法测定靶细胞和旁观者细胞活力;并对靶细胞和旁观者细胞进行染色体畸变分析。结果:随着ACTD剂量的增加,靶细胞的活力下降,存在明显的剂量一效应关系(P0.05)。4 mg/L ACTD作用1h时细胞活力接近50%且稳定。旁观者细胞活力在用4～12 h CM培养时逐渐增加(P0.05),用24 h CM时又下降(P0.05),4 h CM诱导旁观者细胞损伤的作用最强。靶细胞的染色体畸变率随ACTD剂量的增加而增高,具有剂量-效应关系(P0.05)。旁观者细胞染色体畸变以4 h CM诱导的作用最强,随着加入CM时段的延后,损伤逐渐减轻(P0.05),在24 h CM又趋严重(P0.05);旁观者细胞与靶细胞染色体畸变类型相似,以断裂为主,伴有少量环形染色体、碎片和双着丝粒染色体。结论:ACTD可以诱导旁观者效应的发生,染色体畸变在靶细胞和旁观者细胞均以断裂为主。     

放线菌素D、甲氨蝶呤或5-氟尿嘧啶单药初次治疗低危型妊娠滋养细胞肿瘤效果及安全性

目的:评估放线菌素D（Act-D）、甲氨蝶呤（MTX）或5-氟尿嘧啶（5-Fu）单药初次化疗低危型妊娠滋养细胞肿瘤（GTN）的效果及安全性。方法:回顾性分析2012年1月至2020年1月山西省大同市第一人民医院109例接受单药初次化疗的低危型GTN患者资料,其中Act-D组38例,MTX组37例,5-Fu组34例。通过...     

视黄酸依赖反义cyclin D1对HL-60细胞细胞周期素依赖性激酶的影响

目的探讨视黄酸(retinoic acid,RA)及其诱导的反义(anti-sense,AS)cyclin D1对HL-60细胞的细胞周期素激酶CDK4的影响.方法通过构建含有视黄酸反应元件(retinoic acid response element, RARE)的反义cyclin D1 RNA表达载体pCI-neo/RARE3-TK/Ascyclin D1,使反义cyclin D1的表达可受视黄酸诱导调控.以脂质体转染HL-60白血病细胞后,运用MTT比色法检测细胞增殖功能、NBT还原实验观测细胞分化状况,RT-PCR以及western-blot等方法观测视黄酸处理后CDK4的mRNA和蛋白表达水平的改变.结果 RA处理后,细胞生长显著减慢,分化能力明显增强,CDK4 mRNA和蛋白表达水平均有所降低,其中,以反义cyclin D1转染细胞经RA处理后变化更为显著.结论 RA及其诱导的反义cyclin D1对HL-60细胞的抑制增殖与诱导分化效应可能与CDK4表达下调有关.     

TNF-α诱导Molt-4细胞Bcl-2蛋白磷酸化的周期特异性

目的以肿瘤坏死因子-α诱导的Molt-4细胞凋亡为模式,观察Bcl-2蛋白磷酸化有无细胞周期特异性,探讨膜受体途径介导的细胞凋亡的周期特异性发生机制。方法TNF-α诱导Molt-4细胞凋亡,API法检测细胞凋亡的细胞周期特异性。流式细胞仪分选各个细胞周期时相的细胞群,蛋白免疫印迹检测Bcl-2蛋白的细胞周期特异性表达。结果TNF-α诱导Molt-4细胞凋亡主要发生在细胞周期的G1期。Bcl-2蛋白在TNF-α诱导后表达增加,G1期Molt-4细胞中bcl-2部分磷酸化,在时间上与凋亡发生的时间一致。结论加入TNF-α培养的Molt-4细胞Bcl-2蛋白磷酸化失活与细胞凋亡的细胞周期时相一致,具有细胞周期特异性。     

cyclin D2和bcl-2在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及其临床意义

目的:探讨cyclin D2和bcl-2在弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）中的表达及其意义。方法:收集2015年1月至2020年3月在保定市第一中心医院手术切除的87例DLBCL组织及23例淋巴组织反应性增生（RLH）患者组织,采用免疫组织化学法检测DLBCL和RLH组织中cyclin D2和bcl-2蛋白的表达情况,分析二者表达间的相互关系及与DLBCL患者临床病理特征的关系。结果:DLBCL和RLH中cyclin D2蛋白阳性率分别为33.3%（29/87）、2.0%（1/23）,bcl-2蛋白阳性率分别为60.9%（54/87）、7.0%（3/23）;DLBCL中cyclin D2、bcl-2蛋白阳性率均高于RLH,差异均有统计学意义（χ 2=7.566, P=0.006;χ 2=17.512, P<0.01）。cyclin D2和bcl-2蛋白表达与DLBCL患者Ann Arbor分期、免疫分型有关（均 P<0.05）,而与年龄、性别、肿瘤部位、组织类型均无关（均 P>0.05）。cyclin D2和bcl-2蛋白在DLBCL中的表达呈正相关（ r=1.000, P<0.01）。 结论:cyclin D2和bcl-2可能与DLBCL的发生、发展相关,两者可能有一定的协同作用。     

人脑胶质瘤组织中cyclin D1和cyclin E表达的研究

目的 :研究人脑胶质瘤中细胞周期素 (cyclin)D1和cyclinE的表达与肿瘤病理等级的关系。方法 :采用免疫组织化学法检测 5 2例人脑胶质瘤和 8例正常脑组织标本中cyclinD1和cyclinE的表达。结果 :人脑胶质瘤组中有 2 9例cyclinD1的表达。随着胶质瘤病理分级增高 ,高、低恶性度胶质瘤的阳性率和平均标记指数均显著升高 ,两者差异有统计学意义 ,P <0 0 5。cyclinD1与cyclinE的平均标记指数之间呈明显正相关 ,Pearson相关系数r =0 64 4,P <0 0 1。结论 :cyclinD1与cyclinE在胶质瘤中被异常表达 ,是肿瘤发生和恶性转化的重要促进因子。     

以任何方法剪接:Mdm2位于肿瘤监视的十字路口

鼠双微基因2(Mdm2)是p53最重要的调节基因,同时也是对各种类型细胞应激(包DNA损害和致癌损伤)的主要应答者.尽管已有文章描述了Mdm2基因的替代产物的异常拼接产物,但是关于该变异体的起源、功能和影响,现在尚不清楚.最近发现了一种新的mdm2基因的剪接形式.在该剪接体中,108bp的基因内序列合并到成熟的Mdm2 mRNA中.编码框内终止密码子的额外序列可使Mdm2蛋白明显缩短.最有趣的现象是,阿霉素和放线菌素D能诱导产生一种交替剪接形式,即成熟的Mdm2 108,而其他的DNA损伤剂没有这种诱导作用.Mdm2 108基因可诱导p53的大量快速聚集,证明该交替剪接事件的作用是形成p53的肿瘤监视途径,同时抑制细胞的增殖(该细胞为被有效的遗传毒性化合物所破坏的细胞).     

Increased uptake of actinomycin D in Ehrlich ascites tumour cells induced by daunorubicin

Summary The influence of anthracyclines on the uptake of actinomycin D in Ehrlich ascites tumour cells was studied in vitro. The anthracycline daunorubicin significantly increased the [³H]actinomycin D uptake both in whole tumour cells and in isolated nuclei of tumour cells. On the other hand, actinomycin D increased daunorubicin uptake only to a very small degree.Experiments with other intercalating drugs did not influence [³H]actinomycin D binding, suggesting a specific interaction between actinomycin D and the anthracyclines. The mechanisms behind this interference is discussed.The increased cellular uptake of actinomycin D in the presence of daunorubicin may have implications for antineoplastic combination chemotherapy.     

Studies of actinomycin D induced B23-translocation in P388D1 cells implanted in DBA/2 mice.

Nucleophosmin/B23 is a nucleolar phosphoprotein which redistributes from nucleoli to nucleoplasm (B23-translocation) when cells are exposed to certain anticancer drugs, particularly intercalators. The B23-translocation assay has been demonstrated in cell culture to correlate with drug effects and to detect drug-resistant cells. We now report the effect of actinomycin D on B23-translocation in P388D1 cells implanted in DBA/2 mice. B23-translocation was observed in cells after actinomycin D treatment in a dosage- and time-dependent manner. Translocation could be observed within 30 min after drug treatment. Complete B23-translocation with at least 1-day duration was achieved by a single injection of 0.25 mg/kg. Reduced dosages produced partial B23-translocation with shorter durations. These results indicate that B23-translocation may be useful in monitoring drug effects in animals.     

Modulation of the reversibility of actinomycin D cytotoxicity in HeLa cells by verapamil

Actinomycin D treatment (0.001–0.005 μg/ml; 0.5–24 h) induced a dose and time response shifting of nucleolar to nuclear fluorescence. In the presence of verapamil, cells were more responsive to actinomycin D. Translocation of protein B23 occurred with lower doses of actinomycin D and in shorter incubation times in the presence of verapamil. Short exposure (0.5 h) of HeLa cells to actinomycin D (0.05–0.25 μg/ml) induced ‘reversible’ translocation of protein B23 as well as ‘reversible’ inhibition of cell growth and RNA synthesis. Verapamil (5 μM) included in the cell culture after removal of actinomycin D inhibited the recoveries of cell growth, RNA synthesis as well as the corresponding relocalization of protein B23 from the nucleoplasm to nucleoli. These results indicate that verapamil can potentiate the antiproliferating activity of actinomycin D by inhibiting reversibility of its cytotoxicity and suggest clinical application.