辽宁省艾滋病治疗患者耐药基因特征及分子流行病学分析

目的 了解辽宁省自2004年以来抗病毒治疗的艾滋病患者中基因耐药突变和HIV-1耐药株的流行率.方法 选取2004-2008年全省接受一线抗病毒治疗艾滋病患者104个样本,病毒载量检测,高于最低检测限有12个样本,经HIV蛋白酶(PR)全长和部分反转录酶(RT)基因区RT-PCR扩增、测序,运用Contig Express 1对序列拼接、编辑和校正,上传Stanford HIV Drug Resistance Database(http://hivdb.stanford.edu),在线耐药序列分析,寻找耐药位点,评价目前使用的一线药物的治疗效果和耐药株流行趋势.结果 104份治疗患者的样本中,92份病毒载量检测已经小于最低检测限,治疗有效率88.4%(92/104).余下的12份样本经RT-PCR、巢式PCR和5个序列的正反方向测序,8份样本得到PCR有效扩增和测序(均获得5条有效测序序列).RT区序列检测,8份样本中有5份存在核苷类反转录酶抑制剂(NRTIs)相关突变,耐药突变率为4.81%(5/104),M184V出现较早(治疗8个月);6bq存在非核苷类反转录酶抑制剂(NNRTIs)相关突变,耐药突变率为5.77%(6/104),以K103N、Y181C出现频次较高,使NNTRIs存在高度的多重交叉耐药.未发现蛋白酶抑制剂主要耐药相关突变,总耐药突变率为6.73%(7/104).结论 辽宁省艾滋病治疗患者中耐药突变仍处于低流行状态,与国内其他地区原发耐药流行率接近.目前使用的一线反转录酶抑制剂药物仍有效.但同时怎样解决NNRTIs突变导致的多重耐药、调整药物配伍、提高用药依从性、跟踪分析病例个案发展是今后工作努力的方向.     

2015年乐山市HIV-1抗体阳性病例抗病毒治疗效果及耐药分析

目的分析乐山市接受抗病毒治疗的HIV-1抗体阳性病例治疗效果及毒株耐药、突变情况。方法选取乐山市2015年接受抗病毒治疗时间>6个月的HIV-1抗体阳性病例共计620例,采集其抗凝全血进行病毒载量检测,对病毒载量>1 000copy/mL的样本采用自建基因型耐药检测进行耐药检测及分析。结果 620例患者中,419例病毒载量<200copy/mL,抗病毒治疗有效率为67.58%;175例病毒载量>1 000copy/mL,均值1.85×105copy/mL,病毒抑制失败率28.22%;其中93例样本核酸扩增阳性,主要为CRF07-BC亚型(占68.82%)和CRF01-AE亚型(占19.35%)。总耐药率6.13%(33/538),其中对核苷类反转录酶抑制剂(NRTIs)、非核苷类反转录酶抑制剂(NNRTIs)和蛋白酶抑制剂(PIs)的耐药率分别为57.58%、84.85%和18.18%;耐药毒株对NRTI主要突变位点为M184V、K65R,对NNRTI主要突变位点为K103N、K101E、Y181C、G190A,对PI未发现主要位点突变,次要突变位点主要是Q58E、A71V。结论乐山地区部分HIV-1抗体阳性患者抗病毒治疗效果较差。与2014年相比,总耐药率及对NRTIs、NNRTIs耐药率均有所下降,但对PI耐药率上升。应加强对接受HAART的HIV-1抗体阳性病例的病毒载量及耐药检测,及时评估治疗效果及耐药情况。     

深圳口岸国际旅行人员中HIV-1感染者耐药基因型检测分析

目的对深圳口岸1996—2008年已确诊的68例人类免疫缺陷病毒(HIV-1)感染者进行耐药性突变分析,以了解深圳口岸国际旅行者HIV-1耐药性毒株的流行情况。方法应用巢式RT-PCR扩增HIV-1聚合酶基因,对所获得的PCR产物直接测序,再将所获得的序列与国际耐药数据库比对,辨别耐药性突变位点。结果在68例HIV-1感染者中,经巢式RT-PCR扩增并获得聚合酶基因序列68份。耐药分析结果表明,本研究人群未检测到蛋白酶抑制剂(PI)原发耐药突变;11例感染者发生反转录酶抑制剂(RTI)耐药基因突变,基因突变率为16.17%;其中核苷类和非核苷类反转录酶抑制剂的耐药突变率分别为7.35%(5/68)和8.82%(6/68)。结论本研究分析了深圳口岸国际旅行者HIV-1感染者耐药突变的流行情况,这对于我国的艾滋病预防和控制工作具有重要指导意义。     

浙江省HIV/AIDS未治疗人群耐药基因特征研究

目的：横断面了解浙江省未治疗人群耐药基因变异情况,补充耐药监测本底数据。方法：选取2004-2006年期间在各市县接受流行病学调查的104例未治疗HIV/AIDS感染者,对病毒载量高于最低检测限的99个样本进行HIV蛋白酶（PR）全长和部分逆转录酶（RT）基因区进行RT-PCR扩增测序。使用Stanford HIV Drug Resistance Database（ht-tp：//hivdb.stanford.edu）的在线耐药序列分析软件HIV DB进行序列分析,寻找耐药相关突变位点,并做出样本对各药物敏感性的结论。结果：扩增得到74份PI区序列,1份样本存在蛋白酶抑制剂（PIs）主要相关突变,耐药突变率为1.35%;得到83份RT区序列,4份样本存在逆转录酶抑制剂（RTIs）相关突变,耐药突变率为4.8%。总耐药突变率为6.02%（5/83）。结论：浙江省未治疗HIV感染者中耐药相关突变处于低流行状态。但具体感染者体内存在的PR和RT区主要耐药突变位点,会导致对抗病毒治疗药物不同程度的耐药,应该争取条件对治疗前病人进行基因型耐药检测。     

浙江省2004-2007年HIV-1亚型CRF01_AE流行毒株的基因型耐药分析

目的 了解浙江省HIV-1主要流行毒株CRF01_AE在治疗人群和未治疗人群中的基因型耐药变异情况.方法 选取2004-2007年间收集的HIV感染者样本,对HIV蛋白酶(PR)全长和部分反转录酶(RT)基因区进行RT-PCR扩增测序.分析56个感染CRF01_AE重组亚型样本的序列,其中未治疗组43例,已治疗组13例.使用Stanford HIV Drug Resistance Database(http://hivdb.stanford.edu)的在线耐药序列分析软件HIV DB进行序列分析,寻找耐药相关突变位点.结果 未治疗组CD4+T淋巴细胞中位数为229个/mm3,病毒载量log10.中位数为3.41,存在基因型耐药突变率的发生(5/43,11.6%),检出包括PR区第10、46、71位和RT区的第103、118位氨基酸的耐药相关突变;治疗组CD4+T淋巴细胞中位数为186个/mm3,病毒载量log10中位数为3.91,13例中有8例发生了基因型耐药变异(61.5%).检出29个基因型耐药突变.耐药率较高且多表现为交叉耐药.结论 浙江省未治疗的HIV感染者存在一定程度的基因型耐药突变;已开始治疗的HIV感染者基因型耐药突变发生率较高,而且交叉耐药现象广泛存在.     

河南省人类免疫缺陷病毒-1型耐药毒株的变异情况研究

目的 了解河南省经过抗病毒治疗5年后人类免疫缺陷病毒-1型(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)耐药毒株的变异情况.方法 通过横断面调查,参照WHO提供的标准,采集2007年11月到2008年8月间新确认的2～25岁未经抗病毒治疗的艾滋病感染者血清69例,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增HIV-1 pol区基因,进行基因型耐药性分析.结果 69份调查样本中,扩增并测序成功50份,在逆转录酶(RT)区检测到7个耐药突变位点,蛋白酶(PR)区检测出3个次要耐药突变位点,但仅在逆转录酶区发现1份样本(K103N突变)出现针对非核苷类抑制剂(NNRTIs)高度耐药,蛋白酶区未检测到对蛋白酶抑制剂的高度耐药.根据HIV耐药警戒线监测抽样表河南省HIV-1耐药毒株的流行率<5%.结论 河南省HIV-1耐药株的传播尚处于低度流行水平.但随着抗病毒治疗时间的延长耐药株出现的比例增高,需要密切关注耐药株的传播问题并继续进行此类耐药性监测工作.     

2011年宁波艾滋病感染者抗病毒治疗效果及耐药分析

目的:研究2011年宁波艾滋病毒(HIV)感染者高效抗逆转录病毒治疗(HAART)效果及耐药变异。方法:收集272例HAART的HIV-1感染者抗凝血,检测CD4+T淋巴细胞和HIV-1病毒载量,病毒载量>1000 copies/ml的样品扩增HIV-1的pol区,测序结果使用斯坦福大学HIV耐药数据库分析。结果:CD4+T淋巴细胞绝对值为311±160个/μl。19份样品病毒载量>1000 copies/ml。10条序列出现耐药突变,总耐药率为3.73%(10/268)。8条产生针对核苷酸类反转录酶抑制剂(NRTI)和非核苷酸类反转录酶抑制剂(NNRTI)的突变。2条只产生了针对NNRTI的突变。结论:宁波HIV抗病毒治疗人群耐药毒株流行处于较低水平,该人群对目前使用的抗病毒药物敏感。但耐药突变呈多样化趋势,应加强耐药监测的研究以减少耐药突变株的产生与传播。     

深圳地区HIV-1感染者的本底耐药水平调查初探

[目的]建立一套完善,可靠,适合深圳人群的HIV-1耐药性基因型检测方法,调查分析深圳地区未接受抗病毒治疗的HIV感染者/AIDS患者的病毒株耐药突变及其本底流行情况. [方法]从未接受抗病毒治疗的HIV-1感染者血浆中提取病毒RNA,采用RT-PCR扩增目的基因片断,并对扩增片断进行序列测定和分析. [结果]通过HIV-1耐药性基因型检测法能够获得1300 bp长度的目的基因片断.经序列分析所得的21份RT基因结果中有8份对NRTI产生耐药突变(38.5%),5份对NNRTI产生酎药突变(23.81%);另外分析所得的12份PR基团结果中1份产生对蛋白酶抑制剂主要耐药突变(8.33%),5份产生对蛋白酶抑制剂次要耐药突变(41.67%). [结论]HIV-1耐药性基因型检测法能有效地监测HIV-1感染者血浆中的耐药性病毒株的存在,并且检测结果表明,深圳地区未接受抗病毒治疗的HIV-1感染者中已经存在耐药突变株.     

湖南省未接受抗病毒治疗的HIV-1毒株耐药基因变异研究

目的研究湖南省HIV感染者/AIDS患者的耐药情况。为开展大规模抗病毒药物治疗制定计划和方案时提供科学依据。方法对51名HIV感染者/AIDS患者进行CD4绝对计数、血浆病毒载量测定、基因型耐药性检测,并进行分析。结果发现1份样品存在蛋白酶抑制剂(PIs)主要耐药相关突变V32L,N88D(2.13%),3份存在次要耐药相关突变,分别为A71T(4.26%)、A71V(2.13%),3份对核苷类逆转录酶抑制剂(NRTIs)耐药突变L210M(2.13%)、L210F(4.26%),4份对非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)耐药突变V179D(6.38%)、V108A(2.13%)。结论湖南省未接受抗病毒药物治疗的HIV感染者/AIDS患者中对现行的抗病毒治疗方案药物耐药水平仍然很低,但是应该加强对HIV感染者/AIDS患者体内HIV-1变异的监测。     

HIV-1B′亚型毒株新型耐药相关突变位点的筛选

目的 筛选HIV-1 B′亚型病毒株中可能存在的新型耐药相关突变位点.方法 收集整理前期研究获得的451条HIV-1B′亚型pol区基因序列,序列含蛋白酶全长(1～99个密码子)和反转录酶全长(1～560个密码子),长度约1977 bp.将354条来自接受抗病毒治疗艾滋病患者的(服药组)序列与97条来自未接受治疗患者的(未服药组)序列,分别与B亚型野生型pol基因共享序列进行逐个密码子比对,筛选在服药组序列中出现的频率显著高于未服药组序列的突变位点,将筛选出来的突变位点在斯坦福大学HIV-1耐药数据库中检索,根据数据库收录的情况及解释,初步分析突变与耐药的关系.结果 在服药组序列中反转录酶区有6个位点7个突变的频率显著高于未服药组,分别是D123E、V292I、K366R、T369A、T369V、A371V和1375V,即前2个突变位于反转录酶的聚合酶区、后5个突变位于反转录酶的连接区.检索数据库收录情况,有7个突变均为相应位点的主要变异形式,在服药患者中出现的频率显著高于未服药患者.结论 筛选出的HIV-1 B′亚型病毒株7个突变可能与耐药有关.     

合肥市HIV/AIDS未治疗人群的耐药基因及亚型分析

目的了解合肥地区HIV/AIDS未治疗人群基因亚型和原发性耐药情况。方法应用巢式RT-PCR扩增HIV-1 pol区聚合酶基因,经DNA测序后进行系统进化树分析和耐药性分析。结果收集79例合肥地区HIV/AIDS未治疗者,经RT-PCR扩增并获得有效基因亚型序列65例,基因分型以CRF01-AE重组亚型最多39例（60.0%）;其次依次是CRF07-BC 21例（32.3%）、B亚型4例（6.2%）和CRF08-BC1例（1.5%）。1例蛋白酶抑制剂（PIs）主要耐药基因突变,2例反转录酶抑制剂（RTIs）耐药基因突变。总耐药突变率为4.6%（3/65）。结论当前合肥市主要的HIV-1流行亚型是CRF01-AE和CRF07-BC,HIV原发性耐药的发生率在国内处于较低水平。     

云南省德宏州HIV-1新近感染者基因型耐药分析

目的 了解云南省德宏州HIV-1新近感染者中耐药的发生情况.方法 收集德宏州2006年7-12月期间所有的HIV-1阳性样品共1048份,使用BED捕获酶免疫试验进行新近感染检测,共检出新近感染样品101份;使用Bayer公司的TruGene方法进行基因型耐药检测,应用所有样品的序列构建系统进化树以确定样品的亚型.结果云南省德宏州HIV.1新近感染者巾的耐药发生率为6.25%(4/64),样品PR区中M36I/V、L63P和H69K等次要耐药突变出现的频率较高,分别占81.25%、70.31%和65.63%;HIV-1流行株以C/CRF07 BC/08_BC为主,占65.63%(42/64).结论德宏州HIV-1新近感染者中耐药的流行处于中等水平;有必要加强HIV-1的耐药监测.     

东莞市HIV-1主要毒株基因分型及其对耐药影响的研究

目的 了解东莞市人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）感染者流行毒株基因亚型的分布特征及耐药情况。方法 收集2015年10月至2016年2月东莞市疾病预防控制中心未经抗病毒治疗的50例HIV感染者血浆,提取病毒RNA,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法扩增pol基因序列并测序,应用BioEdit、Genotyping和MEGA等生物学软件对pol基因进行HIV-1基因亚型分析,并将获得的核酸序列提至美国斯坦福大学HIV耐药数据库（http：//hivdb.stanford.edu）进行耐药位点分析。结果 50例样本最终成功扩增得到35份样本的pol基因序列,在这35例研究对象中,88.6%（31/35）为男性,65.7%（23/35）为经性接触感染。35条pol基因序列中,CRF01_AE亚型占37.1%（13/35）,CRF07_BC亚型占37.1%（13/35）,B亚型占14.3%（5/35）,CRF55_01B亚型占11.4%（4/35）。在35条基因序列中检测到11条（占31.4%）含有耐药相关突变,以CRF01_AE和CRF55_01B重组亚型为主,原发性耐药率为11.4%（4/35）。结论 东莞市HIV-1感染者存在着多种基因亚型,以CRF01_AE和CRF07_BC重组亚型为主,基因序列发生原发耐药性,应引起重视。     

黑龙江省2004～2007年HIV-1毒株耐药基因型检测结果分析

目的了解黑龙江省部分AIDS患者在接受抗病毒治疗中HIV-1耐药基因的变异情况,为更好地开展抗病毒治疗提供科学依据。方法从患者血浆中抽提病毒RNA,用RT-PCR方法扩增HIV—1po1区基因片段,进行核苷酸序列测定及耐药基因型分析。结果2005年的2号样本以及2007年的3号和5号样本各存在～处蛋白酶抑制剂次要耐药突变：A71T、L10I、A71T,但它们单独存在不会产生耐药性。2005年的2号样本以及2007年的5号和6号样本均检出逆转录酶抑制剂的耐药突变,其中核苷类逆转录酶抑制剂（NRTIs）耐药突变位点共有5处：D67N、KTOR、M184V、K219Q、T215FI,非核苷类逆转录酶抑制剂（NNRTIs）耐药突变位点共有7处：K103T、Y181C、K103N、P225H、K238T、V106A、G190A,最终导致三份样本对NRTIs和NNRTIs类中的多种药物产生不同程度的耐受性。结论被检测的AIDS患者中多数对现有的抗病毒药物敏感,但有3例对多数逆转录酶抑制剂产生耐受性,应该加强HIV感染者／AIDS患者体内HIV-1耐药基因型监测,了解治疗前后总体耐药水平。     

广州市2008-2015年未接受抗病毒治疗的注射吸毒人群HIV-1感染者耐药分析

目的 了解广州市未接受抗病毒治疗的注射吸毒人群（IDU）HIV-1感染者耐药株流行情况。方法 收集2008-2015年新确证HIV-1抗体阳性、现住址为广州市、传播途径为注射吸毒、确证时未接受抗病毒治疗的IDU HIV-1感染者的血清样本,提取HIV-1 RNA,采用巢式PCR法扩增pol区蛋白酶（PR）基因全序列与反转录酶（RT）基因部分序列并测序后,提交到美国斯坦福大学HIV耐药数据库做耐药分析。结果 518例HIV感染者中,有407例（78.57%）血清样本成功获得pol区基因片段。年龄18~64（37.44±8.14）岁,男性占89.68%（365/407）,汉族占89.93%（366/407）,未婚者占55.28%（225/407）,文化程度以初中及以下为主（83.78%,341/407）。HIV-1亚型以CRF07_BC为主（47.18%,192/407）,CRF01_AE占23.83%（97/407）和CRF08_BC占22.85%（93/407）,其他亚型占6.14%（25/407）。总耐药率为3.44%（14/407）,蛋白酶抑制剂耐药率为1.47%（6/407）,核苷类反转录酶抑制剂耐药率为0.25%（1/407）,非核苷类反转录酶抑制剂耐药率为1.72%（7/407）。突变发生率为12.29%（50/407）,蛋白酶区和核苷类反转录酶区未检出主要耐药突变,非核苷类反转录酶区中V179E突变率更高的是其他亚型和CRF07_BC亚型,其他亚型中的CRF55_01B亚型8例全部发生此突变;E138A突变率最高的是CRF08_BC亚型,为3.23%。有2例病例对NNRTIs的4种药物全都耐药。结论 2008-2015年广州市未接受抗病毒治疗的IDU HIV-1感染者的耐药率处于较低水平,大多数IDU HIV-1感染者对现有抗病毒治疗药物敏感。应加强IDU HIV-1感染者的耐药监测,控制耐药性毒株多重、交叉耐药的流行。     

辽宁省艾滋病病毒1流行株膜蛋白V3环氨基酸变异特点

目的　了解辽宁省艾滋病病毒 1(HIV 1)感染者 艾滋病 (AIDS)患者体内不同亚型HIV 1膜蛋白V3环氨基酸序列特征 ,突变种类特点。方法　提取含有整合HIV 1前病毒的基因组DNA ,巢式聚合酶链反应 (nest PCR)扩增后直接测序 ,并做序列排列比对、翻译和分析。结果　辽宁省HIV 1感染者感染病毒分属A、B’、C、G四种亚型 ,AIDS患者体内病毒V3环发生与T嗜性 SI表型有关的氨基酸突变形式 (11位出现R ,13位出现S、T、N ,19位出现V ,2 0位出现Y ,2 5、2 9位出现N等 )高于无症状感染组 (P <0 .0 5 ) ,此外还发现GQGR、APGQ、RPGA、GLGR、RPGA等少见的V3环顶端四肽组成形式及第 5位H ,34位S、F等罕见突变形式。结论　辽宁省AIDS人群中 ,A、B、C、G亚型HIV 1毒株V3环各位置出现氨基酸突变情况与国外对B亚型毒株的研究结果总体上相似 ,但发现一些罕见突变和少见V3环顶端四肽组成形式。     

合肥市HIV-1感染者基因亚型和耐药性突变调查与研究

目的 了解合肥地区艾滋病病毒Ⅰ型(human immundeficiency virus 1,HIV -1)基因亚型及耐药性HIV-1的流行情况,为制定防治措施提供科学依据.方法 应用巢式RT-PCR扩增HIV-1 POL区聚合酶基因,经DNA测序后进行进化系统树分析和重组分析,以确定HIV-1基因亚型和重组体,并与国际耐药数据库比对,辨别耐药性突变位点,结合流行病学资料进行分析.结果 收集93例合肥地区HIV-1感染者,经RT-PCR扩增并获得有效基因亚型序列77例,基因分型以CRF01 _AE重组亚型为主,有46例(59.7％);其次是CRF07_BC亚型23例(29.9％)、B亚型6例(7.8％)和CRF08_BC亚型2例(2.6％).耐药分析结果表明,在65例未治疗人群中,发现1例(1.5％)蛋白酶抑制剂(PIs)主要耐药基因突变,2例(3.1％)反转录酶抑制剂( RTIs)耐药基因突变.抗病毒治疗组出现耐药突变位点6例(50.0％)高于非治疗组3例(4.6％)(x2=20.21,P＜0.001).结论 本研究分析了合肥地区HIV-1基因亚型和耐药突变的流行情况,初步了解合肥地区的HIV-1遗传变异多样性并建立耐药检测体系,对合肥地区的艾滋病预防和控制工作有一定指导意义.     

昆明市VCT人群中的HIV-1亚型和耐药基因型调查

摘要:目的　了解昆明市艾滋病自愿咨询检测（VCT）人群中的艾滋病病毒（HIV）的HIV-1亚型和耐药基因型分布情况。方法　于2013年11-12月在云南省疾病预防控制中心VCT门诊对就诊人群进行调查,并采样进行HIV抗体、CD4细胞、新发感染检测和HIV亚型和耐药基因型检测。结果　610例VCT样本中有96例为HIV抗体阳性（15.7%,96/610）,其中95例（99.0%,95/96）获得亚型分析结果,分别有CRF08_BC（40.0%,38/95）、CRF07_BC（27.4%,26/95）、CRF01_AE（27.4%,26/95）、C（4.2%,4/95）和B（1.1%,1/95）5种亚型。89例样本（92.7%,89/96）获得耐药基因型分析结果,有21例（23.6%,21/89）发生基因突变,有1例出现耐药传播突变位点（1.12％,1/89）。结论　VCT人群中的艾滋病病毒亚型以重组流行型为主,包括CRF08_BC、CRF07_BC和CRF01_AE。耐药毒株在该人群中为低流行。     

2018年珠海市HIV-1基因型及耐药分析

目的 了解2018年广东省珠海市新确诊且未接受抗病毒治疗的HIV-1抗体阳性病例不同感染途径病毒亚型分布和耐药情况。 方法 收集研究对象血浆标本207份,提取病毒RNA,采用巢氏RT-PCR扩增HIV -1多聚酶pol区,测序定型和耐药分析。 结果 在男男性行为者中流行基因型为CRF07_BC(43.3%)、CRF01_AE(36.1%)和CRF55_01B(13.4%);在异性性感染人群优势基因型为CRF01_AE(52.5%)、CRF07_BC(31.1%)和CRF08_BC(6.6%);在3例注射吸毒感染人群检出CRF01_AE;有1例血源性感染病例检测基因型为H亚型;在MSM和异性性感染人群产生低度耐药,低度耐药率分别为4.1%和4.9%;在注射吸毒和血源性传播感染人群未检出耐药病例。 结论 在经性传播途径感染HIV-1多种基因型共同流行,以CRF01_AE和CRF07_BC基因型为主;在四类人群未检出低度以上耐药病例,总体传播性耐药呈低度流行。