同型半胱氨酸检测试剂与厂家声明的一致性验证

目的对同型半胱氨酸检测试剂进行验证,确定其分析性能是否与厂家声明一致。方法根据EP-15中生化定量检测试剂性能验证方案,对同型半胱氨酸试剂的准确度、精密度、线性范围、分析灵敏度、特异性进行系统评估。结果准确度低值偏差为5.24%,高值偏差为1.84%,偏差10%;重复性标准差为0.182 4,变异系数为1.838 6%,偏差10%;线性回归方程:y=63.790x+3.3442,r2=0.998 3;分析物灵敏度均值为-0.057 5,标准差为0.132,灵敏度为0.338 5;血清中分别加入特异性干扰物,测定结果偏差最大为8.17%,最小为-2.78%,正负偏差均10%。结论北京九强公司生产的同型半胱氨酸检测试剂在测定准确度、精密度、线性范围、灵敏度、特异性方面与厂家声明的一致性良好,各项性能指标符合临床和实验室规范的要求。     

梅毒抗体酶联免疫吸附法检测试剂盒性能验证及评价

目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)检测中试剂盒的性能验证评价方法,并对该实验室梅毒抗体(anti-TP)检测中所使用的英科新创生产的ELISA试剂盒进行性能验证评价,以判断所用试剂盒是否能满足实验室检测工作的基本要求。方法利用全自动酶标仪进行ELISA检测,从试剂盒最低检出限、重复性、精密度、正确度四个方面,评价该试剂盒的性能指标,并对试剂盒的CUTOFF值进行验证,判断其是否适合本实验室常规检测人群。结果梅毒抗体(anti-TP)ELISA检测中,该实验室所用英科新创试剂盒最低检出限为0.25 NCU/m L,低于厂家声称的0.3 NCU/ml,适合大批量样本筛检,避免了漏检;批内精密度试验中,弱阳性浓度水平(0.5 NCU/m L)和临界值浓度水平的变异系数(CV)分别为4.0%和3.2%;批间精密度实验中,在弱阳性浓度水平(0.5 NCU/m L)和临界值浓度水平的CV为8.5%和7.6%,均低于厂家声明的标准;正确度验证方面,阴阳性符合率达到100%;CUTOFF值验证实验中,检测的样本OD值的x+3SD=0.027,小于试剂盒提供的CUTOFF值0.105.结论该梅毒抗体检测试剂盒的各项性能指标符合本实验室的要求,CUTOFF值适合本实验室日常检测工作和受检人群。     

新型冠状病毒检测系统性能验证分析

目的 验证新型冠状病毒核酸检测系统,分析是否满足口岸新型冠状病毒(SARS-CoV-2)快速检测要求。 方法 依据 《医学实验室质量和能力认可准则在分子诊断领域的应用说明》(CNAS-CL02-A009)要求,评估新型冠状病毒核酸检测系统(包括核酸提取试剂、核酸提取仪、PCR扩增试剂和 PCR 仪)检测性能,主要包括防污染情况、符合性、检出限、重复性和抗干扰能力等技术参数。 结果 在环境测试以及高浓度样本交叉污染的测试中, 阴性符合率和阳性符合率均为100%;灵敏度试验结果显示,该检测系统的灵敏度可以达到约 10² copies/ml,重复性 CV 值均在 4%以内; 抗干扰能力选择在咽拭子标本采集管中加入 5%的全血、5%的氯化钠、 布地奈德鼻喷雾剂(5%),结果符合率 100%。 结论 本次验证 SARS-CoV-2 的检测系统防污染措施、符合性、检出限、重复性和抗干扰能力等性能指标与试剂厂家声明一致,本检测系统可满足 SARS-CoV-2 实验室快速检测需求。     

沙门菌免疫层析法快速检测试剂盒性能评价

目的评价一种免疫层析法快速检测沙门菌试剂性能及临床应用价值。方法应用沙门菌免疫层析法检测试剂,对33株纯培养细菌悬液及64份临床腹泻患者粪便标本进行检测,评价检测性能。结果检测试剂最低检出限为1×106cfu/ml;以细菌鉴定方法为对照,该检测试剂敏感性为100.0%,特异性为98.7%,准确度为99.2%,与其他肠道腹泻致病菌无交叉反应。试剂可实现A~F不同亚群沙门菌检测,且在4℃和37℃避光保存6个月,检测结果未发生改变。该检测试剂联合亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)快速选择性增菌液可进一步提高临床沙门菌感染的腹泻标本检出率。结论该沙门菌免疫层析快速检测试剂盒具有快速、简便、敏感、特异和稳定的特点,适合临床应用推广。     

荧光免疫层析技术检测寨卡病毒IgG抗体

目的建立和开发一种高特异性、高灵敏度的寨卡病毒IgG抗体的检测方法。方法本研究对寨卡病毒E蛋白核酸序列优化,减低其交叉反应,经过大肠杆菌诱导表达,亲和层析纯化获得特异性蛋白。将获得的寨卡病毒E蛋白抗原喷于检测区捕获样品中的目标抗体,将羊抗小鼠IgG喷于控制区进行质量控制;将鼠抗体人IgG单克隆抗体标记荧光纳米颗粒(激发谱峰365 nm;发射光谱峰610 nm)作为标记抗体;建立荧光免疫层析试剂,配合荧光免疫检测仪YG10,检测人血清中的寨卡病毒IgG抗体,并对该检测方法进行性能验证。结果寨卡病毒E蛋白经大肠杆菌表达,菌液经过收集并超声后,上清和沉淀分别进行SDS-PAGE鉴定,多存在于沉淀中;纯化后的蛋白经SDS-PAGE鉴定,均呈现较单一的蛋白条带,纯度达到90%以上。建立的荧光层析试剂检测50份正常人血清,荧光免疫检测仪YG1分别扫描读取T、C信号值,读取T/C值,计算平均值(AVERAGE)和标准差(STDEVP),3倍标准差加上平均值作为阳性判断值,即:T/C≥3SD+AVG为阳性;与对比试剂ZIKV IgG酶联免疫试剂盒(Dia.Pro.)同时检测3份寨卡阳性标本均为阳性反应;10份正常人血清均为阴性反应;批内重复性CV≤20%,批间重复性CV≤15%;与相似的蚊媒病毒基孔肯雅病毒、登革病毒、黄热病毒、日本脑炎病毒均无交叉反应。结论该荧光层析试剂具有较好的灵敏性和特异性,可作为人血清、血浆、全血样本中寨卡病毒IgG抗体的快速筛查。     

自建恒温扩增法HPV分型检测系统性能验证方法及性能评价

目的自建临床实验室HPV分型检测系统性能验证方法,评估恒温扩增法HPV分型检测试剂的分析性能及其临床应用价值。方法采用国家参考品、企业参考品以及本院收集的HPV分型阳性和阴性的样本,对恒温扩增法HPV分型定性检测试剂的准确度、精密度、特异性、检测限、样本携带污染等性能参数进行方法学性能验证和评价。结果准确度阳性参考品结果均为阳性,阳性符合率为100%,批内精密度Ct值的变异系数≤5%;与试剂盒检测范围外的HPV型别及病原体无交叉反应,检测结果均为阴性,阴性符合率为100%;15种HPV高危型检测限为20 copies/反应,符合国家标准检测限不高于10~4 copies/反应;阳性样本和阴性样本间无交叉污染,试剂无样本携带污染;与cobas 4800 HPV DNA全自动化检测系统进行比对符合率为100%,且1个月内检测结果具备一定的稳定性。结论定性检测项目在正式用于患者标本检测前必须对检测系统的分析性能做详细充分的评价,通过验证恒温扩增法HPV分型检测试剂可以满足目前宫颈癌筛查和临床疗效监测的需求,并且经济简便,适用于临床常规检测。     

前S1抗原方法学性能验证的评价和分析

目的评价乙肝病毒前S1抗原ELISA试剂盒的方法学性能。方法 (1)取前S1弱阳性质控血清的原始浓度及+20%、-20%浓度的标本,进行连续20 d检测,统计分析其日间精密度CV及灰区标本符合率;(2)取80例随机样本及近2年收集的20例特殊样本[HBsAg阴性(-),HBeAg阴性(-),而试剂2检测前S1抗原阳性(+)的标本]用两种ELISA试剂进行符合率实验,并将20例特殊样本进行HBV-DNA检测,进行正确性验证。结果 (1)试剂1检测前S1抗原日间精密度CV=5.65%;-20%浓度样本的结果 97.6%阴性(-),+20%浓度样本的结果 100%阳性(+),样本吸光度均值为0.216 8,95%CI为(0.195 5;0.238 1)。(2)两种试剂对80例随机样本检测,符合性100%,20例特殊样本用试剂1检测结果均为阴性(-),HBV-DNA检测也为阴性(-)。结论 (1)试剂1的检出限、精密度及cut off计算公式符合试剂说明书中规定标准;(2)试剂1与试剂2符合率较好,试剂1与HBV-DNA的符合性较试剂2好;(3)评价方案简单易行,各临床实验室应建立自己的分析性能指标,选择合适的实验方法,以提高结果的灵敏度和特异性。     

不同方法与试剂检测HBsAg的实验比对

目的比对不同方法与试剂检测HBsAg的情况。方法用酶联免疫法两种试剂与两种胶体金法试剂检测血清中HBsAg,将结果进行比对分析。结果酶联免疫法两种试剂A、B共检测740份血清,检测HBsAg结果符合率为99.3%。四种试剂A、B、C、D共检测159份血清,C、D试剂检测HBsAg结果符合率为96.2%,检测HBsAg结果总符合率为94.3%。酶联免疫法A、B试剂的特异性,灵敏度要比胶体金免疫法检测HBsAg好。四种试剂精密度高,孔间差异<15%。结论两种酶联免疫法试剂已发展较成熟,质量稳定;胶体金法操作方便快捷,作为筛查健康人群乙肝HBsAg的快速重要方法,具有较好的发展前景。     

自建检测系统性能验证方法初探

目的:探讨自建检测系统分析性能的确认方法。方法:本研究参照美国国家临床实验室标准化委员会(CLSI)颁布的多个EP文件、NCCLS C28-A2和我国《医疗机构临床实验室管理办法》制定验证方案,对某国产β2-微球蛋白试剂和西门子ADVIA1800全自动生化分析仪组成的检测系统的最低检测限(空白限)、精密度(重复性精密度和期间精密度)、正确度(正确度相对偏差、比对试验)、线性范围进行性能验证。结果:最低检测限为0.0156≤2.000,批内精密度为0.92%、0.67%,批间精密度为0.49%,线性范围为0~15mg/L,正确度相对偏差均小于8%,与西门子原装配套试剂进行比对试验得到回归方程为:y=0.884x+0.3202,相关系数R=0.9624。结论:该检测系统性能指标均满足相关法规和试剂说明书要求,验证结论为合格。本研究提供的验证方案方便实用,较适合于临床实验室的性能评价。     

反转录实时荧光定量PCR用于检测白血病相关融合基因分型的性能及应用评价

目的评价反转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测白血病相关融合基因的性能,以确定临床使用该方法的可行性。方法采用RT-qPCR检测临床骨髓标本中的白血病相关融合基因BCR-ABL、PML-RARα及AML1-ETO的RNA,验证准确性、特异性、最低检出限、精密度、抗干扰和融合基因亚型检出能力等性能指标,并对其临床应用进行初步评价。结果RT-qPCR检测白血病相关融合基因BCR-ABL、PML-RARα及AML1-ETO的阴阳性符合率为100%,特异性和准确性得到验证;该方法检测下限为100 copies/每反应,其批内和批间精密度CV值均<10%;精密度符合实验要求;胆红素、甘油三酯和血红蛋白对该方法无明显干扰作用;均能检出融合基因亚型;白血病患者治疗前融合基因表达为阳性,完全缓解、巩固、维持各期的相关融合基因表达均为阴性,此结果与疾病进展关系一致。结论采用RT-qPCR检测白血病相关融合基因试剂盒符合规定的性能指标,该检测方法具有较高的灵敏度和较好的准确性和重复性等优势,适合应用于临床。     

实验室认可中封闭检测系统的性能验证及评价

[目的]对罗氏MODULAR P生化封闭检测系统进行性能验证,为实验室认可和本实验室不同检测系统检验结果的互认提供依据。[方法]参照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)的评价模式(EP-10A2)对生化检测项目[以谷丙转氨酶(ALT)为例]的精密度、准确度、线性、样本针交叉污染、检测低限、检验程序测量不确定度和临床参考区间进行验证,并参照EP-9A2与罗氏INTERGAR检测系统进行相关性比较和临床可比性能判断。[结果]不精密度小于实验室允许不精密度(10%)、准确度小于实验室允许偏倚(10%);线性和样本针交叉污染结果经t检验的显著性、单项符号检验的统计显示:交叉污染、非线性、线性漂移无统计学差异(可以接受);实测检测低限符合厂家声明性能;校准品浓度处不确定度估计7.429;参考区间验证符合试剂厂商提供的参考范围;相关性分析和临床可比性能判断,结果显示:验证检测系统(MODULAR P)的相对偏差SE%≤1/2CLIA’88允许总误差(TEa),属临床可接受水平,说明罗氏MODULAR P生化封闭检测系统与罗氏INTERGAR检测系统检测结果具有可比性。[结论]MODULAR P生化封闭检测系统检测的主要分析性能均符合质量目标要求,可用于临床标本检测。     

四种检测HBsAg免疫结合胶体金层析纸条的实验比较

目的通过对四种检测HBsAg免疫结合胶体金层析纸条的评估,提供科学选择依据.方法观察比较外包装的区别,结合国家相关法律法规的要求评价外包装.用卫生部临床检验中心的定值血清比较灵敏度,选用20份ELISA检测HBsAg和HBeAg都为阴性的血清标本20份,进行特异性比较.结果外包装混乱,批准文号、储存条件、有效期、说明书等多个要素不符合法律法规规定.灵敏度都只有5μg/ml,特异性都是100%.结论四种检测HBsAg免疫结合胶体金层析纸条的外包装混乱,灵敏度低,特异性高.总体质量有待提高,不适合单独使用.     

基层医院HBsAg检测方法的选择

目的通过对HBsAg检测方法的比较,选出适合基层医院检验科使用的方法。方法用酶联免疫吸附试验、化学发光免疫分析法、胶体金免疫层析实验三种方法分别同时对本院住院的259例患者血清标本进行检测。结果酶联免疫吸附试验和胶体金免疫层析实验的敏感度和特异度均低于化学发光免疫分析法,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论酶联免疫吸附试验检测HBsAg灵敏度高、特异性好,适宜基层医院应用。     

酶联免疫法、金标法、时间分辨免疫荧光分析法测定HBsAg对比分析

目的探讨酶联免疫法、金标法、时间分辨免疫荧光分析法三种方法测定HBsAg的可靠性及优缺点。方法通过对1500名体检及临床标本用三种方法检测HBsAg，对其检测结果的准确度、灵敏度、特异性进行对比。结果三种方法在准确度、灵敏度、特异性方面酶联免疫法最低，金标法其次，时间分辨免疫荧光分析法最高。结论酶联免疫法检测HBsAg操作简便，可用于自动化分析，适用于大量标本的定性检测，如大量人群的乙肝筛查；金标法检测HBsAg操作简便快速，无需特殊仪器设备。适用于单份标本的定性测定，适用于急诊、社区诊所及家庭化验；时间分辨免疫荧光分析法检测HBsAg动态检测范围广、试剂稳定、自动化程度高，最有发展前途，但对实验室条件和操作人员条件要求高，适用于HBsAg定量检测。     

一种新型冠状病毒抗原检测试剂性能分析和临床评价

目的 快速筛查包括无症状在内的新型冠状病毒(COVID-19)感染者。方法 使用胶体金免疫层析技术建立一种抗原快速检测试剂,进行分析性能评估,验证其临床应用。结果 该检测试剂的最低检出限为9.75×10² TCID50/mL;测试29种常见呼吸道病原体高浓度样本均无交叉反应和干扰。临床样本测试,诊断灵敏度为98.56%,特异性为99.00%,总符合率为98.85%;一致性检验Kappa值为0.974 5;对不同Ct值阳性样本分层分析,每个层级内符合率均大于95%。结论 该试剂检测性能优异,检测速度快,操作便携,可作为现有核酸检测法的补充手段,用于新型冠状病毒的早期筛查。     

三种乙型肝炎表面抗原检测方法在口岸体检中的应用评估

目的循证检验医学(EBLM)指导下,对电化学发光法(ECLIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金免疫层析法等3种乙型肝炎表面抗原(HBsAg)检测方法进行评价,为口岸出入境人员寻求最佳的快速HBsAg检测方法和检测程序提供科学依据。方法ECLIA、ELISA、胶体金免疫层析法检测40份(HBsAg)标准血清盘标本,以血清盘预期结果为标准,比较3种方法灵敏度、特异度、总符合率。同时应用成本最小化分析方法,分别计算3种方法的成本。结果在血清盘HBsAg检测中,ECLIA法的灵敏度、特异性和总符合率皆达100.0%,Kappa值为1.000;而ELISA法国产科华试剂灵敏度76.9%、特异性100.0%和总符合率85.0%,Kappa值为0.432;胶体金免疫层析法灵敏度34.6%、特异性100.0%和总符合率57.5%,经Kappa检验其值为0.216。成本最小化分析结果显示:ECLIA法成本20元,ELISA法(科华,国产试剂)成本3元,胶体金免疫层析法成本3元,ECLIA法成本最高。结论ECLIA方法适用于需评估免疫状态,为接种疫苗做准备的出国留学人员、出国商务人员、入境留学生、入境商务人员的HBsAg检测。ELISA国产试剂适用于出国劳务人员、海员等一般人群。胶体金免疫层析法适用于紧急事情人员和日常复查的检测。     

胶体金法快速检测乙肝表面抗原(HBsAg)

在中国乙肝表面抗原（HBsAg）阳性者占总人口10％以上,因此HBsAg的检测十分重要。而此项目的检测方法有很多种。现在的检测方法不仅需要灵敏度高、特异性强、准确度高,而且需要检测迅速。根据本实验室的多次运用,认为胶体金标法（金标法）较为适合卫生检测。现将结果报告如下。1 材料和方法1.1 材料 乙肝表面抗原测定试剂盒（胶体金法）,生产批号:20010518;乙肝表面抗原测定试剂盒（ELISA法）,生产批号:20010506;雅培酶免疫化学发光法（ABBOTT ATSYM）,生产批号:52821LU01;改良型冻干乙肝表面抗原诊断血球（RPHA）,生产批号:20010408.标本来源:体检科送检标本400份;HBsAg纯化抗原（南京军区后勤医学研究所）     

国际旅行卫生保健中心实验室生化定量试剂盒分析性能验证

目的对实验室生化定量试剂盒主要分析性能进行方法学验证。方法依据《WS/T 420-2013临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证》,用日立7100全自动生化分析仪和宁波美康生化检测试剂,从精密度、准确度和线性范围方面对实验室丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase,ALT)等6项生化检测项目进行性能验证。结果 6项生化检测项目预处理质控结果均在控。低浓度质控品总胆固醇(Cholesterol,TC)厂家声称重复精密度(δ_r)实验重复精密度(Sr)Sr验证值(Sr_(验证值)),其余项目Srδr;ALT、葡萄糖(Glucose,GLU)和TC厂家声称期间精密度(δ_1)实验期间精密度(S_1)S_1验证值(S1_(验证值)),其余项目S1δ1。高浓度质控品6项生化检测项目Srδr;ALTδ1S1S1验证值,其余项目S1δ1。正确度GLU和TC参考物质测量偏移值(b_参)参考物质赋值不确定度(S_a),参考物质赋值(X_赋)在b_参的验证区间(VI)内,其余项目b_参S_a。生化6项线性范围相关系数(R~2)0.995,差值与理论值的比值≤10%。结论宁波美康生化检测试剂在日立7100全自动生化分析仪上进行ALT等6项生化检测,方法学性能良好,测量结果准确可靠且重复性好,能满足工作需要。     

美国康仁560全自动生化分析仪的临床应用

<正> 我院引进一台美国康仁560全自动生化分析仪,该分析仪具有精密度高、重复性好、性能稳定、操作灵活方便、速度适中、检测方法齐全、标本及试剂用量少、交叉污染低等特点,可用于临床生化、免疫、药物浓度及中毒监测。其价格适中,对中小型医院检验科较为适用,能提高工作效率和检测质量。现将仪器性能及实际应用体会介绍如下。     

两种检测乙肝表面抗原方法的比较

目的了解两种检测乙型肝炎方法的优缺点,为实验室提供快速、准确的检验方法。方法先后采用胶体金免疫层析测试条法和做血清学检测乙型肝炎表面抗原,并将资料进行整理、分析。结果胶体金免疫层析法检出阳性250份,阳性率为54．82％;ELISA法检出阳性275份,阳性率为60.31％。两法检测结果的总符合率为94．52%。以ELISA法为常规法验证胶体金免疫层析法的敏感性,敏感性为90．91％,特异性为100％。结论胶体金免疫层析法敏感性较酶联免疫法(ELISA)差,认为检测HBsAg仍然以ELISA法为主。