补肾活血中药对体外培养成骨细胞活性的影响

目的研究补肾活血中药对体外培养成骨细胞活性的影响.方法取二次酶消化法培养的胎鼠颅骨第三代成骨细胞,随机分为5组,即:细胞对照组、空白血清组、含药血清组、原药组、阳性对照药α D3组,分别加入普通细胞培养液、含空白血清及不同浓度补肾活血中药含药血清、补肾活血中药原药液、阳性对照药(αD3)的条件培养液,分别在培养第3天和第6天进行各试验组成骨细胞碱性磷酸酶及骨钙蛋白分泌量测定,观察补肾活血中药含药血清及原药液对成骨细胞活性的影响.结果含药血清组成骨细胞活性指标碱性磷酸酶(ALP)值在培养第3天均低于空白血清组,且与含药血清浓度呈负相关关系;第6天,含药血清组各浓度组ALP值明显升高,均显著高于空白血清组,ALP值与含药血清浓度存在正相关关系;空白血清组ALP值在培养第6天时下降,其均值低于培养第3天ALP值.培养第3天及第6天,各浓度原药组ALP值均高于细胞对照组及αD3组;ALP值与原药浓度呈正相关关系.含药血清组及中药原药组骨钙素(OC)含量显著高于空白血清及其他各对照组.结论补肾活血中药含药血清及原药能够直接作用于体外培养的成骨细胞,促进成骨细胞增殖,增强其分泌活性;可延长成骨细胞活性分泌期,使其活性分泌高峰后移而峰值升高,增加其活性分泌总量.     

大豆甙元对大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的 :探讨大豆甙元体外对大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法 :用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞 ,大豆甙元以不同浓度加入细胞培养体系 ,作用不同时间后 ,用动力学法测定细胞内碱性磷酸酶 (ALP)的活性。结果 :大豆甙元在 1× 10 3 mol/L范围内 48h和 72h ,1× 10 5mol/L 96h及 1× 10 7mol/L 72h提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。结论 :大豆甙元体外能提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。     

复元活血汤含药血清对大鼠成骨细胞功能的影响

目的：探讨复元活血汤含药血清对大鼠成骨细胞功能的影响及其作用机制。方法：取2月龄SD雄性大鼠12只,随机分为2组,每组6只,分别给予20 g.kg-1复元活血汤生药灌胃（含药血清组）和同等量的生理盐水灌胃（空白血清组）,每天2次,14 d后腹主动脉采血。取新生SD大鼠2只,采用二次酶消化法消化幼鼠颅盖骨获取成骨细胞,采用血清药理学方法,分别采用含胎牛血清的培养液（胎牛血清组）、含复元活血汤生药灌胃大鼠血清的培养液（含药血清组）和含生理盐水灌胃大鼠血清的培养液（空白血清组）培养成骨细胞。分期测定体外培养的大鼠成骨细胞的增殖功能、分化功能、矿化功能及碱性磷酸酶含量。结果：①成骨细胞增殖功能。时间效应F=381.260,P=0.000;组别效应F=1 071.170,P=0.000;时间与组别交互效应F=22.500,P=0.000。②成骨细胞分化功能。时间效应F=159.950,P=0.000;组别效应F=62.120,P=0.000;时间与组别交互效应F=2.400,P=0.029。③成骨细胞矿化功能。时间效应F=115.500,P=0.000;组别效应F=4.370,P=0.082;时间与组别交互效应F=56.300,P=0.000。④成骨细胞碱性磷酸酶含量。时间效应F=2 175.670,P=0.000;组别效应F=1 201.370,P=0.000;时间与组别交互效应F=428.870,P=0.000。结论：复元活血汤能明显地促成骨细胞的增殖和分化功能,其作用可能与成骨细胞合成和分泌碱性磷酸酶有关。     

补肾健脾药物血清对体外培养的成骨细胞增殖与分化的影响

目的观察补肾健脾药物血清对新生大鼠颅骨成骨细胞增殖和分化的影响.方法用多次酶消化法分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞,加入含不同药物浓度的补肾健脾药物血清条件培养液共同培养;改良Gomori钙钴法染色鉴定,MTT法测定细胞增殖率,对硝基苯酚法检测碱性磷酸酶(ALP)活性.骨疏康和尼尔雌醇作为阳性对照药物.结果补肾健脾中药组成骨细胞的增殖、ALP活性均显著高于空白对照组(P＜0.05),与骨疏康和尼尔雌醇组比较有显著性差异.结论补肾健脾中药可通过增加成骨细胞的增殖与分化而促进骨形成.     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

观察中药骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法：将实验动物随机分成中药组、罗盖全组和蒸馏水组3组，通过体外分离和培养成骨细胞体系，运用分光光度计测定含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。结果：成骨细胞在10％的血清中培养7天时，用分光光度计测定ALP活性。发现骨康含药血清和罗盖全含药血清均能明显提高成骨细胞的ALP活性，骨康血清组和罗盖全血清组对成骨细胞ALP活性的平均影响率分别为128．1％和129．1％。结论：中药骨康含药血清能明显提高成骨细胞的碱性磷酸酶活性。     

人成骨细胞的离体培养和鉴定

目的:建立人成骨细胞离体培养技术。方法:取健康儿童骨科手术时髂骨松质骨,采用蛋白酶分次消化法分离成骨细胞,采用形态学和碱性磷酸酶染色和定量测定鉴定。结果:实验中得到的人成骨细胞纯度高,性状良好。结论:蛋白酶分次消化法处理人髂骨松质骨可以得到纯度高、性状好的成骨细胞。     

羟基磷灰石复合材料制备技术的研究进展

生物材料羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)是脊椎动物骨骼和牙齿的重要无机组分,具有优良的生物相容性、生物活性、骨传导性,化学性质稳定,可作为药物缓释载体和骨组织工程学的修复材料。但其单独使用时,存在脆性大、抗疲劳强度不高、易团聚等缺点,因此多与其他材料联用,以形成性质更加优良的复合材料。另外,在羟基磷灰石中,纳米羟基磷灰石(n HA)由于具有高比表面积、高载药量、肿瘤抑制性等常规HA所不具有的性质,受到了更加广泛的关注。本文查阅近15年来国内外相关文献,从纳米羟基磷灰石复合材料的制备方法及其各自优势进行综述,以展示羟基磷灰石复合材料在制剂应用中的进展,对研究者开展相关研究提供文献基础。     

壮筋续骨汤对大鼠成骨细胞ALP比活性、BGP含量和Cbfα1基因表达影响

目的：探讨壮骨续筋汤对大鼠成骨细胞功能态的影响。方法：采用含药血清的方法体外培养成骨细胞，分壮骨续筋汤组、对照组，观察各组碱性磷酸酶（ALP）比活性、骨钙素（BGP）含量及Cbfα1基因的表达。结果：壮骨续筋汤组的ALP比活性、BGP含量及Cbfα1基因的表达强于对照组（P〈0．05）。结论：壮骨续筋汤能促进成骨细胞功能态的发挥。     

黄瓜子不同提取部位对体外培养大鼠成骨细胞的影响

目的比较黄瓜子不同提取部位对大鼠体外成骨细胞增殖、骨钙素水平及碱性磷酸酶活性的影响。方法采用酶消化法分离大鼠成骨细胞,与黄瓜子不同提取溶剂(石油醚、正丁醇及乙酸乙酯)提取液和大鼠含药血清共同培养。用CCK-8法测定细胞增殖,双抗体夹心酶联免疫法和微量酶标法分别测定细胞骨钙素水平以及细胞碱性磷酸酶活性。结果黄瓜子各提取部位的含药培养液及含药血清对成骨细胞均有一定的增殖作用,其中正丁醇及乙酸乙酯提取部位对成骨细胞骨钙素的合成及碱性磷酸酶活性作用明显。结论结合资料分析,对成骨细胞有增殖作用的有效成分存在于黄瓜子正丁醇提取部位中。     

地黄梓醇对原代培养SD乳大鼠成骨细胞成骨活性的影响研究

目的观察不同浓度地黄梓醇对体外培养新生SD大鼠成骨细胞增殖及成骨活性的影响,为地黄防治骨质疏松症提供实验依据。方法体外培养原代新生24 h SD大鼠成骨细胞,细胞传至第5代,分别加入1×10-3,1×10-5,1×10-7,1×10-9mol/L梓醇溶液及生理盐水10μL/孔,继续培养24,48,72 h后,分别检测成骨细胞增殖情况、骨钙素(BGP)及碱性磷酸酶(ALP)活性。结果培养24 h时,1×10-3mol/L梓醇溶液能显著促进成骨细胞增殖(P<0.05);培养48 h时,1×10-3mol/L梓醇溶液促增殖作用最强(P<0.05)。培养48h时,1×10-7mol/L组和1×10-3mol/L组ALP活性显著高于对照组(P均<0.05);培养72 h时,1×10-3mol/L组ALP活性显著增加(P<0.05)。培养48,72 h后,各浓度梓醇溶液组BGP活性均高于对照组(P均<0.05),且1×10-3mol/L组明显高于其他浓度组(P均<0.05)。结论梓醇在1×10-5mol/L和1×10-3mol/L范围对体外培养SD大鼠成骨细胞的增殖、分化及成骨作用相对显著,尤其在1×10-3mol/L浓度下作用最显著,且具有时效及量效关系。     

荨麻属植物对骨形成影响的研究

目的观察4种荨麻属植物的8种不同提取物对骨形成的影响。方法以成骨样细胞MC3T3-E1为靶细胞，以表皮生长因子为阳性对照，4种荨麻属植物的8种不同提取物分为50，100，200μg/ml 3个浓度组，采用CCK-8（cell counting kit-8）活细胞计数法测定4种荨麻属植物的8种不同提取物对成骨样细胞MC3T3-E1的增殖作用，同时测定碱性磷酸酶的活性。结果三角叶荨麻根的醇提物，宽叶荨麻全草的醇提物和醇提物水层过D101大孔树脂40％洗脱部分在50到200μg／ml的浓度下能显著促进成骨样细胞MC3T3-E1增殖。同时这3种提取物一定程度上也增强了碱性磷酸酶的活性，但无显著性差异。结论三角叶荨麻和宽叶荨麻提取物在体外对成骨样细胞MC3T3-E1的作用提示其在体内可能促进骨形成过程。     

健脾补肾方含药血清对体外培养的兔骨髓间充质干细胞定向分化的影响

目的:观察健脾补肾方含药血清对体外培养的兔骨髓间充质干细胞(rMSCs)定向分化的影响,揭示本方临床应用防治激素性股骨头坏死的药理机制。方法:以健脾补肾方含药血清作用于体外培养的rMSCs,通过对碱性磷酸酶(ALP)活性的的动态检测结果和四环素荧光标记的矿化结节的出现数量作为分析各组诱导液能否诱导rMSCs分化为成骨细胞以及促进骨向分化强度的指标。结果:rMSCs培养的第12天,健脾补肾组ALP活性高于空白对照组(P0.05);从第8天之后,健脾补肾加成骨组ALP活性高于成骨组(P0.05);更换相应培养液22d后,其余3组形成的钙结节数量明显多于空白对照组(P0.01);健脾补肾加成骨组钙结节数量多于成骨组(P0.05)。结论:健脾补肾方含药血清可以促进rMSCs的骨向分化,且与经典的成骨诱导剂合用具有协同作用。这可能揭示了临床应用该方防治激素性股骨头坏死(SINFH)的细胞学机制。     

巴戟天药物血清对成骨细胞生物学特性的影响

目的:通过观察巴戟天药物血清对体外培养成骨细胞(OB)增殖及其活性的影响,探讨巴戟天壮骨作用的实质。方法:取新生SD大鼠头盖骨提取成骨细胞,给巴戟天药物血清,测定巴戟天对成骨细胞(OB)增殖、分泌碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)及转化生长因子(TGF-β1)的影响。结果:巴戟天醇提物及巴戟天正丁醇部位能显著刺激OB增殖;巴戟天中正丁醇部位低剂量组可促进分化中的OB分泌ALP和OC,并可促进OB表达TGF-β1。结论:巴戟天中正丁醇部位低剂量组能够促进OB分泌碱性磷酸酶、表达TGF-β1mRNA,从而促进骨的生长。     

淫羊藿甙对缺氧所致成骨细胞凋亡的保护作用

目的:通过在缺氧条件下体外培养成骨细胞,探讨缺氧对成骨细胞增殖与凋亡的影响以及淫羊藿甙的保护机制。方法:采用酶消化法传代培养乳SD大鼠颅盖骨细胞并建立缺氧模型。实验分2组:组1为单纯缺氧条件下进行的细胞培养,不加入任何药物干预;组2为缺氧条件下加入浓度为10ng/ml的淫羊藿甙与细胞共培养,用台盼蓝染色法分别计数培养5d的细胞数;用流式细胞仪检测2组缺氧5d的细胞凋亡率。结果:缺氧组的细胞数明显少于与淫羊藿甙共培养组,缺氧引起的细胞凋亡率较淫羊藿甙共培养组高。结论:缺氧能抑制成骨细胞的增殖,促进成骨细胞调亡而淫羊藿甙对其具有保护作用。     

补肾活血固齿方对小鼠颅顶前成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的观察补肾活血固齿方对小鼠颅顶前成骨细胞(MC3T3-E1)碱性磷酸酶(ALP)活性的影响,探讨其对成骨细胞分化的作用机制。方法将20只SD大鼠随机分为含药血清组和无药血清组,各10只。含药血清组大鼠予补肾活血固齿方灌胃,无药血清组予等容积0.9%氯化钠注射液灌胃,均灌胃7 d后抽取腹主动脉血制备成含药血清和无药血清。胎牛血清组为直接购买的PAA胎牛血清。分别用含10%含药血清、10%无药血清及10%胎牛血清的培养基培养MC3T3-E1细胞24、48、72 h,检测MC3T3-E1细胞中ALP的含量。结果含药血清组培养24、48、72 h后MC3T3-E1细胞ALP含量均高于胎牛血清组及无药血清组同期水平,比较差异均有统计学意义(P0.05),但胎牛血清组与无药血清组同期差异无统计学意义(P0.05);含药血清组MC3T3-E1细胞ALP含量随培养时间的延长而明显增加(P0.05)。结论补肾活血固齿方可增强MC3T3-E1细胞中ALP活性,促进MC3T3-E1细胞向成骨细胞分化,且均有一定时间依赖性。     

抗骨增生胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖、分化的影响

目的探讨抗骨增生胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖、分化及骨保护蛋白(OPG)和核因子-кB受体活化子配体(RANKL)蛋白表达的影响。方法采用中药血清药理学方法制备含抗骨增生胶囊大鼠血清。取乳鼠颅骨,利用复合胶原蛋白酶反复消化,离心,体外培养成骨细胞。加入不同浓度的抗骨增生胶囊含药血清进行干预,噻唑蓝(MTT)法检测中药血清对成骨细胞增殖的影响,测定碱性磷酸酶(ALP)活性,Western Blot检测OPG和RANKL蛋白表达。结果成骨细胞经抗骨增生胶囊含药血清作用后,细胞的生长呈现不同程度的增殖,中、高剂量中药组在24、48、72 h均有明显的促进作用(P0.01),且呈剂量依赖性。低剂量中药组在24、48 h时与空白对照组比较差异无统计学意义(P0.05),72 h时作用较强(P0.05)。除低剂量组培养24 h外,低、中、高剂量中药组培养24、48、72 h后,ALP分泌均呈不同程度增加,均有明显的促进作用(P0.01)。成骨细胞经过抗骨增生胶囊含药血清低、中、高剂量作用72 h后,对比值进行统计分析,与空白对照组比较,OPG表达明显升高(P0.01),RANKL表达明显降低(P0.01)。结论抗骨增生胶囊含药血清可以促进成骨细胞的增值、分化,从而促进骨形成。     

健骨二仙丸提取物对大鼠体外培养成骨细胞增殖作用的研究

目的:探讨健骨二仙丸提取物对大鼠体外培养成骨细胞的作用效果及对成骨细胞增殖的作用机理。方法:采用新生大鼠颅骨进行成骨细胞分离,并在含10%的胎牛血清DMEM中进行体外培养,分别加入高、低剂量的健骨二仙丸提取物并与高、低剂量Premarin组、阴性组、Tamoxifen对照组、Tamoxifen阻断对照组进行对照,用MTT法进行成骨细胞增殖和活性检测。结果:在培养24h后,健骨二仙丸提取物对培养成骨细胞增殖有明显的促进作用,培养到48h促进作用更为明显,表现出一定的时间相关性,且其作用不能被Tamoxifen阻断或完全阻断。结论:健骨二仙丸提取物可促进成骨细胞增殖,且其对骨代谢的影响不通过或者主要不是通过雌激素样作用生效。     

芦丁与槲皮素对成骨细胞代谢影响的比较研究

目的:对比研究芦丁(Rutin)与其苷元槲皮素(Quercetin)对成骨细胞形成的影响,以探讨二者防治骨质疏松的作用机理。方法:新生大鼠颅骨分离培养成骨(ROB)细胞,MTT法测定细胞增殖,比色法测定碱性磷酸酶(ALP)活性,茜素红(AR-S)染色法测定矿化结节数,以观察Rutin与Quercetin对ROB细胞骨形成过程中增殖、分化和矿化作用的影响。结果:Quercetin可明显促进ROB细胞的增殖与矿化,故能增强ROB细胞形成活性;Rutin仅能促进ROB细胞增殖,而对矿化作用无影响,却能抑制ROB细胞分化,因而无明显促进骨形成活性。结论:Querce- tin中3-OH形成糖苷(Rutin)后可引起体外培养的成骨细胞活性降低,故含有Rutin的食物或中药防治骨质疏症的机理可能是通过其体内代谢物Quercetin刺激成骨细胞形成而发挥作用的。     

扶脾温肾汤治疗慢性牙周炎的疗效评价

目的:评价扶脾温肾汤治疗慢性牙周炎的疗效。方法:选择34例中、重度慢性牙周炎患者,随机分为治疗组和对照组。牙周基础治疗后,仅治疗组服用中药两个月。检测治疗前、两个月后牙周指标(全口牙菌斑指数、牙周探诊深度、牙周附着水平测定、牙齿松动度)和血生化指标*总钙、无机磷、碱性磷酸酶)。评价2组指标变化。结果:治疗组患者治疗后牙周指标、血生化指标较对照组有明显改善(P<0.01,P<0.05)。结论:扶脾温肾汤治疗中、重度慢性牙周炎有效。