TPA诱导人原代白血病细胞分化的临床意义

在非生理性诱导剂中,12-0-十四酰佛波醇13-乙酯(12-o-tetradecanoyl phorbol 13-acetate,TPA)是诱导分化作用最强的化学物质,能够诱导白血病细胞发生多种反应。在体外,TPA 抑制白血病细胞的增殖,诱导HL-60等白血病细胞株和某些类型原代白血病细胞向单核巨噬细胞方向分化。TPA对正常造血细胞的影响较为复杂。在缺乏外源性 CSF 时,TPA 可刺激巨噬细胞集落的生长,在存在外源性 CSF 时抑制粒系集落的形成;TPA 直接刺激 T 淋巴细胞的增殖并     

小檗碱类生物碱的抗炎活性

小檗碱是黄柏皮和黄连根茎中的一个主要成分,日本和其他东方国家以这两种草药用于治疗腹泻和肠胃疾病。从中分离得到的48种小檗碱类和巴马亭类生物碱衍生物进行研究。经小鼠实验证明,对致癌物12-0-十四酰佛波醇-13-乙酸酯(12-0-tetrade-canoylphorhol-13-acetate,TPA)诱发的小     

Chemopreventive Effects of Black Tea Polyphenols in Mose Skin Model of Carcinogenesis

In the present investigations,the antitumorigenic effect of black tea polyhenols(BTP)in two-stage mouse skin model of carcinogenesis was studied.The animals were initated with a single“subcarcinogenic”topical dose(52μg/200μl acetone)of 7,12-dimethylbenzanthracene(DMBA).To evaluate the anti-tumour initiating activity,BTP was topically appied twice a week for three weeks prior to DMBA applications,followed by topical treatment with 12-o-tetradecanoyl phorbol-13-acetate(TPA)(5μg/200μl acetone,2x/wk.)as promoter.For eveluation of antitumor prmotin activity,BTP was applied prior to each treatment of TPA.BTP application showed marked inhibitory effect as antitumour initiator as well as antitumour promoter in mouse skin model o two-stage carcinogenesis.Since initiation involves genetic pathway and tumour prmotion involves epigenetic pathway,it seems that BTP exerts its antitumorigenic effect by altering both genetic and epigenetic pathways.     

Effects of gossypol on phorbol ester-calcimycin-induced prostaglandin synthesis by macrophages.

Arachidonic acid metabolism via cyclooxygenase pathway in mouse resident peritoneal macrophages were stimulated by phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA), calcimycin and exogenous arachidonic acid, respectively. Racemic, (-) and (+)-gossypol dose-dependently inhibited PMA or calcimycin-induced synthesis of prostacyclin, thromboxane A2 and prostaglandin F2 alpha, but failed to affect arachidonic acid-induced synthesis of prostaglandin. It is suggested that both (-)-gossypol and (+)-gossypol inhibit synthesis of prostaglandin at the level of arachidonic acid release, and the inhibition of prostaglandin synthesis by gossypol might not be the main mode of its antifertility action.

     

促癌作用和促癌剂

<正> 癌发生的二阶段学说是四十年前Beren-blum 根据下述实验事实提出的。首先在小鼠背部皮肤上涂布一次微量(不致于致癌的量)的致癌剂,比如10-100微克的二甲基苯并(α)蒽(7,12-dimethylbenz[α]anthracene,DMBA),然后再用巴豆油或其主要成分12-0-+四酰佛波-13-乙酸酯(12-0-tetrade-canoylphorbol-13-acetate,TPA)每周涂布二次,持续涂布,几乎所有小鼠都发生肿瘤。然而,无论是只微量涂布一次DMBA 或反复涂布巴豆油,还是先涂布巴豆油然后再涂布微量致癌剂都不会引起肿瘤发生。涂布一次致癌剂(如微量DMBA)所发生的变化是正常细胞转变为     

通过单细胞测序分析瘢痕相关巨噬细胞影响肝星状细胞活化的分子机制

目的 建立体外诱导人巨噬细胞为瘢痕相关巨噬细胞(scar-associated macrophages, SAMs)的实验方案,研究SAMs使肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSCs)活化的分子机制。方法 利用已发表的人和小鼠纤维化肝组织非实质细胞的单细胞测序数据,分析SAMs中纤维化相关功能基因的表达。使用佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯(phorbol-12-myristate-13-acetate, PMA)和纤维蛋白溶酶原(plasminogen, PLG)把人单核细胞系THP-1诱导成为SAMs。收集SAMs培养上清与人HSCs细胞系LX-2共培养。采用实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)的方法检测SAMs标志物、纤维化相关功能基因和HSCs活化标志物的表达。结果 单细胞测序结果显示,不同病因造成的小鼠纤维化肝组织或肥胖患者损伤肝组织中均存在SAMs,且均高表达其标志基因和纤维化相关基因SPP1、CTSD。联合使用PMA及PLG使THP-1的SAM...     

12-去氧大戟二萜醇酯类化合物对人血小板的聚集作用

大戟二萜醇酯类化合物是强的促肿瘤剂和致炎剂,而血小板的聚集是研究炎性介质释放的一种简单模型。12-0-十四酰基-大戟二萜醇-13-乙醇酯(TPA)可引起血小板聚集。作者研究了十个与TPA类似的酯对血小板聚集的作用,并和TPA的聚集作用作了比较。取男性血置于柠檬酸钠中,离心制成富有血小板的血浆(PRP)。酯溶于0.5％丙酮,配成0.05～10微克分子浓度(μM),然后与血浆混合,检测对血小板的聚集作用(0.5％丙酮溶液不引起血小板聚集)。     

Antitumor Activity of Diallyl Suifide in Two—Stage Mouse Skin Model of Carcinogenesis

It has been reported that diallyl sulfide (DAS),a sulfur-containing volatile compound in garlic(Allium sativum),exerts and ticarcinogenic activity in various rodent tumor models.In the present sutdy,,the antitumor property of DAS was tested in Swiss albino mice in the two stage initiation-promotion mouse skin carcinogenesis.Skin cancers were initiated topically with a single subcarcinogenic dose(52μg)of 7,,12-dimethyl benz(a)anthracene(DMBA).Promotions was performed by twice weekly applications of 12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate m(TPA)at a dose of 5μg/animal for 32 weeks.DAS was applied topically(250μg/animal) thrice weekly for 3 weeks for anti-initiating and 1 h prior to each promotion treatment for anti-promoting studies.The results showed that the treatment schedule of DAS can effectively delay the oneset of tumorigenesis and reduce the cumulative number of tumors and the average number of tumors per mouse.In groups in which DAS applied prior to initiation or promotion,a significant population of the animals remained tumor-free till the termination of experiment.These findings suggest that DAS can effectively inhibit chemically induced mouse skin carcinogenesis.     

佛波酯等3种促癌物诱导BALB/c 3T3细胞骨桥素基因表达升高

目的探讨促癌物佛波酯(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate,TPA),岗田酸(okadaic acid,OA)和氯化镉(cadmium chloride,CdCl2)在促进BALB/c 3T3细胞转化过程中对骨桥素基因(OPN)转录表达的影响.方法以N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)为启动剂,TPA,OA和CdCl2分别为促癌剂,建立BALB/c 3T3细胞转化模型.采用小鼠毒理基因芯片分别检测促癌物处理过程中和转化细胞集落中的基因表达变化,同时采用实时RT-PCR验证部分细胞样本的OPN基因表达.结果基因芯片检测结果显示,3种促癌物在作用过程中均能诱导OPN基因表达升高,其中TPA处理后4 h,7 d和17 d,OA处理后3,7 d和24d,CdCl2处理后3 d和7 d,OPN基因的表达较对照组增强;同时在促癌物诱导形成的9个转化细胞集落中,有8个转化集落检测到OPN基因表达升高.此外,实时RT-PCR检测也验证了OPN基因的表达升高.结论OPN基因与TPA,OA和CdCl2的促癌作用存在密切联系.     

EFFECT OF PHORBOL ESTER ON cAMP-DEPENDENT PROTEIN KINASE ACTIVITY IN CARDIOMYOCYTES

Cardiomyocytes isolated from neonatal rats were treated with phorbol-12-myristate-13-acetate(PMA) ranging from 10^-11 to 10^-7mol/L for 20 min,causing cytosol protein kinase A (PKA) activity to decrease while particulate PKA activity increase in a concentration-dependent manner.The change of PKA activity induced by PMA was abolished completely by pretreatment of polymyxin B or depletion of protein kinase C (PKC).Type Ⅱ PKA activity in particulate fraction was enhanced remarkably,while that of type I PKA was not altered when the cells were treated with 100 nmol/L PMA.The results suggested that subcellular distribution and activity of PKA in cardiomyocytes may be regulated by PKC.     

卡波济肉瘤相关疱疹病毒体外感染人牙龈成纤维细胞初探

目的:探索卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)体外感染人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblast,HGF)的途径和方法,为研究KSHV导致口腔卡波济肉瘤病变的机制提供依据。方法:用12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酯(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate,TPA)刺激人原发性渗出性淋巴瘤(primary effusion lymphoma,PEL)细胞系的BC-3细胞,收集细胞上清(含KSHV病毒颗粒),感染HGF细胞。观察细胞病变效应(cytopatric effect,CPE),采用RT-PCR和Western blot分别检测HGF细胞内KSHV编码基因的转录情况和蛋白表达水平。结果:KSHV感染HGF细胞后可出现CPE;感染后采用RT-PCR可检测到不同时间点ORF26和ORF73基因的转录;感染后12 h可检测到vIL-6蛋白的表达。结论:KSHV可感染HGF细胞并建立潜伏感染,为进一步研究KSHV导致的口腔KS发病机制提供了较好的体外模型。     

人成骨细胞株HOS TE85致瘤性转化的研究

目的建立人成骨细胞株HOS TE85致瘤性转化的模型, 作为骨肉瘤癌变过程细胞分子生物学研究的模型.方法通过克隆形成率实验确定N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N′-nitro-N-nitrosoguanidine, MNNG)对HOS TE85细胞转化浓度后,以MNNG作启动剂,佛波酯(12-0-Te-tradecanoyl phorbol 13-acetate, TPA)作促进剂对其进行转化,66 d后通过细胞形态、软琼脂集落形成实验和裸鼠体内致瘤实验鉴定细胞转化程度.结果经MNNG和TPA协同处理HOS TE85细胞66 d后,细胞中出现形态异常的转化灶,转化灶细胞失去接触抑制;转化细胞凝集性增强;软琼脂克隆形成率明显增加;转化细胞在裸鼠皮下成瘤,病理组织学证实为低分化骨肉瘤.结论模拟人体细胞发生恶性转化的过程,建立了HOS TE85的恶性转化模型.     

卵泡抑素相关基因3对肿瘤相关巨噬细胞在乳腺癌增殖、迁移和侵袭中的机制研究

目的 探究卵泡抑素相关基因3(follistatin-related gene 3,FSTL3)对肿瘤相关巨噬细胞（tumour-associated macrophages,TAMs）在乳腺癌增殖、迁移和侵袭中的作用及其相关机制。方法 收集2018年3月至2021年3月在海军军医大学第一附属医院21例乳腺癌患者的肿瘤及其癌旁组织,并提取巨噬细胞。使用佛波酯（phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA）、PMA/干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)和PMA/白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)诱导THP-1为初始、M1型和M2型巨噬细胞,分别为PMA组、PMA/IFN-γ组、PMA/IL-4组;采用脂质体转染法将si-FSTL3、si-NC转染至THP-1,再使用PMA/IL-4诱导转染后的THP-1,分别为si-FSTL3组、si-NC组。采用流式细胞术鉴定巨噬细胞分型。通过实时荧光定量聚合酶链式反应（quanlitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR）和West...     

TPA对人食管癌Eca109细胞增殖和细胞核形态的影响

目的 研究佛波酯（12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate，TPA）对人食管癌细胞的影响。方法 细胞增殖试验采用MTT法和细胞计数的方法，细胞核形态的测量采用计算机辅助的图像分析系统，分别测量计算细胞核面积（NA）、核周长（NP）、最大直径（Dmax）、最小直径（Dmin）、核浆比（NPA）、核轴比（NAR）、核形状因子（NRF）等。结果 TPA没有抑制人食管癌Eca109细胞增殖和改变细胞核形态。结论 TPA对人食管癌Eca109细胞可能没有促分化作用。     

TPA促进小鼠毛囊中TCF3的表达

目的 检测12-O-十四烷酰佛波醋酸酯-13 (TPA)处理C57 BL/6( B6)小鼠背部皮肤后TCF3表达的变化情况.方法 采用免疫荧光染色、RT-PCR和Western blot等技术,检测TPA和丙酮分别处理7周大小的B6鼠背部皮肤1、2和4周后TCF3的表达情况.结果 与丙酮处理组相比,TPA处理组中B6鼠...     

人永生化成骨细胞hFOB1.19恶性转化的研究

目的 建立人胚永生化成骨细胞系(hFOB1.19)的恶性转化模型, 作为骨肉瘤癌变过程细胞分子生物学研究的模型.方法 通过克隆形成率实验确定N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine, MNNG)对hFOB1.19细胞转化浓度后,以MNNG作启动剂,佛波酯(12-0-Te-tradecanoyl phorbol 13-acetate, TPA)作促进剂对hFOB1.19细胞进行转化,90 d后通过细胞形态、DNA含量分析、软琼脂集落形成试验和裸鼠体内致瘤试验鉴定细胞恶性转化程度.结果 经MNNG和TPA协同处理hFOB1.19细胞90 d后,细胞中出现形态异常的转化灶,转化灶细胞失去接触抑制; 高倍体细胞数,转化组(81.08%) 高于对照组(55.03%);软琼脂克隆形成率明显增加;转化细胞在裸鼠皮下成瘤,病理组织学证实为低分化骨肉瘤.结论 模拟人体细胞发生恶性转化的过程,建立了人胚永生化成骨细胞系的恶性转化模型.     

PMAIP1基因在恶性肿瘤中的研究进展

佛波醇-12-肉豆蔻酸-13-乙酸酯诱导蛋白-1(phorbol-12-myristate-13-acetate-induced protein 1,PMAIP1)是一种肿瘤抑制基因,是p53相关凋亡途径的重要介质。同时,PMAIP1也属于B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)家族中促凋亡的BH3-only亚家族成员之一,可以通过p53依赖途径或p53非依赖途径来影响细胞的增殖及凋亡过程,在肿瘤的发生、发展以及相应的治疗中发挥着重要作用。本文将对近年来PMAIP1基因在恶性肿瘤中的研究进展进行综述,以期为相应肿瘤的治疗带来一定的帮助。     

佛波酯对食管癌EC9706细胞NDRG_1表达及细胞增殖影响的研究

目的:探讨12-氧-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯(TPA)作用于食管癌细胞EC9706后,对NDRG1mRNA表达、细胞增殖、细胞周期的影响。方法:采用50nmol/L的TPA作用于EC9706细胞,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期的变化,原位杂交法检测NDRG1mRNA水平。结果:TPA能上调NDRG1mRNA水平,抑制EC9706细胞增殖,细胞周期发生G1→S期阻滞。结论:TPA可能通过上调NDRG1mRNA的表达而抑制EC9706增殖,促进其分化。     

泽泻化学成分的研究

目的研究泽泻Alisma orientalis干燥块茎中的化学成分。方法利用正相硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20、反相制备色谱等手段进行分离纯化,并通过1H-NMR、13C-NMR等波谱技术进行结构鉴定。结果从泽泻干燥块茎中分离得到了8个化合物,分别鉴定为泽泻醇A24-乙酸酯(alisol A 24-acetate,Ⅰ)、16,23-氧化泽泻醇B(16,23-oxidoalisol B,Ⅱ)、11-去氧泽泻醇B 23-乙酸酯(11-deoxy-alisol B 23-acetate,Ⅲ)、11-去氧泽泻醇C23-乙酸酯(11-deoxy-alisol C 23-acetate,Ⅳ)、alismol(Ⅴ)、阿曼托黄素(amentoflavone,Ⅵ)、2,2′,4-三羟基查耳酮(2,2′,4-trihydroxy chalcone,Ⅶ)、β-谷甾醇(β-sitosterol,Ⅷ)。结论化合物Ⅵ和Ⅶ为首次从该属植物中分离得到。     

蛋白激酶C在脂多糖致心肌细胞骨架结蛋白损伤中的作用

目的 观察脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)对心肌细胞结蛋白(desmin)结构形态和数量的影响,并探讨蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)信号通路在LPS作用过程中起的作用.方法体外培养Wistar乳鼠心肌细胞,随机分为4组,分别是正常对照组、LPS组(100ng/ml LPS)、Calphostin C处理组(40mmol/L Calphostin C 100ng/ml LPS)和12-o-十四烷酰佛波醋酸酯-13(12-o-tetradecanoylphorbol-13-acetate, TPA)处理组(100mmol/L TPA),每组分别处理6h和8h.使用免疫荧光技术标记心肌结蛋白,在共聚焦显微镜下观察细胞内结蛋白的结构、分布并计算细胞内结蛋白荧光强度.结果正常对照组结蛋白均匀分布于除细胞核的胞质内,并在局部有明显的聚集增加,荧光强度为(45.57±2.96);LPS 6h组结蛋白分布和荧光强度与正常组相比差异无统计学意义,LPS 8h组结蛋白在细胞内分布与正常相比差异有统计学意义,且荧光强度显著减弱(31.33±2.23,P＜0.01);Calphostin C 6h和8h处理组的结蛋白分布以及荧光强度与正常组接近;TPA处理6h即可造成结蛋白荧光显著减弱(33.30±1.15,P＜0.01),且结蛋白有异常的纤维样聚集.结论 LPS可以影响心肌细胞内结蛋白的结构、分布和数量,并存在一定的时效关系,而Calphostin C可抑制LPS造成的心肌细胞骨架蛋白结蛋白的改变,而TPA则可在较短的时间内造成与LPS相似的结果,提示PKC可能参与了LPS对结蛋白破坏的过程.