苦瓜蛋白对K562／A02耐药逆转作用的研究

[目的]观察苦瓜蛋白对K562／A02细胞多药耐药的逆转及对PgP表达、功能的影响。[方法]采用CCK-8法测IC50,用流式细胞仪测定苦瓜蛋白对K562／A02细胞上P-gp表达及细胞内ADM潴留的影响。[结果]苦瓜蛋白能提高K562／A02对多种化疗药物敏感性,使P-gP蛋白表达下降,提高细胞内ADM的浓度。[结论]苦瓜蛋白能部分逆转K562／A02的耐药性,逆转机制与下调P-gP蛋白的表达有关。     

力达霉素抑制K562细胞增殖和诱导凋亡作用及其机制

目的: 研究力达霉素(LDM)对人慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨其机制。方法: 选取处于对数生长期的人CMLK562细胞,采用不同浓度(0.01、0.10和1.00nmol·L^-1)LDM处理48h,作为0.01、0.10和1.00nmol·L^-1LDM组,不加药物的正常细胞为对照组。台盼蓝染色观察各组K562细胞生长抑制率,MTT法检测细胞存活率,吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色法观察凋亡细胞的形态表现,AnnexinⅤ-FITC/PI双染结合流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞中caspase-3和caspase-8蛋白相对表达量。结果: 台盼蓝染色,LDM对K562细胞增殖有一定的抑制作用,各浓度LDM组细胞生长抑制率均高于对照组(P<0.05);MTT法检测,随LDM作用浓度的升高,细胞存活率下降,LDM对K562细胞作用的半数抑制浓度(IC₅₀)为(0.1±3.2)nmol·L^-1。AO/EB染色,荧光显微镜下观察到LDM能够引起细胞发生凋亡(胞质呈芽状突起,胞核碎裂成点状)。流式细胞术检测,各浓度LDM组K562细胞凋亡率均高于对照组(P<0.05)。Western blotting法检测,0.10和1.00nmol·L^-1LDM组K562细胞中caspase-8和caspase-3蛋白相对表达量明显高于对照组(P<0.01)。0.01nmol·L^-1LDM组K562细胞中caspase-8和caspase-3蛋白表达量与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。结论: LDM能够有效抑制K562细胞增殖,低浓度LDM可能通过上调细胞中caspase-8和caspase-3表达诱导K562细胞发生凋亡。     

汉防己甲素逆转白血病细胞株K562/A02耐药的机制

目的:研究汉防己甲素（TTD）对白血病细胞株K562/A02多药耐药(MDR)逆转的机理。方法：以白血病细胞系K562及其耐药细胞系K562/A02为TTD作用的靶细胞。细胞水平检测实验分5组（K562组、K562/A02组、K562+ADM组、K562/A02+ADM组和K562/A02+TTD+ADM组）,采用MTT法检测TTD对K562和K562/A02细胞的非细胞毒性剂量,流式细胞术检测细胞内阿霉素(ADM)的浓度,基因、酶学、蛋白水平检测实验分3组（K562组、K562/A02组和K562/A02+TTD组）,采用RT-PCR法检测mdr1 mRNA的表达,免疫细胞化学方法检测谷胱甘肽S转移酶π（GST-π）和拓扑异构酶Ⅱ（Topo Ⅱ）的表达水平,Western-blotting法检测P-糖蛋白（P-gp）和bcl-2表达。结果：1.562 5 mg•L^-1的TTD处理K562/A02细胞后,细胞内ADM的浓度较单用ADM组明显提高（P<0.01）;与空白对照组比较,K562/A02细胞内mdr1 mRNA/P-gp的表达量减少（P<0.01）;GST-π和TopoⅡ表达无明显变化;凋亡抑制基因bcl-2的表达量减少（P<0.01）。结论:TTD主要通过增加细胞内ADM浓度,下调mdr1/P-gp和bcl-2表达逆转耐药。     

索拉非尼诱导K562细胞凋亡机制的研究

目的：观察索拉非尼对BCR-ABL阳性细胞株K562的增殖、凋亡作用,探索多靶点抗肿瘤药物索拉非尼诱导K562细胞凋亡可能机制。方法： CCK-8法观察索拉非尼作用48小时后K562细胞增殖活力变化;AnnexinV/PI双染法索拉非尼对K562细胞株的早期凋亡诱导作用;PI单染法观察索拉非尼对K562细胞株晚期凋亡诱导作用。Hochest33342染色法观察索拉非尼所致K562细胞凋亡形态学变化。免疫印迹法（Western blotting）检测凋亡相关蛋白PARP变化。结果：索拉非尼以浓度依赖的方式抑制K562细胞株增殖、诱导细胞凋亡,凋亡相关蛋白PARP剪切。结论：PARP剪切为执行凋亡功能的casepase途径活化的一个标记,提示索拉非尼诱导K562细胞凋亡的机制同caspase级联反应活化有关,多靶点抗肿瘤药物索拉非尼用于治疗CML及伊马替尼耐药的CML具有潜在的应用前景。     

Thapsigargin逆转K562/A02细胞多药耐药性的实验研究

目的 探讨内质网Ca^2 -ATP酶抑制剂thapsigargin对白血病多药耐药细胞株K562／A02化疗敏感性的影响。方法 用MTT比色法检测K562／A02细胞耐药性、thapsigargin的增殖抑制活性及其对K562／A02细胞化疗敏感性的影响；丫啶橙(AO)／溴化乙锭(EB)染色荧光显微镜观察thapsigargin处理后K562／A02细胞形态改变；流式细胞仪(FCM)检测P-糖蛋白(P-gp)表达；荧光显微镜检测Pgp功能。结果 ①thapsigargin对K562和K562／A02细胞的增殖抑制活性呈剂量和时间依赖性，K562／A02细胞较K562细胞对thapsigargin更敏感，thapsigargin诱导K562／A02细胞呈现典型的凋亡细胞形态学改变。②K562／A02细胞对阿霉素(ADM)、柔红霉素(DNR)、长春新碱(VCR)、依托泊苷(VP-16)、高三尖杉酯碱(HHT)和米托蒽醌(MXT)均出现不同程度的耐药性；thapsigargin抑制K562／A02细胞P-gP功能而对其表达无影响，thapsigargin能增加K562／A02细胞对ADM、DNR、VCR、VP-16、HHT和MXT的化疗敏感性。结论 Thapsigargin能诱导白血病多药耐药细胞株K562／A02细胞凋亡并能部分逆转K562／A02的多药耐药性；thapsigargin的多药耐药逆转功能可能与其凋亡诱导作用和抑制PgP功能有关。     

雷公藤甲素通过调节microRNA21的表达干预K562/A02细胞的化疗敏感性

目的: 研究雷公藤甲素对K562/A02细胞多药耐药性的逆转作用,并探讨其机制。方法: 四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测雷公藤甲素细胞毒性;采用非毒性浓度雷公藤甲素作用于K562/A02细胞,AnnexinV/PI双标法检测细胞凋亡;荧光定量PCR检测microRNA21表达水平;蛋白印迹法检测Bcl-2蛋白表达水平。microRNA21反义寡核苷酸转染K562/A02细胞,观察细胞增长率,凋亡率和Bcl-2表达的变化。结果: 非毒性浓度（5 nmol/L）雷公藤甲素明显增强K562/A02细胞对多柔比星的敏感性,并能增强多柔比星诱导细胞凋亡的作用,使K562/A02细胞平均凋亡率由4.3%明显上升到18.5%（P< 0.05）;雷公藤甲素作用后,microRNA21和Bcl-2蛋白水平降低;microRNA21反义寡核苷酸转染K562/A02细胞后,降低了Bcl-2表达,提高多柔比星敏感性和多柔比星诱导的细胞凋亡。 结论: 雷公藤甲素增强K562/A02细胞对多柔比星的敏感性,并诱导其凋亡,可能与下调microRNA21水平有关。     

MnSOD模拟化合物通过线粒体途径诱导K562／ADM细胞凋亡

目的:观察锰超氧化物岐化酶模拟化合物(Mn-SODm)对人白血病K562/ADM耐药细胞凋亡诱导作用,并探讨其分子机制.方法:采用AnnexinV/PI双标记和细胞形态学法检测K562/ADM细胞凋亡;流式细胞术(FCM)检测细胞Bcl-2,Bax蛋白表达水平、线粒体跨膜电位(△ψm),细胞色素c(Cyt c)含量和释放Caspase-3活性变化.结果:10,50 mg/LMnSODm处理K562/ADM细胞后,AnnexinV/PI染色显示凋亡细胞明显增多,凋亡率分别为85.1%,96.8%;光学显微镜和透射电镜观察呈现典型的凋亡形态改变;FCM检测发现Bcl-2蛋白表达下调32%～73%,Bax蛋白表达增高4～10倍;线粒体AOm释放降低35%～52%;Cyt c含量增高28%～75%;Caspase-3活性增强5.1～6.4倍.结论:MnSODm ke可抑制Bcl-2蛋白表达,促进Bax蛋白表达,并通过线粒体途径诱发K562/ADM耐药细胞凋亡.     

恶性造血细胞中P-gp 170表达的比较研究

目的:通过研究恶性造血细胞中P-糖蛋白(P-gp)170的表达,为骨髓增生异常综合征(MDS)治疗提供P-gp 170低表达的体外细胞株模型。方法:用含0.1 mmol.L-1阿霉素的RPM I 1640分别培养MDS细胞株MUTZ-1和多药耐药(MDR)红白血病细胞株K562/A02。用MTT法检测细胞的增殖抑制作用,光镜和电镜技术分别观察与阿霉素共同培养后的MUTZ-1细胞和K562/A02细胞形态和超微结构,流式细胞仪分别测定MUTZ-1细胞和K562/A02细胞P-gp 170表达水平。结果:0.1 mmol.L-1阿霉素对MUTZ-1细胞增殖呈时间依赖性抑制作用,而对K562/A02细胞的增殖没有影响;MUTZ-1细胞出现典型的凋亡形态学改变,K562/A02细胞表面呈现出许多长的微绒毛和许多微孔;K562/A02细胞与MUTZ-1细胞相比高表达P-gp 170。结论:P-gp 170在恶性造血细胞中表达有显著性差异,P-gp 170低表达的MUTZ-1细胞株可用于MDS治疗的体外研究模型,P-gp 170高表达的K562/A02细胞株可用于MDR逆转的体外研究模型。     

亚砷酸对白血病K562/A02细胞的作用及机制

目的研究亚砷酸对白血病多药耐药细胞株K562/A02细胞的作用及对多药耐药基因1（mdr1）、P糖蛋白（P-gp）和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,探讨亚砷酸逆转白血病多药耐药（MDR）的作用机制。方法将K562/A02细胞与不同浓度的亚砷酸（0、0.5、2.0、5.0μmol/L）共同孵育,分别在24、48、72h时,用Wrights染色法观察K562/A02细胞形态,流式细胞术（FCM）检测凋亡细胞,MTT法检测细胞增殖活性,RT-PCR法检测mdr1mRNA的表达,免疫组织化学法观察P-gp表达,并用ELISA法检测VEGF的浓度。结果随着亚砷酸作用浓度和时间的增加,K562/A02细胞的数目减少,并出现凋亡形态学改变,FCM显示随着作用浓度和时间的增加,细胞凋亡率逐渐上升;从作用48h组开始,mdr1mRNA及P-gp的表达出现显著降低（P〈0.05）,mdr1mRNA条带颜色较空白对照组明显变浅,mdrl/GAPDH灰度比值下降,此时,P-gp的灰度值上升,且随亚砷酸作用浓度和时间的增加,mdr1mRNA条带颜色进一步变浅,表达水平进一步下降;ELISA法检测表明从0.5μmol/L作用24h组开始,VEGF浓度即下降至405.02pg/mL（P〈0.05）,相同作用时间下以5.0μmol/L组较其它浓度组下调VEGF的作用最为显著。结论亚砷酸呈药物浓度-时间依赖性抑制K562/A02细胞增殖,诱导其凋亡,下调VEGF表达,有效抑制了mdrlmRNA的产生和P-gp的合成。     

Puerarin逆转K562/AO2耐药的分子机制

目的:研究黄酮类化合物puerarin对K562/A02(人红白血病多药耐药细胞系)细胞耐药逆转作用的分子机制.方法:免疫荧光染色方法检测阿霉素(ADR)和puerarin对K562(人红白血病细胞系)和K562/A02两种细胞NF-кB活性的影响;免疫细胞化学染色方法检测ADR和puerarin对K562和K562/A02的survivin表达的影响;流式细胞仪检测ADR和puerarin对K562和K562/A02的P-gP表达的影响.结果:经ADR处理后的K562细胞和K562/A02细胞NF-кB的活性明显高于K562细胞空白对照组;经puerarin预处理后再加ADR处理的K562细胞中的NF-кB的活性明显低于只用ADR处理的K562细胞.经puerarin干预后的K562/A02细胞的NF-кB的活性明显低于未经puerarin干预的K562/A02细胞;经ADR处理后的K562细胞和K562/A02细胞的p-gP,survivin表达明显高于K562细胞空白对照组;经puerarin预处理后再加ADR处理的K562细胞中的p-gp,survivin表达明显低于未经pu-erarin预处理的K562细胞;经puerarin干预后的K562/A02细胞的p-gp,survivin表达明显低于未经puer-arin干预的K562/A02细胞.p-gp和survivin表达呈正相关.结论:NF-кB的活化使p-gp和survivin表达增多可能是K562细胞多药耐药形成的机制之一.Puerarin能预防和阻止K562细胞耐药形成,并能逆转K562/A02对ADR的耐药,其机制与抑制NF-кB活性及survivin和p-gp的表达有关.     

白藜芦醇对人宫颈癌SiHa细胞增殖与凋亡作用的影响

目的：探讨白藜芦醇（Res）诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡的作用及可能的机制．方法：MTT法检测不同浓度（0,12．5,25,50,100,200,300,400和600μmol／L）Res处理24,48和72h对SiHa细胞的抑制率;流式细胞仪采用AnnexinV和PI双染检测细胞的凋亡率．荧光显微镜观测SiHa细胞的形态学改变．分光光度法检测Caspase-3活性．结果：Res在一定浓度范围内,以浓度和时间依赖的方式抑制宫颈癌SiHa细胞的生长（P〈0．05）．以0,200和300μmol／L Res处理细胞48h,SiHa细胞早期凋亡率分别为1．1％,8．9％和11．1％,晚期凋亡比例为3．1％,15．0％和14．0％．荧光显微镜下细胞呈现典型的凋亡性改变．200μmol／L Res处理8h后,Caspase-3活性增加,24h达高峰,后逐渐下降,经50,100和200μmol／L Res处理24h后,Caspase-3活性与对照组相比,分别增加了1．92倍,2．51倍和4．53倍（P〈0．05）．结论：白藜芦醇通过诱导Caspase-3活性增加以时间依赖和浓度依赖的方式抑制宫颈癌SiHa细胞增殖,诱导细胞凋亡．     

Annexin V-FITC／PI法检测脂多糖诱导滋养细胞的凋亡

目的：通过流式细胞术测定法检测脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）对滋养细胞凋亡的影响，明确LPS与滋养细胞凋亡的关系，为预防和治疗由滋养细胞凋亡导致的病理妊娠提供新的思路。方法：利用流式细胞仪Annexin V-FITC／H法检测不同浓度的LPS处理培养的JEG0细胞系滋养细胞的凋亡率分析。结果：流式细胞检测结果显示LPS组凋亡指数分别为（2．05±0．33）％、（7．43±0．68）％、（13．43±0．90）％显著高于对照组（0．80±0．15）％，且P均〈0．01。结论：Annexin V-FITC／PI法能特异地、准确地检出早期凋亡的细胞、继发性坏死的细胞；LPS能够诱导滋养细胞过度凋亡，且凋亡率随着LPS浓度的增加而增加。     

新生霉素衍生物FM-Nov17抑制慢粒白血病细胞增殖与其诱导DNA损伤的关系

目的研究新生霉素衍生物FM—Nov17抑制K562和K562／G01细胞增殖的作用与其诱导DNA损伤的关系。方法3－（4,5－二甲基噻唑－2）－2,5－二苯基四氮唑溴盐（MTT）及羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）染色法检测FM—Nov17对K562及K562／G01细胞增殖的影响;流式细胞光度术检测FM—Nov17诱导K562及K562／G01细胞DNA损伤、细胞周期阻滞和细胞凋亡;Westernblot探讨FM—Nov17对DNA损伤、细胞周期和细胞凋亡调控通路相关蛋白表达的影响。结果FM—Nov17在体外可明显抑制K562和K562／G01细胞增殖,半数抑制率（IC50）分别为（58．28±0．31）和（62．36±0．14）μmol／L,并减少K562及K562／G01细胞的增殖分裂代数;FM—Nov17能诱导细胞DNA损伤和阻滞细胞于G。／M期,并增加细胞凋亡率,呈剂量依赖关系;FM—Nov17能增加y-H2AX、ATM、P53的磷酸化水平以及Parp和Caspase3的切割,减少CDC25A和CDC25C的表达。结论FM—Nov17通过诱导DNA的损伤,阻滞细胞于G2／M期,激活线粒体凋亡通路,诱导细胞的凋亡,抑制K562和K562／G01细胞的增殖。     

Antitumor effect of betulinic acid on human acute leukemia K562 cells <Emphasis Type="Italic">in vitro</Emphasis>

The effects of betulinic acid (BA), a pentacyclic lupane-type triterpene, on the cell viability, cell cycle and apoptosis in human leukemia K562 cells were investigated. The effects of BA on the growth of K562 cells were studied by MTT assay. Apoptosis was assayed through Annexin V/propidium iodide (PI) double-labeled cytometry. The effects of BA on the cell cycle of K562 cells were studied by a PI method. The expression of Bax and capase-3 was detected by using Western blot. The results showed that BA was ...     

氧化苏木素抑制ABCB1介导肿瘤多药耐药活性的研究

目的探讨氧化苏木素对ABCBl介导的肿瘤多药耐药活性的影响抑制。方法MTT试验检测氧化苏木素对人白血病K562及其耐药K562／ADR（ABCBl高表达）细胞的细胞毒作用;AnnexinV／PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡的发生。结果氧化苏木素对耐药的K562／ADR细胞具有高效的细胞毒作用,氧化苏木素对K562和K562／ADR细胞的IC50值分别为（5．45±0．36）和（5．62±0．43）μmol／L,二者无显著性差异。流式细胞仪检测凋亡的结果显示：0、5、10、20Ixmol／L的氧化苏木素分别处理K62和K562／ADR细胞后。K562细胞的凋亡率从（3．41±0．55）％依次升高到（24．67±2．08）％、（40．33±3．51）％和（66．67±3．64）％,K562／ADR细胞的凋亡率从（2．82±0．57）％依次升高到（23．01±3．60）％、（38．23±4．06）％和（65．77±5．51）％。结论氢化苏木素克服了ABCBl介导的肿瘤多药耐药活性．诱导耐药细胞凋亡是茸作用的机制．     

三氧化二砷对耐药白血病细胞血管内皮生长因子和P-糖蛋白表达的影响

目的:研究三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)对K562/A02细胞表达血管内皮生长因子(vascular endo- thelial growth factor,VEGF)和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gP)的影响,并对VEGF和P-gp的相关性进行探讨。方法:用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测ATO对K562/A02细胞的增殖抑制率,酶联免疫吸附双抗体夹心法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定上清VEGF含量,流式细胞术测定P-gP表达率。结果:0.05μmol/L ATO对K562/A02细胞的增殖和VEGF的表达无明显影响;0.4、3.2μmol/L ATO则对K562/A02细胞有明显的增殖抑制作用和下调VEGF的作用(P<0.05)。P-gP经0.05、0.4μmol/L ATO处理24、48、72h后无明显变化(P>0.05),3.2μmol/L ATO处理48、72 h后可显著下调P-gP表达(P<0.05)。结论:ATO逆转K562/A02细胞多药耐药(multidrug resistance,MDR)的作用可能与其调控P-gP和VEGF的水平有关;K562/A02细胞VEGF水平与P-gP的表达率可能有一定的相关性。