截断型载脂蛋白E4对培养神经元细胞中神经细丝磷酸化的影响

背景:神经细丝的磷酸化程度与阿尔茨海默病的发生密切相关,载脂蛋白E4是阿尔茨海默病公认的易患因子,但载脂蛋白E4对神经元细胞内神经细丝磷酸化的影响及机制尚不十分清楚。研究显示在阿尔茨海默病患者脑组织和体外培养的神经元细胞中,载脂蛋白E4蛋白C末端的272～299位氨基酸残基可被水解截去,产生truncated-apoE4片段,且与阿尔茨海默病的特征性病理改变神经纤维缠结中的磷酸化神经细丝相互作用。目的:在细胞水平观察truncated-ApoE4过度表达对培养的神经元中神经细丝磷酸化的影响。设计:非随机对照实验观察。单位:华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系。材料:实验于2005/12在华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学实验室完成。小鼠成神经瘤贴壁生长细胞株N2a由许华熙博士提供。方法:构建pEGFP-T-apoE4真核表达重组体,采用脂质体介导的方法分别将pEGFP-c3、pEGFP-apoE4和pEGFP鄄T-apoE4瞬时转染小鼠成神经瘤细胞株(N2a),24～48h后,免疫印迹技术检测神经细丝的磷酸化状态,测定糖原合酶激酶3、细胞周期依赖性蛋白激酶5(CDK5)的活性。主要观察指标:神经细丝的磷酸化程度及糖原合酶激酶3、细胞周期依赖性蛋白激酶5的酶活性。结果:转染组细胞内磷酸化神经细丝含量显著增多,糖原合酶激酶3酶活性显著增加,以pEGFP-T-apoE4转染组最为显著(P<0.05),细胞周期依赖性蛋白激酶5酶活性与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05)。结论押Truncated鄄ApoE4过度表达可通过激活糖原合酶激酶3而非细胞周期依赖性蛋白激酶5引起成神经瘤细胞株(N2a)细胞中神经细丝过度磷酸化,提示truncated鄄ApoE4可能参与了阿尔茨海默病的病理过程。     

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5过度表达对神经细丝磷酸化的影响

背景：阿尔茨海默病的主要神经病理学特征之一是由过度磷酸化的细胞骨架蛋白（如6，神经细丝）组成的神经原纤维缠结，细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5可催化6蛋白的磷酸化，但神经细丝是否可被细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5磷酸化及其在阿尔茨海默病发病中的作用却知之甚少。目的：在细胞水平观察细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5过度表达对神经细丝磷酸化的影响。设计：随机对照实验。单位：华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系。材料：实验于2001—02／10在华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系实验室完成。观察对象为培养的鼠成神经瘤细胞株（N2a）细胞。方法：培养N2a细胞，分为2组，一组为转染组，一组为未转染组。转染组用脂质体转染技术将细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶．5基因转入N2a细胞株中，并建立稳定表达细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5的N2a／cdk-5细胞株，免疫沉淀法及酶活性测定检测细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5活性，免疫荧光和免疫印迹技术检测它的表达和神经细丝的磷酸化状态。主要观察指标：两组细胞内神经细丝磷酸化的程度。结果：在N2a细胞株转染组中，细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5表达增加，并使抗体SMI31显色增强，SMI32显色减弱，提示神经细丝被过度磷酸化。与此同时，细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5酶活性较未转染组提高3．5倍。结论：提示细胞水平的细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5过度表达会导致细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5过度激活和神经细丝过度磷酸化，而过度磷酸化的神经细丝可能参与了阿尔茨海默病的病理过程。     

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5过度表达对神经细丝磷酸化的影响(英文)

背景:阿尔茨海默病的主要神经病理学特征之一是由过度磷酸化的细胞骨架蛋白(如,神经细丝)组成的神经原纤维缠结,细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5可催化蛋白的磷酸化,但神经细丝是否可被细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5磷酸化及其在阿尔茨海默病发病中的作用却知之甚少。目的:在细胞水平观察细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5过度表达对神经细丝磷酸化的影响。设计:随机对照实验。单位:华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系。材料:实验于2001-02/10在华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系实验室完成。观察对象为培养的鼠成神经瘤细胞株(N2a)细胞。方法:培养N2a细胞,分为2组,一组为转染组,一组为未转染组。转染组用脂质体转染技术将细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5基因转入N2a细胞株中,并建立稳定表达细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5的N2a/cdk-5细胞株,免疫沉淀法及酶活性测定检测细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5活性,免疫荧光和免疫印迹技术检测它的表达和神经细丝的磷酸化状态。主要观察指标:两组细胞内神经细丝磷酸化的程度。结果:在N2a细胞株转染组中,细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5表达增加,并使抗体SMI31显色增强,SMI32显色减弱,提示神经细丝被过度磷酸化。与此同时,细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5酶活性较未转染组提高3.5倍。结论:提示细胞水平的细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5过度表达会导致细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5过度激活和神经细丝过度磷酸化,而过度磷酸化的神经细丝可能参与了阿尔茨海默病的病理过程。     

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5过度表达对神经细丝磷酸化的影响

背景:阿尔茨海默病的主要神经病理学特征之一是由过度磷酸化的细胞骨架蛋白(如(o),神经细丝)组成的神经原纤维缠结,细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5可催化(o)蛋白的磷酸化,但神经细丝是否可被细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5磷酸化及其在阿尔茨海默病发病中的作用却知之甚少.目的:在细胞水平观察细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5过度表达对神经细丝磷酸化的影响.设计:随机对照实验.单位:华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系.材料:实验于2001-02/10在华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系实验室完成.观察对象为培养的鼠成神经瘤细胞株(N2a)细胞.方法:培养N2a细胞,分为2组,一组为转染组,一组为未转染组.转染组用脂质体转染技术将细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5基因转入N2a细胞株中,并建立稳定表达细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5的N2a/cdk-5细胞株,免疫沉淀法及酶活性测定检测细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5活性,免疫荧光和免疫印迹技术检测它的表达和神经细丝的磷酸化状态.主要观察指标:两组细胞内神经细丝磷酸化的程度.结果:在N2a细胞株转染组中,细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5表达增加,并使抗体SMI31显色增强,SMI32显色减弱,提示神经细丝被过度磷酸化.与此同时,细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5酶活性较未转染组提高3.5倍.结论:提示细胞水平的细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5过度表达会导致细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5过度激活和神经细丝过度磷酸化,而过度磷酸化的神经细丝可能参与了阿尔茨海默病的病理过程.     

阿尔茨海默病与糖原合酶激酶3

目的：阿尔茨海默病具有神经原纤维缠结和tau蛋白的异常过度磷酸化两大病理特征，可导致神经细胞骨架异常并与神经元死亡有关。近来的一些理论提出了糖原合酶激酶3参与上述两大病理特征的形成，从而在阿尔茨海默病发病中具有重要作用的相关假设：资料来源：应用网络Medline检索1986／2002关于阿尔茨海默病的相关献，检索词：阿尔茨海默病(Alzheimer disease)，糖原合酶激酶3(glycogen synthase kinase-3)，tau蛋白。资料选择：选择关于糖原合酶激酶3与阿尔茨海默病发病关系的相关献，以非随机研究原和没有对照组的研究为纳入标准，未排除非盲法研究，排除重复性献和综述性献。资料提炼：在66篇献中，内容呈不同程度重复的有13篇，给予删除；对53篇献进行分类整理分析，其中33篇选用为参考献。资料综合：糖原合酶激酶3B能在大多数阿尔茨海默病相关位点磷酸化tau蛋白，本身的活性又同时受到蛋白激酶与蛋白磷酸酯酶的双重调节；糖原合酶激酶3β在引起tau蛋白异常过度磷酸化的同时，在细胞水平还引起神经元的调亡；整体实验也显示糖原合酶激酶3β可能导致轴突转运障碍。结论：糖原合酶激酶3β不但直接导致tau蛋白的异常过度磷酸化，使组织内出现类似于阿尔茨海默病患脑内神经原纤维缠结样细胞，同时又在细胞凋亡中发挥重要作用；加之其作用底物众多，调节途径复杂，不但是阿尔茨海默病发病的关键分子，而且尚可能是各种因素导致神经元损伤的交汇点。     

阿尔茨海默病与糖原合酶激酶3

目的:阿尔茨海默病具有神经原纤维缠结和tau蛋白的异常过度磷酸化两大病理特征,可导致神经细胞骨架异常并与神经元死亡有关。近来的一些理论提出了糖原合酶激酶3参与上述两大病理特征的形成,从而在阿尔茨海默病发病中具有重要作用的相关假设。资料来源:应用网络Medline检索1986/2002关于阿尔茨海默病的相关文献,检索词:阿尔茨海默病(Alzheimerdisease),糖原合酶激酶3(glycogensynthasekinase-3),tau蛋白。资料选择:选择关于糖原合酶激酶3与阿尔茨海默病发病关系的相关文献,以非随机研究原著和没有对照组的研究为纳入标准,未排除非盲法研究,排除重复性文献和综述性文献。资料提炼:在66篇文献中,内容呈不同程度重复的有13篇,给予删除;对53篇文献进行分类整理分析,其中33篇选用为参考文献。资料综合:糖原合酶激酶3β能在大多数阿尔茨海默病相关位点磷酸化tau蛋白,本身的活性又同时受到蛋白激酶与蛋白磷酸酯酶的双重调节;糖原合酶激酶3β在引起tau蛋白异常过度磷酸化的同时,在细胞水平还引起神经元的凋亡;整体实验也显示糖原合酶激酶3β可能导致轴突转运障碍。结论:糖原合酶激酶3β不但直接导致tau蛋白的异常过度磷酸化,使组织内出现类似于阿尔茨海默病患者脑内神经原纤维缠结样细胞,同时又在细胞凋亡中发挥     

糖原合成酶激酶3在阿尔茨海默病中的作用

糖原合成酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3,GSK-3)作为体内主要的蛋白激酶之一,广泛地参与了生长发育、凋亡衰老和肿瘤形成等重大生命过程。GSK-3β-Ser9和GSK-3α-Ser21位点的磷酸化修饰是机体对GSK-3活性调控的关键过程,GSK-3参与了tau蛋白过度磷酸化修饰、β淀粉样蛋白异常聚集和神经元凋亡等过程,因此对GSK-3活性调控的研究是阿尔茨海默病等神经退行性疾病的发病机制和相关治疗研究中的焦点问题之一。     

细胞周期素依赖性激酶-5研究进展

细胞周期素依赖性激酶-5属于小丝氨酸／苏氨酸周期素依赖性激酶家族成员，虽与其他成员序列具有同源性，但功能却完全不一样，即与细胞周期关系不大，却在中枢神经系统的发育和神经元正常功能的维持中发挥重要作用，并与一些退行性疾病及药物成瘾有密切联系，是神经系统中重要的蛋白激酶之一，可能成为防治中枢神经系统疾病的靶分子。现就细胞周期素依赖性激酶-5的一些最新研究进展进行综述。     

细胞周期素依赖性激酶-5研究进展

细胞周期素依赖性激酶 5属于小丝氨酸 /苏氨酸周期素依赖性激酶家族成员 ,虽与其他成员序列具有同源性 ,但功能却完全不一样 ,即与细胞周期关系不大 ,却在中枢神经系统的发育和神经元正常功能的维持中发挥重要作用 ,并与一些退行性疾病及药物成瘾有密切联系 ,是神经系统中重要的蛋白激酶之一 ,可能成为防治中枢神经系统疾病的靶分子。现就细胞周期素依赖性激酶 5的一些最新研究进展进行综述     

反义蛋白激酶Cγ寡核苷酸对原代培养大鼠脑神经元蛋白激酶Cγ mRNA表达与皮质和海马神经元增殖及神经突起生长的影响

目的:观察阳离子脂质体Lipofectamine介导的蛋白激酶CγAsODN对原代培养大鼠脑神经元蛋白激酶CγmRNA表达及生长的影响。方法:实验于2004-03/08在华中科技大学同济医学院附属同济医院完成。①实验分组:取新生50只SD乳鼠大脑皮质及海马神经元进行原代培养,分为正常对照组,空脂质体转染组,300nmol/L Lipofectamine-SODN转染组,100nmol/L Lipofectamine-AsODN转染组,300nmol/L Lipofectamine-AsODN转染组,每组10瓶。②实验方法:培养第4￣5天采用脂质体或脂质体包裹的不同浓度的AsODN或SODN蛋白激酶Cγ转染培养神经元。③实验评估:采用倒置显微镜对神经元的生长进行动态观察;免疫组化ABC法进行蛋白激酶Cγ阳性神经元的鉴定;MTT法检测神经元的增殖率;RT-PCR方法检测转染后神经元的蛋白激酶CγmRNA的表达变化。结果:①蛋白激酶Cγ阳性神经元呈胞浆内棕褐色染色,胞核不显色。②蛋白激酶CγAsODN转染早期呈现促进神经元突起生长,胞体分化的作用。随着反义浓度增加,相对生长指数值升高。而在转染晚期,ASODN蛋白激酶Cγ转染组凋亡率均明显增加。③AsODN蛋白激酶Cγ可降低神经元蛋白激酶CγmRNA的表达。结论:蛋白激酶CγAsODN可减少神经元蛋白激酶CγmRNA的表达,并刺激皮质及海马神经元的增殖及神经突起的生长,这可能与蛋白激酶Cγ对神经元的生长起负性调控作用有关。