PCR技术在前列腺液细菌检测中的应用

目的 应用聚合酶链反应(PCR)技术检测慢性前列腺炎患者前列腺液中病原菌的阳性率.方法 收集97例慢性前列腺炎患者的前列腺液,分别用16S rRNA基因PCR方法和细菌培养法进行检测,比较两种方法检测 病原菌的敏感性.结果 97例慢性前列腺炎患者前列腺液中,PCR方法检测出58例,阳性率为59.79％,培养法检出10例,阳性率为10.31％,PCR方法检出率明显高于培养法(P＜0.01).结论 16S rRNA基因PCR检测方法具有快速,特异性和敏感性高等特点.     

实时荧光PCR用于流感病毒检测的效果分析

目的探讨和研究实时荧光逆转录聚合酶链式反应在流感病毒检测中的应用效果。方法采用实时荧光PCR对617例流感样病例患者的咽拭子标本进行流感病毒核酸的测定,对检测出的阳性标本采用MDCK进行培养并分离,对两种方法的检测结果进行分析,对比特异性及灵敏度。结果本组617例标本中实时荧光PCR共检测出阳性标本152例,阳性率24.6%;细胞培养法在此152例阳性标本中共分离出流感病毒79例,阳性率12.8%,实时荧光PCR检测阳性率显著高于细胞培养法,差异具有统计学意义(P0.05)。结论实时荧光PCR能够快速有效的检测出流感病毒核酸,是实验室快速诊断的有效手段。     

荧光定量PCR法和显色培养法检测孕妇生殖道无乳链球菌感染阳性率比较

目的比较荧光定量PCR法和显色培养法检测孕妇生殖道无乳链球菌(GBS)感染阳性率,了解检测效果,分析两种方法的优缺点,选择合适的检测方法,提高GBS检出率,保护易感人群。方法应用荧光定量PCR法和显色培养法检测998例妊娠女性孕晚期生殖道GBS感染阳性率,与原有血平板培养法比较,评价这两种检测方法的结果。结果在998例样本中,血平板培养法检测出阳性标本28例,阳性率为2.81%,显色培养法检测出阳性标本61例,阳性率为6.11%,荧光定量PCR法检测出阳性标本84例,阳性率为8.42%。荧光定量PCR法与显色培养法检测GBS阳性率与血平板培养法比较差异均有统计学意义(P<0.05),荧光定量PCR法和显色培养法检测GBS阳性率比较差异也有统计学意义(P<0.05)。结论显色培养法和荧光定量PCR法检测GBS的检出率明显高于血平板培养法,其中荧光定量PCR法检测阳性检出率高于显色培养法。筛查孕妇生殖道GBS带菌情况可指导临床医生对该菌进行预防性治疗,更好地保护易感人群,选择荧光定量PCR法更具优势。     

肺炎支原体快速鉴定培养基应用于儿童呼吸道感染早期快速诊断的价值

目的探讨肺炎支原体(MP)快速鉴定培养基在儿童MP感染早期快速诊断中的价值。方法对东莞地区1053例急性呼吸道感染3-7天早期患儿的咽拭子标本同时应用MP快速鉴定培养法进行MP培养检测和PCR技术直接检测MP-DNA及ELISE法检测患儿血清中MP-IgM特异性抗体。结果1053例急性呼吸道感染患儿咽拭子标本中MP培养阳性215例,总阳性率为20.42%;用ELISE法检测患儿血清中MP-IgM阳性103例,阳性率9.78%;PCR技术检测MP阳性236,阳性率为22.41%。三种方法作对比性分析,病程早期MP培养和PCR技术检测阳性率无明显差异(p>0.05)。而MP快速鉴定培养和PCR技术检测阳性率远高于ELISA法直接检测血清中MP-IgM特异性抗体有显著差异(p<0.05)。结论MP快速液体培养法简便快捷,对儿童MP感染的早期诊断治疗具有重要的参考价值,适合一般实验室和基层医院开展应用。     

聚合酶链反应技术与分离培养法在脊柱结核诊断中的对比研究

目的比较聚合酶链反应技术(PCR)与分离培养法在脊柱结核诊断中的检出效果。方法应用PCR技术与分离培养法检测脊柱结核和非骨结核标本各24份,比较两种方法检出效果。结果24例脊柱结核标本阳性率:PCR法为91.67%,分离培养法为20.00%,PCR法检出率优于培养法,差异有显著性(P<0.05)。24例非骨结核分离培养法均为阴性,PCR法阳性率为9%。结论PCR技术检测脊柱结核具有快速、敏感等优点,对脊柱结核的早期诊断具有重要意义。     

多重聚合酶链式反应在脓毒血症病原体检测中的应用

目的探讨多重聚合酶链式反应(PCR)在脓毒血症病原体检测中的灵敏度、特异性及检测时间,为多重PCR在脓毒血症病原体检测中的应用提供理论依据。方法采用多重PCR和血培养检测医院40例脓毒血症患者血液中的病原体,并比较两种检测方法的灵敏度、特异性、检测速度、检测菌种的差异,并以同期40名健康体检者血标本作为对照;采用SPSS 15.0软件进行数据处理,检测阳性结果以率的形式表示,并进行χ2检验。结果对照组中两种方法的阳性率差异无统计学意义,脓毒血症组多重PCR检测的阳性率为55.0%,血培养为82.5%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05),且血培养检测出18例脓血症患者中共有11例PCR检测为阳性,占61.1%;多重PCR特异性为80.7%,灵敏度为95.7%;脓毒血症组多重PCR的平均检测时间为(6±0.56)h,血培养法为(30.78±1.45)h,差异有统计学意义(P<0.05);从22份阳性血培养中共分离出4种病原菌,分别为金黄色葡萄球菌10株、铜绿假单胞菌7株、鲍氏不动杆菌3株、表皮葡萄球菌2株,多重PCR均能检测上述病原菌的DNA。结论在脓毒血症病原学的检测中,多重PCR较血培养具有更高的敏感性和特异性,检测时间也较血培养明显缩短,有利于脓毒血症病原体的快速检测,指导临床用药。     

16SrRNA基因检测在自发性腹膜炎快速诊断中的应用价值

目的探讨运用16S rRNA基因检测技术在快速诊断自发性腹膜炎的临床价值。方法针对16S rRNA区域的恒定区,设计一条通用引物,对已知病原菌、人类基因组DNA、巨细胞病毒和白色假丝酵母菌进行PCR扩增,检验方法的特异性,用倍比稀释法检测方法的灵敏性。然后用此方法检测自发性腹膜炎患者的腹水样本,并与培养法进行比较分析。结果已知病原菌均扩增出了特异产物,人类基因组DNA、巨细胞病毒和白色假丝酵母菌无相对应产物,PCR敏感性可达1 pg大肠杆菌DNA。69例腹水样本PCR方法检测阳性率为33.3%,培养法阳性率为14.5%,PCR法阳性率显著高于培养法(P0.05)。结论 16S rRNA基因检测技术具有检测时间短、敏感性高、结果准确可靠等优点,具有重要的临床应用价值。     

微型寡核苷酸芯片检测脑脊液病原菌研究与应用

目的建立快速检测脑脊液标本中常见病原菌的微型寡核苷酸芯片。方法根据脑脊液中常见病原菌16S rRNA基因序列设计通用引物和检测探针;探针固定于尼龙膜上制成寡核苷酸芯片;通用引物扩增病原菌DNA并标记生物素,产物与芯片进行反向杂交检测;对该体系的敏感性和特异性进行了测试,并检测了32例临床病原菌感染的脑脊液标本。结果所有实验菌株均只与芯片上相应探针杂交。该法最低可检测出10 CFU/ml的大肠埃希菌;32例临床本的检测结果与常规鉴定法完全一致。结论该寡核苷酸芯片法能够准确、敏感、快速地检测脑脊液标本中的病原菌。     

脑膜炎奈瑟菌检测及基因分群

目的 建立多重聚合酶链反应(PCR)技术对脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)的快速诊断及分群方法.方法 应用多重PCR技术对本实验室保存的70株已鉴定Nm进行核酸鉴定及基因分群,同时检测23例流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)疑似病例脑脊液标本中脑膜炎奈瑟菌特异性DNA片段.用传统的细菌培养法和血清凝集法作对照,比较其特异性.结果 68株Nm的多重PCR检测结果与血清分群结果一致,2株血清未能分群的Nm经多重PCR检测为C群;23例流脑疑似病例脑脊液标本经多重PCR检测有5例为C群,1例为A群,1例为B群,阳性检出率为30.43％.传统的病原分离培养、生化鉴定和血清学鉴定出4例为C群,阳性检出率为17.39％.结论 多重PCR技术对脑膜炎奈瑟菌检测的特异性优于传统的细菌培养法以及血清凝集法.     

实时荧光核酸恒温扩增技术在淋球菌检测中的应用评价

目的评价实时核酸恒温扩增检测技术(SAT)在淋球菌检测中的应用价值。方法对204例疑似淋球菌感染患者的生殖道拭子分别进行SAT、PCR法及培养法检测,同时对其尿液标本进行SAT检测。分别对生殖道拭子和尿液标本SAT检测结果与生殖道拭子PCR法和培养法检测结果进行比较分析。结果 204例疑似患者拭子标本中,SAT法检出阳性90例,高于培养法而略低于PCR法,但阳性率差异均无统计学意义(P0.05)。其中有3例患者拭子标本SAT检测阳性而尿液标本检测为阴性,符合率为98.53%,两者阳性率差异无统计学意义(P0.05)。以淋球菌培养为金标准,SAT检测拭子标本的敏感度为100%,特异度为91.94%;SAT检测尿液的敏感度为98.77%,特异度为94.31%。结论SAT技术检测拭子及尿液标本中的淋球菌与生殖道拭子PCR法和培养法效果相当,且尿液标本SAT检测作为一种非侵入性采样方法有望替代生殖道拭子标本检测。     

多重聚合酶链反应检测儿童常见下呼吸道感染细菌

目的 探讨多重聚合酶链反应(PCR)检测儿童急性下呼吸道感染细菌的应用价值.方法 对383例急性下呼吸道感染患儿的深部呼吸道吸引物进行细菌培养及多重PCR检测,检测肺炎链球菌、流感嗜血菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、嗜肺军团菌、铜绿假单胞菌等9种病原菌.结果 细菌培养的总检出率为42.04％,多重PCR检出率45.95％,两者差异无统计学意义;以细菌培养为标准,多重PCR检测的总敏感性为77.02％,特异性为76.58％,其中大肠埃希菌和表皮葡萄球菌的检出率明显高于培养法.结论 多重PCR检测可作为下呼吸道致病菌快速检测的有用工具.     

多重半套式聚合酶链反应在检测脑脊液病原菌中的应用

目的：建立多重半套式聚合酶链反应（PCR）快速检测脑脊液标本中常见的病原菌。方法：通过对病原菌16S rRNA基因保守区和变异区的序列分析，设计通过引物及革兰阴性菌、革兰阳性菌的特异性引物，分别作为外、内侧引物，对脑脊液标本中不同细菌的DNA进行多重半套式PCR扩增；同时与常规细菌培养法作比较，并检测了该方法的敏感性。结果：外侧扩增后革兰阳性菌、革兰阴性菌经扩增后均有长约1032bp的片段产生；内侧扩增两种细菌除1032bp的产物外，革兰阳性菌另有一336bp的特异性产物，革兰阴性菌另有一127bp的特异性产物。该方法最低可检测出8cfu/ml的大肠埃希菌；62份脑脊液标本扩增结果与培养法相比，敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预没值分别为93．8％、5．7％、88．2％、97．8％。结论：多重半套式PCR方法能特异、敏感、快速地检测出脑脊液感染的常见病原菌。     

一起不典型症状宋内志贺菌暴发疫情的实验室诊断

目的分析本实验室对1起由宋内志贺菌引起的不典型临床症状、疑似不明原因发热暴发疫情的实验室检测过程,为类似事件的实验室诊断提供参考。探讨通过增菌前后Ct值变化,荧光PCR用作病原菌确诊方法的可能性。方法采用总大肠菌群酶底物法测定总大肠菌群和大肠埃希菌,常规培养法和荧光PCR法测定患者咽拭和肛拭样品以及水样中病原微生物,用MIC法对分离菌株进行体外药敏试验。结果 10份饮用水中6份总大肠菌群和大肠埃希菌,不符合GB5749-2006的要求。常规培养9份肛拭均检出宋内志贺菌,而10份水样均未检出肠道致病菌。荧光PCR结果 9份肛拭和5份水样检出志贺菌核酸,5份水样增菌后Ct值较增菌前有明显下降。肛拭中分离的9株菌对青霉素类抗生素中的阿莫西林、哌拉西林、替卡西林100%耐药,对磺胺类、β-内酰胺类、头孢菌素类(1-4代)、氨基糖苷类等存在不同程度耐药。结论实验室应用指标菌检测、常规培养和荧光PCR技术,48 h即找到引起疫情暴发的原因,为疫情的控制提供了及时科学的依据。药敏试验为患者治疗提供了正确的药物选择依据。     

应用实时荧光聚合酶链反应检测婴幼儿腹泻标本中的腺病毒

目的 建立实时荧光聚合酶链反应(Real-time PCR)方法检测腺病毒,并分析浙江省温州地区散发性婴幼儿腹泻患者不同型别腺病毒的感染情况.方法 根据GenBank中腺病毒六邻体基因序列设计一对通用引物,建立Real-time PCR方法检测婴幼儿腹泻标本中腺病毒DNA,并与免疫层析法比较;同时对Real-time PCR方法 检测阳性的标本进行PCR产物测序和病毒分离培养及酶切鉴定.结果 建立快速、特异检测婴幼儿腹泻标本中腺病毒DNA的Real-time PCR技术.157份婴幼儿腹泻标本中免疫层析法检测阳性3份,阳性率为1.91%;Real-time PCR检测阳性5份,阳性琦率为3.18%(5/157);154份免疫层析法检测阴性标本中,有2份Real-time PCR法检测为阳性.5份Real-time PCR检测阳性标本经测序鉴定,Ad3型占1.91%(3/157),Ad7型占1.27%(2/157);经病毒分离培养检出阳性2例,酶切鉴定为Ad3型.结论 Real-rime PCR技术结合PCR产物直接测序分析具有敏感、特异等优点,适用于腹泻标本中腺病毒的检测及分型.2008年2-4月浙江省温州地区散发性婴幼儿腹泻的腺病毒主要为Ad3型和Ad7型.     

应用通用引物PCR检测诊断细菌和真菌性中枢神经系统感染的价值

目的了解细菌和真菌性中枢神经系统（CNS）感染病原谱,并探讨通用引物聚合酶链反应（PCR)检测技术的病原学诊断价值。方法收集某院2009年1月—2015年3月疑似或确诊CNS细菌或真菌性感染患者资料,分析其脑脊液培养病原菌种类,采用细菌16S rRNA和真菌28S rRNA通用引物对患者脑脊液DNA进行PCR扩增和序列测定,并与同期脑脊液培养及鉴定结果进行比较。结果共收集确诊或疑似CNS细菌或真菌感染者400例,其中脑脊液培养阳性132例。共分离病原菌150株,其中革兰阳性菌48株,革兰阴性菌90株,真菌12株;居前3位的细菌为鲍曼不动杆菌（32株）、凝固酶阴性葡萄球菌（16株）和肺炎克雷伯菌（13株）;最常见真菌为新生隐球菌（8株）。选取88份感染患者脑脊液标本和20例非感染患者脑脊液进行PCR扩增,PCR扩增法灵敏度（35.23％,31/88）高于培养法（28.41%,25/88）（χ2＝4.17,P＜0.05）。PCR扩增和培养法阴性预测值分别为25.97%、24.10%,两种方法的特异度、阳性预测值均为100.00%。PCR扩增测序与培养结果符合率为84.00%（21/25）;PCR检测平均报告时间（48 h）较培养结果报告时间（细菌平均约72 h,真菌平均约96 h）更快速。结论CNS 感染病原分布广泛,以革兰阴性菌为主;通用引物PCR检测具有快速、灵敏、准确等特点,具有良好的临床推广和应用价值。     

Evaluation of a multiplex PCR system for simultaneous detection of Salmonella spp., Listeria monocytogenes, and Escherichia coli O157:H7 in foods and in food subjected to freezing

Conventional culture methods were compared to a multiplex polymerase chain reaction (PCR) assay for simultaneous detection of Salmonella spp., Listeria monocytogenes, and Escherichia coli O157:H7 from enrichment cultures of various types of artificially inoculated and naturally contaminated foods. The multiplex PCR assay was evaluated in 44 types of spiked food samples, including meat, produce, fish, and dairy products targeting genes specific for each pathogen for simultaneous detection. The sensitivity of the assay was 相似文献   

Sale of raw milk in northern Italy: food safety implications and comparison of different analytical methodologies for detection of foodborne pathogens

The safety of raw milk sold in Northern Italy was investigated in relation to hygiene quality parameters and presence of Salmonella spp., Listeria monocytogenes, thermotolerant Campylobacter, and Verocytotoxin producing Escherichia coli O157:H7. The performance of different analytical methods used-official culture method (ISO), modified Bacteriological Analytical Manual cultural method (mBAM), and polymerase chain reaction (PCR)-was evaluated. The presence of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map) was investigated only by PCR. All samples met regulations for alkaline phosphatase and inhibitory substance, while 18% and 44.8% of samples collected from vending machines had, respectively, somatic cell count (SCC) >300,000/mL and total bacterial count (TBC) >50,000?CFU/mL. The correlation between hygienic quality parameters in samples collected from bulk tank and vending machines showed a significant increase of TBC in vending machines meaning that raw milk was mishandled during distribution and sale. All pathogens investigated were detected in raw milk sold at vending machines; a total of five samples (5%) had at least one pathogen, of which two were detected by PCR and three by mBAM. None of the samples was positive by cultural ISO methods. Even if the comparison of analytical methods showed that none performs significantly better than the others, testing a higher volume of milk (25 versus 210?mL) affects significantly the detection rate of pathogens. Three samples (3%) were positive for Map, suggesting that raw milk is a significant source of Map exposure for consumers. The observed TBC increase and the detection of several pathogenic bacteria pose questions on the safety of raw milk; the use of ISO seems inefficient in detecting a low contamination level of pathogens in milk and consequently not appropriate as official method for testing. In order to ensure consumer's safety, a new approach for the raw milk chain is required.     

细菌核糖体23 S亚单位基因芯片在感染性疾病快速诊断中的应用研究

目的研究建立快速检测细菌DNA的方法,建立含有10种细菌探针的检测用基因芯片模型. 方法使用合成的扩增细菌核糖体23 S亚单位(23S rDNA)寡核苷酸探针,制备基因芯片;设计23S rDNA通用引物,应用PCR(聚合酶链反应)法,扩增细菌核糖体23S亚单位基因(23S rDNA),扩增后产物与芯片上的探针杂交,用荧光扫描仪检测信号;对23种临床常见致病菌、培养物及临床病例标本采用本方法进行检测,并与常规细菌培养法比较. 结果基因芯片检测临床致病菌具有较高的特异性和灵敏性. 结论利用寡核苷酸探针基因芯片检测系统具有一定的种属鉴别能力,比常规培养法快速、准确.     

Malassezia pachydermatis carriage in dog owners

Yeasts of the genus Malassezia serve as both commensal microorganisms and pathogens on the skin of humans and domestic animals. Although rare, cases of life-threatening fungemia in people have been attributed to Malassezia pachydermatis, for which dogs are a natural host. Zoonotic transfer has been documented from dogs to immunocompromised patients by healthcare workers who own dogs. We investigated the role of pet dogs as risk factors for mechanical carriage of M. pachydermatis on human hands. Dogs and their owners were sampled as pairs, by fungal culture and nested polymerase chain reaction (PCR). Although fungal culture was not a reliable means by which to detect carriage of the yeast on human hands, PCR identified M. pachydermatis on most (approximately equal to 93%) human participants. Human carriage of ubiquitous opportunistic pathogens such as M. pachydermatis underscores the importance of good hand hygiene by healthcare professionals.