新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡时程

为确定新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡时程、采用HE染色及TUNEL研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后神经细胞凋亡情况.结果显示,新生大鼠缺氧缺血后3周时,左脑仍有少量凋亡细胞存在,与对照组比较有显著性差异,P＜0.05;于4周时左脑凋亡细胞数与对照组比较无显著性差异,P＞0.05.结果提示新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后神经细胞凋亡持续至损伤后4周.     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤远期行为学和超微结构改变

目的：建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）模型,观察远期行为学及超微结构改变。方法：60只7日龄新生Sprague-Dawley大鼠随机分为HIBD组和假手术组,每组30只。生后5周进行Morris水迷宫试验及感觉功能测试;取脑组织切片行尼氏染色计数神经元数目;取皮层、海马行透射电镜,观察突触结构,测量突触后致密区（PSD）厚度及活性区长度,并与行为学结果进行相关分析。结果：Morris水迷宫试验中,HIBD组大鼠寻找平台潜伏期时间明显长于假手术组（P<0.05）;HIBD组大鼠穿越平台次数较假手术组少（P<0.05）。感觉运动功能试验中,HIBD组测试结果明显差于假手术组。尼氏染色提示HIBD组神经元数目明显减少（P<0.01）。电镜显示HIBD组大鼠突触数量减少,PSD厚度及活性区长度变薄变短。HIBD组大鼠PSD厚度与Morris水迷宫试验寻找平台潜伏期时间呈负相关（r=-0.861,P<0.01）,与三项感觉功能评估得分之和亦呈负相关（r=-0.758,P<0.05）。结论：缺氧缺血可致新生鼠远期神经元减少和超微结构损伤,造成远期行为学功能障碍。     

新生大鼠脑缺氧缺血模型心肌细胞凋亡的研究

目的　研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)发生后不同时段心肌细胞凋亡情况。方法　结扎新生 7日龄大鼠右颈总动脉后放入 8%低氧舱 2h制成HIBD模型 ,应用AnnexinV/PI双染流式细胞技术检测缺氧缺血 (HI)后 1、4、18、2 4、4 8、72h及 7d心肌细胞凋亡情况。结果　HI后各HI组心肌细胞的凋亡率均明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,72hHI组凋亡率又显著高于其他组 (P <0 .0 5 ) ,表明HI后 7d内各组大鼠心肌均存在超出正常凋亡 ,尤以 72hHI组凋亡率最高。结论　新生大鼠HIBD后 1h～ 7d内心肌细胞均存在明显凋亡 ,以HI后 72h更明显 ,提示对缺氧缺血性脑病新生儿保护心肌减少心肌凋亡的治疗应至少用至生后 7d     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤闪光视觉诱发电位改变及意义

目的观察新生鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)发生后闪光视觉诱发电位(F-VEP)的波形变化特征,探讨F-VEP对HIBD的早期监测作用.方法80只SD新生鼠随机分为假手术组、HIBD组,每组各40只,按动物模型建立后0、6、12、24、48h分为五个时段,每组各时段均为8只,采用闪光刺激法检测视觉诱发电位.结果(1)7日龄SD新生鼠F-VEP有一分化良好的正向波.(2)HIBD组0、6、12、24、48h潜伏期延长,与对应各时段的假手术组比较均有非常显著性差异(P＜0.001).结论(1)新生鼠HIBD发生时,F-VEP波形迅速发生改变,主要表现为潜伏期延长.(2)缺氧后持续异常的F-VEP提示HIBD存在,有助于HIBD的早期监测.     

线粒体自噬对新生大鼠缺氧缺血脑损伤的影响

目的了解缺氧缺血脑损伤的动物模型中线粒体自噬情况,探讨其在缺氧缺血脑损伤中的作用。方法将120只新生7日龄Sprague-Dawley大鼠分为假手术组、缺氧缺血脑损伤(HIBD)组、自噬抑制剂干预组(3MA组)。HIBD组行右侧颈总动脉结扎后置于低氧仓(8%氧气和92%氮气)2.5 h,3MA组腹腔注射2μL 3MA 30 min后再进行结扎和低氧处理,假手术组不予结扎和低氧处理。在造模后提取各组单细胞悬液,用Mitotracker标记线粒体、Lysotracker标记自噬小体、LC3标记自噬进行免疫荧光共定位观察线粒体自噬情况;荧光探针JC-1染色后,采用流式细胞仪检测线粒体膜电位。TTC染色法检测脑梗死灶大小。提取皮质神经元中的细胞浆蛋白,Western blot法检测线粒体自噬相关蛋白的表达情况。结果与假手术组相比,HIBD组线粒体膜电位明显降低(P0.05),线粒体自噬增加(P0.05),线粒体分裂相关蛋白Drp1、Fis1的表达升高,线粒体外膜蛋白受体Tom20与内膜蛋白受体Tim23的表达降低(P0.05);3MA组膜电位比HIBD组降低更为明显(P0.05),但线粒体自噬程度明显减少(P0.05)。3MA组大鼠脑组织梗死程度较HIBD组明显增加(P0.05)。结论 HIBD能够增加线粒体自噬的发生,抑制线粒体自噬会加重新生大鼠HIBD的损伤程度。     

缺氧缺血对新生大鼠脑皮质细胞凋亡的影响

为了探讨新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）脑损伤时，是否存在细胞死亡的另一种形式—凋亡（apoptosisApo），选用48只健康新生7天的SD大鼠，建立HIE标准化动物模型，将其随机分为对照组和缺氧缺血后1、4、18、24、40、72h、7天组。应用HE染色、电镜、组织切片原位末端标记技术（TUNEL）等手段，观察和比较各组实验侧脑皮质细胞的凋亡形态、特点和密度。结果光镜和电镜下可见细胞皱缩、核碎裂、Apo小体；原位标记显示实验侧皮质、海马回、丘脑均有末端标记阳性的细胞，证实HIE中的Apo现象。8组皮质区阳性细胞数／mm2F＝109．21P＜0．001。两两比较结果：各级之间P＜0．001。说明缺氧缺血可引起脑细胞凋亡，其强度与细胞凋亡有明显统计学意义。其中在皮质区18h点标记细胞最明显，Apo出现早于坏死，在缺氧缺血脑损伤的早期。提示机体在遭遇病理因素时，首先启动自身内部机制，让部分细胞主动性的死亡。     

不同葡萄糖水平对缺氧缺血新生大鼠脑病理改变的影响

目的电镜下观察葡萄糖水平对缺氧缺血（HI）新生大鼠脑皮质和海马病理改变的影响。方法7日龄SD新生大鼠随机分为单纯HI组、HI前高血糖组、HI前低血糖组以及正常对照组。各组于HI后72h断头处死,脑组织置2%戊二醛溶液中固定,透射电镜下待检。结果单纯HI主要引起海马部位的病理改变,皮质病变相对轻微。HI前低血糖组的脑病理改变呈进一步加剧,海马部位多见神经元坏死,皮质及海马神经元内线粒体空泡变明显,核周细胞器减少或消失。HI前高血糖组的脑病理改变明显轻于单纯HI组和HI前低血糖组,未见神经元坏死,仅表现为线粒体轻度肿胀以及胶质细胞明显增生。结论HI前低血糖可进一步加剧新生大鼠的脑缺氧缺血损害,HI前高血糖则可明显减轻新生大鼠脑缺氧缺血损伤.     

石杉碱甲对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的研究石杉碱甲对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用。方法7日龄SD大鼠随机分为对照组、缺氧缺血组和石杉碱甲组，用氨基酸自动分析仪测定脑损伤后0、60、120min和石杉碱甲组右侧脑组织中谷氨酸含量；光镜下计数缺氧缺血及予石杉碱甲后海马CAl区神经元。结果石杉碱甲组脑组织谷氨酸含量与缺氧缺血120min组比较明显降低；脑损伤21d后，石杉碱甲组海马C～1区神经元明显增多，与缺氧缺血组比较差异显著。结论石杉碱甲能抑制脑组织中谷氨酸释放，并对大鼠海马CAl区神经元有一定的保护作用。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡时程

为确定新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡时程、采用HE染色及TUNEL研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后神经细胞凋亡情况。结果显示,新生大鼠缺氧缺血后3周时,左脑仍有少量凋亡细胞存在,与对照组比较有显著性差异,P<0.05;于4周时左脑凋亡细胞数与对照组比较无显著性差异,P>0.05。结果提示新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后种经细胞凋亡持续至损伤后4周。     

IGF-Ⅰ治疗新生大鼠缺氧缺血脑损伤对BDNF基因表达的影响

为了解新生大鼠缺氧缺血脑损伤(HIBD)后脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA水平的变化以及IGF-I治疗后对BDNF的影响,制作新生大鼠缺氧缺血脑损伤模型,用原位杂交方法观察HIBD后各时间点海马和大脑皮层BDNF基因表达的动态变化,并比较IGF-I治疗组与对照组HIBD后12h、72h BDNF mRNA的表达水平,用病理图像分析软件作半定量分析。结果显示HIBD后12h海马的BDNF mRNA开始上升,72～96h达高峰,120h下降;皮层BDNF mRNA在HIBD后72h才显著升高,且持续时间短,仅48h;给予外源性IGF-I治疗后10hBDNF mRNA开始上升,70h仍维持在较高水平,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。提示IGF-I可能诱导BDNF的转录,两者协同发挥神经保护作用。     

缺氧缺血新生鼠脑早期微循环改变的形态学研究

目的　 观察缺氧缺血性脑损伤时新生鼠脑早期微循环的形态学改变。 方法 　在缺氧缺血性脑损伤的动物模型上 ,采用组织化学染色及脑组织墨汁灌注观察脑组织血管形态和分布。 结果 　缺氧缺血后即刻脑皮质、髓质、海马微血管数增多 ,微血管通透性增强 ,微血管内血栓形成 ,脑内多部位出血 ,同时神经元出现水肿、丢失、胶质细胞增生等一系列缺血缺氧改变。结论 　缺氧缺血性脑损伤时早期存在着脑微循环障碍 ,在临床缺血缺氧性脑损伤的救治过程中应注意尽早纠正     

新生儿缺氧缺血性脑病脑血流动力学变化及其临床意义

为研究缺氧缺血性脑病脑血流变化规律，应用彩色多普勒超声对３８例患儿脑血流参数及结构形态进行了连续监测。结果：生后２４小时内，中重度组收缩期、舒张末期及平均血流速度显著下降，分别为２７±６，６±３，１５±４ｃｍ／ｓ，而后逐渐增加，其中以平均血流速度最为明显。脑血管阻力指数及搏动指数开始异常增高，分别为０．８３±０．１２、１．５４±０．２８；４８～９６小时降至最低水平，分别为０．５４±０．０６、０．８０±０．１３，病情愈重二者愈低，脑水肿改变愈明显。轻度组无上述规律。提示：监测脑血管阻力有助于脑损伤的判断与治疗。     

Cerebral and ventilatory depression during hypoxia in anaesthetized newborn guinea-pigs

The effects of hypoxia on ventilation and cerebral activity were studied in urethane-anaesthetized newborn guinea-pigs. Ventilation was measured by a pneumotachograph, and cerebral activity by a cerebral function monitor (CFM). All animals were subjected to either 9% O₂ or 6% O₂ in N₂ for 10 minutes or until apnoea occurred. Hypoxia produced a biphasic response in ventilation, that is, an increase followed by a decrease. The initial increase was attributed to the elevation of the respiratory rate, whereas the tidal volume showed a pure decline. The respiratory rate reached its peak at 3 minutes of hypoxia (170 ± 12% during 9% O₂ and 169 ± 12% during 6% O₂). Cerebral activity during both 9 and 6% O₂ breathing showed a small increase followed by a decrease. In the group subjected to 9% O₂ the maximum CFM activity increased to 114 ± 8% of the control level and the minimum activity increased to 113 ± 7%, while in the group subjected to 6% O₂ the maximum CFM activity increased to 104 ± 5% and the minimum CFM activity to 101 ± 3%. The depression of CFM activity was more pronounced with 6% O₂ than with 9% O₂. Regression analysis showed a linear correlation between ventilation and cerebral activity during both 9 and 6% O₂ breathing. The results suggest that hypoxic ventilatory depression may be the consequence of cerebral depression produced by acute severe hypoxia.     

健康新生儿静息能量消耗的研究

目的　检测我国健康新生儿静息能量消耗值 (REE) ,评估不同因素对其的影响。方法通过开放式间接能量测定仪 (DeltatracTMⅡ ,芬兰 )对 15 4例出生体重 2 5 0 0～ 3 999g的健康新生儿 (男75名 ,女 79名 )进行REE检测 ,与Schofield预计公式所得的预计值进行比较 ,同时比较性别和分娩方式对新生儿REE的影响。结果　健康新生儿的REE平均实测值为 ( 2 0 1 8± 2 5 4)kJ/ (kg·d) ,预计值为 :( 2 2 6 1± 4 8)kJ/ (kg·d) ,两者之间差异有显著性 ,预计值比实测值高出 12 0 4%。性别及分娩方式对新生儿REE无影响。结论　现有的预计公式并不适用于临床估算新生儿能量消耗 ,对新生儿进行间接能量测定是了解其能量消耗的较好方法。本研究推荐中国健康新生儿 (出生体重 2 5 0 0～ 3 999g)静息能量消耗值为 ( 2 0 1 8± 2 5 4)kJ/ (kg·d) ,95 %可信区间为 ( 15 2 0～ 2 5 1 6)kJ/ (kg·d)。     

实验性缺氧缺血新生猪脑线粒体DNA损伤的研究

目的：观察实验性缺氧缺血后新生猪不同时段脑线粒体DNA8003bp损伤,探讨缺氧缺血性脑损伤(hypoxicischemicbraindamage,HIBD)能量代谢障碍的分子生物学基础。方法：将3日龄新生猪(n=50)随机分为对照组和HIBD实验0,24,48,72h组。实验组结扎左侧颈总动脉并置于8%氧气2h制作HIBD动物模型,对照组行假手术。取各组动物左侧大脑海马区皮质提取脑线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtDNA),LXPCR方法扩增检测200bp及8003bpmtDNA片段。PCR产物行琼脂糖凝胶电泳,结果以积分光密度(IOD)值表示。结果：8003bp片段缺氧缺血后0hIOD值22.616±2.276较对照组56.995±0.317显著降低(P<0.05),24h时IOD值为27.719±0.309和48h为49.491±3.233,有所恢复,仍低于对照组(P<0.05),72h时IOD值为55.972±2.236与对照组相比无统计学差异(P>0.05)。结论：缺氧缺血后新生猪脑海马区神经元mtDNA发生断裂性损伤,72h恢复至正常水平。缺氧缺血性mtDNA损伤可能与缺氧缺血情况下线粒体呼吸链复合物活性下降及迟发性神经元死亡有关。     

三种途径注射神经干细胞治疗缺氧缺血性脑损伤可行性比较

目的 比较三种神经干细胞(NSCs)移植方法 的可行性,尝试建立一种创伤小、疗效好的神经干细胞移植方法 .方法 生后3～4 d的新生猪在缺氧缺血性脑损伤造模后被分为静脉NSCs移植组、颈内动脉NSCs移植组、腰穿NSCs移植组,每组各5只;术后2 h分别通过腋静脉、颈内动脉和腰穿途径注射2×106个绿色荧光蛋白标记的NSCs.术后24 h处死实验动物,取海马、侧脑室前角、侧脑室后角层面进行病理切片,400倍镜下计数荧光染色的神经干细胞.结果 400倍荧光显微镜视野(HP)下,静脉NSCs移植组、颈内动脉NSCs移植组、腰穿NSCs移植组的阳性细胞分别为(53.80±8.78)/HP、(69.80±11.90)/HP、(265.00±29.65)/HP.其中腰穿NSCs移植组进入脑组织的NSCs细胞显著多于其他两组,差异有非常显著性(P<0.01).结论 本实验证实了腰穿途径治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤的可行性,且较静脉及颈内动脉途径优越.     

缺氧缺血性脑病患儿红细胞胞浆游离钙水平变化的临床意义

目的 探讨红细胞胞浆游离钙(RBC[Ca2+]i)在缺氧缺血性脑病(HIE)发病机制中的作用及其应用价值.方法 选择2002年6月至2006年3月我科收治的28例中、重度HIE患儿作为研究对象,HIE患儿入院后在常规治疗的基础上给予尼莫地平治疗,疗程7～10 d.于治疗前、治疗72 h和7～10 d各采集静脉血1次,采用Fura-2/AM法检测RBC[Ca2+]i水平.以我院产科同期收住的20例正常新生儿作为对照组.结果 (1)中、重度HIE组治疗前后各时间点RBC[Ca2+]i水平均明显高于对照组,差异具有显著性(P＜0.05,P＜0.01),中、重度HIE组间差异元显著性(P＞0.05).(2)HIE息儿RBC[Ca2+]i水平于治疗后72h达到高峰,然后逐渐恢复,至治疗7～10 d仍高于对照组(P＜0.05).(3)RBC[Ca2+]i水平与HIE程度存在明显正相关(r=0.447,P＜0.05).结论 RBC[Ca2+]i参与了HIE的病理生理过程,在HIE发病机制中可能起重要作用,动态监测RBC[Ca2+]i水平可能有助于HIE的早期诊断和预后判断.     

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目的了解窒息新生儿在听觉刺激诱发脑神经活动时的脑氧合代谢和脑血流量的改变。方法1998~2003年北京中日友好医院儿科选择窒息新生儿34例为窒息组,健康新生儿40名为对照组。使用近红外光谱仪,观察听觉刺激试验诱发的脑氧合血红蛋白[HbO2]、还原血红蛋白[HbH]和总血红蛋白[Hbtot]浓度的变化,并比较两组脑氧合代谢和脑血流量的改变。根据[HbO2]、[HbH]和[Hbtot]不同的变化,将氧合代谢曲线分为A([HbO2]、[HbH]和[Hbtot]均增加);B([HbO2]和[Hbtot]增加,[HbH]降低);C([HbO2]和[Hbtot]降低,[HbH]增加)3种曲线类型。结果窒息组中25例(25/34、73·5%)显示C型变化,对照组中28例(28/40、70·0%)显示A型变化,两组中A、C两型例数比较差异显著(P<0·05)。两组[HbO2]和[Hbtot]数值变化幅度比较差异显著(P<0·05)。结论窒息新生儿听觉刺激诱发相应皮层的神经活动时,显示局部脑血流量下降、氧合代谢降低,重度窒息儿更明显。     

早期脑损伤新生大鼠脑白质神经蛋白聚糖和多功能蛋白聚糖表达及意义

目的观察宫内感染致脑损伤仔鼠脑白质Neurocan和Versican表达情况。方法 40只受孕母鼠随机分为对照组(n=10)和脂多糖组(n=30),给予受孕18 d的脂多糖组孕鼠脂多糖(血清型055)380μg/kg,连续2 d腹腔注射;对照组孕鼠腹腔注射同等剂量的生理盐水。每组随机选取幼鼠各60只,于0,1,7,14,21,28日龄各处死10只仔鼠,HE染色法检测脑组织病理变化,荧光定量RT-PCR方法测定Neurocan和Versican相对表达量。结果对照组孕鼠无死亡及提前分娩,共娩出活产足月仔鼠124只;脂多糖组中孕鼠5只死亡,6只提前分娩,剩余19只共娩出活产足月仔鼠132只,死亡24只。与对照组比较,0,1,7,14,21,28日龄脂多糖组新生大鼠脑白质Neurocan mRNA和Versican mRNA表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫内感染致脑损伤后,脑白质区Neurocan和Versican的表达明显上调。