双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫肺炎大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响

目的：检测双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫肺炎（PCP）大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响。方法：以醋酸可的松皮下洲Wistar大鼠建立PCP动物模型，对60mg/kg双氢青蒿素治疗实验大鼠，杀鼠取肺，用胶原酶消化法分离肺泡巨噬细胞，可PI和TUNEL法检测其凋亡，同时设有正常大鼠对照组。结果：感染组和治疗组大鼠肺泡巨噬．细胞凋亡率显著高于正常对照组，治疗组大鼠肺泡巨噬细胞凋亡率明显低于感染组。结论：卡氏肺孢子虫感染引起大鼠肺泡巨噬细胞发生凋亡，经双氢青蒿素治疗后PCP大鼠肺泡巨噬细胞凋亡降低。     

还原型谷胱甘肽对肺泡巨噬细胞凋亡的影响

肺泡巨噬细胞（alveolar macrophage, AM）是肺部防御病原微生物和肺损伤的第一道防线，AM凋亡的异常可影响肺免疫防御的完整性。中性粒细胞（PMN）肺内聚集是导致肺损伤的重要因素，PMN释放介质对AM有一定的影响。我们采用体外培养细胞方法原代培养大鼠AM，分离并激活PMN，收集上清液与AM共同孵育，观察AM的形态变化，测定培养上清液中LDH和NO的释放情况，并以原位凋亡检测法和免疫组化测定Fas等反映AM凋亡的变化，以期研究还原型谷胱甘肽（R-GSH）对AM凋亡的影响。     

猪苓多糖对巨噬细胞一氧化氮生成和细胞内还原型谷胱甘肽的影响

本文观察了猪苓多糖 (PPS )对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮 (NO )生成和细胞内还原型谷胱甘肽 (GSH )的影响。结果显示 :(1)PPS对小鼠腹腔巨噬细胞NO生成具有明显的促进作用 ;(2 )细胞内GSH浓度随NO生成增加而减少 ;(3)这些作用能被NO生成抑制剂L NMMA所抑制。结果表明PPS能促进小鼠腹腔巨噬细胞NO生成 ,并同时消耗细胞内GSH。提示细胞内GSH可能起到调节巨噬细胞NO生成和保护宿主细胞免受NO介导的细胞毒作用。     

不同毒力结核分枝杆菌感染小鼠对肺泡巨噬细胞的凋亡率及其时相性变化的影响

目的:探讨不同毒力结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞的凋亡率及其时相性变化。方法:不同毒力结核分枝杆菌悬液分别经小鼠尾静脉注射、复制及鉴定各组小鼠感染模型,各组小鼠感染模型复制成功后第1、3、5、7、9、11、13、15天,进行肺泡灌洗,收集小鼠肺泡灌洗液,获取感染小鼠肺泡巨噬细胞,以激光共聚焦显微镜技术检测及鉴定结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞,流式细胞术检测上述各时间点、各组感染小鼠肺泡巨噬细胞的凋亡率,比较各组感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡率的时相性变化。结果:激光共聚焦显微镜检测结果显示,结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株和卡介苗菌株(BCG)均被小鼠肺泡巨噬细胞大量吞噬。流式细胞技术检测结果显示:结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株感染小鼠模型组和卡介苗菌株(BCG)感染小鼠模型组,在小鼠感染模型复制成功后1～9天,小鼠肺泡巨噬细胞的凋亡率逐渐升高,9天时两组小鼠肺泡巨噬细胞的凋亡率均达最高,随着时间的延长,两组小鼠肺泡巨噬细胞的凋亡率呈现逐渐降低趋势。结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株感染小鼠组,感染小鼠的肺泡巨噬细胞的凋亡率明显高于卡介苗菌株(BCG)感染小鼠组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:感染小鼠的肺泡巨噬细胞的凋亡率与结核分枝杆菌的毒力强弱呈正相关。     

大鼠肺纤维化形成中内源性一氧化氮对肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的:研究大鼠肺纤维化形成过程中异常增多的肺内源性一氧化氮对肺泡上皮细胞凋亡的影响。方法:气管内滴注博莱霉素,用硝酸还原法检测出肺血NO₂^-/NO₃^-含量;TdT介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)和透射电镜观察肺泡上皮细胞凋亡。分别观察注BLMA₅后14 d和30 d以及用氨基胍(AG)阻断iNOS合成NO后上述指标的变化。结果:(1)注BLMA₅后14 d,出肺血NO₂^-/NO₃^-含量分别高于正常对照组和注BLMA₅后30 d组(均P<0.01);凋亡的肺泡上皮细胞数亦分别多于正常对照和注BLMA₅后30 d组(均P<0.01)。(2)AG阻止出肺血NO₂^-/NO₃^-含量增高的同时,亦抑制了肺泡上皮细胞的凋亡。结论:在肺纤维化形成过程中,内源性NO的增多,有诱导肺泡上皮细胞凋亡的作用。     

ROS对小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的影响

目的 探讨ＲＯＳ影响巨噬细胞凋亡的机制。方法 激光扫描共聚集显微术,流式细胞术和荧光标记技术等,结果（１）凋亡巨噬细胞内ＤＡＤＰＨ氧化酶活性急剧降低使得胞内ＲＯＳ水平快速上降;（２）ＲＯＳ清除剂促进地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡;（３）ＰＫＣ促进巨细胞凋亡和ＲＯＳ急剧减少;ｃＡＭＰ抑制巨噬细胞凋亡和ＲＯＳ急剧减少。结论 （１）ＲＯＳ抑制地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡;（２）ＰＫＣ,ｃＡＭＰ等因素通过影响地     

长春新碱诱导的自噬性细胞凋亡对线粒体膜电位的影响

目的：了解长春新碱（VCR）诱导的自噬性细胞凋亡是否与线粒体跨膜电位（△Ψm）改变有关及其可能的机制。材料与方法：以正常人的肝细胞系为体外模型,应用碘化丙啶（PI）／Rhodamine123(Rh123)双重染色检测△Ψm,通过亚GI期细胞和透射电镜鉴定细胞凋亡。结果与结论：VCR可明显诱导线粒体△Ψm下降,也可以诱导L－02细胞自噬性凋亡。线粒体△Ψm下降可能是VCR诱导自噬性细胞凋亡的关键环节。     

C5a在介导肺泡上皮细胞凋亡以及在ALI中所扮演的角色

心源性以外的各种肺内外致病因素导致的急性、进行性缺氧性呼吸衰竭被定义为急性肺损伤 /急性呼吸窘迫综合征(acutelunginjury/acuterespiratorydistresssyndrome, ALI/ARDS), 主要的病因有脓毒症、多发性创伤、误吸和休克等。ALI和ARDS具有性质相同但程度不同的病理生理改变, 严重的ALI被定义为ARDS。在对ARDS早期死亡病人的形态学研究中, 观察到Ⅰ型肺泡上皮细胞 (AE1 )存在凋亡现象。后继的研究中, 在内毒素 (LPS)诱导的小鼠ALI模型, 注射caspase抑制剂可以明显减少凋亡的AEC细胞, 并可显著降低小鼠死亡率 [1]。在小…     

自噬在巨噬细胞清除凋亡淋巴细胞中的作用

目的研究巨噬细胞吞噬凋亡淋巴细胞后自噬结构的形态学特征,探讨自噬对巨噬细胞清除凋亡细胞的作用。方法用环磷酰胺诱导淋巴细胞凋亡。在扫描电子显微镜下观察巨噬细胞吞噬凋亡细胞的形态学变化,透射电镜下观察巨噬细胞内的自噬前体、自噬体和自噬溶酶体的结构特点,用图像分析仪测量自噬结构的断面面积。以单丹磺酰尸胺(MDC)染色法标记巨噬细胞的自噬体,在激光扫描共焦显微镜下观察和定量分析。结果巨噬细胞活跃地吞噬凋亡淋巴细胞、凋亡细胞核、凋亡小体或其他细胞碎片,形成异噬体。与对照组比较,吞噬凋亡细胞组的自噬细胞及其自噬体数目增多,自噬前体、自噬体和自噬溶酶体与细胞质的断面面积之比增大。许多自噬体内可见凋亡小体或其他细胞碎片,这些自噬体的体积较大,多位于细胞膜下。未观察到含有整个凋亡细胞或凋亡细胞核的自噬体。结论巨噬细胞清除凋亡淋巴细胞时自噬功能显著增强。自噬对于凋亡淋巴细胞的清除起着重要的直接和间接作用。     

转染Elafin对百草枯诱导的肺泡上皮凋亡的影响

目的:探讨转染Elafin对百草枯(Paraquat,PQ)诱导的肺泡上皮凋亡的影响及可能机制。方法:电穿孔法转染p EGFP-C1-Elafin进入A549细胞,培养24 h后,RT-PCR检测Elafin mRNA在A549细胞中的表达情况;并给予生理盐水、不同浓度PQ(5、50、100μmol/L)作用后,Annexin V/PI双染法流式细胞仪检测A549细胞凋亡率、活性氧类物质(Reactive oxygen species,ROS)含量。Western blot检测核因子相关因子2(Nuclear factor erythroid like-2,Nrf2)、血红素加氧酶-1(Heme oxygenase-1,HO-1)表达情况。结果:转入A549细胞Elafin成功表达。PQ呈浓度依赖性导致A549细胞凋亡;PQ可使ROS含量明显增加,Nrf2、HO-1表达下调。Elafin可抑制PQ诱导的细胞调亡,上调Nrf2、HO-1蛋白表达。结论:Elafin可以一定程度抑制PQ诱导的A549细胞凋亡,其机制可能与其上调抗氧化蛋白Nrf2等有关。     

Caspase-3基因沉默对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的:通过siRNA抑制caspase-3基因的表达探讨肺炎链球菌对肺泡上皮细胞凋亡的影响及凋亡基因caspase-3对凋亡的调节作用,寻找治疗肺炎链球菌肺炎的新方法。方法:体外培养肺泡上皮细胞A549,用肺炎链球菌R6作用于A549细胞,使用siRNA技术抑制caspase-3表达,RT-PCT法检测caspase-3转录强度,化学荧光测定法检测caspase-3蛋白含量,ELISA法检测细胞上清中IL-6和IL-10浓度,TUNEL法检测细胞凋亡。结果:肺炎链球菌能诱导A549细胞凋亡、导致caspase-3的表达和IL-6的浓度升高、IL-10的浓度降低;使用siRNA抑制caspase-3表达后,caspase-3的表达降低,A549细胞的凋亡率降低,而IL-6和IL-10的浓度并无明显变化。结论:Caspase-3在肺炎链球菌引起的肺泡上皮细胞的凋亡中占据了重要的地位;运用RNA干扰技术抑制caspase-3的表达能降低肺泡上皮细胞的凋亡率,这可能对肺炎链球菌肺炎的治疗有积极意义。     

沉默Bax基因对TNF-α诱导人肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响

目的:运用RNA干扰(RNAi)技术沉默人肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549的B细胞淋巴瘤-2相关基因(Bax),探讨Bax在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导A549细胞凋亡中的作用。方法:体外培养A549细胞,利用脂质体LipofectamineTM2000将化学合成的Bax小干扰RNA(siRNA)转染入A549细胞,给予10μg/LTNF-α刺激24h,RT-PCR检测bax mRNA的表达,Western blotting和免疫组化检测Bax蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化。结果:化学合成的Bax siRNA抑制了A549细胞Bax mRNA和蛋白的表达(P0.05),流式细胞术显示BaxsiRNA组的细胞凋亡率明显低于TNF-α组和阴性对照siRNA组(P0.05)。结论:体外实验证明Bax的高表达在TNF-α诱导A549细胞凋亡中发挥了重要的促凋亡作用,利用RNAi技术沉默Bax基因可以有效抑制由TNF-α介导的A549细胞凋亡。     

纤维状矿物粉尘对肺泡巨噬细胞作用的体外研究

目的:评价纤维状矿物粉尘的表面游离基团及表面电动电位在其对肺泡巨噬细胞毒性中所起的作用,探讨其损伤的机制。方法:采用体外细胞培养技术及扫描电镜的方法,以细胞死亡率、细胞电泳率、丙二醛(malondialdehyde,MDA)的变化、乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)及超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)活力作为毒性指标,观察纤维状矿物粉尘对肺泡巨噬细胞膜的通透性、膜电荷及细胞形态的影响。结果:不含OH^-的纤维硅灰石、板状沸石未表现出细胞毒性;纤维海泡石、纤维坡缕石、纤维水镁石及纤维蛇纹石石棉因含不同的OH^-而表现出不同的细胞毒性,六种纤维矿物粉尘均使细胞电泳率发生了改变。结论:纤维矿物粉尘的表面电动电位是一个非特异的因素;而纤维矿物粉尘对肺泡巨噬细胞的毒性与其表面所含OH^-及其数量有关。     

脾脏巨噬细胞对凋亡细胞诱导免疫反应的影响

为研究小鼠脾脏巨噬细胞(Mφ)对凋亡细胞诱导免疫应答的影响,我们用氯磷酸二钠脂质体(clodronate-liposomes,CL)清除小鼠脾脏Mφ,于不同时间点对三组(nave、PBSL、CL)小鼠选择性回输e450标记的DO11.10CD4~+T细胞、凋亡细胞及其相关抗原,然后用流式细胞仪检测小鼠血液与脾脏中免疫细胞的清除率、DO11.10CD4~+T细胞(即KJ126+T细胞)的增殖及Foxp3+Treg细胞的增殖。结果显示:(1)注射CL 1d后,外周血单核细胞的清除率约93%,脾脏中F4/80+Mφ、单核细胞与树突细胞的清除率分别为99%、90%、54%;(2)PBSL组与CL组中,KJ126+T细胞占CD4+T细胞的比率分别为1.32%、0.56%,差异有统计学意义(P0.0001);Foxp3+T细胞占CD4~+T细胞的比率分别为0.69%、0.89%,差异有统计学意义(P=0.0004)。表明CL可以有效清除血液与脾脏中的免疫细胞;清除脾脏Mφ可以抑制KJ126+T细胞的增殖和促进Foxp3+Treg细胞的增殖。提示脾脏Mφ参与了提呈凋亡细胞相关抗原的过程,参与调节凋亡细胞诱导的抗原特异性T细胞的免疫应答能力及凋亡细胞诱导的免疫耐受。说明脾脏Mφ在凋亡细胞诱导的免疫反应中起着重要的作用。     

莫西沙星对脂磷壁酸诱导的人肺泡巨噬细胞凋亡及炎症因子释放的影响

目的 探讨脂磷壁酸(LTA)对人肺泡巨噬细胞(AM)凋亡及炎症因子释放的影响和莫西沙星(MXF)对其反应的抑制作用.方法 收集、提纯及体外培养人AM,LTA刺激4h后,加或不加MXF与其共孵育,于各实验终点用MTT法计算细胞相对活力,光学显微镜观察细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR法检测TLR2、IL-1β、IL-8及TNF-α的mRNA水平,ELISA检测IL-8蛋白水平,验证RT-PCR.结果 LTA对AM有细胞毒性,并呈浓度递增关系(P＜0.05),MXF对AM活力无影响(P＞0.05),且可抑制LTA的毒性作用(P＜0.05).LTA促进AM凋亡(P＜0.05),此作用可被MXF抑制(P＜0.05).LTA上调AM中TLR2、IL-1β、IL-8及TNF-α的mRNA表达(P＜0.05),各峰值时间及峰值分别为:12 h(3.56±0.03)、6 h(46.63±7.06)、12 h(28.07±1.24)、3 h(2.34±0.50),上调24 h IL-8蛋白水平,上述效应可被MXF抑制.结论 LTA对人AM有细胞毒性,促进AM凋亡,上调AM中TLR2及炎症因子IL-1β、IL-8及TNF-α的表达,MXF抑制LTA诱导的AM炎症及凋亡,可能在革兰氏阳性菌肺炎中发挥杀菌、抗炎、保护宿主AM免疫活性的作用.     

还原型谷胱苷肽对骨髓基质干细胞增殖及向神经样细胞分化的影响

BACKGROUND:As bone marrow stromal stem cells can be easily obtained and have multi-directional differentiation potential, it is an important approach to obtain neural stem cells for treatment of spinal cord injury through induced differentiation of bone marrow stromal stem cells. OBJECTIVE:To observe the effects of different concentrations of reduced glutathione on proliferation and neuronal differentiation of bone marrow stromal stem cells. METHODS:Bone marrow stromal cells were isolated and cultured by limited dilution method. The cloned bone marrow stromal cells were stimulated with reduced glutathione at different concentrations (0, 5, 10, 20, 40 mmol/L) respectively. After 72 hours of culture, proliferation of bone marrow stromal cells was examined by MTT assay. The morphology of bone marrow stromal cells was observed under inverted microscope and the cells were identified by immunofluorescence staining of microtubule associated protein-2 and glial fibrillary acidic protein. RESULTS AND CONCLUSION:We found that 5 mmol/L reduced glutathione medium could promote the proliferation of bone marrow stromal cells (P < 0.05), but reduced glutathione at 20 and 40 mmol/L inhibited the cell proliferation (P < 0.05). The number and size of cell colonies in the 10 mmol/L reduced glutathione group had no obvious difference from the control group. Reduced glutathione at 10 mmol/L was powerful to induce the neuronal differentiation of bone marrow stromal stem cells, and most cells expressed microtubule associated protein-2 and glial fibrillary acidic protein. A random selection of 5 fields of view was conducted and percentage of bone marrow stromal cells differentiating into neuron-like cells was calculated as (62.0±4.8)%. These results confirmed that low-concentration (5 mmol/L) reduced glutathione can promote the proliferation of bone marrow stromal cells, while 10 mmol/L reduced glutathione has a strong induction of bone marrow stromal cells differentiating into neuron-like cells.     

急性肺损伤大鼠肺泡内中性粗细胞凋亡的延迟

目的：观察急性肺损伤(ALI)时中性粒细胞(PMN)的凋亡情况，以阐明其在肺损伤中的作用。方法：对盐酸内毒素造成的大鼠ALI模型行肺泡灌洗术，将其中的PMN及正常外周血PMN分别与ALI组及对照组的肺泡灌洗液(BALF)孵育，用Annexin及形态学方法测其凋亡率，并观察白细胞介索—1β(IL—1β)的表达情况。结果：同ALI的BALF孵育的PMN凋亡明显延迟，其IL—1β的表达亦升高，IL—1β与PMN的凋亡呈负相关。结论：ALI时，肺泡内PMN的渗出增加，凋亡延迟，可能与IL—1β表达升高有关。     

谷胱甘肽对染锰大鼠生精细胞凋亡与增殖的影响

目的:研究谷胱甘肽(GSH)对染锰大鼠生精细胞凋亡与增殖的作用及机制。方法:雄性SD大鼠48只随机分为6组,各组给锰途径为腹腔注射。采用TUNEL法检测生精细胞凋亡指数(AI);免疫组织化学法检测生精细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达。结果:与空白对照组比较,GSH对照组和15mg/kg GSH组生精细胞AI与生精细胞PCNA增殖指数(PI)均无显著性差异;与各自对应的单纯染锰组比较,15mg/kg GSH组和30mg/kg GSH组生精细胞AI均显著降低而PI均显著升高;30mg/kg组与15mg/kg组比较,生精细胞AI显著升高而PI显著降低;各组大鼠生精细胞AI和PI呈负相关。结论:15mg/kg和30mg/kg氯化锰可诱发大鼠睾丸生精细胞凋亡,两者存在剂量-效应关系;各组大鼠睾丸生精细胞AI和PI呈显著负相关;GSH对锰诱发大鼠生精细胞凋亡具有拮抗作用;GSH可能拮抗锰对大鼠生精细胞增殖的抑制作用。     

巨噬细胞凋亡研究的若干进展

巨噬细胞是机体免疫系统的重要细胞成份 ,具有多种生理功能 ,并参与清除入侵致病微生物 ,杀伤肿瘤细胞 ,而且在动脉粥样硬化、高血压等心血管疾病的发生发展中具有重要意义。本文综述了近年来巨噬细胞凋亡研究的若干进展 ,包括巨噬细胞凋亡在形态学和生化学上的主要改变 ,以及常见的诱导因素和相关基因 ,并初步探讨了巨噬细胞凋亡在动脉粥样硬化病变中的意义