麦胚凝集素对红细胞膜变形性的影响

利用分子生物学方法和激光衍射仪研究了红细胞变形性。结果,低粘滞系数(η=2cp)的磷酸缓冲液(PBS)悬浮红细胞,在低切变率((?)=150s~(-1))时红细胞的变形指数(DI)随麦胚凝集素(WGA)浓度的增大而增加;高粘滞系数(η=15cp)的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)悬浮红细胞,在高切变率((?)=800s~(-1))时,WGA浓度增大,红细胞变形指数随之减小。     

凝胶电泳法测定麦胚凝集素的分子量

凝胶电泳法测定蛋白质分子量的方法已经广泛应用,但该法测定植物凝集素分子量的报道很少.因植物凝集素大都是糖蛋白,用凝胶电泳法测定往往出现拖尾现象.笔者介绍了用平板凝胶电泳法测定麦胚凝集素的最佳条件,其测定结果与文献报道的一致.     

从麦胚中快速分离纯化麦胚凝集素

用改良的鸡卵类粘蛋白Sepharose 4B亲和层析法从麦胚中纯化的麦胚凝集素有较高的血凝活性,每100g麦胚丙酮粉的麦胚凝集素平均产率为58.74±6.56mg;纯化的麦胚凝集紊在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)上为单一区带;其表观分子量为34 400;它的专一性半抗原糖为N-乙酰葡糖胺和唾液酸。     

肝脏肿瘤组织中麦胚凝集素受体的定位

采用ABC法对肝细胞癌、肝内胆管细胞癌等肝脏肿瘤中麦胚凝集素受体进行组织学定位,并以正常肝组织、肝硬变组织及癌周肝组织等为对照,结果表明:肝细胞癌中麦胚凝集素受体的不规则分布与正常肝组织、肝硬变组织中带状分布形成明显对比,与胆管细胞癌中麦胚凝集素受体的分布也有差别。用神经氨酸苷酶处理后,麦胚凝集素受体的分布有明显变化。提示:细胞内麦胚凝集素受体的分布特点有利于肝脏肿瘤的诊断和鉴别诊断。     

麦胚凝集素简易提取及在α-淀粉酶测定中的应用

目的:通过麦胚凝集素对唾液淀粉酶(AMYs)的抑制,建立胰淀粉酶(AMYp)的检测方法。方法:从食用淀粉中简易提取麦胚凝集素,对其抑制AMYs的能力进行检测,并计算出抑制率。结果:麦胚凝集素对AMYs的平均抑制率为88.4%。通过对抑制后的淀粉酶活性测定,比较真实地反映AMYp的水平。结论:日常工作中检测淀粉酶的活性为总活性,用简易方法获得的麦胚凝集素加以抑制,然后测定AMYp的活性,对急性胰腺炎有鉴别诊断价值。     

麦胚凝集素修饰胰岛素固体脂质纳米粒的研究

目的:制备胰岛素固体脂质纳米粒(SLNs)、麦胚凝集素(WGA)修饰固体脂质纳米粒(WGA-SLNs),研究其对口服吸收胰岛素的促进作用。方法:用复乳法制备SLNs,将WGA与磷脂酰乙醇胺(PE)结合物(WGA-PE)掺入SLNs中制成WGA-SLNs;按胰岛素剂量250IU/kg分别灌胃给予高血糖小鼠SLNs或WGA-SLNs,用葡萄糖酶试剂盒测定小鼠血糖。按胰岛素剂量50IU/kg分别灌胃给予大鼠SLNs及WGA-SLNs,分别用葡萄糖氧化酶法(GOD-PAP)和放射免疫法(RIA)测定大鼠血糖及血清胰岛素浓度。结果:高血糖小鼠口服SLNs后,在0.5h血糖降至初始水平的(30.92±11.54)%,1h降至(46.84±10.21)%,4h为(76.83±10.54)%;口服WGA-SLNs后,在0.5h血糖降至初始水平的(37.56±14.66)%,1h降至(30.44±14.55)%,4h为(58.70±11.18)%,维持降糖作用12h。大鼠口服SLNs及WGA-SLNs后均具有降血糖作用,以皮下注射胰岛素溶液为对照,其相对生物利用度分别为4.99%和7.107%。结论:SLNs促进胰岛素的口服吸收,具有一定的降血糖效果。WGA修饰显著促进了胰岛素吸收,证实了凝集素的靶向作用和吸收促进作用。     

WGA提取方法的改进与结果分析

ＷＧＡ提取方法的改进与结果分析郑白玉荣先国陈淑凤（化学教研室，滨州市２５６６０３）关键词麦胚凝集素；甲壳素；视和层析法；得率麦胚凝集素（ＷｈｅａｔＧｅｒｍＡｇｇｌｕｔｉｎｉｎ，ＷＧＡ）是一类专一、可逆地与糖类结合的蛋白质，具有抗肿瘤、抗微生物、凝血等...     

麦胚凝集素的分离纯化及其在亲和层析中的应用

目的 :将分离纯化麦胚凝集素 (WGA)的方法和固定化WGA亲和层析柱的制备方法进行改良 ,从而得到能够有效结合细胞膜受体的亲和层析柱。方法 :依次用去脂抽提、分级盐析、离子交换层析、甲壳素亲和层析的方法分离纯化WGA ;将制备的WGA与用溴化氰活化的琼脂糖 4B(Sepharose 4B)耦联固定。结果 :得到的纯化倍数为 15 8 5倍的WGA单体相对分子质量为 160 0 0 ,表观相对分子质量为 3 2 0 0 0 ,血凝活力为 8 3mg·L-1。WGA Sepharose4B可以与红细胞表面糖基特异性结合。结论 :改良的WGA分离纯化方法和固定化WGA亲和层析柱的制备方法简便、有效 ,可用于实验室中细胞膜受体的研究     

麦胚凝集素沉淀血清糖蛋白对原发性肝癌的诊断意义

采用麦胚凝集素(浓度5mg／me)分别与48例样品血清孵育，沉淀物用N-乙酰葡萄糖胺复溶，SDS-PAG电泳谱发现有三条区带；结果表明：原发性肝癌患者血清中与麦胚凝集素结合的二条区带SDS-PAG电泳谱带浓度显著增加；其机制可能是糖苷转移酶活性异常，或糖蛋白的生成增加，而清除能力下降．     

重组红细胞血型糖蛋白A脂质体与麦胚凝集素的相互作用

本研究应用重组的红细胞血型糖蛋白A脂质体．分别与麦胚凝集素和交联有麦胚凝集素的Sepharose 4B(WGA—Sepharose4B)相互作用。结果发现重组的红细胞血型糖蛋白A脂质体与麦胚凝集素作用，有明显的凝集现象；并能结合在交联有麦胚凝集素的Sepharose颗粒周边4B上．从而为人工模拟红细胞膜提供了一可靠的实验依据。     

RP-HPLC法测定口服麦胚凝集素修饰脂质体中胰岛素

目的:建立RP-HPLC方法,测定麦胚凝集素修饰脂质体中胰岛素的含量和包封率。方法:利用逆相蒸发-超声法制备麦胚凝集素修饰胰岛素脂质体,反相高效液相色谱法测定脂质体中胰岛素含量和包封率。利用Phenomenex-C_(18)柱(250mm×4.6mm,5μm),乙腈-0.01％三氟乙酸(300:700)为流动相,测定波长为210nm,建立了HPLC测定胰岛素含量的方法。结果:HPLC测定方法线性范围5～100μg/ml,线性关系良好。普通胰岛素脂质体的包封率为(30.30±2.77)％(n=3),麦胚凝集素修饰脂质体包封率为(69.33±4.54〕％(n=3)。结论:建立的RP-HPLC方法便捷准确,重现性好,可用于测定麦胚凝集素修饰脂质体中胰岛素的含量和包封率。     

麦胚凝集素慢病毒载体的构建及其表达的研究

目的 探讨麦胚凝集素慢病毒载体的构建与表达的方法.方法 采用基因工程方法,将麦胚凝集素的基因插入慢病毒表达载体Plvx-IRES-ZsGreen1中.再采用慢病毒包装,将构建好的质粒和其他三种包装质粒(RPEV、PRRE、VSVG)在293T细胞中进行共转染,获取病毒液后感染人源的脂肪干细胞(ADSC).结果 显微镜下显示绿色荧光报告蛋白表示感染成功.对感染后的脂肪干细胞运用免疫染色技术进行显色,结果显示麦胚凝集素已经成功在脂肪干细胞中实现表达.结论 慢病毒包装WGA蛋白的方法可靠高效,可作为一种高效的示踪技术广泛应用于各类细胞.     

应用麦胚凝集素免疫组化法观察麻风皮损Langerhans细胞

本文首次应用麦胚凝集素(wheat germagglutinin,WGA)免疫组化法对91例麻风皮损郎格罕氏细胞(Langerhanscells,LC)进行观察,结果表明,正常对照和消退期病例均为阴性,仅活动期病例呈阳性反应,阳性率为56.92%。结核样型麻风和瘤型麻风表皮WGA阳性LC密度分别为90.13±17.81和16.80±7.59,两者差别具高度显著性(p<0.05)这一结果不仅表明两极型麻风表皮LC数有所不同,而且提示活动期麻风表皮LC的糖基代谢和膜表面功能发生了一定改变。     

麦胚凝集素慢病毒载体的构建及其对脂肪干细胞的感染

目的探讨麦胚凝集素（WGA）慢病毒载体的构建与表达的方法,以及WGA在神经系统中跨膜示踪的能力。方法 采用基因工程方法,将WGA的基因插入到慢病毒表达载体Plvx-IRES-ZsGreen1 中。再采用慢病毒包装,将构建好的质粒 和其他3 种包装质粒（RPEV、PRRE、VSVG）在293T细胞中进行共转染,获取病毒液后感染人源的脂肪干细胞（hADSCs）, 将感染后的hADSCs 注入小鼠的脑卒中模型,修复神经损伤。结果显微镜下检测到绿色荧光报告蛋白表示感染成功。 对感染后的hADSCs 进行免疫组化显色,结果显示WGA已经成功的在hADSCs 中实现了表达,在MCAO小鼠模型脑损伤 处追踪到感染了WGA的hADSCs。结论慢病毒包装WGA蛋白的方法可靠高效,可以作为一种高效的示踪技术广泛应 用于各类细胞。     

番茄凝集素的甲壳素亲和层析纯化

番茄果实经中性盐溶液提取,硫酸铵沉淀,甲壳素柱亲和层析和CM-纤维素离子交换层析,得纯番茄凝集素;对其化学组成及细胞凝集作用进行了实验研究。     

傅里叶变换红外技术研究麦胚凝集素作用下血型糖蛋白A构象变化

目的进一步阐明麦胚凝集素作用下，膜血型糖蛋白Ａα螺旋改变的部位。方法：首先，制备重组蛋白体膜血型糖蛋白Ａ，然后，以ＦＴＩＲ技术定量测定麦胚凝集素作用下，血型糖蛋白Ａ二级结构的改变。结果发现：麦胚凝集素结合于血型糖蛋白，导致血型糖蛋白Ａα螺旋减少，β结构增加。且相同浓度的麦胚凝集素作用下，重建脂蛋体膜血型糖蛋白Ａα螺旋下降较多，溶液血型糖蛋白Ａα螺旋下降较少。提示：麦胚凝集素作用下，膜血型糖蛋白Ａ膜内、膜外螺旋均有减少。