耶尔森氏菌毒力岛的研究进展

耶尔森氏菌属为肠杆菌科 ,共 11种 ,其中 3种即鼠疫耶尔森氏菌、假结核耶尔森氏菌和小肠结肠炎耶尔森氏菌对人是致病的〔1,17,18〕。尽管鼠疫耶尔森氏菌和假结核耶尔森氏菌在遗传方面几乎相同 ,在ＤＮＡ水平 90 %以上的一致性 ,〔1,16〕但它们的传播方式和所引起的疾病表现形式     

携带HPI毒力岛的大肠杆菌的毒力基因分析

目的检测分离自腹泻病人、家禽粪便和食品标本的携带HPI毒力岛的大肠杆菌携带其他致病性相关基因组岛的情况。方法运用PCR和DNA打点杂交方法。结果在被检测的82株大肠杆菌中，志贺氏菌属的Shi-2岛检出率为62．2％（51／82）；大肠杆菌OI57：H7的8个O岛中。OI55和OI140的检出率为57．3％（47／82）．且二者协同存在；OI28的检出率为35．4％（29／82），OI15的检出率为68．3％（56／82）。OI144的检出率为9．8％（8／82）。OI43和OI122则均未检出。该82株大肠杆菌中78株携带至少2个毒力岛．如编码RTX的OI28岛、编码Ⅲ型分泌系统的OI15岛以及编码粘附素的OI144岛，另外还有4株菌携带7个基因岛，20株菌携带6个基因岛。结论一些和细菌致病性有关的基因组岛在肠道大肠杆菌中广泛存在，其中一部分有可能是致病性的，提示基因横向转移在致病性大肠杆菌进化过程中具有重要意义。     

我国部分地区猪源大肠杆菌LEE和HPI毒力岛相关基因的检测

目的 采用PCR方法检测我国江苏等9个省市部分地区分离的1007株猪源大肠杆菌中肠细胞脱落位点毒力岛（LEE）和强毒力岛（HPI）。方法 对LEE毒力岛检测其核心区的衙和eaeA基因，对HPI毒力岛检测其irp2和fyuA基因。同时对LEE和／或HPI阳性大肠杆菌进行了O血清型的鉴定。结果 在分离的猪源大肠杆菌中。LEE毒力岛基因检测结果为：2．2％（22／1007）的菌株let和eaeA基因的扩增阳性，0．5％（5／1007）的菌株eaeA阳性。HPI毒力岛基因检测结果为：10．6％（107／1007）的菌株irp2和fruA基因扩增阳性，2．1％（21／1007）的菌株irp2阳性；其中有2株irp2和ler基因扩增阳性，有3株irp2、ler和eaeA基因扩增阳性，1株irp2、fyuA、ler和eaeA基因扩增都为阳性；在128个HPI阳性分离株中，093和0107血清型菌株分别占定型菌株的15．7％（13／83）和12．0％（10／83）。结论 2．7％的猪源大肠杆菌携带LEE．12．7％的菌株携带耶尔森菌HPI，O93和O107为猪源HPI大肠杆菌常见血清型。     

不同夹源产毒性大肠杆菌的毒力型,耐药性及质粒分析

本研究对从广州郊区某乡的腹泻病人，健康人及环境中分离到的产毒性大肠杆菌菌株进行了毒力型，耐药性及质粒分析。结果表明，病人ＥＴＣＣ株含ＬＴ或ＳＴｐ较多，环境株ＬＴ较多。     

小肠结肠炎耶尔森氏菌主要毒力基因分析

目的了解南京地区从不同来源分离的小肠结肠炎耶尔森氏菌毒力基因的分布情况。方法聚合酶链反应(PCR)技术进行不同血清生物型菌株的毒力基因检测。结果从血清型来看,分离到的9株血清型O:3菌株有7株的基因型分布为ail+,ystA+,ystB-,virF+,yadA+。从生物型来看,共分离到致病生物型(3,4)菌株12株,其中9株毒力基因分布特征为ail+,ystA+,ystB-,virF+,yadA+。结论本市小肠结肠炎耶尔森氏菌血清型O:3菌均包含毒力基因,毒力基因主要分布特征为ail+,ystA+,ystB-,virF+,yadA+。所有的致病生物型(3,4)菌株,均包含染色体上的毒力基因ail,毒力基因主要分布特征亦为ail+,ystA+,ystB-,virF+,yadA+。ail与致病生物型之间存在明显关联。     

腹泻仔貉检出携带耶尔森菌HPI毒力岛的大肠杆菌

目的：为了解大肠杆菌引起仔貉腹泻的机理,进行了小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛基因的检测,并对其菌株做毒力试验。方法：用PCR扩增法检测毒力岛基因irp2和fyua,小鼠腹腔注射检测菌株毒力。结果：从3个貉场腹泻病死貉脏器以及粪便中分离出血清型分别为O23和O20的大肠杆菌,对两血清型大肠杆菌进行毒力岛检测,均检出携带小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛基因irp2和fyuA。2个血清型O23、O20大肠杆菌均分别使小鼠发病死亡。结论：仔貉腹泻是由携带小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛基因irp2和fyua的大肠杆菌引起,该菌对仔貉的健康具有潜在的威胁。     

河北省鼠疫耶尔森菌毒力测定

目的研究河北省鼠疫自然疫源地分离的鼠疫耶尔森菌(简称鼠疫菌)对小鼠和豚鼠的毒力。方法选取2005年分离的鼠疫菌株(200501、200502、200507、200511、200512)、1972年分离的鼠疫菌株(7220)、1994年分离的鼠疫菌株(9401).腹股沟皮下注射法接种小鼠和豚鼠,动物死亡后常规解剖取肝、脾等脏器做细菌培养,计算每株鼠疫菌对小鼠和豚鼠的半数致死量(LD_(50))及LD_(50)的95%可信区间,比较各菌毒力的强弱。结果7220株和2005年分离的5株鼠疫菌毒力强,小鼠LD_(50)介于21.72～113.59个菌;9401株毒力相对较弱,LD_(50)为1809.88个菌。7株菌对豚鼠均有较强的毒力,LD_(50)介于3.35×10~2～6.64×10~4个菌。结论7株鼠疫菌属于鄂尔多斯高原型强毒鼠疫菌,对小鼠和豚鼠均有较强的毒力。     

多重聚合酶链反应检测产毒性大肠杆菌三种毒力基因

目的提高普通的单基因聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测产毒性大肠杆菌（ＥＴＥＣ）的时效。方法以ＥＴＥＣ４４８１３（ＳＴｐ＋）、ＥＴＥＣ１９４４９（ＳＴｈ＋）和ＥＴＥＣ４４８１５（ＬＴ＋）三个标准株为模板,建立了检测产毒性大肠杆菌多重ＰＣＲ扩增系统。结果杂交工程株Ｈ１０９０７（ＳＴｐ＋）,ＰＳＬＭ００４（ＳＴｈ＋）和ＰＭＭ０３０（ＬＴ＋）,杂交的结果都是阳性,５４株菌株经ＰＣＲ检测,其中ＬＴ＋８株、ＳＴｐ＋２株、ＳＴｈ＋７株、ＬＴ＋＋ＳＴｐ＋１０株、ＬＴ＋＋ＳＴｈ＋１０株、ＳＴｐ＋＋ＳＴｈ＋４株和ＬＴ＋＋ＳＴｐ＋＋ＳＴｈ＋１３株。结论用一次ＰＣＲ扩增可检测和鉴别ＥＴＥＣ,比单基因ＰＣＲ更加快速、经济。     

不同来源产毒性大肠杆菌的毒力型、耐药性及质粒分析

本研究对从广州郊区某乡的腹泻病人、健康人及环境（包括猪、鸡和环境）中分离到的产毒性大肠杆菌（ETEC）菌株进行了毒力型、耐药性及质粒分析。结果表明,病人ETEC株含LT或STp较多,环境株含LT较多。比较三种来源菌株对20种临床常用抗菌药物的耐药性,病人株的耐药谱最广,耐药率也最高;其次为环境株。根据耐药谱,可把大多数菌株（94％）分为6个型．不同来源ETEC株的优势耐药型有所不同,但不同毒力型ETEC株的耐药谱无明显不同。91．6％（55／60）的ETEC殊含有质粒,与正常大肠杆菌（78．6％）相近,最常见的质粒有2．2～2．6Md、3．3～4．5Md和＞20Md三种,ETEC株含＞20Md质粒显著高于正常大肠杆菌。未发现质粒谱与ETEC毒力型及耐药谱之间有明显的关系。     

中国鼠疫耶尔森菌染色体结构特征的研究

目的 了解中国鼠疫耶尔森菌不同分离株之间的染色体结构差异,探索染色体重排在鼠疫菌中发生的原因及用于菌株遗传特征识别和亲缘关系分析的可能性.方法 以完成全基因组测序的首株鼠疫菌株CO92(美国)为参考株,以从中国分离出的已完成全基因组测序的4株鼠疫菌株(内蒙古91001、云南剑川D182038、云南玉龙D106004、西藏那曲Z176003)为对比株,根据美国国立生物技术信息中心网站(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome)上公布的这5株鼠疫菌的染色体序列及染色体上所有编码基因序列间的相似性,将鼠疫菌染色体人为的划分成多个大的DNA节段(染色体板块),确定这些板块在不同鼠疫菌株间排列方式的差异以及板块之间的断裂区片段的基因组成;根据菌株两两比较所得的重排差异结果,分析菌株间的亲缘关系.结果 除Z176003菌株外,CO92、D182038、D106004、91001菌株可被分成44个相对独立的染色体板块,板块内部基因组成和排列高度稳定,板块之间可以相对移动.与参考株CO92菌株比较,D182038、D106004菌株染色体均存在13处重排,Z176003菌株染色体存在14处重排,91001菌株染色体存在37处板块排列顺序的改变.菌株间两两比较,D106004与Z176003菌株之间仅有8处染色体板块排列方式不同,表明二者的亲缘关系最为接近.CO92菌株染色体上的相邻板块之间存在43个断裂区,有39个断裂区的DNA片段含有插入序列,其中25个插入序列为IS100.结论 鼠疫菌基因组具有一定的流动性,不同菌株间的染色体结构存在较大差异,染色体重排事件发生的原因与其拥有的插入序列密切相关.菌株间染色体的重排差异,能用于菌株遗传特征的识别和亲缘远近关系的分析.     

Bromelain protects piglets from diarrhoea caused by oral challenge with K88 positive enterotoxigenic Escherichia coli

BACKGROUND: K88 positive enterotoxigenic Escherichia coli (K88+ ETEC) is an important cause of diarrhoea in young piglets. K88+ ETEC pathogenesis relies on attachment to specific glycoprotein receptors located on the intestinal mucosa. Proteolytic treatment of these receptors in vitro and in vivo prevents attachment of K88+ ETEC to piglet small intestines and may be of clinical use to prevent K88+ ETEC pathogenesis. AIMS: To determine whether bromelain, a proteolytic extract obtained from pineapple stems, would protect piglets against K88+ ETEC diarrhoea and to confirm and extend earlier findings on the effects of bromelain on K88+ ETEC receptors in vivo. METHODS: Bromelain (0, 12.5, or 125 mg) was orally administered to just weaned piglets for 10 days. One day following commencement of bromelain treatment, piglets were challenged with K88+ ETEC (5 x 10(10) K88ac:0149) for seven days. Intestinal contents from unchallenged piglets were obtained via an intestinal fistula, and tested for their ability to bind K88+ ETEC before and after bromelain treatment. RESULTS: Both doses of bromelain were successful in reducing the incidence of K88+ ETEC diarrhoea and protected piglets from life threatening disease. Bromelain treated pigs also had significantly increased weight gain compared with untreated pigs. Bromelain only temporarily inhibited K88+ ETEC receptor activity, with receptor activity being regenerated 30 hours following treatment, consistent with the regeneration of new enterocytes. CONCLUSION: Results show that bromelain can temporarily inactivate ETEC receptors in vivo and protect against ETEC induced diarrhoea. Bromelain may therefore be an effective prophylaxis against ETEC infection.     

江西省猪和啮齿动物宿主小肠结肠炎耶尔森菌病原学研究

目的 了解江西省不同宿主动物中小肠结肠炎耶尔森菌的分布以及病原特征,为该菌防控提供科学依据。方法 采集江西省不同年份的屠宰猪与鼠类标本,对foxA筛检阳性的标本进行分离培养,对分离到的小肠结肠炎耶尔森菌进行血清型、生物型、毒力基因与脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析。结果　从1 018份标本中分离到79株小肠结肠炎耶尔森菌,阳性率为7.76%(79/1018)。猪的阳性率为20.86%(63/302),均为O∶3血清型;鼠的阳性率为2.24%(16/716),血清型为O∶5、O∶8和未分型,生物型均为1A型。79株小肠结肠炎耶尔森菌中,致病性菌株均来自猪,占总分离菌株数的79.75%(63/79),其中59株(ystA+、ystB-、yadA+、virF+、ail+、rfbc+),4株(ystA+、ystB-、yadA-、virF-、ail+、rfbc+);非致病性菌株均来自鼠,占总分离菌株数的20.25%(16/79),其中12株(ystA-、ystB+、yadA-、virF-、ail-、rfbc-)、4株(ystA-、ystB-、yadA-、virF-、ail-、rfbc-)。致病性菌株可分为6种带型,以K6GN11C30021为主要型别,占比80.95%(51/63)。结论　在江西省的不同宿主动物中,致病性小肠结肠炎耶尔森菌的主要携带者为生猪。应加强江西地区以生猪为宿主的小肠结肠炎耶尔森菌的监测。     

徐州地区小肠结肠炎耶尔森菌病原学初步研究

目的了解徐州地区小肠结肠炎耶尔森菌分布及病原学特征。方法对本地区分离到的菌株进行血清学分型、生化、药敏试验,并使用聚合酶链反应(PCR)技术检测毒力基因,同时对致病性血清型(O∶3和O∶9型)菌株进行脉冲场凝胶电泳分析。结果2014份标本中共检出32株(分布17个血清型)小肠结肠炎耶尔森菌,总检出率为1.59%。致病菌株占18.75%,携带ystB基因的占21.87%。32株小肠结肠炎耶尔森菌分为3个生物型别,其中1A型占78.12%,3型18.75%,2型为3.12%。本地区分离的3株O∶3血清型菌株的PFGE带型相同。结论该地区存在致病性小肠结肠炎耶尔森菌以及由此引起的腹泻疾病,尤其O∶3型菌株属于我国O∶3血清型小肠结肠炎耶尔森菌的主要克隆系,本地区应当进一步加强该菌的监测工作。     

ETEC肠毒素基因多重PCR检测方法的建立

肠毒素性大肠杆菌的致病性与其具有粘附性的菌毛和产肠毒素的能力密切相关。由于菌毛的血清型多而复杂 ,肠毒素只有不耐热肠毒素 (LT)和耐热肠毒素 (ST)两种 ,因此成为研究的对象。用三对扩增产物分别为 1 1 0bp、2 37bp、368bp的引物建立了检测LT和STⅠ、STⅡ毒素基因的多重PCR方法。扩增产物分别用HindⅢ、HincⅡ、Sau3AⅠ限制性内切酶酶切 ,均得与预期一致的 2个片段。对各个参考株的检测结果为 1 0 0 %符合。结果表明该多重PCR方法具有很好的特异性和敏感性。该方法可用于肠毒素性大肠杆菌腹泻病的辅助诊断以及大肠杆菌的分类检测     

我国青海田鼠与布氏田鼠鼠疫菌生物学特性的比较

目的通过对我国青海田鼠与布氏田鼠鼠疫菌生物学特性的比较,了解两种菌株的遗传特点及其亲缘关系。方法以生化、毒力因子、毒力、PstⅠ敏感性、质粒、外膜蛋白,重复片断扩增多态性指纹图谱,脉冲场电泳图谱等方法进行比较。结果青海田鼠与布氏田鼠鼠疫菌株的主要生化性状均为鼠李糖( )、麦芽糖( )、密二糖( )、甘油( )、阿胶糖(-)脱氮(-);具有FI 、VW 、Pgm 、PstⅠ ;对小白鼠表现为毒力强,青海田鼠型鼠疫菌对豚鼠的毒力高于布氏田鼠型鼠疫菌;两种菌株均对鼠疫菌(包括自身)产生的PstⅠ敏感;它们均携带(6、45、65)×106相对分子质量(Mr)3种质粒,外膜蛋白图谱均缺失32kd条带;重复片断扩增多态性指纹图表现出二者有近缘关系,脉冲场凝胶电泳图谱一致。结论青海田鼠与布氏田鼠鼠疫菌的生物学特性相似,有较近的亲缘关系。     

青海田鼠鼠疫自然疫源地鼠疫菌生化性状测定

目的通过对青海田鼠鼠疫自然疫源地的鼠疫菌进行生化试验来测定其生化性状,并与喜玛拉雅旱獭鼠疫疫源地鼠疫菌和布氏田鼠鼠疫疫源地鼠疫菌的差异进行比较研究。方法选择鼠李糖、甘油、麦芽糖、阿胶糖、蜜二糖、木胶糖、松三糖、乳糖、水杨素、山梨糖、甘露醇、七叶苷、糊精、蔗糖、半乳糖、纤维二糖、山梨醇、尿素、枸橼酸钠、和硝酸钾等项目进行生化试验。结果青海田鼠型菌株的生化性状,与其毗邻地理位置及生态环境一致,分离自喜玛拉雅旱獭的菌株有较大的差异。而与地理位置和生态环境相差甚远的布氏田鼠菌株其生化性状较接近。结论由此可见鼠疫菌的生化性状与宿主的关系更加密切。     

Diarrhea caused by enterotoxigenic Escherichia coli infection of humans is inhibited by dietary calcium

BACKGROUND & AIMS: In several rat infection experiments, we have shown that dietary calcium inhibits intestinal colonization and translocation of invasive salmonella. The aim of the present study was to find out whether calcium is also protective against enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) infection. This was first tested in our rat model and subsequently verified in a human infection study. METHODS: Rats were fed a purified diet with either a low or a high amount of calcium phosphate and orally infected with ETEC. In addition, a parallel, double-blind, placebo-controlled intervention study of 3 weeks was performed with 32 healthy men. Subjects largely maintained their habitual diet and consumed either regular milk products (calcium supply, 1100 mg/day) or placebo milk products (calcium supply, 60 mg/day). On day 10, subjects ingested a live but attenuated ETEC strain (strain E1392/75-2A), able to induce mild although short-lived symptoms. Primary outcomes studied were infection-induced diarrhea (total fecal output and relative fecal dry weight) and fecal mucin excretion. RESULTS: In humans, ETEC induced diarrhea in both groups, in that total fecal output doubled and mean relative fecal dry weight dropped from 25% to 20%. Additionally, fecal mucin excretion was increased in both groups. All these fecal parameters were completely normalized in the calcium group on the second infection day, in contrast to the placebo group, which recovered on the third infection day. Likewise, supplemental calcium inhibited ETEC colonization and diarrhea in rats. CONCLUSIONS: Calcium in milk products improves human resistance to ETEC infection as it inhibits infectious diarrhea.