不同配方的神经营养因子对神经干细胞存活和增殖能力的影响

目的：探讨由营养因子碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)及N2添加剂所组成的配方中最适合神经干细胞存活和增殖的组合。方法：分离培养大鼠脑神经干细胞，免疫荧光细胞染色加以鉴定，采用不同组合配方的培养液培养细胞，通过计数神经干细胞球数，判定其对神经干细胞存活和增殖的影响。结果：在bFGF，EGF和N2组成的8种不同配方培养液中，bFGF组是神经干细胞存活和增殖的最适配方，是8周中与对照组比较所有P&;lt;0.05的惟一配方；EGF具有促进神经干细胞分化的作用，而促增殖能力不如bFGF；相比之下，N2对神经干细胞增殖的影响最弱。结论：bFGF对神经干细胞增殖及较长期存活具有重要的作用，其作用较EGF和N2强，EGF还具有促神经干细胞分化的作用。     

人脐血单个核细胞体外定向诱导向神经干细胞分化

背景：有文献报道应用不同的诱导剂如细胞生长因子和神经营养因子等，可将人脐血单个核细胞体外诱导为神经干细胞和／或成熟神经细胞，但诱导剂的使用方法以及剂量却各不相同。目的：联合应用不同的诱导剂将人脐血单个核细胞体外诱导分化为神经干细胞，并进行形态学观察和鉴定，以确定最佳诱导剂组合及最佳浓度。设计、时间及地点：观察对比实验，于2007-05／2008-09在辽宁省血液中心输血医学研究所细胞研究中心完成。材料：新鲜脐血来源于足月分娩的健康孕妇。方法体外分离培养人脐血单个核细胞，在无血清DMEM／F12培养液中添加不同组合的诱导因子进行单个核细胞的诱导，以确定最佳诱导因子组合：①10ug／L神经生长因子（nerve growth factor，NGF）＋体积分数为0．01神经营养因子N2＋体积分数为0．02神经营养因子B27。②10ug/L NGF＋10ug/L碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）＋体积分数为0．01神经营养因子N2＋体积分数为0．02神经营养因子B27。③10ug／L bFGF＋10ug/L表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）＋体积分数为0．01神经营养因子N2＋体积分数为0．02神经营养因子B27。④10ug／L bFGF＋10ug／L EGF。同时在无血清DMEM／F12培养液中添加不同浓度的bFGF和EGF进行单个核细胞的诱导，以确定最仕诱导浓度：①5ug／L bFGF＋5ug／L EGF组。②10ug/L bFGF和10ug／LEGF组。③20ug/L bFGF和20ug／L EGF组。主要观察指标：①倒置荧光照微镜下观察脐血单个核细胞及各诱导剂组诱导分化为神经干细胞的形态特征。②免疫荧光检测10ug／L bFGF和10ug／L EGF组神经干细胞巢蛋白nestin的表达情况。③流式细胞仪检测10ug／L bFGF和10ug／L EGF组诱导第7天和第15天的细胞nesfin表达情况。结果：①分离培养的脐血单个核细胞呈散在的圆形生长。②至诱导第7天，分化细胞出现突触样结构和生长端样结构，并可见多个细胞之间形成网络，符合神经干细胞样形态特征。③不同的细胞因子组合诱导的神经干细胞增殖和分化情况不同，含NGF实验组细胞长势相对最差，含bFGF和EGF实验组的细胞长势最旺盛，胞体较大而圆，细胞突起也粗大，呈三角形或锥形，突触样结构和生长端样结构明显可见，为最佳诱导因子组合。④10ug／LbFGF＋10p-g，LEGF组的细胞密度适中，伸出突起明显，神经细胞形态最特异，培养周期最短，为最适实验浓度。⑤细胞免疫荧光检测10ug／L bFGF＋10ug／L EGF组诱导第7天细胞nestin阳性。⑥流式细胞仪分别检测对照组和10ug／L bFGF＋10ug／L EGF组诱导第7天、第15天nestin阳性细胞数，差异均具有统计学意义（P〈0．05）。结论：联合应用10ug／L bFGF和10ug/L EGF可较短时间内定向将人脐血单个核细胞体外诱导分化为神经干细胞。     

MT 及bFGF体外诱导大鼠骨髓基质干细胞向神经细胞方向分化的研究

目的：探讨体外诱导大鼠骨髓基质干细胞（MSCs）向神经元样细胞分化的最宜条件，为细胞移植提供寿命相对较长种子细胞。方法：采用细胞培养技术分离培养和纯化大鼠MSCs，以褪黑素（MT）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）为诱导剂定向诱导大鼠MSCs向神经元细胞分化。以免疫荧光法测定分化细胞神经特异性烯醇化酶（NSE）、星形胶质细胞特异性标志（GFAP）的表达。结果：MT、bFGF诱导分化3d部分细胞胞体收缩成三角形，有些成为简单的双极或多极细胞。诱导72h细胞开始表达NSE，9-14d阳性细胞增多，其中MT＋bFGF组变化显著，细胞不表达GFAP。结论：MT和bFGF可以诱导大鼠MSCs向神经元细胞分化，并存活14d以上稳定表达神经元细胞的特异性标记NSE。     

人胎脑皮质神经干细胞的分离培养及鉴定

目的探讨人脑皮质中分离培养神经干细胞并鉴定其增殖及分化潜能。方法采用包含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮细胞生长因子(EGF)的无血清培养和单细胞克隆技术，从30周自愿水囊引产人胎脑皮质中分离出神经干细胞，并进行培养、传代、分化观察，应用免疫组织化学染色对培养的细胞及其分化的细胞进行鉴定。结果从30周人胎脑皮质中成功分离出具有自我更新和多分化潜能的神经干细胞，在无血清培养时细胞呈悬浮状态生长，形成神经球，该细胞具有连续克隆能力，可传代培养，表达神经巢蛋白抗原(Nestin)；在含血清培养时诱导神经干细胞分化，分化后的细胞表达神经元细胞和胶质细胞的特异性抗原。结论神经干细胞的存活和分裂有赖于EGF和bFGF的共同作用；30周人胎脑皮质仍能培养出具有自我复制和分化潜能的神经干细胞。     

碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子对恒河猴骨髓源性神经干细胞的体外诱导增殖作用

目的：探索骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)体外诱导分化为神经干细胞(nerve stem cells，NSCs)的增殖条件，比较碱性成纤维细胞生长因子(base fibroblast growth factor，bFGF)、表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)对神经干细胞生长曲线的影响，为BMSCs在神经科学领域内的应用提供参考。方法：以恒河猴骨髓中分离出的BMSCs为实验对象，实验组利用NSC培养基和bFGF，EGF生长因子，进行体外培养、诱导、增殖。对照组用神经干细胞培养基进行培养增殖。Nestin及CD133作为免疫细胞化学鉴定NSCs的细胞标志。结果：原代培养第6天时多数细胞表现为Nestin及CD133抗原阳性，此后实验组及对照组细胞数量开始明显扩增，但实验组增殖更为明显，bFGF+EGF组从第8天时的(96．30&;#177;8．78)&;#215;10^4增加到第18天时的(1407.90&;#177;26.62)&;#215;10^4，并且增殖开始的时间较对照组提前2dc．NSCs在10d后有少量细胞向神经元和神经胶质细胞分化。结论：bFGF与EGF联合应用能够促使NSCs增殖时间提前及增殖效能显著提高。另外，bFGF和EGF还具有诱导NSC向神经细胞分化的作用。     

碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子对恒河猴骨髓源性神经干细胞的体外诱导增殖作用

目的:探索骨髓基质细胞(bonemarrowstromalcells,BMSCs)体外诱导分化为神经干细胞(nervestemcells,NSCs)的增殖条件,比较碱性成纤维细胞生长因子(basefibroblastgrowthfactor,bFGF)、表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)对神经干细胞生长曲线的影响,为BMSCs在神经科学领域内的应用提供参考。方法:以恒河猴骨髓中分离出的BMSCs为实验对象,实验组利用NSC培养基和bFGF,EGF生长因子,进行体外培养、诱导、增殖。对照组用神经干细胞培养基进行培养增殖。Nestin及CD133作为免疫细胞化学鉴定NSCs的细胞标志。结果:原代培养第6天时多数细胞表现为Nestin及CD133抗原阳性,此后实验组及对照组细胞数量开始明显扩增,但实验组增殖更为明显,bFGF+EGF组从第8天时的(96.30±8.78)×104增加到第18天时的(1407.90±26.62)×104,并且增殖开始的时间较对照组提前2d。NSCs在10d后有少量细胞向神经元和神经胶质细胞分化。结论:bFGF与EGF联合应用能够促使NSCs增殖时间提前及增殖效能显著提高。另外,bFGF和EGF还具有诱导NSC向神经细胞分化的作用。     

海人酸对神经干细胞增殖及分化的影响

背景：神经干细胞对脑组织的修复作用非常有限,约80％新增殖的内源性神经干细胞在6周内死亡,仅0．2％的细胞继续增殖、分化,参与修复。目的：分析不同剂量海人酸在对神经干细胞增殖及分化的影响。方法：体外分离并培养新生Wistar大鼠神经干细胞,将神经干细胞分为空白对照组和加入不同浓度梯度的海人酸组,通过免疫组化法和免疫荧光法进行鉴定,MTT比色法测定海人酸对神经干细胞分化的影响,计算分化后神经元和星形胶质细胞比例。结果与结论：海人酸组贴壁的神经球分化速度较空白对照组快,在同一时间点进行观察,神经细胞的迁移距离较未处理组远。分化5d后,海人酸组所分化的细胞中,星状细胞较空白对照组多,而神经元样细胞相对较少,培养的细胞具有自我更新和向神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞分化的潜能。兴奋性氨基酸海人酸可使部分神经干细胞死亡,但可促进幸存的神经干细胞增殖及分化,并诱导其向星形胶质细胞分化。     

不同配方的神经营养因子对神经干细胞存活和增殖能力的影响

目的:探讨由营养因子碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)及N2添加剂所组成的配方中最适合神经干细胞存活和增殖的组合。方法:分离培养大鼠脑神经干细胞,免疫荧光细胞染色加以鉴定,采用不同组合配方的培养液培养细胞,通过计数神经干细胞球数,判定其对神经干细胞存活和增殖的影响。结果:在bFGF,EGF和N2组成的8种不同配方培养液中,bFGF组是神经干细胞存活和增殖的最适配方,是8周中与对照组比较所有P<0.05的惟一配方;EGF具有促进神经干细胞分化的作用,而促增殖能力不如bFGF;相比之下,N2对神经干细胞增殖的影响最弱。结论:bFGF对神经干细胞增殖及较长期存活具有重要的作用,其作用较EGF和N2强,EGF还具有促神经干细胞分化的作用。     

含碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子培养基先后作用培养建立大鼠胚胎神经干细胞克隆的实验

背景：体外培养获得神经干细胞的有效方法是干细胞实验研究中很值得关注的问题。 目的：观察应用含有不同生长因子的培养基体外培养神经干细胞的有效方法。 设计：单一样本观察。 单位：四川大学生命科学院细胞生物学实验室。 材料：孕14dSD大鼠10只。DMEM／F12 1：1，碱性成纤维细胞生长因子，表皮生长因子；巢蛋白抗体IgG，β-微管蛋白Ⅲ抗体IgG，胶质纤维酸性蛋白抗体IgG，生物素标记二抗和三抗、异硫氰酸荧光素标记二抗。 方法：实验于1999／2001在四川大学生命科学院细胞生物学实验室完成。①从胎鼠前脑取出脑组织，采用酶消化．机械吹打、离心、培养原代神经干细胞克隆。②神经干细胞以2&;#215;10^8 L^-1密度接种培养，分4组，每组6瓶细胞，DMEM／F12组：加入DMEM／F12（1：1）培养基含体积分数为0．1的小牛血清；碱性成纤维细胞生长因子组：培养基为含20μg／L碱性成纤维细胞生长因子；表皮生长因子组：培养基含30μg／L表皮生长因子；碱性成纤维细胞生长因子＋表皮生长因子组：先用含碱性成纤维细胞生长因子的培养基培养2h后再换成含表皮生长因子的培养基培养。培养24h后更换培养瓶，培养14d后显微镜下计数原代克隆数，免疫组化法检测干细胞特殊标记蛋白巢蛋白的表达。 主要观察指标：①神经干细胞的原代克隆。②单细胞克隆培养结果。③诱导分化结果。 结果：①从胎鼠脑中分离的细胞具有连续传代形成克隆的能力，免疫荧光化学显示细胞球内细胞巢蛋白表达阳性。②采用含碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子培养基先后作用培养的方法形成神经干细胞克隆率最高（0．630％）。③培养的神经干细胞克隆能诱导分化成神经元和神经胶质细胞。 结论：①结果证实培养分离的细胞是神经干细胞。②采用含碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子培养基先后作用培养的方法是获得神经干细胞的有效方法。     

新生小鼠海马源性神经干细胞体外分离培养细胞群的增殖分化

目的：从新生小鼠脑海马部取材进行大量细胞克隆，对体外分离培养的神经干细胞进行鉴定．检测所分离细胞群的增殖分化特性。 方法：实验于2005-07／10在解放军第三军医大学解剖学教研室实验完成。选用清洁级昆明种新生24h内小鼠12只，利用神经于细胞条件培养基和单细胞克隆技术，从小鼠脑海马分离并体外培养神经干细胞。连续传代20代后，以免疫荧光细胞化学方法及免疫组织化学方法检测克隆细胞Nestin、BrdU、NeuN、NF-200、MOSP及胶质原纤维酸性蛋白的表达。 结果：实验选用昆明种新生24h内小鼠12只，全部进入结果分析。①神经干细胞的培养及分化：神经干细胞以神经球的方式悬浮生长。无明显突起，原代细胞接种后于第3天开始形成神经球。组成细胞球的细胞圆润饱满，活力状态好，绝大多数在1d内贴壁，并从细胞球边缘伸出突起，加入含血清的培养基后克隆球48h内即可见到明显的细胞分化，克隆球周围有细胞移出，7d后原有的细胞球消失。②神经干细胞的鉴定结果：原代克隆及其亚克隆行Nestin免疫荧光染色。证实克隆内细胞均为Nestin抗原阳性；细胞经BrdU标记后，行BrdU免疫细胞化学染色，部分细胞呈阳性。③神经干细胞的分化鉴定：对诱导分化的细胞分别行NeuN、NF-200、MOSP及胶质原纤维酸性蛋白免疫细胞化学检测，表达均呈阳性。 结论：成功分离并获得新生小鼠脑海马神经于细胞，该细胞可连续传代，具备多向分化潜能。     

不同细胞因子对间充质干细胞向神经细胞诱导分化的影响

目的：探讨骨髓间充质干细胞体外培养条件及不同细胞因子对其向神经样细胞分化的影响。 方法：实验于2003-10／2005-01在郑州大学干细胞研究中心完成。从正常人骨髓中分离获取骨髓间充质干细胞．体外培养扩漕、纯化后，分3组对其进行诱导分化：①碱性成纤维生长因子组。②表皮生长因子组。③碱性成纤维生长因子＋表皮生长因子组。诱导后行免疫细胞化学鉴定，用反转录-聚合酶链反应对培养及诱导前后的微管相关蛋白-2、胶质纤维酸性蛋白mRNA的表达进行检测。 结果：增殖培养3d即可见细胞分裂像和克隆单位．细胞可保持较高的增殖生长能力。碱性成纤维生长因子组和联合诱导组微管相关蛋白-2mRNA的表达高于表皮生长因子组，而表皮生长因子组比碱性成纤维生长因子组有较多的胶质纤维酸性蛋白mRNA的表达。 结论：骨髓间充质干细胞可以在体外扩增、培养，并可向神经干细胞方向诱导。表皮生长因子能促进干细胞向胶质细胞方向分化．而碱性成纤维生长因子能促进神经干细胞向神经元分化。     

碱性成纤维生长因子和神经生长因子联合应用培养成年大鼠海马神经干细胞向神经元样细胞的分化

背景：影响神经干细胞向神经元分化的因素很多,各种营养因子可以不同程度地刺激神经干细胞向神经元分化,如何使神经干细胞大量分化为神经元是研究的热点问题。目的：观察联合应用碱性成纤维生长因子和神经生长因子对成年大鼠海马神经干细胞为神经元的影响。方法：无菌条件下分离大鼠脑海马组织,传至第4代克隆球直径约为200μm时,滴加DMEM/F12＋2%B27＋20μg/L表皮生长因子＋20μg/L碱性成纤维细胞生长因子,进行单细胞克隆培养,传代的神经干细胞分成空白对照组、碱性成纤维细胞生长因子组、神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子＋神经生长因子组。观察传代后的克隆球进行神经干细胞免疫细胞化学染色鉴定,计数神经元特异性烯醇化酶阳性细胞率,检测神经干细胞向神经元的分化情况。结果与结论：①单细胞克隆培养后,克隆球细胞表达巢蛋白,诱导分化后神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白均呈阳性表达。②与空白对照组神经干细胞分化为神经元的比例比较,碱性成纤维细胞生长因子组、神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子组＋神经生长因子组均明显提高（P〈0.05）,且碱性成纤维细胞生长因子组＋神经生长因子组神经元的比例最高（P〈0.05）。提示,碱性成纤维细胞生长因子可以提高神经生长因子诱和神经生长因子均可促进神经干细胞向神经元分化,且二者联合应用效果更佳。     

不同体外诱导培养条件下新生鼠基底前脑神经干细胞增殖和分化为神经元的能力

目的：研究神经干细胞的增殖、迁移和分化可为揭示神经系统的发生、发育过程提供可靠依据。观察表皮生长因子和碱性成纤维生长因子在体外刺激新生鼠基底前脑神经干细胞的增殖情况，及其各自诱导神经干细胞分化成神经元的能力。 方法：实验于2005-12／2006—07在广州医学院解剖学教研室完成。①动物：清洁级新生24h内的SD大鼠30只，实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法：新生鼠在无菌条件下取脑，分离出基底前脑，胰蛋白酶消化，离心过滤制备单细胞悬液，接种于含B27的DMEM／F12培养基培养瓶中，每瓶40-60万个细胞，加入终浓度均为10μg／L的表皮生长因子和碱性成纤维生长因子刺激生长，在体外进行神经干细胞的克隆培养，传代培养过程中加入终浓度为6mg／LBrdU用于标记神经球，设立3组，各自加入体积分数为0．1的小牛血清、终浓度均为10μg／L的表皮生长因子、碱性成纤维生长因子，对培养得到的神经干细胞进行诱导分化。③实验评估：免疫荧光染色检测神经干细胞巢蛋白抗原的表达，并用BrdU标记和免疫荧光证实其增殖能力。免疫荧光染色检测不同诱导条件下神经干细胞向神经元分化的能力。 结果：①细胞形态观察：从新生鼠基底前脑成功分离出神经干细胞，原代培养呈透亮的圆球形，2—3d后细胞数目明显减少，部分细胞开始分裂。1周左右培养瓶中出现许多由数十到数百个细胞组成的悬浮生长的细胞球，球中的细胞形态规则，边界清楚，折光性较强，胞浆颜色较深，核，浆比较大。该细胞具有连续增殖能力，可以传代培养。②巢蛋白抗原的表达：传代神经球中的细胞均呈巢蛋白抗原阳性。③BrdU标记检测：克隆球中的细胞均为BrdU阳性，表明克隆球是由不断分裂增殖的细胞组成。④诱导分化结果：?     

中枢神经系统再生的可能性:碱性成纤维生长因子和表皮生长因子对胚胎神经干细胞生长分化的影响

目的研究碱性成纤维生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)对胚胎神经干细胞生长和分化的影响.方法从孕11～13d大鼠胚胎神经管取神经干细胞,原代体外培养中加入bFGF和EGF,观察对神经干细胞胞体发育及突起生长的影响.结果EGF主要影响神经干细胞的增殖,也可以促进细胞突起的生长,但胞体直径与相应的对照组无显著差异;bFGF可促进胞体发育及突起的生长;两种因子联合应用,生长作用优于单独应用组.结论EGF和bFGF可以促进原代培养胚胎神经干细胞的生长和分化.     

体外血清预培养促进神经干细胞增殖

背景：神经干细胞的临床应用前景广阔，寻找多种方法体外促进神经干细胞的增殖和分化为今后的发展方向。目的：介绍一种省时且经济的神经干细胞的培养方法。设计：观察对比实验。单位：北京市神经外科研究所。材料：选择4只孕14天Wistar大鼠，常温常湿环境饲养，体质量（180&;#177;20）g，均购自中国医学科学院动物所（实验动物许可证号码：SCXK1100—0006）。DMEM／F12（1：1）以及B27购自Gibco公司；碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子购自PeproTech公司；巢蛋白单克隆抗体、胶质纤维酸性蛋白多克隆抗体、半乳酸脑苷多克隆抗体和微管相关蛋白2单克隆抗体购自Chemicon公司。胎牛血清购自Hyclone公司。方法：实验于2004—05／2004—10在北京市神经外科研究所损伤修复室完成。将Wistar大鼠脱臼处死，每次取4只胎鼠，将其脑组织置于Hank’s液中，解剖显微镜下剥离软脑膜及血管，眼科剪剪碎脑组织并收集细胞于2个离心管中离心，弃上清液。①根据给予血清预培养与否将细胞分成血清预培养组及对照组。血清预培养组细胞加入含100g／L胎牛血清DMEM培养液，培养48h后换含表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、B27的DMEM／F12培养液；对照组细胞中直接加含表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、B27的DMEM／F12培养液，37℃．体积分数为0．05的CO2培养箱培养1周。通过相差显微镜观察血清预培养组对照组培养48h后神经干细胞的生长情况。②用100g／L胎牛血清诱导分化后的第5天和第10天行nestin、胶质纤维酸性蛋白多克隆抗体、半乳酸脑苷多克隆抗体和微管相关蛋白2单克隆抗体免疫荧光染色，采用荧光显微镜观察检测两组神经干细胞的表达；对照组采用PBS缓冲液替代一抗，其它步骤同血清预培养组。主要观察指标：①相差显微镜下观察血清预培养组及对照组神经干细胞培养48h后的生长状况。②免疫荧光染色检测两组神经干细胞的表达。结果：①血清预培养组细胞经培养48h后，出现大量较规则的神经干细胞球，多数细胞球由8-10个细胞聚集而成。改用表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、B27的DMEM／F12培养液后，细胞球增殖很快；对照组细胞培养48h后只有不规则片状块，4—5d后才出现规则的小细胞球。②荧光显微镜观察可见两组细胞的分化速度和分化方向相同，在诱导分化后的第5天，nestin、胶质纤维酸性蛋白、半乳酸脑苷为阳性，微管相关蛋白2为阴性；在诱导分化后的第10天，nestin和胶质纤维酸性蛋白为阳性，半乳酸脑苷和微管相关蛋白为阴性。结论：血清预培养可使神经干细胞聚球速度加快，促进神经干细胞增殖。     

蛇床子素可促进体外培养神经干细胞的增殖

背景：神经干细胞具有自我更新和多向分化潜能,但正常情况下,神经干细胞数目太少,且大部分处于静息状态,促进其增殖是神经干细胞治疗神经退行性疾病的关键。目的：观察蛇床子素对体外培养的神经干细胞增殖作用的影响,分析其促进增殖能力的作用机制。方法：体外培养神经干细胞,在增殖培养基中培养至第3代,加入不同浓度的蛇床子素（10,50和100μmol/L）作用24 h用CCK-8法检测细胞活力,再培养3,5,7 d后测量神经球半径,用免疫荧光组化法计数Ki67阳性细胞数目;再培养3 d后利用RT-PCR技术检测神经干细胞中Notch 1、Hes 1和Mash 1基因表达的情况。结果与结论：与正常组比较,50,100μmol/L的蛇床子素具有明显促进神经干细胞增殖能力的作用,100μmol/L作用最为显著,可引起Notch 1基因、Hes 1基因上调表达,对Mash 1基因基本无影响,说明蛇床子素对体外培养的神经干细胞具有促进增殖作用,其作用机制可能与激活Notch信号通路上的Notch 1、Hes 1基因有关。     

Numb基因在培养神经干细胞中的表达

目的 观察参与细胞发育分化和细胞非对称性分裂的notch信号传导路的分子Numb在体外培养的神经干细胞内的分布和表达，以期为在体外控制神经干细胞的分化提供新的线索。方法 取孕14d(E14)Balb／c近交系小鼠胚胎，采用无血清培养技术，在体外进行神经干细胞克隆的培养传代，经过免疫细胞化学鉴定后，用Numb特异性引物对培养的神经干细胞进行RT-PCR分析，PCR产物经克隆测序后，用地高辛标记，对神经干细胞克隆进行原位杂交。结果 在培养的神经干细胞内有大量细胞(&;gt;95％)均为Numb基因表达信号阳性；干细胞克隆内部中心和边缘相互间未见明显差别。结论 Numb基因可能在神经干细胞的增殖和分化过程中起重要作用。     

无血清条件下体外分离培养鼠胚胎脑组织神经干细胞

背景:神经干细胞的体外培养成功为治疗中枢神经系统疾病提供了新的思路,但神经干细胞的分化和功能修复机制尚不甚清楚.移植后的细胞能否与体内细胞结合以及建立起正常的神经系统突触联系急需解决.目的:在无血清条件下体外分离培养胚鼠神经干细胞,观察其生长及分化情况.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-03/2008-01在天津市环湖医院神经干细胞室完成.材料;孕14～16 d的SD大鼠,由北京维通利华实验动物中心提供.方法:取孕鼠胚胎的脑海马组织.通过机械分离和胰蛋白酶消化结合法体外分离培养神经干细胞,在含有碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子及B27的无血清DMEM/F12培养基中传代扩增.取原代培养7 d的神经干细胞,制备单细胞悬液,接种后加入含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液诱导3 d.主要观察指标:倒置显微镜下观察神经干细胞的增殖分化过程,并行免疫荧光染色鉴定.通过细胞免疫化学染色检测诱导分化后的细胞类犁.结果:分离培养的神经干细胞在无血清培养基中不断分裂增殖,8 d左右即可形成胞体透亮、折光性好的干细胞球,悬浮生长,免疫荧光染色巢蛋白呈阳性表达.神经干细胞球诱导5 d,免疫细胞化学染色后可见胶质纤维酸性蛋白及神经元特异性烯醇酶呈阳性表达的细胞.结论:体外无血清条件下,分离培养的神经干细胞生长状态良好,且具有自我更新和增殖能力.诱导后能够向神经元及星形胶质细胞方向分化.     

新生小鼠海马神经干细胞体外培养条件下的增殖与分化

背景：神经干细胞移植可用于中枢神经损伤的临床治疗。目的：观察新生小鼠海马神经干细胞在体外培养条件下的增殖和分化。方法：从新生昆明小鼠海马取材,采用机械分离法对原代细胞进行无血清培养,采用机械法复合酶消化法对原代细胞进行传代,以体积分数为10%胎牛血清诱导分化。免疫荧光行巢蛋白、β-微管蛋白Ⅲ和胶质纤维酸性蛋白染色,对培养的细胞进行鉴定。CCK-8法检测神经干细胞增殖能力。结果与结论：从新生小鼠海马分离得到的细胞具有连续传代形成克隆球的能力,克隆球呈巢蛋白免疫反应阳性;加入胎牛血清可诱导分化为β-微管蛋白Ⅲ和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞。提示实验成功建立了体外培养新生小鼠海马组织分离和培养神经干细胞的方法,培养的神经干细胞在体外培养条件下保持着自我增殖和分化的潜能。     

锌对大鼠骨髓间充质干细胞增殖与向神经样细胞分化的影响

目的探讨锌对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells BMSCs)增殖及向神经样细胞诱导分化的作用。方法贴壁法体外分离培养BMSCs,MTT法检测不同浓度的锌处理BMSCs 24h、48h及72h后增殖活性。免疫细胞化学法检测不同浓度的锌处理BMSCs Ki67的表达。BMSCs分空白对照组、缺锌诱导组、正常诱导组、低浓度锌处理组和高浓度锌处理5组。除空白对照组外,其余4组在含有碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮细胞生长因子(EGF)诱导分化培养基中培养5d,维甲酸继续培养14d,诱导BMSCs向神经样细胞分化。倒置显微镜观察细胞生长形态;免疫细胞化学法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达。结果MTT结果显示,细胞暴露在锌浓度为200×10-7 mol/L时,不同时间点细胞活力均最强;免疫细胞化学法显示:缺锌组Ki67阳性表达显著低于空白对照组(P0.05),低浓度锌处理组Ki67阳性表达显著高于空白对照组、缺锌组和高浓度锌处理组(P0.05);缺锌组、正常诱导组和低浓度锌处理组GFAP和NSE阳性率显著高于空白对照组和高浓度锌处理组(P0.05),正常诱导组和低浓度锌处理组的GFAP和NSE阳性率显著高于缺锌组(P0.05),低浓度锌处理组的GFAP和NSE阳性率均显著高于正常诱导组(P0.05)。结论锌在一定浓度范围内能够提高BMSCs增殖能力及促进BMSCs向神经样细胞分化。