肿瘤患者合并弓形虫感染血清抗体检测分析

目的　了解银川地区肿瘤患者弓形虫感染状况 ,使肿瘤合并弓形虫感染时能得到及时的治疗 ,提高化疗或放疗的效果。方法　用间接血凝法 (IHA)对 2 32例各种肿瘤患者及 2 6 0名正常体检者血清进行检测。结果2 32名肿瘤患者弓形虫血清抗体阳性 2 4人 ,阳性率为 10 .34 % ,2 6 0名正常体检者弓形虫血清阳性 4人 ,阳性率为1.5 4% ,抗体几何平均滴度 (GMT)分别为 11.6 5和 1.5 4。结论　肿瘤患者弓形虫感染率及血清抗体平均滴度均高于正常体检者 ,两者间有显著性差异 (P <0 .0 1)。     

孕妇弓形虫感染的抗体检测

目的探讨孕妇早期弓形虫感染率及抗体检测的意义.方法 1368例早孕妇女应用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行弓形虫特异性抗体检测.结果早孕妇女弓形虫感染率为4.82%,孕妇年龄与孕早期弓形虫感染无明显关联.结论早孕妇女进行弓形虫特异性抗体检测是提倡优生优育及提高人口健康素质的一项重要举措.     

刚地弓形虫感染昆明种及Babl/c小鼠的病理特征研究

目的 研究弓形虫感染昆明种及Babl/c小鼠的病理特征.方法 分别以刚地弓形虫速殖子感染昆明种及Babl/c小鼠,观察小鼠感染发病情况,并用病理组织切片,直接染色或免疫组化法检测小鼠体内弓形虫包囊或抗原.正常对照组小鼠未感染弓形虫.结果 两种小鼠对刚地弓形虫均易感,昆明种小鼠感染刚地弓形虫后2、3 d开始发病,感染后7～10 d死亡,死亡率95.00%;Babl/c小鼠于感染后4、5 d开始发病,呈一过性急性发作,绝大多数小鼠能度过急性期逐步恢复而长期存活,仅少数小鼠死亡,死亡率为10.00%.昆明种小鼠感染后主要表现为肝细胞变性、坏死、大量炎细胞浸润,小肠黏膜坏死脱落,腹腔内可见大量弓形虫速殖子;Babl/c小鼠在急性感染期表现为肝细胞水变性,腹腔内可见弓形虫速殖子,度过急性期后继续存活的小鼠体内虽未见到大量包囊、但在肝、脑等组织中可检出弓形虫抗原.对照组小鼠在实验期间无任何异常.结论 两种小鼠对刚地弓形虫的易感性不同,Babl/c鼠感染弓形虫后经历了急性和慢性感染的转换过程,是研究弓形虫感染与免疫的良好模型.     

承德市部分人群血清弓形虫抗体检测报告

承德市部分人群血清弓形虫抗体检测报告寄生虫学教研室王庆林陈晓宁赵小娟附属医院检验科丁秀荣关键词弓形虫；血清抗体检测；临床表现；流行病学弓形虫病是近年才受到重视的一种危害较严重的人畜共患疾病。为初步了解我市本病的流行情况，我们对我市部分人群进行了血清弓...     

风湿性疾病患者血清弓形虫抗体检测分析

目的：了解风湿性疾病患者弓形虫感染的情况。方法：采用ELISA法对346例风湿性疾病患者进行血清弓形虫IgG、IgM检测。结果：在被检患者中,IgG阳性率21.68%,其中男性阳性率17.00%,女性阳性率16.34%,两者比较无统计学意义（P〉0.05）;IgM阳性率20.52%,其中男性阳性率17.62%,女性阳性率17.10%,两者比较无统计学意义（P〉0.05）。类风湿性关节炎（RA）、系统性红斑狼疮（SLE）、风湿热（RF）患者IgG阳性率分别为23.83%、20.46%、20.59%,明显高于多发性肌炎（PM）、皮肌炎（DM）、干燥综合征（SS）患者的12.50%、10.00%、15.38%（P〈0.05）。RA,SLE,RF患者IgM阳性率分别为21.24%、21.59%、23.53%,明显高于PM,DM,SS患者的12.50%、10.00%、7.69%（P〈0.05）。结论：风湿性疾病患者弓形虫感染率较高,尤其是RA,SLE,RF患者。     

银川市732名大学新生血清弓形虫抗体检测分析

为了解银川地区在校大学生弓形虫感染状况及其与民族、性别、家庭职业之间的关系 ,以保障在校大学生的身体健康 ,用间接血凝试验 (IHA)对 732名入院新生静脉血进行弓形虫抗体检测。结果 ,弓形虫血清抗体阳性率 2 0 5 % ( 1 5 /732 ) ;男、女学生弓形虫抗体阳性率分别为 3 0 8% ( 1 1 /35 7)和 1 0 7% ( 4 /375 ) ,两组间差异无显著性 (P >0 0 5 )。汉、回、满族学生弓形虫抗体阳性率分别为 2 5 1 % ( 1 1 /4 38)、1 84 % ( 3/1 6 3)和 0 79% ( 1 /1 2 6 ) ,各组间差异无显著性 (P >0 0 5 )。农业学生与非农业学生弓形虫抗体阳性率分别为 3 5 1 % ( 1 2 /34 2 )和 0 77% ( 3/390 ) ,两组间有显著性差异 (P <0 0 5 )。显示不同性别和民族的学生均有机会感染弓形虫 ,农业家庭学生弓形虫感染率高于非农业家庭学生。     

经口感染弓形虫对小鼠免疫器官的影响

目的　研究经口感染弓形虫对小鼠免疫器官的影响。方法　两组小鼠分别灌胃接种含 5× 10 4个速殖子的液体 0 .5ml或相同剂量的PBS ,观察小鼠的体况、胸腺、脾、Peyer’spatches(PP结 )的变化。 结果　经口接种弓形虫速殖子可致小鼠感染 ,在第 8,10天表现最为严重。胸腺重量略有减轻 ;PP结肿大 ,但数目变化不显著 ;脾脏增重 ,尤其在第 8,10天与对照组相比差异显著 (P <0 .0 1)。结论　 5× 10 4个弓形虫速殖子灌胃接种可使小鼠出现一过性临床症状 ,并可以诱导机体黏膜和系统免疫应答 ,使免疫器官发生病理改变。     

经口感染弓形虫垂直传播小鼠模型的建立

目的建立经口感染弓形虫RH株速殖子垂直传播小鼠模型。方法将54只妊娠0天的BALB/c孕鼠随机分为6组,于妊娠第8天,分别用0,1000,2000,4000,8000,16000个弓形虫速殖子灌胃感染,妊娠第18天处死,记录活胎率,测定母鼠肝、胎盘和胎仔脑组织弓形虫抗原。结果经ELISA检测弓形虫循环抗原证实,孕鼠死亡率与胎盘和胚胎感染率均随感染剂量的增加而升高,而活胎率下降。1000,2000组的胎盘、胚胎未发生感染,4000组的胚胎感染率5.13%,16000组的胚胎感染率20.00%,但孕鼠的健康状况差、死亡率高,均不适宜建立弓形虫垂直传播动物模型。综合分析表明,8000组孕鼠既有较高的存活率,又可保证胎盘和胚胎较高的感染率。结论每只孕鼠灌胃感染8000个速殖子为建立弓形虫垂直传播小鼠模型的适宜剂量。     

SLE小鼠血清中自身抗体检测

目的 :比较LPSip所诱导的SLE模型小鼠血清中自身抗体的表达 ,获得死亡率较低的SLE模型 .方法 :BALB/c小鼠随机分组ipLPS或生理盐水 ,2 4h后取血清行间接免疫荧光法及可提取性核抗原 (ENA)多肽抗体免疫印迹法进行实验 .结果 :LPS 5mg·kg-1ip动物死亡率为 4 0 % ;2 .5mg·kg-1死亡率为 5 % ;1.2 5mg·kg-1无死亡 .ENA多肽抗体免疫印迹法 :LPS 5mg·kg-1ip动物可见阳性条带出现于 2 8/ 2 9,13.5ku多肽 ;15 ,16 .5 ,38ku多肽 ;5 2ku多肽及4 7/ 4 8,4 5ku多肽上 ,可判定为抗Sm ,抗Rib ,抗ssA和抗ssB抗体阳性 .与LPS 2 .5mg·kg-1ip组一致 .间接免疫荧光法 :LPS 5mg·kg-1ip与 2 .5mg·kg-1组动物血清中均能检测出核糖体 (Rib) p 蛋白抗体、Jo 1抗体和线粒体 (AMA)抗体阳性 ,荧光强度较强 .1.2 5mg·kg-1组无阳性结果 .结论 :LPS2 .5mg·kg-1ip能成功诱导SLE模型 ,且动物死亡率低     

孕妇弓形虫感染的IgM、IgG和IgA抗体检测

我室在 1997、1998年应用ＥＬＩＳＡ方法进行弓形虫ＩｇＭ、ＩｇＧ和ＩｇＡ抗体检测 ,以了解孕妇弓形虫感染情况 ,现将结果报告如下。1　材料与方法1.1　材料　　待查血清 ,为重庆市区和郊区孕妇 ,年龄范围 2 0～ 38岁 ,在怀孕早期 (2～ 3月 )内 ,采静脉血 ,常规分离血清 ,置 -2 0℃冰箱中保存备用 ,并对部分孕妇弓形虫ＩｇＭ抗体阳性的所生新生儿脐血血清作弓形虫抗体血清学检测。1.2　弓形虫抗原、阳性、阴性对照血清　　均购于上海市医学检验重点实验室和温州市伊利康公司研制的弓形虫ＥＬＩＳＡ试剂盒 ,酶标ＩｇＭ抗体为试剂盒所带的试…     

小鼠过继转移致敏小肠IEL抗弓形虫感染

目的研究分离自弓形虫RH株速殖子经口感染小鼠后不同时间点的小肠上皮内淋巴细胞(intraepitheliallymphocyte,IEL)过继转移抗弓形虫感染作用,探讨其作用机制。方法BALB/c鼠经口感染弓形虫速殖子5×104个/只或未感染,作为供体提供IEL。同品系受体鼠分为实验组(IEL7组、IEL9组、IEL11组、IEL13组和IEL15组)和对照组(IEL0组),每组6只小鼠。受体鼠经尾静脉分别接受分离自供体鼠经速殖子感染后第7、9、11、13、15天的致敏IEL或未致敏的IEL3×105/0.2ml只。各组小鼠过继转移后第4天,用弓形虫速殖子灌胃攻击,攻击后第13天分离纯化脑、肺、脾组织弓形虫速殖子并计数,测定肠液IgA含量。结果致敏IEL过继免疫可使受体鼠脑、肺、脾组织内弓形虫速殖子数显著减少,接受感染后第13天IEL的小鼠组织内速殖子数减少最为显著(P<0.01)脑、肺和脾组织内速殖子数比对照组分别减少81.13%,58.43%和70.97%。致敏IEL过继转移使肠道IgA水平升高,IEL11组和IEL13组显著高于IEL0组(P<0.01)。结论致敏IEL过继转移能上调肠道黏膜的免疫应答,导致黏膜特异性IgA分泌增加,诱导黏膜抗体的保护性免疫应答。IEL的这种保护作用具有致敏的时间依赖性,感染后第13天分离的致敏IEL对弓形虫感染具有最大的保护作用。     

STAg和霍乱毒素不同程序滴鼻免疫小鼠诱导抗弓形虫作用

目的观察弓形虫可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)和霍乱毒素(cholera toxin,CT)佐剂不同程序滴鼻免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染能力,确定STAg和CT滴鼻免疫的最佳程序。方法BALB/c小鼠随机分为3组:1次、2次和3次免疫组,用20 μg STAg 1 μg CT/只分别滴鼻免疫1次,2次或3次,前2次间隔2周,末次间隔1周。末次免疫后第14天,用4×104个速殖子/只灌胃攻击所有小鼠,观察小鼠健康及死亡情况,攻击后第30天处死,ELISA法检测血清IgG和粪便IgA,计数肝、脑组织内弓形虫速殖子,分离并计数派伊尔结(Peyer′spatches,PP)和脾淋巴细胞数。结果2次和3次免疫组小鼠存活率明显高于1次免疫组(P<0.05),肝、脑组织内虫荷显著低于1次免疫组(P<0.001),血清IgG和粪便IgA高于1次免疫组,PP和脾淋巴细胞数无显著性变化。结论STAg和CT佐剂滴鼻免疫2次或3次能有效诱导小鼠抗弓形虫感染。     

弓形虫毒力因子的研究进展

弓形虫（Toxoplasma gondii）是世界性分布的专性细胞内寄生原虫,可感染人类和几乎各类哺乳动物,导致弓形虫病。弓形虫的毒力取决于参与寄生虫一宿主细胞相互作用或者宿主免疫应答的弓形虫毒力因子。研究弓形虫毒力相关因子,对于寻找有效的药物作用靶位点和疫苗候选分子,预防和控制这种社会性寄生虫病具有重大意义。本文对弓形虫毒力相关因子的研究进展进行了综述。     

2005年湛江市、韶关市、汕头市人兽弓形虫感染状况调查

目的 了解广东省湛江市、韶关市、汕头市的人兽弓形虫感染情况.方法 收集3个地区人、猪、鼠血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)间接法检测弓形虫IgG抗体.结果 湛江市检测猪血清279份,阳性13份,阳性率为4.66%,检测鼠血清93份,阳性7份,阳性率7.53%;韶关市检测人血清42份,阳性0份,检测鼠血清95份,阳性3份,阳性率3.16%;汕头市检测人血清50份,阳性6份,阳性率为12.00%,检测鼠血清100份,阳性3份,阳性率为4.00%.结论 汕头市人群存在弓形虫感染,湛江市、韶关市、汕头市兽类存在弓形虫感染,3个地区的鼠类弓形虫感染率无统计学意义,家鼠、野鼠的弓形虫感染率也无统计学意义.     

弓形虫 SAG1基因的表达及其诱导的细胞免疫应答

目的分析弓形虫 SAG1基因真核表达质粒的体外表达及其诱导小鼠的细胞免疫应答.方法重组表达质粒 pVAX1-SAG1瞬时转染 vero细胞, Western blot法检测在细胞中的表达.将重组真核表达质粒 pVAX1-SAG1及空质粒 pVAX1于 0、 4周分别经肌注免疫 BALB/c小鼠;第 8周杀鼠,取脾,分离淋巴细胞,分别经 ConA和抗原刺激,用 MTT法测定免疫鼠脾脏 T淋巴细胞转化率 ;使用直接免疫荧光法 ,用流式细胞仪对 CD4+、 CD8+ T细胞亚群进行测定;两组小鼠经弓形虫速殖子攻击感染,计算存活期.结果 Western blot法分析转染细胞,发现存在弓形虫感染血清识别的 26 000u的特异带,与理论值相符 ;抗原刺激小鼠脾 T淋巴细胞发生增殖反应 , 免疫组与空质粒对照组间差异有显著性 (P< 0.05),但 ConA刺激小鼠后,两组间差异无显著性 (P >0.05); T细胞亚群 CD4+、 CD8+动态分析 ,CD4+、 CD8+ T细胞数量均升高,免疫组与空质粒对照组差异均有显著性 (P1< 0.05, P2< 0.05).弓形虫攻击感染,免疫组鼠的平均存活时间较空质粒对照组延长.结论 真核表达质粒 pVAX1-SAG1在 vero细胞中获得表达 ,且能诱导 BALB/c小鼠产生细胞免疫应答.     

弓形虫RH株微线体蛋白MIC3的原核表达及其免疫反应性

目的 克隆表达弓形虫RH株MIC3基因,并对重组蛋白进行免疫反应性分析.方法 应用PCR技术扩增弓形虫RH株MIC3基因,将目的基因片段分别克隆至pET28a(+)和pET32a(+)两种表达载体中构建重组质粒,重组质粒转化至大肠杆菌体BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,表达产物进行SDS-PAGE电泳分析和Western-blot鉴定.结果 成功从弓形虫RH株基因组DNA中克隆出大小约1080bp MIC3基因片段;重组质粒pET28a-MIC3和pET32a-MIC3经过酶切和PCR鉴定,及测序分析,表明重组质粒构建正确.两种重组质粒分别诱导表达后进行SDS-PAGE电泳分析,诱导表达产物分别在50 KD及70KD左右出现目的条带,Westem-blot分析显示重组蛋白对弓形虫慢性感染小鼠血清具有特异免疫反应性.结论 原核表达了弓形虫MIC3重组蛋白,所表达的重组蛋白具有免疫反应性,为下一步利用重组蛋白进行弓形虫病的诊断和疫苗研究奠定基础.     

弓形虫主要表膜P30抗原的免疫保护作用研究

目的 研究弓形虫主要表膜P30抗原免疫小鼠所诱导的免疫性保护作用及免疫保护机制。方法 将单克隆抗体免疫亲和层析分离纯化的P30抗原免疫C57BL／6纯系小鼠,然后用弓形虫RH株速殖子和Fukaya株包衰攻击感染,观察P30抗原免疫对急性弓形虫感染鼠死亡时间及慢性感染鼠脑内包囊形成的影响,同时对感染后不同时间鼠血清特异性抗体水平、IL－2及IFN－r细胞因子水平和脾T淋巴细胞亚群动态变化进行了测试分析。结果 显示P30抗原免疫可在一定程度上延长感染小鼠的存活时间,减少脑内包囊的形成数量,增强小鼠抵抗急慢性弓形虫感染的能力。在感染后不同时期免疫鼠血清中特异性抗休还清瘃IFN－r、IL－2水平均高于同期对照鼠,而且免疫鼠脾CD4^ t CD8^ T淋纠细胞尤其是CD8^ 细胞的数量在感染早期升高较快,至感染后4周达高峰,两者的比值随感染时间的延长而逐渐下降。结论 P30抗原免疫对感染小鼠具有明显的保护作用,是细胞免疫和体液免疫共同作用的结果,尤其是细胞免疫可能发挥着更为重要的作用。     

弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠诱导的肠IEL持续性免疫应答

目的采用可溶性速殖子抗原(solubletachyzoiteantigen,STAg)和霍乱毒素(choleratoxin,CT)佐剂制备弓形虫复合黏膜疫苗,观察经滴鼻免疫BALB/c小鼠后诱导的肠上皮内淋巴细胞(intraepitheliallymphocytes,IEL)免疫应答及持续时间,探讨其抗弓形虫感染的作用机制。方法BALB/c小鼠96只随机分为实验组和对照组,实验组以免疫原性好的STAg(20μg/只)为抗原和CT(1μg/只)为佐剂滴鼻免疫,对照组以PBS滴鼻。滴鼻2次(间隔2周)后分别于第1、2、3、4、6、8、10、12周处死小鼠。制备肠IEL细胞悬液,计数并涂片;免疫细胞化学法(immunocytochemistry,ICC)检测CD4 T、CD8 T细胞亚群水平。结果免疫后肠IEL显著增生,第2周达高峰,第1周至第4周(P<0.01)高于对照组。其中以CD8 T细胞增生为主,CD8 T细胞水平第2周达高峰,第1周至第6周增高显著(P<0.01),CD4 T细胞也略有增生,第2、3周(P<0.05)有显著性,CD4 /CD8 比值倒置,第1、2周明显低于对照组(P<0.05)。结论弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫BALB/c小鼠可有效诱导肠IEL免疫应答,且可持续较长时间,在预防弓形虫感染中起重要作用。     

刚地弓形虫TgPRF的原核表达、多克隆抗体制备与应用

目的 原核表达弓形虫TgPRF蛋白,制备多克隆抗体并评价其作为内参抗体的可行性。方法 以刚地弓形虫RH株速殖子cDNA为模板,PCR扩增TgPRF编码基因,克隆至pGEX-4T-1载体,转化至大肠埃希氏菌（Escherichia coli）BL21。经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析重组蛋白表达情况。利用GST标签亲和层析法纯化重组蛋白。以纯化后蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备抗TgPRF多克隆抗体。收集弓形虫RH株速殖子,以制备的多克隆抗体为一抗,Western blotting检测抗体特异性及效价。收集ATc调控下不同时间点的弓形虫iKO-Ty-TgAPH虫株速殖子进行Western blotting,以抗Ty和抗TgPRF抗体为一抗,检测TgAPH和TgPRF表达量的变化。结果 SDS-PAGE显示：TgPRF在诱导4 h后表达量趋于饱和,相对分子量为52 ku,且呈可溶性表达。弓形虫RH株速殖子总蛋白进行的Western blotting显示：抗TgPRF多克隆抗体可识别内源性的TgPRF,且该多克隆抗体稀释至1∶10 000时仍可见明显条带;iKO-Ty-TgAPH虫株速殖子总蛋白进行的Western blotting显示：TgAPH的表达量随ATc作用时间的增加呈递减趋势,而TgPRF表达量基本维持恒定。结论 本实验制备的抗TgPRF多克隆抗体特异性和效价良好,可作为衡量弓形虫特定蛋白表达量的内参抗体,也可直接检测内源性TgPRF的表达。     

弓形虫ESA鼻内免疫小鼠诱导的黏膜及系统免疫应答

目的 观察弓形虫排泄-分泌抗原(excreted-secreted antigen,ESA)鼻内免疫小鼠诱导黏膜和系统免疫应答的效果.方法 将64只BALB/c小鼠随机分为8个组,每组8只.实验组小鼠分别用腹腔感染弓形虫小鼠第0,6,12,24,36,48和60小时无菌收集的腹腔液中获取的ESA 20 μg/只滴鼻免疫小鼠2次,间隔14 d,以PBS20 μl/只滴鼻为对照.逐日观察小鼠状况,于末次免疫后第14天颈椎脱位处死小鼠,检测血清特异性IgG、小肠冲洗液sIgA水平,分离肠上皮内淋巴细胞(intestinal intraepithelial lymphocytes,iIEL)及肠系膜淋巴结淋巴细胞(mesenteric lymph node lymphocytes,MLNL)并计数.结果 60 h组小鼠初次免疫后第8-11天,有倦怠、饮水及采食量减少等表现,体重增长较其他组缓慢(P＜0.05),其他组小鼠健康状况良好.不同时相ESA鼻内免疫小鼠后特异性抗体水平升高,MLNL、iIEL发生增殖性应答.48 h组和60 h组各项指标均明显高于0 h组(P＜0.01)及PBS组(P＜0.05).结论 48 h和60 h弓形虫ESA均能诱导黏膜及系统免疫应答,但60h ESA可能对机体有毒副作用,不适宜直接滴鼻免疫,48 h ESA可作为弓形虫黏膜疫苗的候选抗原.