三氧化二砷对MRL/lpr狼疮小鼠肾脏病理和组织转化生长因子-β1核因子-κBp65异常表达的影响

目的 研究MRL/lpr狼疮小鼠肾脏病理转化生长因了(TGF)-β1、核因子(NF)-κBp65的异常表达及三氧化二砷(ATO)的干预作用.方法 将MRL/lpr狼疮鼠45只随机分为ATO组、环磷酰胺(CTX)组和对照组.观察各组MRL/lpr狼疮小鼠治疗前后尿蛋内(半定量)的变化;给药2个月后处死,经苏木素-伊红(HE)染色、PAS染色后观察肾组织病变程度;用免疫荧光方法检测肾组织IgG、C3的表达;用免疫组织化学方法检测肾组织TGF-β1、NF-κBp65的表达.结果 ①尿蛋白分析:给药后ATO组较对照组有明显减少(P=0.004)、CTX组较对照组也有减少(P=0.005).②免疫荧光检测IgG、C3的表达:在对照组可见IgG沿肾小球系膜区,毛细血管袢弥漫沉积(+～+++),而ATO组、CTX组则明显减少(-～+),经统计发现ATO组、CTX组较对照组明显减少(P＜0.05);C3的表达差异无统计学意义.③肾小球细胞数及肾组织活动积分在ATO组及CTX组中均较对照组明显减少(P＜0.05).④免疫组织化学:TGF-β1、NF-κBp65在对照组肾小管上皮细胞可见明显表达,经ATO及CTX组表达明显减少,肾小球表达各组均不明显.结论 TGF-B1、NF-κBp65主要表达在MRL/lpr狼疮小鼠肾小管上皮细胞,ATO通过下调TGF-β1、NF-Kκp65的表达改善小管病变达到改善狼疮肾炎的进展.     

BXSB小鼠肾组织诱生型一氧化氮合酶的异常表达及甲泼尼龙干预效应

目的探讨诱生型一氧化氮合酶(iNOS)是否参与介导BXSB小鼠狼疮肾炎(LN)及甲泼尼龙(MPS)是否可通过影响iNOS表达而缓解LN。方法用MPS对BXSB自发狼疮小鼠进行体内实验,利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学技术研究了MPS对狼疮小鼠肾脏iNOS表达的影响,并观察了狼疮小鼠MPS治疗前后24h尿蛋白和NO3-/NO2-排泄量。结果BXSB狼疮小鼠肾组织检测到了iNOSmRNA的表达,而BALB/C小鼠未见表达;免疫组织化学示iNOS表达于BXSB小鼠肾小管上皮细胞、血管内皮细胞、肾间质及肾小球浸润的炎症细胞胞质内。MPS治疗组BXSB狼疮小鼠肾组织iNOSmRNA表达量显著低于未治疗组(P<0.01);治疗组24h尿蛋白及NO3-/NO2-排泄量显著低于未治疗组(P<0.01,P<0.05)。结论iNOS及其合成的一氧化氮(NO)可能参与介导了LN。MPS可能通过抑制肾组织iNOS的表达缓解LN。     

大黄和黄芪水提醇沉液注射治疗BXSB狼疮鼠的实验研究

目的 为了开发治疗系统性红斑狼疮（SLE）的新药，我们应用大黄、黄芪溶液注射治疗BXSB狼疮样小鼠，以观察其疗效。方法 应用水提醇沉法制取大黄黄芪溶液，15只BXSB雄性小鼠及6只雌鼠被随机分成三组，分别应用大黄黄芪溶液、地塞米松及生理盐水腹部皮下注射。考马斯亮蓝分光度法被用来检测小鼠尿蛋白含量，应用免疫荧光法检测小鼠血清抗核抗体（ANA）滴度及肾内免疫复合物沉积。结果 中药组及地塞米松组BXSB小鼠的尿蛋白含量及血清ANA滴度均明显低于生理盐水组（P＜0．01或P＜0．05），两组肾内免疫复合物沉积也轻于生理盐水组（P＜0．05）加药组BXSB小鼠的24h尿蛋白含量低于地塞米松组（P＜0．05）。结论 大黄、黄芪水提醇沉液可降低BXSB小鼠尿蛋白含量及血清ANA滴度，减少肾内免疫复合物沉积，对BXSB狼疮样小鼠有较为肯定的疗效。     

七叶皂苷对BXSB狼疮小鼠肾功能的影响

目的 探讨七叶皂苷对BXSB小鼠肾功能的作用.方法 采用狼疮模型BXSB小鼠作为实验对象,随机分成A组(正常对照组)、B组(单用激素组)、C组(激素联合大剂量七叶皂苷组)和D组(激素联合小剂量七叶皂苷组),每组10只,干预1个月后检测各组小鼠蛋白尿(尿蛋白试纸检测)及尿素氮、肌酐(自动生化分析仪检测).结果 与其余3组相比,激素联合大剂量七叶皂苷组可以明显减少小鼠蛋白尿水平(P<0.05)及改善肾功能指标(血清尿素氮和肌酐)(P<0.05).结论 七叶皂苷可以减少BXSB小鼠蛋白尿水平,并对肾功能有保护作用.     

BXSB狼疮小鼠外周血及脾肾组织干扰素-γ表达水平以及FK506对其表达的影响

目的探讨干扰素(IFN)-γ在狼疮小鼠表达和分泌的动态变化以及他克莫司(FK506)对其表达和分泌的影响.方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别检测不同周龄BXSB小鼠(狼疮模型)和C57BL/6小鼠(正常对照)血清IFN-γ水平以及脾、肾组织IFN-γmRNA表达量,并对比了FK506处理BXSB小鼠和未处理BXSB小鼠IFN-γ表达的差异;此外本研究还检测各组动物血浆抗dsDNA抗体水平以及尿蛋白浓度.结果BXSB小鼠血IFN-γ水平以及脾、肾组织IFN-γmRNA表达量均显著高于C57BL/6小鼠;各周龄BXSB小鼠血清IFN-γ水平以及脾组织IFN-γ mRNA表达量差异无统计学意义,而16周龄以后肾组织IFN-γmRNA表达量开始显著增高.他克莫司能显著降低BXSB小鼠IFN-γ分泌水平以及睥、肾组织IFN-γmRNA表达量,也能显著降低血清抗dsDNA抗体水平以及尿蛋白浓度.结论全身循环及肾组织局部IFN-γ的高表达和高分泌在系统性红斑狼疮(SLE)的发生和发展以及肾损伤过程中起重要的作用;FK506可作为治疗SLE的免疫抑制剂之一,通过IFN-γ的作用可能是本药治疗SLE的重要作用机制之一.     

三氧化二砷对MRL/lpr自发性狼疮小鼠抗双链DNA抗体和DNA甲基转移酶及CD11a表达的影响

目的 探讨三氧化二砷(ATO)对MRL/lpr自发性狼疮小鼠抗双链DNA(dsDNA)抗体及DNA甲基转移酶1(DNMT1)和黏附分子淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)的亚基CD11a表达的影响及其可能作用机制.方法 将MRL/lpr狼疮鼠随机分为ATO治疗组、0.9％氯化钠注射液(NS)对照组和环磷酰胺组.另设正常C57/BL小鼠,随机分为ATO治疗组和NS对照组.以上每组各10只,隔日腹腔注射,给药2个月后处死,SYSMEX KX21血常规测定仪测定血常规,酶联免疫吸附试验(EMSA)法测各组小鼠血清抗dsDNA抗体水平;反转录.聚合酶链反应(RT-PCR)检测2组小鼠外周血单个核细胞的DNMT1及CD11a转录水平的表达情况.采用方差分析和配对t检验进行统计学处理.结果 ①MRL/lpr小鼠ATO 治疗组血清抗dsDNA抗体水平(0.89±0.07)和CD11 a(0.43±0.25)均低于NS对照组(1.77±0.28.P＜0.01和0.99±0.31,P＜0.05),DNMT1 (0.32±0.30)高于NS对照组(0.16±0.26,P＜0.05);②MRL/lpr小鼠ATO治疗组及环磷酰胺治疗组小鼠的血清抗dsDNA抗体水平(分别为0.90±0.07和0.66±0.22)较NS组(1.77±0.28)下降,且ATO治疗组小鼠的血清抗dsDNA抗体水平高于环磷酰胺治疗组(P＜0.05):ATO组DNMT1(0.32±0.30)高于环磷酰胺治疗组(0.16±0.18,P＜0.05),CD11 a(0.43±0.25)低于环磷酰胺治疗组(0.86±0.31,P＜0.05);③在C57/BL小鼠中.ATO治疗组和NS对照组之间以上指标差异均无统计学意义.结论 ATO 能减少狼疮小鼠体内自身抗体产生,逆转其低甲基化状态;但是对正常小鼠的抗体水平和其甲基化状态并无明显影响.     

三氧化二砷对BXSB狼疮鼠生存时间及脾细胞分泌白细胞介素-4干扰素-γ的影响

目的探讨三氧化二砷（ATO）对BXSB狼疮小鼠生存时间、外周血抗dsDNA抗体水平及离体脾脏单个核细胞白细胞介素（IL）-4、干扰素（IFN）-γ分泌水平的影响。方法BXSB狼疮小鼠44只，随机分为2组，治疗组予腹腔内注射ATO，对照组注射等量生理盐水，酶联免疫吸附试验（ELISA）测其外周血抗dsDNA抗体水平，并将生存时间作比较；另外，通过体外培养脾脏单个核细胞比较C57和BXSB小鼠脾脏单个核细胞分泌IL-4、IFN-γ水平的差异，然后观察ATO对BXSB小鼠脾脏单个核细胞IL-4、IFN-γ分泌水平的影响，同时观察ATO对细胞活性的影响。结果ATO可延长BXSB狼疮小鼠的生存时间，显著降低其外周血中抗dsDNA抗体的水平；1μmol／L浓度的ATO对小鼠脾脏单个核细胞的活性无明显影响：与C57小鼠相比，BXSB狼疮小鼠脾脏单个核细胞在体外经有丝分裂原刺激之后分泌IL-4、IFN-γ水平较高，ATO能显著抑制其分泌。结论ATO可延长BXSB狼疮鼠的生存时间，降低其外周血抗dsDNA抗体的水平．提示ATO对BXSB狼疮鼠有一定的治疗作用；ATO抑制该小鼠脾脏单个核细胞IL-4和IFN-γ的分泌可能是其发挥治疗作用的重要机制之一。     

Exendin-4干预对糖尿病肾病大鼠肾脏TGF-β1mRNA和蛋白表达的影响

目的 通过Exendin-4对糖尿病肾病(DN)大鼠进行干预治疗,观察其对肾组织转化生长因子1 (TGF-β1)mRNA和蛋白表达的影响.方法 用高糖高脂饲料结合小剂量的链尿佐菌素建立糖尿病肾病模型,随机分为糖尿病肾病模型组、Exendin-4低剂量治疗组[4 μg/(kg·d)]和Exendin-4高剂量治疗组[20 μg/(kg·d)],治疗6周后测定各组大鼠24 h蛋白尿、血糖、血脂,HE染色光镜下观察肾组织的病理变化,用免疫组化法及RT-PCR两种方法检测TGF-β1的表达.结果 与糖尿病肾病模型组相比,Exendin-4治疗组的血糖、血脂、24 h尿蛋白定量均下降(P＜0.05),高剂量治疗组改善更明显(P＜0.05).与糖尿病肾病模型组相比,Exendin-4治疗组大鼠肾组织的TGF-β1表达明显下降(P＜0.05),高剂量治疗组大鼠肾组织的TGF-β1表达下降更明显(P＜0.05).结论 Exendin-4对糖尿病肾病大鼠具有一定的肾脏保护作用,且有剂量依赖性,其机制可能与降低TGF-β1mRNA和蛋白的表达进而抑制细胞外基质的堆积有关.     

狼疮肾炎肾组织核转录因子-κB单核细胞趋化因子-1与CD68的表达及相关分析

目的 对狼疮肾炎(LN)肾组织进行核转录因子-κB(NF-κB)、单核细胞趋化因子(MCP-1)及巨噬细胞特异性抗体(CD68)检测,探讨其与LN肾脏病理及临床指标的关系.方法 应用免疫组织化学二步法检测49例LN肾组织NF-κB、MCP-1及CD68,原位杂交法检测49例LN肾组织NF-κB,并与肾脏病理及临床指标进行分析.结果 ①LN肾组织中NF-κB、MCP-1及CD68表达均比对照组显著升高(P＜0.01);其中Ⅳ型LN肾组织中NF-κB、MCP-1及CD68的表达比非Ⅳ型LN及对照组明显增加(P＜0.01,P＜0.05).原位杂交与免疫组织化学法检测NF-κB差异无统计学意义(P＞0.05).②LN肾组织中,NF-κB的表达与肾组织活动性指数、尿蛋白定量(24 h)及血清肌酐均高于对照组,且三者之间差异有统计学意义(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05);MCP-1与CD68的表达在肾小球和肾小管中仅与肾组织活动性指数(r=0.447,0.532,P＜0.05)、尿蛋白定量(24 h)(r=0.357,0.368,P＜0.05)呈正相关,而与血肌酐之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 NF-κB通过活化MCP-1进一步诱导巨噬细胞可能是LN肾脏损害的原因之一,NF-κB信号途径有望成为抑制巨噬细胞在肾脏局部浸润和增生的一个新的治疗靶点.     

血管性血友病因子及P-选择素在狼疮肾炎患者肾组织的表达及意义

目的 探讨血管性血友病因子(vWF)及P-选择素与狼疮肾炎的病理临床关系.方法 应用免疫组织化学方法检测71例狼疮肾炎患者肾活检组织及10份正常对照肾组织中vWF及P-选择素的表达,结果与临床病理指标进行综合分析.采用单因素方差分析,Nemenyi秩和检验,Pearson相关分析进行统计学处理.结果 vWF在正常对照组几乎无表达;狼疮肾炎组肾小球系膜基质,肾小管及间质血管内膜均可见vWF的阳性表达,以Ⅳ型表达最明显(0.30±0.10),与Ⅱ、Ⅲ型(0.12±0.05,0.22±0.14)相比,差异有统计学意义(x2=9.273.P＜0.05).正常对照组仅有极少量P-选择素表达;狼疮肾炎组肾小球系膜区、肾小管和肾间质中均有P-选择素的广泛表达,以Ⅳ、Ⅴ型显著(0.29±0.05.0.36±0.10),与Ⅱ、Ⅲ型(0.27±0.09,0.29±0.05)相比差异有统计学意义(P＜0.05).肾组织中vWF的表达水平与肾组织活动指数、尿蛋白定量(24 h)呈正相关(r分别为0,403,0.332,P均＜0.05);肾组织中P-选择素的表达水平与肾组织活动指数、尿蛋白定量(24h)、系统性红斑狼疮疾病活动度(SLEDAI)呈正相关(r分别为0283,0.453,0.297,P均＜0.05);肾组织中vWF与P-选择素的表达呈明显正相关(r=0.371,P=0.001).结论 vWF及P-选择素参与狼疮肾炎病理发展过程,联合检测vWF、P-选择素有助于对狼疮肾炎严重程度的评估,进而为临床治疗提供依据.     

Th17细胞和调节性T细胞在系统性红斑狼疮患者中的研究

目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血Th17细胞、调节性T细胞及联系两者的细胞因子白细胞介素(IL)-6的变化及其与病情活动的相关性,探讨Th17细胞、调节性T细胞在SLE发病机制中的作用.方法 收集103例SLE患者及28名健康者,SLE活动性的判断采用SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分方法,其中非活动组(SLEDAI≤9分)患者37例,活动组(SLEDAI＞9分)患者66例.用四色分选流式细胞仪检测外周血Th17细胞、调节性T细胞百分数,用流式细胞仪微球捕获芯片技术(CBA)检测血清IL-6浓度,并分析其与病情活动的相关性.统计学处理采用t检验、秩和检验和Spearman相关分析.结果 ①SLE患者组Th17细胞[(1.2±1.1)%]、IL-6[(35±92)pg/ml]显著高于健康对照组[(0.6±0.4)%、(6±3)pg/ml],而调节性T细胞[(1.6±1.2)%]显著低于健康对照组[(2.6±1.8)%].②SLE活动组Th17细胞[(1.6±1.7)%]显著高于SLE非活动组[(1.0±0.7)%]与健康对照组(P均＜0.05),SLE活动组调节性T细胞[(1.5±1.3)%]显著低于SLE非活动组[(2.1±2.0)%]与健康对照组(P均＜0.05),SLE活动组Th17/调节性T细胞(0.68±0.34)显著高于SLE非活动组(0.24±0.20)与健康对照组(0.13±0.09,P均＜0.05),SLE活动组IL-6[(41±22) pg/ml]显著高于SLE非活动组[(32±28) pg/ml]与健康对照组(P均＜0.05);SLE非活动组与健康对照组之间Th17细胞、调节性T细胞、Th17/调节性T细胞、IL-6差异均无统计学意义(P＞0.05).③Th17细胞百分数与SLEDAI呈正相关,调节性T细胞百分数与SLEDAI呈负相关,Th17/调节性T细胞与SLEDAI呈正相关,IL-6浓度与SLEDAI评分之间呈正相关,Th17细胞与调节性T细胞呈负相关.结论 SLE患者外周血Th17细胞、调节性T细胞及IL-6浓度较健康对照组显著增高,并与疾病活动性密切相关,说明Th17细胞、调节性T细胞可能在SLE的发生、发展中起重要作用.

Abstract：

Objective To study the changes of Th17 cell, regulatory T cell (Treg) and interleukin (IL)-6 in the peripheral blood of patients with systemic lupus erythematosus (SLE) and their relationship with disease activity. Methods Percentage of Th17 and Treg in the peripheral blood of 103 patients with SLE and 28 healthy volunteers were detected by flow cytometry. The concentration of IL-6 in SLE patients and healthy volunteers was detected by cytometric bead array (CBA). The disease activity of SLE was measured by SLEDAI. SLE patients were divided into two groups: stable SLE (SLEDAI≤ 9, n=37) and active SLE (SLEDAI＞9, n= 66). The change of Th17, Treg, IL -6 and their relationship with disease activity were analyzed. Nonparamentric tests, t -test and spearman correlation were used for statistical analysis. Results The percentage of Th17 cells and the concentration of IL-6 in the peripheral blood in patients with SLE was higher than that in normal controls [respectively for (1.2±1.1)%, (35±92) pg/ml and (0.6±0.4)%, (6±3) pg/ml, P＜0.05]. However, the percentage of Treg in patients with SLE was lower than that in normal controls [respectively for (1.6±1.2)%,(2.6±1.8)%, P＜0.05]. The percentage of Th17, Th17/Treg IL-6 level in active SLE patients was higher than those in inactive SLE and those in normal controls (P＜0.05). However, the percentage of Treg in active SLE was lower than that in stable SLE patients and that in normal controls (P＜ 0.05). The percentage of Th17, Th17/Treg and concentration of IL-6 was positively correlated to disease activity(P＜0.05). But the percentage of Treg had negative correlation with the percentage of Th17 and disease activity (P＜0.05). Conclusion Th17, Treg and serum IL-6 in SLE patients are abnormal and they maybe contribute to the pathogenesis of SLE.     

系统性红斑狼疮患者血清卵泡抑素样蛋白1表达水平及其临床意义

目的 检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中卵泡抑素样蛋白1(FSTL1)的水平及FSTL1在狼疮肾炎肾脏组织中的表达,探讨其在SLE疾病中的临床意义.方法 酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测54例SLE患者及27名健康对照组血清FSTL1水平.免疫组织化学染色检测狼疮肾炎患者肾脏组织及健康者肾脏组织中FSTL1的表达情况.采用Mann-WhitneyU/检验、t检验、X2检验及Pearson检验进行统计分析.结果 SLE组FSTL1血清水平(26±21) μg/L显著高于健康对照组(12±14) μg/L(P＜0.01);SLE高血压组明显高于非高血压组(P＜0.01);SLE病程≥5年组与病程＜5年组之间差异有统计学意义(P＜0.01);血清FSTL1表达水平与SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分(r=0.319,P=0.022)、年龄(r=0.700,P＜0.01)、病程(r=0.513,P＜0.01)、补体C4 (r=0.443,P=0.004)、总胆固醇(r=0.460,P=0.001)呈正相关;与血小板计数(r=-0.422,P=0.001)、抗双链DNA(dsDNA)抗体水平(r=--0.276,P=0.046)呈负相关.FSTL1主要表达在肾小管上皮细胞胞质内.结论 FSTL1在SLE患者血清中明显升高,且与疾病活动性有关.提示FSTL1在SLE发病机制中起一定作用.     

三氧化二砷与白藜芦醇联用对急性早幼粒细胞性白血病NB4细胞存活率的影响

目的 观察三氧化二砷(ATO)与白藜芦醇(Res)联用对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞存活率的影响,并探讨其作用机制.方法 采用不同剂量的ATO[0(对照)、0.1875、0.3750、0.7500、1.1250、1.5000、2.2500、3.0000、5.0000 μmol/L]、Res[0(对照)、1.5625、3.1250、6.2500、12.5000、18.7500、25.0000、37.5000、50.0000 μmol/L]孵育NB4细胞.应用四氮唑盐比色法(MTT)检测不同处理组的细胞存活率,计算ATO和Res对NB4细胞的半数抑制浓度(IC50).根据IC50,设置联合用药比例分别为1.5∶18、.5∶25、.5∶35,并根据药物联合指数计算公式,分别计算出联合用药在不同抑制效应(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9)时的联合指数,判断ATO与Res在不同抑制效应时各自所需药物浓度之间的相互作用.应用DCFH-DA荧光探针检测对照组、ATO(1.5000 μmol/L)加药组、Res(25.0000 μmol/L)加药组、联合用药组(0.9000 μmol/L ATO+12.5000 μmol/L Res)NB4细胞活性氧(ROS)水平,每组各检测10份样品.结果 ①ATO(≥0.7500 μmol/L)加药组NB4细胞存活率明显低于对照组(P＜0.05),呈剂量依赖性的量效关系,IC50为(1.78±0.11)μmol/L.②Res(≥18.7500 μmol/L)加药组NB4细胞存活率明显低于对照组(P＜0.05),呈剂量依赖性的量效关系,IC50为(18.71±0.18)μmol/L.③ATO和Res联合应用对NB4细胞存活抑制效应呈现拮抗作用.④Res加药组NB4细胞内ROS水平(1670.55±13.97)明显低于对照组(2345.88±14.48,P＜0.05).ATO加药组NB4细胞内ROS水平(3092.42±94.84)明显高于对照组(P＜0.05).联合用药组NB4细胞内ROS水平(1860.27±15.99)明显低于ATO加药组(P＜0.05).结论 ATO、Res均可致NB4细胞存活率下降,而两者联合应用时表现为拮抗效应,ROS可能参与了这种拮抗作用.

Abstract：

Objective To investigated the effects of combined arsenic trioxide(ATO) and resveratrol(Res)on the viability of NB4 human leukemia cells. Methods NB4 human leukemia cell was used in this experiment.Cells were cultured in ATO (0,0.1875,0.3750,0.7500, 1.1250, 1.5000,2.2500,3.0000,5.0000 μmol/L) and Res (0, 1.5625,3.1250,6.2500, 12.5000, 18.7500,25.0000,37.5000,50.0000 μmol/L). Cell viabilities were measured by MTT in different treatment groups. Half inhibitory concentration(IC50) was calculated. The ratio of concentration of ATO and Res 1.5∶ 18,1.5∶ 25,1.5∶ 35 was added to cells, and the combination index(CI) was calculated. The level of ROS in control, ATO( 1.5000 μmol/L), Res(25.0000 μmol/L) and ATO(0.9000 μmol/L) + Res( 12.5000μmol/L) groups was measured by chemiluminescence assay. Results ①ATO( ≥0.7500 μmol/L) reduced the viability of NB4 cells in a concentration-dependent manner(P ＜ 0.05 ), and IC50 was (1.78 ± 0.11 )μmol/L. ②)Res (≥18.7500 μ mol/L) dose-dependently decreased the viability of NB4 cells (P ＜ 0.05 ), and IC50 was ( 18.71 ±0.18)μ mol/L. ③Combination of ATO and Res showed an antagonistic effect on NB4 cells viability. ④The ROS in Res group( 1670.55 ± 13.97) was significantly lower than that in control group(2345.88 ± 14.48,P ＜ 0.05). The ROS in ATO group (3092.42 ± 94.84) was significantly higher than that in control group(P ＜ 0.05). The ROS in ATO + Res group (1860.27 ± 15.99) was significantly lower than that in ATO group(P ＜ 0.05). Conclusions NB4 cell survival rate can be decreased by ATO and Res. The combination of arsenic trioxide and Res presents an antagonistic effect on NB4 cell viability, in part by reducing intracellular ROS formation.     

羟氯喹抑制紫外线诱导的系统性红斑狼疮CD4+T细胞白细胞介素-10和干扰素-γ的表达

目的 研究紫外线对系统性红斑狼疮(SLE)CD4+T细胞因子的影响和羟氯喹的抑制作用.方法 选择SLE 30例,健康对照10名.磁珠分选SLE患者和健康人的CD4+T细胞,紫外线311 nm窄谱中波紫外线暴露,加入羟氯喹共培养,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清白细胞介素(IL)-10和干扰素-γ的表达水平.采用t检验进行统计学分析.结果 SLE患者CD4+T细胞IL-10表达高于健康对照[(27±4)和(18±3) pg/ml,P=0.011];经45、100 mJ/cm2紫外线暴露后,SLE活动患者CD4+T细胞IL-10表达升高[(27±4)和(77±42) pg/ml,(40±18)和(77±42) pg/ml,P=0.022,P=0.048],经100 mJ/cm2紫外线暴露后,活动患者CD4+T细胞IL-10表达高于稳定患者[(77±42)和(24±4)pg/ml,P=0.029];羟氯喹降低SLE活动患者CD4+T细胞IL-10和干扰素-γ表达[(2.6±4.0)和(17.9±2.3)pg/ml,P=0.018,P=-0.017)];羟氯喹降低经45,100 mJ/cm2紫外线暴露后SLE活动患者T细胞IL-10表达[(40±18)和(22±6)pg/ml,(77±42)和(21±5) pg/ml,P=0.037,P=0.04];羟氯喹降低经100 mJ/cm2紫外线暴露的SLE活动和稳定患者T细胞干扰素-γ表达[(18±3)和(13±14) pg/ml,(19±7)和(12±5) pg/ml,P=0.013,P=0.049].结论 紫外线加重SLE患者体内Th1/Th2细胞因子的比例失衡;羟氯喹抑制了紫外线诱发SLE患者干扰素-γ和IL-10的表达.

Abstract：

Objective To explore the role of hydroxychloroquine (HCQ) in ultraviolet B (UVB)- induced expression of interleukin (IL)-10 and interferon (IFN)-γ from CD4+T cells in patients with systemic lupus erythematosus (SLE). Methods Thirty patients with SLE and 10 healthy controls were enrolled in the study. CD4+ T cells were isolated using magnetic beads from SLE patients and healthy controls. HCQ was added in culture media before and after irradiation with UVB 311 nm narrow band ultraviolet B (NB-UVB). The levels of IL-10 and IFN-γ in the supernatant were detected with enzyme-linked immunosorbent (ELISA). Comparisons between groups were performed by t-test. Results The level of IL-10 was higher in SLE patients [(27±4) pg/ml] than that in healthy controls [(18±3) pg/ml, P=0.011]. After exposure of CD4+T cells to UVB in 45 or 100 mJ/cm2 dosages, the level of IL-10 was increased significantly in patients with active disease (P=0.022, P=0.048). After exposure of CD4+T cells to UVB in 100 mJ/cm2 dosages, the levels of IL-10 was higher in patients with active disease [(77±42) pg/ml] than patients with stable disease [(24± 4) pg/ml, P=0.029]. When CD4+ T cell were cultured with HCQ, IL-10 and IFN-γ levels in patients with active disease [(2.6±4.0), (17.5±2.3) pg/ml] were decreased significantly (P=0.018, P=0.017). HCQ reversed UVB-induced IL-10 expression in active SLE patients after exposure of CD4+T cells to UVB in 45 or 100 mJ/cm2 dosages (P=0.037, P=0.04). HCQ also reversed UVB-induced IFN-7 expression in active SLE patients and stable SLE patients after exposure to CD4+T cells with UVB in 100 mJ/cm2 dosages (P=0.013, P= 0.049). Conclusion UVB can aggravate the imbalance of Th1 and Th2 cytokines. HCQ inhibits UVB-induced IL-10 and IFN-7 expression of CD4+T cells in patients with SLE, especially in patients with active disease.     

异基因骨髓间充质干细胞移植治疗系统性红斑狼疮11例临床分析

目的 探讨异基因骨髓问充质干细胞(MSC)移植治疗难治性系统性红斑狼疮(SLE)的疗效及安全性.方法 血缘相关供者骨髓中分离培养MSC移植治疗11例SLE患者,移植前予环磷酰胺(CTX)0.8～1.8 g,分2～3次静脉输注,输注后隔日予MSC移植,移植细胞数(1×106/kg体质量).评价患者移植前后的临床表现和实验室检查指标的改变.结果 异基因MSC移植后,11例SLE患者随访1～13个月,所有患者均无移植相关并发症.移植后1个月SLE疾病活动评分(SLEDAI)由12±5降低为6±3(11例,P＜0.01).尿蛋白定量(24 h)移植后1个月由(1989±842)mg(518～3690 mg)降低为(1118±700)mg(10例,P＜0.05);移植后2个月[(2478±797)mg vs (924±659)mg,5例,P＜0.05];移植后6个月[(2478±797)mg vs(522±151)mg,5例,P＜0.01].2例肾功能不全患者血肌酐轻度下降.5例低蛋白血症患者移植后1个月血清白蛋白上升[(28±6)g/L vs(32±7)g/L,5例,P＜0.05].移植后1个月血清补体C3升高[(0.50±0.12)g/L vs(0.75±0.10)g/L,9例,P＜0.01],抗核抗体(ANA)滴度降低.结论 异基因MSC移植治疗难治性SLE有效安全.MSC取材方便,扩增迅速,输注安全经济.异基因MSC移植治疗SLE的长期疗效评估需进一步随访观察.     

不同剂量结核病DNA疫苗的电转染免疫原性研究

目的 研究不同剂量结核病DNA疫苗电转染后的免疫原性.方法 40只BALB/c小鼠通过随机数字表法分为8组,每组5只.其中4组分别用100 μl生理盐水和10 μg、50 μg、100 μg结核分枝杆菌Ag85A DNA肌内注射免疫小鼠;另4组用100 μl生理盐水和10 μg、50 μg、100 μgAg85ADNA肌内注射加电转染免疫小鼠.每2周免疫1次,共3次.最后1次免疫后2周杀死小鼠.用ELISA方法检测小鼠脾细胞培养上清液中γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素4（interleukin 4,IL-4）水平;用流式细胞术检测小鼠外周血单个核细胞（PBMC）分泌IFN-γ的辅助性T细胞（helper T cell,Th）1细胞百分比、分泌IL-4的Th2细胞百分比,以及Th1与Th2的细胞比值.用SAS 9.2软件处理数据,实验数据以“-x±s”表示,对有关数据进行两因素析因设计的方差分析,两两比较采用t检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 免疫结束后2周,小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ水平,50 μg[（646.05±342.53） pg/ml]和100 μgAg85ADNA肌内注射组[（738.61±372.68） pg/ml]显著高于生理盐水组[（1.73±3.88）pg/ml]（f值分别为4.065、4.647,P值均＜0.05）和10 μg Ag85A DNA组[（87.83±120.82）pg/ml]（t值分别为3.513、4.094,P值均＜0.05）;10 μg Ag85A DNA电转染组[（357.06±105.18） pg/ml]显著高于生理盐水组（t=2.247,P＜0.05）,高于100 μg Ag85ADNA电转染组[（86.08±135.73） pg/ml],但差异无统计学意义（t=1.706,P＞0.05）;50 μg Ag85ADNA电转染组[（648.60±439.41）pg/ml]显著高于生理盐水组（t=4.081,P＜0.05）和100 μg Ag85A DNA电转染组（t=3.539,P＜0.05）.与直接肌内注射组IFN-γ水平[（87.83±120.82） pg/ml]比较,10 μg Ag85A DNA电转染组增高3倍[（357.06 pg/ml）/（87.83 pg/ml）]; 50 μg Ag85A DNA肌内注射组[（646.05±342.53） pg/ml]与电转染组[（648.60±439.41）pg/ml]比较,差异无统计学意义（t=-0.016,P＞0.05）;100 μg Ag85A DNA电转染组[（86.08±135.73）pg/ml]较肌内注射组[（738.61±372.68） pg/ml]降低88.35％（t=4.105,P＜0.05）.小鼠PBMC分泌IFN-γ的Th1细胞百分比,不同剂量Ag85A DNA肌内注射组[10 μg Ag85A DNA：（1.39±0.84）％;50 μg Ag85A DNA：（1.55±0.33）％;100 μg Ag85A DNA：（2.13±0.47）％]和DNA电转染组[10 μg Ag85A DNA：（1.42±0.47）％; 50 μg Ag85A DNA：（1.88±0.51）％; 100 μg Ag85ADNA：（1.43±0.68）％]均高于生理盐水组[（0.65±0.31）％]（t值分别为2.002、2.431、4.015、2.084、3.332和2.105,P值均＜0.05）,但不同剂量Ag85A DNA电转染组与肌内注射组之间差异均无统计学意义（t值分别为0.081、0.901和-1.91,P值均＞0.05）.小鼠PBMC分泌IL-4的Th2细胞百分比,不同剂量Ag85A DNA肌内注射组[10 μg Ag85A DNA：（1.42±1.18）％; 50 μg Ag85A DNA：（1.14±0.78）％; 100 μg Ag85A DNA：（1.24±0.76）％]和DNA电转染组[10 μg Ag85A DNA：（1.19±1.09）％; 50 μg Ag85A DNA：（2.06±0.96）％;100 μgAg85A DNA：（1.47±0.65）％]均显著低于生理盐水电转染组[（4.14±2.55）％]（t值分别为-3.392、-3.738、-3.616、-3.676、-2.599和-3.325,P值均＜0.05）,但不同剂量DNA肌内注射组与DNA电转染组之间差异无统计学意义（t值分别为0.284、-1.139和-0.292,P值均＞0.05）.结论 DNA电转染免疫可以增强低剂量DNA疫苗的免疫应答,使用少量的DNA疫苗就可以产生较好的免疫效果.     

系统性红斑狼疮患者外周血Th17细胞与调节性T细胞的变化

目的 探讨外周血辅助性T细胞17(Th17)与调节性T细胞在系统性红斑狼疮(SLE)发生、发展中的变化.方法 选取32例SLE活动期患者作为SLE活动组、30例SLE稳定期患者作为SLE稳定组及25名健康者作为对照组,采用流式细胞术及定量聚合酶链反应(PCR)的方法,分别从蛋白质水平与mRNA水平检测其外周血CD4+T细胞IL-17及FoxP3的表达.采用单因素方差分析进行统计学处理.结果 SLE活动组外周血CD4+T细胞IL-17蛋白质(1.01±0.22)％及mRNA(2.04±0.63)表达水平显著高于SLE稳定组(0.48±0.16)％、(1.12±0.34)及健康对照组(0.41±0.12)％、1(P＜0.01),但SLE稳定组与健康者对照组差异无统计学意义(P＞0.05).SLE活动组外周血CD4+T细胞FoxP3蛋白质(2.36±0.54)％及mRNA(0.42±0.16)表达水平显著低于SLE稳定组(4.34±0.95)％、(0.87±0.28)及健康对照组(5.09±1.17)％、 1(P＜0.01),SLE稳定组又低于健康对照组(P＜0.05).结论 SLE患者外周血中可能存在Th17/调节性T细胞的失衡,且失衡程度可能与病情活动性相关.     

谷胱甘肽转移酶μ基因缺失和氧化损伤与系统性红斑狼疮相关性研究

目的　检测系统性红斑狼疮 (SLE)患者谷胱甘肽转移酶 μ(GSTμ)基因缺失及血中一氧化氮 (NO)、脂质过氧化物 (LPO)、超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)和谷胱甘肽 (GSH)含量 ,分析其与SLE发病之间的关系。方法　用PCR法检测 87例SLE患者和 40名健康对照组的GSTμ基因 ,用化学分析法测上述 5项指标。 结果　SLE患者GSTμ基因缺失率达 6 9 0 % ,明显高于对照组的 47 5 %。SLE活动期NO(79± 18) μmol/L、LPO (10 4± 2 0 ) μmol/L明显高于稳定期和对照组的水平。SLE活动期SOD (12 86± 2 5 2 ) μU/L、GSH Px (78± 14)U/mg、GSH (0 37±0 0 5 )mg/ g明显低于稳定期及对照组水平。在SLE稳定期GSH (1 0 0± 0 14)mg/ g ,仍明显低于对照组水平。血清NO水平与LPO呈显著直线正相关 ,与SOD、GSH Px、GSH呈显著直线负相关。抗dsDNA与NO、LPO呈显著直线正相关。在SLE活动期 ,GSTμ基因缺失者LPO (11 4± 2 2 ) μmol/L明显高于GSTμ基因携带者的水平 ,SOD (1111± 2 18) μU/L、GSH Px (6 7± 14)U/mg、GSH (0 2 4±0 0 4)mg/g明显低于GSTμ基因携带者的水平。在SLE稳定期GSTμ基因缺失者的SOD和GSH水平仍低于GSTμ基因携带者。 结论　GSTμ基因缺失可能是SLE发病的遗传因素之一 ,SLE