生物磁石复合体靶向性分离检测目标细菌

目的使用生物磁石复合体的新型荧光免疫测定方法,高感度快速分离检测目标细菌.方法通过sulfo-SMCC及SPDP处理的方法将抗体固定于生物磁石粒子,制成生物磁石复合体,应用于目标细菌的荧光免疫测定.以生物磁石复合体来结合和移动混合液中的靶细菌,并通过外磁场控制生物磁石复合体.结果本实验以大肠菌为检测目标,使用生物磁石-大肠菌抗体的复合体,约20min左右能从大肠菌混合液中分离出目标大肠菌,并在1h以内从大肠菌混合液中检测出大肠菌.采用生物磁石复合体的荧光免疫测定法还可以分离并测定出浓度在30个/ml以下的微量大肠菌检体.结论利用此项技术可以靶向性分离检测特定细菌.     

生物磁石复合体靶向性分离检测目标细菌

目的：使用生物磁石复合体的新型荧光免疫测定方法，高感度快速分离检测目标细菌。方法：通过sulfo-SMCC及SPDP处理的方法将抗体固定于生物磁石粒子，制成生物磁石复合体，应用于目标细菌的荧光免疫测定。以生物磁石复合体来结合和移动混合液中的靶细胞，并通过外磁场控制生物磁石复合体。结果：本实验以大肠菌为检测目标，使用生物磁石-大肠菌抗体的复合体，约20min左右能从大肠菌混合液中分离出目标大肠菌，并在1h以内从大肠菌混合液中检测出大肠菌。采用生物磁石复合体的荧光免疫测定法还可以分离并测定出浓度在30个/ml以下的微量大肠菌检体。结论：利用此项技术可以靶向性分离检测特定细菌。     

使用生物纳米磁珠对低浓度目标细菌的磁捕获

目的以从磁性细菌体内提取的纳米磁珠为载体，对低浓度大肠杆菌O157：H7进行快速磁捕获与分离。方法从磁性细菌中获取生物纳米磁珠，然后将大肠杆菌O157抗体接种于该磁珠表面，形成免疫磁珠后，对细菌混合液中浓度约为1cfu／10ml的大肠杆菌O157：H7进行快速磁捕获与分离。结果菌源性纳米磁珠表面大肠杆菌O157抗体的包被固定量为132μg／mg磁珠。当大肠杆菌O157免疫磁珠浓度为50μg／ml以上时，即有较好的捕获和分离效果，而且特异性较高，显著强于传统的离心分离法（P〈0．01），当浓度达到100μg／ml以上时捕获和分离效果更好。结论利用磁性细菌由来的生物纳米磁珠，可将目标细菌抗体包被于生物纳米磁珠表面，制成免疫磁珠后，通过外磁场诱导可快速、准确地进行低浓度目标细菌的捕获与分离。     

一种新型结核分枝杆菌检测方法的研究

目的 探讨利用荧光量子点(QDs)开发新一代结核分枝杆菌的检测方法.方法 采用特异性多克隆抗体偶联到磁珠上用于结核杆菌的分离和富集,然后用标记QDs的链霉亲和素检测结合生物素标记的肝素血凝素(HBHA)单克隆抗体的结核杆菌.采用牛结核分枝杆菌和结核分枝杆菌作为阳性样品,以大肠杆菌和沙门氏菌作为阴性对照,以评估该方法的可行性.结果 用抗酸染色能检测到磁珠分离和富集的结核杆菌,直接观察没有发现阴性对照有荧光,但阳性对照可以观察到荧光.直接观察法的检测限为104细菌/mL.当采用荧光光度计检测样品时,其检测限可以达到103细菌/mL.结论 该方法能适用于包括结核分枝杆菌病原体的检测,是一种具有前景的病原体的检测方法.     

ATP细菌快速测定系统检测温泉中微生物污染的效果评价

目的为提高卫生监督机构对温泉浴水质的现场快速检测能力和手段,建立温泉浴池水中细菌总数新的检测方法。方法对温泉浴池水中非细菌细胞的ATP用生物方法分离,使用荧光虫素和荧火虫光素酶稀释溶剂将溶解的细菌细胞中的ATP转化为光能,再通过灵敏的微光度计检出ATP的量,通过查表,得出池水中所含细菌总数。结果该方法分离效果良好,重现性好,灵敏度、精密度高,干扰少。结论本方法携带、操作方便,重现性好,测定结果可靠,灵敏度高,无论在温泉浴池水还是游泳池水的现场快速检测都有较好的适用性。     

荧光抗体活菌染色—直接沉淀免疫荧光菌团应用于EITor弧菌快速检定的实验研究

本文报道用荧光抗体直接加入细菌液体标本中,离心沉淀,作活菌湿片染色,在荧光显微镜下直接观察细菌沉淀物荧光菌团,快速检定EI Tor弧菌的实验研究结果。 实验证明:本法特异性强,抗EI Tor弧菌的荧光抗体,只对EI Tor弧菌形成特异的荧光菌团,且能从此种荧光菌团中分离培养出典型的EI Tor弧菌;对不凝集弧菌     

从冷藏肉蛋中分离出嗜冷的荧光假单胞菌和变形杆菌

用细菌检验标准方法从4℃冷藏2周的生猪肉中以优势菌生长状态分离出1抹荧光假单胞菌;从冷藏的鸡蛋中以纯培养状态分离到3株荧光假单胞菌和1株变形杆菌。对该5株细菌进行了鉴定,结果证明它们都是适宜在4℃生长的嗜冷菌。随着冰箱的普及,在变质食品中此类细菌会越来越多见,对健康的危害及引起食物中毒的可能性会越来越大。     

毛细管电泳-激光诱导荧光用于中药制剂中氨基酸成分的分析

目的:探讨毛细管电泳-激光诱导荧光在对中药制剂中的氨基酸成分进行分析过程中的实际效果。方法:收集经异硫氰酸荧光素衍生出的5种氨基酸试剂,分为观察组和对照组,每组检测需要进行50次。对照组使用常规的柱前衍生紫外检测的方法进行检测,观察组使用毛细管电泳-激光诱导荧光检测的检测方法进行检测,在检测完成后比较两种检测方法的分离效果以及分离时间。结果:两组检测方法均能够对于中药制剂中的氨基酸成分进行相应的检测以及分析,但观察组检测方式在检测时间以及分离效果方面均明显优于对照组的检测方式,差异有统计学意义(P0.05)。结论:在中药制剂中的氨基酸成分进行检测的过程中,通过使用毛细管电泳-激光诱导荧光的检测方式能够显著提升检测效果并减少检测时间。     

输入性登革热的实验室诊断

目的通过实验室检测发现并确诊1例输入性登革热阳性病例。方法采用实时荧光(RT-PCR方法对病人血清进行检测,并对RT-PCR扩增产物进行核苷酸序列测定,检测结果使用BLAST进行比对;并采用间接ELISA法和捕获ELISA法分别检测登革热特异性抗体IgG、IgM。结果通过实时荧光RT-PCR方法检测出该病例呈登革热病毒核酸Ⅲ型阳性;对RT-PCR扩增产物进行序列比对,结果显示与登革病毒III型同源性很好;ELISA法检测登革热特异性抗体IgG、IgM均为阴性。结论通过实验室确诊,该病例为登革热阳性病例。     

双色红外荧光技术在蛋白磷酸化检测中的应用

目的 通过与化学发光法比较,了解双色红外荧光技术在目标蛋白磷酸化检测中的优势。方法 分别取内毒素休克小鼠不同时间肺组织,制备组织匀浆蛋白样品。用SDS-PAGE电泳分离后转膜,将膜分别与磷酸化的或／和总的p42／44MAPK抗体孵育,二抗用耦联有Alexa Fluor 680和IRDye 800的荧光抗体或辣根过氧化物酶抗体．通过双色红外荧光系统和化学发光法进行蛋白质磷酸化检测。结果 红外荧光检测技术和化学发光检测结果均显示内毒素处理后小鼠肺组织p42／44MAPK磷酸化水平发生了改变,1h最高,12h以后逐渐恢复到接近正常水平。两种方法检测结果显示了较好的一致性,相比之下双色红外荧光技术具有更高的灵敏度、操作方便、节省时间及可以同时检测两种蛋白等优点。结论 双色红外荧光技术在蛋白磷酸化的检测方面具有较好的应用前景。     

免疫磁捕获-PCR检测大肠杆菌O157

目的使用免疫BMPs,对牛粪标本中的大肠杆菌O157进行免疫磁捕获,再对捕获物进行PCR检测,研究免疫磁捕获-PCR检测牛粪标本中大肠杆菌O157的方法。方法从磁性细菌中获取BMPs,将大肠杆菌O157抗体接种于BMPs表面,制成免疫BMPs。使用免疫BMPs,对大肠杆菌O157∶H7浓度为1×103cfu/g的牛粪标本,进行免疫磁捕获,对捕获物以vt1（Vero毒素1基因）、vt2（Vero毒素2基因）为增扩对象,进行PCR检测。作为对照,相同牛粪标本,直接对牛粪标本以vt1、vt2为增扩对象,进行同样PCR检测。结果相同牛粪标本,经免疫BMPs捕获处理,捕获物的PCR结果显示vt1及vt2基因阳性。而未经免疫磁捕获处理的牛粪标本,直接PCR检测的结果显示阴性。结论对牛粪标本,利用免疫BMPs,可捕获目标抗原,同时还可去除牛粪中存在的PCR反应抑制物等影响因素,提高检测敏感度。     

复方三氯异氰尿酸泡腾片杀菌效果观察

目的了解复方三氯异氰尿酸泡腾片杀菌效果。方法采用悬液定量杀菌试验方法、模拟现场消毒试验及现场消毒试验方法对该消毒剂杀菌效果进行观察。结果用含有效氯500mg/L复方三氯异氰尿酸泡腾片溶液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别作用5min和10min,其杀灭对数值均5.00,用含有效氯5 000mg/L复方三氯异氰尿酸泡腾片溶液对枯草杆菌黑色变种芽胞作用60min,其杀灭对数值均5.00。用500mg/L复方三氯异氰尿酸泡腾片溶液浸泡消毒白色工作服作用20min,对白色工作服口袋内布片上污染的金黄色葡萄球菌的杀灭对数值各样本均≥4.00;用有效氯含量为500mg/L复方三氯异氰尿酸泡腾片溶液浸泡消毒黄瓜,作用10min,对黄瓜上污染的大肠杆菌的杀灭对数值各样本均≥3.00;有效氯含量为500mg/L复方三氯异氰尿酸泡腾片溶液,作用30min,对筷子上污染的大肠杆菌的杀灭对数值各样本均≥3.00;用500mg/L复方三氯异氰尿酸泡腾片溶液擦拭消毒物体表面作用30min,对自然菌的平均杀灭对数值为2.00。结论复方三氯异氰尿酸泡腾片对物体表面、织物、瓜果及食饮具均有较好的消毒效果。     

双黄连对多重耐药大肠埃希菌抗菌增敏作用及机制研究

目的：探讨双黄连粉针剂对多重耐药大肠埃希菌抗菌增敏作用及其作用机制。方法：取分离于临床的多重耐药大肠埃希菌,二倍稀释法测定双黄连与头孢他啶单独使用的最低抑菌浓度（MIC）,棋盘稀释法测定双黄连和头孢他啶联合使用时部分抑菌浓度指数（FIC）,动态生长曲线法观察双黄连和头孢他啶及其联合使用时对细菌生长的影响,采用荧光分光光度法测定双黄连对柔红霉素在细菌菌体内聚集的影响。结果：双黄连粉针剂与头孢他啶联合应用时FIC指数=0.375,具有协同抑菌作用;双黄连联合头孢他啶能够明显抑制细菌生长;亚抑菌浓度双黄连分别预处理4、6、8 h后,大肠埃希菌菌体内柔红霉素蓄积程度较空白对照增强（P〈0.05）,其中6~8 h时较为明显。结论：双黄连与头孢他啶联合应用具有协同作用,其作用机制可能与增加药物在菌体内蓄积水平有关。     

四种儿童常见肠道致病菌的多重PCR检测

目的 对儿童感染性腹泻能进行四种常见病原菌如肠致病性大肠埃希菌（enteropathogenic Escherichia coli,EPEC）、沙门菌属（Salmonella spp.）、志贺菌属(Shigella spp.)、空场弯曲菌(Campylobacter Jejuni)的快速检测。方法 建立多重PCR检测体系。结果 该方法用一次PCR即可检测四种肠道致病菌,灵敏度达10~100CFU/ml;同时利用16S rRNA基因的保守区域作为内参照,有利于对粪便标本的扩增进行质量控制;对粪便标本,整个检测过程约5 h。结论 通过检测编码细菌的毒力因子或特异性生化反应相关的酶的基因,多重PCR体系能特异、灵敏、快速地检测四种肠道致病菌;icsA基因可以作为志贺菌属检测的特异性靶基因;该方法可进一步完善成体外基因诊断试剂盒。     

Nd：YAG激光对天然牙根管内大肠杆菌杀菌效果的体外实验

目的  建立大肠杆菌离体天然牙根管感染模型,评价脉冲Nd：YAG激光对感染根管内大肠杆菌的杀菌效果。方法  将感染3周的30颗离体前牙随机分为5组,每组6颗牙齿。A组1.5 W激光照射1次,作用30 s;B组2.1 W激光照射1次,作用30 s;C组2.1 W激光重复照射3次,每次30 s,间隔15 s;D组2.5%次氯酸钠NaOCl冲洗后2.1 W激光重复照射3次,每次30 s;对照组单纯用2.5%NaOCl冲洗。每组标本在照射、冲洗前后根管内即刻取样行细菌培养,48 h后计数菌落数（CFU/ml）,比较根管内大肠杆菌的杀灭效果。结果  Nd：YAG激光和2.5% NaOCl照射、冲洗后根管内细菌量均显著下降。各组根管内细菌减少量比较差异有统计学意义。A组与B组比较差异无统计学意义（P >0.05）,分别与C组、D组、对照组比较差异有统计学意义（P <0.05）;C组与D组比较差异有统计学意义（P <0.05）,与对照组比较差异无统计学意义（P >0.05）;D组与对照组比较差异有统计学意义（P <0.05）。结论  Nd：YAG激光和2.5% NaOCl对根管内大肠杆菌具有杀菌作用,两者联合使用杀菌作用更强。

     

泌尿系感染大肠埃希菌的交叉耐药和相关耐药

目的:通过对泌尿系感染大肠埃希菌的交叉耐药和相关耐药调查,使临床医生进一步了解该菌的耐药状况,了解本地区的耐药模式。方法:细菌鉴定采用API20E,药敏试验采用纸片扩散法,同一种药物按耐药和敏感分为两组。结果:交叉耐药和相关耐药分别计算可更直接观察细菌的耐药状况,耐药菌株对其他抗生素的耐药性与其敏感菌株相比耐药性增高明显。常见的耐药模式为氨苄西林/复方新诺明;氨苄西林/复方新诺明/氟喹诺酮类。产ES-BL大肠埃希菌占37.0%。哌拉西林/他唑巴坦、呋喃妥因和亚胺培南耐药率分别为19.7%、15.4%、0%。结论:加强交叉耐药和相关耐药调查有助于医生选用正确的治疗方式。哌拉西林/他唑巴坦、呋喃妥因和亚胺培南是本地区治疗泌尿系感染大肠埃希菌最有效的药物。     

菌源性磁珠在病原菌检测中的应用

目的 建立一种可检测低浓度大肠埃希菌O157等的产Vero毒素大肠埃希菌（verotoxigenic escherichia coli,VTEC）的方法.方法 从磁性细菌中获取菌源性磁珠（bacterial magnetic particles,BMPs）,将大肠埃希菌O157抗体接种于BMPs表面,形成免疫BMPs.收集养牛场排出的污水标本,每份10ml中添加免疫BMPs 1mg,通过外磁场诱导,以免疫BMPs对污水标本进行靶向取样.增菌培养12h,以VTEC的vt1（Vero毒素1基因）、vt2（Vero毒素2基因）为增扩对象,进行PCR检测.作为对照,同样的污水标本,每份10ml,常规离心分离,分离物经过12h增菌培养后,同样进行PCR检测.结果 经免疫BMPs靶向取样处理后,40份污水标本,确诊含有vt1及/或vt2基因的6份.而同样40份污水标本,经离心分离处理,最后确诊含有vt1和/或vt2基因的1份.结论 对于有大量杂菌和异物的污水标本,利用免疫BMPs,通过外磁场诱导可对目标病原菌进行靶向取样,作为病原菌检测的辅助手段,可降低漏检率.     

时间分辨免疫荧光分析检测乙型肝炎病毒表面抗原

目的 时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)是当前标记免疫分析研究应用领域的热点之一,具有高灵敏性和高特异性,用于生物分子的超微量检测.本研究者在建立一种灵敏度高、特异性强、操作简便的检测方法.方法 以Eu-DTTA{N1-(P-异硫氰基苄基)-二乙三胺四乙酸铕钠}为示踪物,建立了用TRFIA检测乙型肝炎血清学标志物乙型肝炎病毒表面抗原的方法.结果 所建立的标准曲线分析范围分别为0.2～300 ng/ml,分析灵敏度为0.05 ng/ml,检测参考标准品的批内变异系数均小于10%,与免疫放射测定同时定量检测多份血清样本,相关系数高达95%.结论 TRFIA分析范围宽,灵敏度高,操作简便,具有优越的定量检测能力,价格适中,十分适合临床推广应用.     

用三对引物检测血液中细胞DNA的方法学

目的：建立稳定、敏感的检测血液中肠源性细菌ＤＮＡ的方法。方法：取２３例腹部手术后体温＞３８．５℃患者的肘静脉血进行血培养,并以酚抽提法提取全血ＤＮＡ进行ＰＣＲ,靶基因分别为大肠杆菌特异性的β－半糖甘酶基因、脆弱类杆菌特异性的谷氨酰胺合成酶基因,以及大多数细菌所共有的１６ＳｒＲＮＡ基因。以标准菌株提取的ＤＮＡ为阳性对照。空白对照为阴性对照,２０例健康志愿者全血ＤＮＡ为正常对照。对２０例标本重复检测２次以确定其复现性。结果：ＰＣＲ复现率为９５％。血培养阳性率为１３．０％（３／２３）,ＰＣＲ检测阳性率为４３．５％（１０／２３）,较血培养阳性率高（Ｐ＝０．０１６）。结论：按照规范进行的ＰＣＲ检测血液中肠源性细菌方法稳定,比血培养敏感。