肝损伤修复过程中p75神经营养因子受体的作用

p75神经营养因子受体(p75NTR)是肝星状细胞(HSC)表面表达的与神经生长因子(NGF)特异结合的受体,在肝脏损伤修复过程中发挥重要作用。在肝脏损伤修复过程中,p75NTR能提高肝组织肝细胞生长因子的表达,促进受损肝细胞的再生和肝组织结构的恢复;对于静息状态的HSC,p75NTR能促进HSC活化;在肝损伤晚期,随着再生肝细胞和活化HSC的增多,NGF分泌明显增加,NGF与p75NTR结合能促进活化的HSC凋亡和肝纤维化逆转。     

黄芪注射液对肝纤维化抑制作用的实验研究

目的探讨黄芪注射液对大鼠肝星状细胞(HSC)和肝纤维化的作用。方法体外细胞实验: 用不同浓度黄芪注射液(0、25、50、100、200、400 mg/ml)作用HSC不同时间(24、48、72h)后,采用四甲基偶氮唑盐法检测其活化增殖;流式细胞术检测HSC增殖周期;溴乙锭/吖啶橙荧光染色和流式细胞术检测HSC凋亡。动物实验:用40%四氯化碳和5%乙醇制备大鼠肝纤维化动物模型,实验分为正常对照组、模型组和黄芪注射液组。黄芪注射液组和模型组在模型制备的同时分别给予黄芪注射液(800 mg·kg-1·d-1)和等渗盐水腹腔注射,第8周时测定血清透明质酸(HA),层黏连蛋白(LN)水平及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)含量,免疫组织化学方法观察肝组织LN的表达,苏木素-伊红、苦味酸-酸性品红染色观察肝组织病理改变。结果在体外细胞实验中,与0 mg/ml组比较,黄芪注射液其它浓度组明显抑制了HSC增殖,并呈剂量和时间依赖性;HSC增殖周期被抑制在G2-M期;黄芪注射液各浓度组荧光染色法和流式细胞术均未检测到HSC凋亡。在体内实验中,血清HA、LN含量:模型组分别为(114.3±25.6)μg/L和(78.8±11.7)μg/L,黄芪注射液组分别为(85.6±37.3)μg/L和(66.8±17.6)μg/L,P <0.05;肝组织SOD活性黄芪注射液组为(75.9±5.9)NU/mg,模型组为(49.6±5.7)NU/mg,P< 0.01;而MDA含量黄芪注射液组为(2.4±0.2)μmol/g,模型组为(3.7±0.4)μmol/g,P<0.01。显微镜下黄芪注射液组肝纤维化程度明显轻于模型组,免疫组织化学结果黄芪注射液组肝组织LN表达明显减少。结论黄芪注射液可延缓肝纤维化的发生,其机制除可直接抑制HSC增殖外,还有抗氧化、抗脂质过氧化、减少LN产生,防止肝窦毛细血管化等作用。     

NHE-1与肝星状细胞增殖的关系及姜黄素对其的影响

目的:研究NHE-1与肝星状细胞增殖的关系及姜黄素对其的影响, 初步探讨肝纤维化的形成机制.方法:选择肝星状细胞系作为体外研究对象,用不同浓度(1、10、20 μmol/L)的姜黄素处理大鼠肝星状细胞; 以MTT比色法测定肝星状细胞的增殖; 酶联免疫吸附法(ELISA)测定Ⅰ型胶原含量, RT-PCR法检测肝星状细胞Na+/H-泵(NHE-1 mRNA)的表达.结果:各浓度姜黄素可明显下调肝星状细胞NHE-1 mRNA表达(0.6401±0.0063, 0.2391±0.0039, 0.1437±0.0044 vs 0.7214±0.0155,P <0.05), 降低培养上清液中Ⅰ型胶原的水平(199.40±16.22, 182.37±14.72, 169.91±15.80 ng/mg pro vs 216.35±17.19 ng/mg pro,P <0.05), 抑制肝星状细胞的增殖, 并呈剂量依赖性.结论:姜黄素可能通过调控肝星状细胞NHE-1mRNA的表达来抑制HSC的增殖及Ⅰ型胶原的合成等机制, 从而抑制肝纤维化的形成.     

姜黄素对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的　观察姜黄素对体外培养肝星状细胞 (HSC)增殖与凋亡的影响。方法　不同浓度姜黄素处理HSC株HSC T6 ,MTT法检测细胞增殖 ,流式细胞仪、透射电镜和琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡。结果　在 2 0～ 10 0 μmol/L浓度范围内 ,姜黄素可剂量依赖性地抑制HSC增殖 (P <0 .0 1)。 2 0、4 0、6 0 μmol/L姜黄素处理HSC 2 4h后 ,细胞周期分析发现S期细胞减少 ,G2 /M期细胞显著增加 (P <0 .0 1) ;流式细胞术检测到明显的亚G1峰 ,各组的凋亡指数 (% )分别是 15 .3± 1.9,2 6 .7± 2 .8,37.6± 4 .4 ,与对照组 (1.9± 0 .6 )相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;4 0 μmol/L姜黄素作用 12、2 4、36、4 8h ,凋亡指数 (% )分别是 12 .0± 2 .4、2 6 .7± 3.5、33.8± 1.8和 4 9.3± 1.6 ,与对照组相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;透射电镜观察到细胞皱缩、核染色质浓缩沿核膜排列和凋亡小体形成等 ;琼脂糖凝胶电泳可见到明显的DNA梯带形成。结论　姜黄素可显著抑制HSC增殖 ,使细胞周期停滞于G2 /M期 ,并诱导其凋亡 ,其作用具有时间和剂量依赖性     

卡维地洛抑制血小板衍生因子BB诱导的人肝星状细胞活化和纤维化的作用机制

目的 研究卡维地洛对人肝星状细胞迁移、侵袭及纤维化作用的影响,并进一步探讨其信号通路机制。方法 人肝星状细胞系(LX-2)加入不同浓度(0、1、2、5、10μmol/L)的卡维地洛处理一定时间后,加入血小板衍生因子(PDGF)BB刺激细胞使其激活,分别采用CCK-8检测细胞增殖水平、划痕实验检测细胞迁移能力、Transwell小室进行侵袭能力检测、Real-time PCR和Western Blot检测纤维化相关指标及通路相关蛋白的表达水平。包括空白对照组、PDGF-BB组(只加入PDGF-BB)和4个不同卡维地洛浓度的混合组(1μmol/L组、2μmol/L组、5μmol/L组、10μmol/L组,且均加入了PDGF-BB)。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用Dunnett-t检验。结果 卡维地洛可抑制LX-2増殖且呈浓度依赖性,半抑制浓度为28.42μmol/L;和PDGF-BB组比较,10μmol/L组可明显抑制LX-2的迁移能力[(59.780±8.898)%vs(17.270±2.668)%,t=4.576,P=0.010];PDGF-BB可诱导LX-2侵袭能力增加,卡维地洛处理后的LX-2侵袭能力随浓度增加逐渐减弱,2μmol/L组、5μmol/L组和10μmol/L组LX-2侵袭度自(157.00±10.52)%分别降低至(85.15±13.50)%(t=4.198,P=0.014)、(55.67±9.54)%(t=7.133,P0.01)和(45.37±10.70)%(t=7.438,P0.01);5μmol/L组和10μmol/L组Ⅰ型胶原mRNA表达自(1.068±0.128)降低至(0.453±0.085)(t=3.997,P0.05)和(0.151±0.019)(t=7.091,P0.01);1μmol/L组、2μmol/L组、5μmol/L组和10μmol/L组纤连蛋白mRNA表达自(1.285±0.042)降低至(0.879±0.063)(t=5.345,P0.01)、(0.768±0.010)(t=4.773,P0.01)、(0.742±0.117)(t=4.385,P=0.012)和(0.591±0.049)(t=10.76,P0.01);5μmol/L组和10μmol/L组纤连蛋白表达自(2.103±0.414)降低至(0.739±0.132)(t=3.137,P=0.035)和(0.600±0.114)(t=3.499,P=0.025),分别使α-平滑肌肌动蛋白表达自(1.418±0.241)降低至(0.543±0.215)(t=2.710,P=0.035)和(0.343±0.118)(t=4.005,P0.01);2μmol/L组、5μmol/L组和10μmol/L组Y751磷酸化自(2.309±0.181)降低至(1.278±0.304)(t=2.912,P=0.044)、(0.555±0.038)(t=9.476,P0.01)和(0.175±0.039)(t=11.51,P0.01);5μmol/L和10μmol/L分别使Akt磷酸化自(1.106±0.185)降低至(0.335±0.132)(t=3.386,P=0.015)和(0.137±0.110)(t=4.494,P0.01)。结论 卡维地洛可抑制LX-2的增殖以及PDGF-BB诱导的迁移、侵袭和纤维化作用,其机制主要是通过阻断PDGF-BB/PDGFRβ/Akt通路发挥作用的。     

去甲肾上腺素对肝星状细胞表达瘦素以及瘦素受体的影响

目的:探讨交感神经递质去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)对体外培养肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)系表达瘦素以及瘦素受体的影响.方法:用不同浓度的NE作用于HSC,分别于24、48及72 h收集细胞,免疫组织化学方法检测活化HSC表达α-肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)情况;Western blot法检测其表达瘦素以及瘦素受体蛋白的影响;real-time PCR检测NE对HSC瘦素以及瘦素受体m RNA的影响.结果:(1)免疫组织化学结果显示,1、10、100μm o l/L浓度N E作用于H S C 24 h,α-SMA表达明显增加(14.1±4.4,17.5±5.2,19.8±4.1 vs 11.3±4.5;P0.05);提示NE可以活化HSC,并促进HSC增殖.10μmol/L N E作用H S C 24、48、72 h后,α-S M A表达逐渐增强(17.5±5.2;18.5±5.4;19.2±6.2,P0.05);提示N E对H S C的促增殖作用具有时间依赖性;(2)Western blot结果显示,1、10、100μmol/L NE作用于HSC 24 h后,瘦素蛋白表达明显高于对照组(1.54±0.08,2.72±0.09,2.84±0.18 vs 0.85±0.12,P0.05);瘦素受体蛋白表达亦明显高于对照组(1.57±0.18,2.51±0.17,2.89±0.19 vs0.98±0.15,P0.05);(3)Real-time PCR检测HSC瘦素以及瘦素受体m RNA的表达增加,1、10、100μmol/L NE作用于HSC 24 h后,瘦素m RNA表达明显高于对照组(1.51±0.08,2.58±0.09,3.63±0.12 vs 1.00±0.07,P0.05);瘦素受体m RNA表达亦明显高于对照组(1.71±0.08,2.87±0.10,4.01±0.14 vs1.00±0.08,P0.05).结论:交感神经递质NE对体外活化的HSC瘦素以及瘦素受体的表达均有促进作用,从而参与了肝纤维化的进程.     

p75NTR蛋白体外通过TrkANGFR/p75NTR异源二聚体信号途径促进L02细胞增殖

目的 观察神经生长因子(NGF)及受体(TrkANGFR、P75NTR)在肝细胞中的表达,探讨外源性p75NTR蛋白对肝细胞的生物学作用.方法 体外培养L02肝细胞,免疫细胞化学和荧光定量PCR法分别检测NGF、TrkANGFR、P75NTR在L02细胞中的表达.XTT法检测外源性P75NTR、NGF、NGF－ P75NTR、抗TrkANGFR、抗p75NTR对L02细胞增殖的作用.流式细胞术(膜联蛋白V/碘化丙啶)检测外源性P75NTR对L02细胞凋亡的作用.流式细胞术(碘化丙啶)检测外源性p75NTR对L02细胞周期的影响.结果 P75NTR促进L02细胞增殖,呈剂量依赖性.NGF和NGF+ P75NTR组吸光度值(A)值分别为0.4916±0.0565和0.5839±0.0733,与阴性对照组比较差异有统计学意义(0.3601±0.0310,P＜0.05);抗TrkANGFRA值为0.2689±0.0229,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P=0.003);抗P75 NTRA值为0.3524±0.0312,与阴性对照组比较差异无统计学意义(P=1.000).外源性P75NTR对L02细胞有抗凋亡趋势,加入100 ng/ml P75NTR抗凋亡作用最强,表达量为3.70±0.26,但与对照组比较差异无统计学意义(4.10±0.62,P=1.000).P75NTR作用于L02细胞周期的S期,呈剂量依赖性,呈倒置的U形曲线,浓度为100 ng/ml时作用最强(25.60±0.40),与对照组比较差异有统计学意义(20.10±1.00,P=0.000).外源性NGF、P75NTR、NGF+ P75NTR上调了L02细胞NGFmRNA、TrkANGFR mRNA、P75NTRmRNA的基因表达,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);抗TrkANGFR、抗P75 NTR对NGFmRNA、TrkANGFR mRNA、P75NTR mRNA的基因表达无明显影响,与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 L02细胞表达NGF及受体TrkANGFR、p75NTR,合适剂量的外源性P75NTR可能通过TrkANGFR/P75NTR异源二聚体信号途径促进L02细胞增殖.     

木犀草素抑制肝星状细胞增殖及其胶原合成

目的 研究木犀草素对体外培养的肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)增殖及其胶原表达、合成的影响。方法 从Wistar大鼠肝脏分离培养HSC,并用~3H-TdR和~3H-pro同位素掺入实验,基因探针原位杂交等技术研究了木犀草素对HSC增殖、胶原基因表达合成的影响。结果 当木犀草素的浓度分别达到10 μmol/L和20 μmol/L 时抑制HSC增殖(t=2.542,P＜0.05)和胶原合成(t=3.650,P＜0.01),其作用具有剂量依赖关系;25 μmol/L木犀草素使Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达降低,其中Ⅰ型前胶原基因表达降低具有统计学差异(x~2=6.850,P＜0.01)。结论 木犀草素在体外抑制HSC增殖和胶原表达合成,在体内可能会具有预防或冶疗肝纤维化的作用。     

大鼠肝纤维化自发逆转过程中肝星状细胞凋亡与p75的表达

肝星状细胞（HSC）凋亡是肝纤维化逆转的主要机制之一。人和大鼠的HSC表达低亲和力神经生长因子受体p75，当p75与神经生长因子（NGF）结合时可引起细胞凋亡。本研究通过建立四氯化碳（CCl4）肝纤维化大鼠模型，对肝纤维化自发逆转过程中HSC凋亡和p75表达进行了研究。     

去甲肾上腺素对大鼠肝星状细胞作用的实验研究

目的 探讨交感神经系统在肝纤维化发生和发展中的作用. 方法采用免疫荧光和RT-PCR检测体外培养的肝星状细胞(HSC)中α1、β2-肾上腺素能受体的表达;用四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度的去甲肾上腺素(NE)对HSC增殖活性的影响.同时用RT-PCR检测受NE作用后HSC的活化指标胶原蛋白-1、转化生长因子β(TGF β)及α-平滑肌动蛋白(α-SMA)的表达.用高效液相色谱-电化学法测定活化的HSC中交感神经递质NE的水平. 结果α1和β2-肾上腺素能受体表达于HSC的胞膜和胞质内;NE可呈剂量依赖性地促进HSC增殖,在浓度为100μmol/L时达到最大效应,F=140.464,P<0.05,差异有统计学意义.以NE 100 μmol/L作用细胞24h后,可显著促进反应HSC活化的指标上升,胶原蛋白-1表达为0.3022±0.0610,TGF β表达为2.2080±0.2151,α-SMA mRNA表达为0.5469±0.0108,与对照组胶原蛋白-1(0.1040±0.0556)、TGF β(1.1190±0.0070)、α-SMA mRNA表达(0.0759±0.0449)比较,t值分别为-4.160、-8.763和-17.651,P值均<0.05,差异均有统计学意义.HSC可以合成并释放NE,且受血小板衍生生长因子(10ng/ml)刺激后HSC中NE含量为(14.24±0.21)ng/ml,对照组为(11.34±0.15)ng/ml,两组比较,t=-32.907,P<0.05,差异有统计意义.结论 抑制交感神经系统使HSC活性降低对临床上治疗肝纤维化有一定的指导意义.     

姜黄素调控炎症对内皮细胞增殖凋亡的影响

目的明确姜黄素对炎症诱导的血管内皮细胞损伤的保护机制。方法将人单核／巨噬细胞系（THP-1）分为空白对照组、高脂高糖组、高脂高糖＋姜黄素预处理组（高脂高糖浓度为25mmol／L葡萄糖＋500μmol／L棕榈酸）,分别给予相应处理24h,更换培养基继续培养24h,利用酶联免疫吸附法（ELISA）检测上清及实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）分析THP-1细胞内肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）的表达,同时将上清作用脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）,HUVECs分为空白对照组、空对照条件培养基组、高脂高糖条件培养基组、姜黄素处理条件培养基组,并行噻唑蓝法（MTT）检测HUVECs增殖、流式细胞仪检测凋亡,Westernblotting分析磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK）及B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）蛋白表达。组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果高脂高糖组THP-1细胞内受体相互作用蛋白140（RIPl40）、TNF-α和IL-6mRNA表达及上清中炎症因子TNF-α和IL-6浓度明显高于空白对照组（t=8．55、9．44、9．73、16．01、19．22,均P〈0．05）。相对于高脂高糖组,姜黄素预处理组THP-1细胞内RIPl40、TNF-α和IL-6mRNA表达及上清中TNF-α和IL-6浓度明显下降（t=3．59、5．96、5．59、6．95、23．91,均P〈0．05）;高脂高糖条件培养基组HUVECs细胞活力明显低于空对照条件培养基组（24h,1．22±0．07比1．85±0．14,t=6．58,P〈0．05;48h,1．72±0．02比2．49±0．09,t=10．08,P〈0．05）,而姜黄素处理条件培养基组能够改善高脂高糖条件培养基对HUVECs增殖的抑制作用（24h,1．22±0．07比1．72±0．11,t=2．13,P〈0．05;48h,1．72±0．02比2．33±0．11,t=6．92,P〈0．05）;与空对照条件培养基组比较,高脂高糖条件培养基组能够明显增加HUVECs凋亡率、p-ERK表达及降低Bcl-2表达（t=9．82、9．69、4．61,均P〈0．05）,姜黄素处理条件培养基组与高脂高糖条件培养基组比较,下调RIPl40表达后能明显降低HUVECs凋亡率、p-ERK表达及增加Bcl-2表达（t=6．35、7．17、3．26,均P〈0．05）。结论姜黄素能够通过抑制高脂高糖诱导的炎症来调控HUVECs的增殖凋亡。     

姜黄素抑制棕榈酸诱导的巨噬细胞炎症反应的机制研究

目的探讨姜黄素抑制棕榈酸诱导的巨噬细胞炎症反应的作用机制。方法以0、250、500μmol／L棕榈酸干预小鼠巨噬细胞RAW264．724h,观察细胞形态,逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞中受体相互作用蛋白140（RIPl40）、肿瘤坏死因子a（TNF-a）、白细胞介素-6（IL-6）mRNA水平,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测上清中TNF-a、IL-6水平;噻唑蓝法（MTr）确定姜黄素作用RAW264．7细胞的最佳时间和浓度;细胞分为姜黄素组和对照组,分别给予20μmol／L姜黄素和二甲基亚砜（DMSO）预处理1h后,均给予500μmol／L棕榈酸作用24h,观察细胞形态并检测细胞中RIPl40、TNF-a、IL-6mRNA水平和上清中TNF-a、IL-6浓度。采用单因素方差分析和t检验对研究数据进行统计检验。结果500μmol／L棕榈酸组RIPl40mRNA表达较0μmol／L组显著升高（3．40±0．51比1．01±0．21,t=7．436,P〈0．01）;0、250、500μmol／L棕榈酸组TNF-amRNA（1．00±0．03、1．79±0．12、2．16±0．13）和蛋白[（197±25）、（371±10）、（485±17）ng／L]、IL-6mRNA（1．00±0．51、2．55±0．15、2．59±0．17）和蛋白[（953±66）、（1081±36）、（1182±18）ng／L]与棕榈酸剂量明显相关（F=99．308、187．049、152．958、26．594,均P〈0．01）;棕榈酸处理后,细胞变圆、皱缩甚至崩解;姜黄素作用RAW264．7细胞的最佳时间为1h,最佳浓度为20ixmol／L;姜黄素组与对照组相比,RIPl40mRNA（1．00±0．05比0．63±0．01,t=一13．79,P〈0．01）、TNF-amRNA（0．64±0．11比1．00±0．07,t=一4．532,P〈0．05）和蛋白[（322±12）比（485±17）ng／L,t=一13．577,P〈0．01]、IL-6mRNA（0．57±0．05比1．00±0．02,t=一14．167,P〈0．01）和蛋白[（241±47）比（1182±18）ng／L,t=一44．810,P〈0．01]均显著降低,而细胞形态正常,细胞问仍有连接融合。结论RIPl40可能参与姜黄素抑制棕榈酸诱导的炎症反应过程。     

特利加压素治疗失代偿期乙型肝炎肝硬化患者消退腹水的作用及对肝肾功能的影响

目的 探讨特利加压素对失代偿期乙型肝炎肝硬化患者肝肾功能的影响及对腹水的治疗作用。方法 回顾性分析2014年8月至2016年4月安徽省立医院肝脏外科收治的50例失代偿期乙型肝炎肝硬化患者,按其处置方式的不同分为特利加压素处理组（n=25）和传统处理组（n=25）,比较两组患者治疗后1 d、3 d、7 d血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、碱性磷酸酶、肌酐、尿素氮等肝肾功能指标及24 h尿量和腹围的变化。结果 治疗后3 d和7 d,特利加压素治疗患者血清肌酐水平为（100.88±28.51）μmol/L和（95.28±25.34）μmol/L,显著低于传统处理组【分别为（124.34±19.88）μmol/L和（113.99±26.89）μmol/L,P＜0.05】;尿素氮水平为（10.13±4.76）μmol/L和（9.05±4.53）μmol/L,低于传统处理组【分别为（13.12±5.28）μmol/L和（12.34±5.99）μmol/L,P＜0.05】;24 h尿量为（1825.6±613.34） ml和（1990.8±731.16）ml,显著多于传统处理组【（1334.42±542.33）ml和（1421.54±698.99）ml,P＜0.05】;腹围为（91.32±7.4）cm和（91.04±7.45）cm,显著小于传统治疗组【（96.28±6.89）cm和（96.55±7.99）cm,P＜0.05】。治疗7 d后,特利加压素组患者腹水好转率为76.0%（19/25）,显著高于传统治疗组的40.0%(10/25,P＜0.05）;而两组患者血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、碱性磷酸酶等肝功能指标的变化,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 对于失代偿期乙型肝炎肝硬化患者,特利加压素能有效改善其肾功能,减少腹水,预防肝肾综合征的发生,短期使用该药,对患者肝功能影响不大。     

激活素A对人肝星状细胞系LX-2细胞增殖的影响

目的观察激活素A对人肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)系LX-2细胞增殖的影响。方法体外培养人HSC LX-2。设正常对照组和激活素A干预组,其中激活素A干预组分为9个浓度梯度,药物终浓度分别为1、2.5、5、10、20、40、80、160、320μg/L,采用CCK-8法检测激活素A对细胞增殖的影响;再选取25、50、100、200、300μg/L5个浓度分别作用24、48、72 h,观察激活素A对细胞增殖的影响。结果激活素A可刺激LX-2细胞增殖,1～2.5μg/L浓度范围内作用轻微(P>0.05),而80～320μg/L的激活素A作用明显增强(P<0.01),且在细胞指数生长期对刺激细胞增殖有时间浓度依赖性。结论激活素A可通过刺激HSC增殖,参与肝纤维化的形成。     

没药甾酮对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的研究没药甾酮对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法以正常人肝细胞L-02作为对照,采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐法观察不同浓度没药甾酮（5～100μmol/L）对人肝癌细胞HepG2和L-02细胞增殖的影响并观察细胞形态的变化;应用流式细胞术检测细胞周期变化和凋亡发生。结果不同浓度没药甾酮均可显著抑制人肝癌细胞HepG2生长,并呈时间、剂量依赖性,最大抑制率可达81.9%±1.92%（100μmol/L）;没药甾酮可使G0/G1期细胞比例增多,G2/M期细胞比例下降,可将细胞阻滞于G0/G1期;没药甾酮诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡,50μmol/L和75μmol/L没药甾酮早期细胞凋亡率分别为24.91%±2.41%、53.03%±2.28%,与对照组相比,差异均具有统计学意义（P〈0.05）。结论没药甾酮可抑制人肝癌细胞HepG2增殖并诱导凋亡,其作用可能与干扰细胞周期有关。     

经胃肠道给予氯化血红素对压力负荷性心衰大鼠氧化应激状态的影响

目的探讨经胃肠道给予氯化血红素后体内血红素氧合酶-1(HO-1)-CO-胆红素的反应和对大鼠慢性压力负荷性心力衰竭进程中氧化应激的影响。方法成年雄性SD大鼠63只,随机分为血红素组、心衰组和对照组,每组21只,各组再分为4、8、12周三个小组,每小组7只。心衰组、氯化血红素组行腹主动脉缩窄术,对照组行假手术。从术后3周开始血红素组以60mg/(kg·d)氯化血红素灌胃,对照组和心衰组同时间灌以同体积生理盐水。各小组在相应的时间点检测血清HO-1、碳氧血红蛋白(COHb)、丙二醛(MDA)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的含量,检测血清超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果 (1)氯化血红素组在给药后4、8、12周血清HO-1含量明显高于心衰组,分别是(6.80±0.92)μg/Lvs(2.5±0.22)μg/L;(10.70±0.69)μg/Lvs(4.50±0.28)μg/L;(13.30±0.99)μg/Lvs(6.07±0.71)μg/L(P0.01);COHb含量均明显高于心衰组,分别为(4.34±0.31)%vs(1.68±0.11)%;(6.32±0.44)%vs(2.46±0.20)%;(7.80±0.39)%vs(3.01±0.42)%(P0.01)。(2)氯化血红素组在给药4、8、12周血清MDA含量均低于心衰组,分别为(8.3±1.3)μmol/Lvs(14.2±2.3)μmol/L(P0.05);(9.6±0.5)μmol/Lvs(20.2±3.2)μmol/L(P0.01);(11.8±1.1)μmol/Lvs(26.1±3.7)μmol/L(P0.01);(3)氯化血红素组SOD活性在4、8、12周均高于心衰组,分别是(125±6)kU/Lvs(95±10)kU/L(P0.01);(109±9)kU/Lvs(67±5)kU/L(P0.01);(72±10)kU/Lvs(40±6)kU/L(P0.01)。(4)氯化血红素组ox-LDL含量在4、8、12周均低于心衰组,分别为(1.14±0.16)μmol/Lvs(1.80±0.22)μmol/L;(1.38±0.14)μmol/Lvs(2.34±0.25)μmol/L;(1.83±0.16)μmol/Lvs(3.17±0.31)μmol/L(均P0.01)。结论经胃肠道给予氯化血红素可以对体内的HO-1产生诱导作用;HO/CO-胆红素系统的诱导可改善压力负荷心衰大鼠的体内氧化/抗氧化失衡状态。     

类风湿关节炎患者血清同型半胱氨酸和脂联素的表达及其意义

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者血清同型半胱氨酸(HCY)、脂联素(ADP)水平的变化及其意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测RA患者治疗前后血清HCY、ADP水平,并与正常对照组及糖尿病对照组比较。结果 RA组血清HCY水平为(6.63±2.75)μmol/L,显著高于正常对照组(4.30±2.12)μmol/L(P=0.003),与糖尿病组(6.69±2.98)μmol/L比较差异无统计学意义(P>0.05);RA组血清ADP水平为(208.12±74.06)μg/L,低于正常对照组(241.73±82.05)μg/L,高于糖尿病对照组(195.95±62.03)μg/L,3组间差异无统计学意义(P>0.05)。治疗6个月后,RA组应用甲氨蝶呤者血清HCY水平显著升高,(7.74±3.07)μmol/Lvs(6.84±3.15)μmol/L,P=0.007;应用来氟米特者血清HCY水平无显著变化,(6.37±2.22)μmol/Lvs(6.43±2.38)μmol/L,P=0.739。结论 RA患者血清HCY水平升高,甲氨蝶呤治疗后进一步升高;血清ADP水平无明显变化。RA患者发生心血管疾病风险升高。     

S-腺苷蛋氨酸对活化人肝星状细胞增殖和凋亡的影响

背景:肝星状细胞(HSCs)的活化是肝纤维化发生的中心环节。S-腺苷蛋氨酸(SAM)是机体最重要的甲基供体,既往研究表明SAM具有一定的抗纤维化作用,能抑制HSCs的活化。目的:观察SAM对活化人肝星状细胞株LX-2增殖、凋亡的作用及其相关机制。方法:用不同浓度SAM培养LX-2细胞24 h,采用CCK-8法检测SAM对LX-2细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,实时定量PCR法检测cyclin D1 mRNA表达,蛋白质印迹法检测α-SMA蛋白表达。结果:与对照组相比,3.0~8.0 mmol/L SAM能抑制LX-2细胞增殖,并呈剂量依赖性(P0.05);2.0、4.0 mmol/L组G1/G0期细胞比例显著降低(P0.05),S期细胞比例显著升高(P0.05);4.0、8.0 mmol/L组早期凋亡率和总体凋亡率显著升高(P0.05);2.0、4.0 mmol/L组cyclin D1 mRNA表达显著升高(P0.05);1.0、2.0、4.0 mmol/L组α-SMA蛋白表达显著降低(P0.05)。结论:SAM能抑制LX-2细胞增殖,其机制可能通过上调cyclin D1的表达而使细胞周期阻滞于S期;同时,SAM能诱导LX-2细胞的凋亡,并下调α-SMA的表达。     

血清D-二聚体、同型半胱氨酸及尿酸含量与高血压的关系

目的:探讨血清D-二聚体(D-D)、同型半胱氨酸(hcy)、血尿酸含量与老年高血压患者血压分级的关系。方法:80例老年高血压患者根据中国高血压防治指南分为,高血压1级组(25例)、2级组(28例)、3级组(27例),另选24例老年健康体检者作为正常对照组。测定各组血清D-D、hcy、血尿酸水平。结果:高血压2、3级组患者血清D-D水平[(0.66±0.24)μg/ml,(0.81±0.62)μg/ml]明显高于正常对照组[(0.26±0.17)μg/ml,P均0.05],高血压1、2、3级组患者血清hcy水平[(12.48±4.81)μmol/L,(17.28±4.52)μmol/L,(30.75±8.55)μmol/L]均显著高于对照组[(8.25±2.43)]μmol/L,P均0.05];高血压2、3级组患者血清血尿酸水平[(306.14±55.05)μmol/L,(334.07±69.47)μmol/L]高于正常对照组[(264.00±69.22)μmol/L,P均0.05]。此外,血清D-D、hcy、血尿酸水平均与高血压分级呈正相关(r=0.423、0.807、0.291,P0.05～0.001)。结论:血清D-二聚体、同型半胱氨酸、血尿酸水平与老年高血压患者血压分级相关,随血压的升高呈现聚集现象。     

法尼酯衍生物X受体活化对肝星状细胞TIMP-1、TIMP-2及MMP-2表达的调节作用

目的研究法尼酯衍生物X受体（FXR）对肝星状细胞基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）和基质金属蛋白酶组织抑制因子-2（TIMP-2）及基质金属蛋白酶-2（MMP-2）表达的影响。方法应用FXR人工合成配体GW4064（0.01、0.1、1μmol/L）处理大鼠肝星状细胞株HSC-T6后,应用实时荧光定量PCR法检测FXR、TIMP-1、TIMP-2及MMP-2 mRNA表达变化,应用Western Blot法检测TIMP-1、TIMP-2及MMP-2蛋白表达的变化。结果 GW4064处理HSC-T6后,FXR mRNA相对表达量明显增加（P=0.000）,TIMP-1及TIMP-2 mRNA及蛋白相对表达量明显减少（P〈0.01）,GW4064浓度在1μmol/L时MMP-2mRNA及蛋白相对表达量则明显增加（P=0.000）。结论 GW4064通过激活FXR下调TIMP-1和TIMP-2表达及上调MMP-2的表达来调控细胞外基质的合成和降解的平衡,提示FXR配体可能可以治疗肝纤维化。