miR-10a-5p抑制人食管鳞状细胞癌的迁移和侵袭能力

目的探讨miR-10a在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达水平及临床意义。方法实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测48例ESCC患者肿瘤组织及瘤旁正常组织中miR-10a的表达水平,同时检测相同患者术前血清及25例健康志愿者血清中miR-10a的表达水平,并分析其与临床特征之间的关系。另外,探索miR-10a对ESCC细胞迁移及侵袭能力的影响。结果 miR-10a在食管癌组织及术前患者血清中的表达水平要低于瘤旁正常组织及健康志愿者,miR-10a在肿瘤组织中的表达水平与淋巴结转移、TNM分期密切相关(P<0.05),miR-10a在术前患者血清中的表达水平与淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化程度密切相关(P<0.05)。miR-10a的过表达可以抑制细胞增殖及迁移、侵袭能力。结论作为一种抑癌基因,miR-10a成为ESCC诊断及治疗的潜在靶点。     

LncRNA PTPRG-AS1通过靶向miR-5590-3p调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的 探讨LncRNA PTPRG-AS1对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制.方法 以正常乳腺上皮细胞MCF-10A为对照,qRT-PCR法检测乳腺癌细胞系(MCF-7、T47D和BT549)中LncRNA PTPRG-AS1和miR-5590-3p表达.分别转染si-LncRNA PTPRG-AS1、miR...     

LncRNA XIST通过miR-20a-5p/HMGA2轴调控乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的机制

目的 探讨LncRNA XIST对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响及机制。方法 选取正常乳腺上皮细胞MCF-10A及乳腺癌细胞系MCF-7、T47D和Bcap-37细胞,将不同物质转染至MCF-7、T47D细胞,设为空白组(无转染)、si-XIST组(转染si-XIST)、si-NC组(转染si-NC)、微小RNA-20a-5p(miR-20a-5p)组(转染miR-20a-5p mimics)及miR-NC组(转染miR-NC)。CCK-8检测细胞增殖能力;Transwell检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;TUNEL染色检测细胞凋亡。采用荧光素酶报告基因实验验证LncRNA XIST与miR-20a-5p及miR-20a-5p与高迁移率族蛋白A2(HMGA2)的靶向关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LncRNA XIST、miR-20a-5p的表达水平。采用Western blot检测HMGA2的表达水平。结果 与MCF-10A细胞比较,MCF-7、T47D和Bcap-37细胞中LncRNA XIST表达水平升高,miR-20a-5p表达水平降...     

miR-103a-3p对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

摘要：目的〓探讨miR-103a-3p在人肺癌组织中的表达及对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法：收集南通市肿瘤医院52例肺癌患者手术组织标本,qRT-PCR检测肺癌组织及癌旁组织中miR-103a-3p的表达;采用Lipofecta mineTM 3000 将miR-103a-3p mimic、mimic NC、miR-103a-3p inhibitor及inhibitor NC转染至A549细胞中,qRT-PCR检测miR-103a-3p的转染效率;CCK8实验检测其细胞增殖能力;流式细胞术检测其细胞凋亡能力;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力。 结果：miR-103a-3p在肺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织（p＜0.01）;qRT-PCR结果显示,转染miR-103a-3p mimic组细胞中miR-103a-3p的表达水平明显高于mimic NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力受到抑制;而转染miR-103a-3p inhibitor 组细胞中miR-103a-3p的表达水平低于inhibitor NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力增强;但细胞凋亡在4组中变化均不明显。 结论：miR-103a-3p在肺癌组织中低表达,miR-103a-3p能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-103a-3p对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨mi R-103a-3p在人肺癌组织中的表达及对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法收集南通市肿瘤医院52例肺癌患者手术组织标本,q RT-PCR检测肺癌组织及癌旁组织中mi R-103a-3p的表达;采用Lipofecta mineTM3000将mi R-103a-3p mimic、mimic NC、mi R-103a-3p inhibitor及inhibitor NC转染至A549细胞中,q RT-PCR检测mi R-103a-3p的转染效率;CCK8实验检测其细胞增殖能力;流式细胞术检测其细胞凋亡能力;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力。结果 mi R-103a-3p在肺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织(P0.01);q RT-PCR结果显示,转染mi R-103a-3p mimic组细胞中mi R-103a-3p的表达水平明显高于mimic NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力受到抑制;而转染mi R-103a-3p inhibitor组细胞中mi R-103a-3p的表达水平低于inhibitor NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力增强;但细胞凋亡在4组中变化均不明显。结论 mi R-103a-3p在肺癌组织中低表达,mi R-103a-3p能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-34a-3p通过靶基因YAP1调控黑色素瘤A375细胞的增殖和凋亡

目的探讨miR-34a-3p通过靶基因YAP1调控黑色素瘤A375细胞的增殖和凋亡。方法通过荧光定量PCR检测miR-34a-3p在黑色素瘤和正常皮肤组织中的表达,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-34a-3p的靶基因,黑色素瘤A375细胞转入miR-34a-3p模拟剂(miR-34a-3p mimics组),转入对照物miR-NC(对照组miR-NC),miR-34a-3p mimics组转染YAP1表达载体(miR-34a-3p mimics+YAP1组)。通过MTT和流式细胞术分别检测miR-34a-3p和YAP1对黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响,并通过Western blot检测miR-34a-3p对YAP1蛋白表达的影响。结果黑色素瘤组中的miR-34a-3p的表达量(0. 67±0. 21)低于正常皮肤组织(1. 35±0. 47),差异具有统计学意义(P 0. 05)。双荧光素酶报告基因显示,miR-34a-3p mimics与YAP1 3'UTR WT载体共转染组荧光强度(0. 39±0. 11)明显低于对照miR-NC与WT载体共转染组(0. 98±0. 35),差异具有统计学意义(P 0. 05)。而miR-34a-3p mimics与YAP1 3'UTR MUT载体共转染组(1. 31±0. 23)与其对照miR-NC与MUT载体共转染组(1. 22±0. 21)之间的荧光强度无显著差异(P 0. 05)。在培养24 h、48 h和72 h后,miR-34a-3p mimics组细胞细胞活力低于对照组miR-NC,差异具有统计学意义(P 0. 05); miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞活力高于miR-34a-3p mimics组,差异具有统计学意义(P 0. 05)。miR-34a-3p mimics组细胞的凋亡率高于对照组miR-NC,差异具有统计学意义(P 0. 05)。miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞凋亡率低于miR-34a-3p mimics组,差异具有统计学意义(P 0. 05)。与对照组miR-NC比,miR-34a-3p mimics组细胞的YAP1蛋白表达量显著降低,cleaved caspase 9表达水平显著升高,差异具有统计学意义(P 0. 05)。而与miR-34a-3p mimics组比较,miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞凋YAP1蛋白表达量显著增加,cleaved caspase 9表达水平显著降低,差异具有统计学意义(P 0. 05)。结论miR-34a-3p能够通过调控靶基因YAP1的表达,抑制黑色素瘤A375细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

miR-33b靶向HMGA2基因表达抑制食管癌细胞迁移的实验研究

目的研究miR-33b靶向高迁移率族蛋白A2(HMGA2)基因表达抑制食管癌细胞迁移的作用。方法培养食管癌Eca9706细胞,转染阴性对照(NC)模拟物、miR-33b模拟物、NC-siRNA、HMGA2-siRNA、pcDNA3.0空白质粒、pcDNA3.0-HMGA2质粒后,采用Transwell及划痕实验检测细胞的迁移,采用荧光定量PCR及western blot检测mi R-33b、HMGA2表达量,采用双荧光素酶报告基因验证miR-33b对HMGA2的靶向调节作用。结果转染miR-33b模拟物后mi R-33b的表达量明显增加,HMGA2的表达量明显减少,细胞的迁移明显受到抑制;转染HMGA2-siRNA后HMGA2的表达量明显减少,细胞的迁移明显受到抑制;转染pcDNA3.0-HMGA2质粒后HMGA2的表达量明显增加且miR-33b抑制细胞迁移的作用发生逆转;双荧光素酶报告基因证实miR-33b靶向HMGA2 m RNA的3’UTR。结论 miR-33b直接靶向HMGA2并抑制食管癌细胞的迁移。     

miR-155-5p通过靶向抑制Sirt1影响子痫前期发生的机制

目的 探讨子痫前期患者中microRNA-155-5p(miR-155-5p)通过靶向抑制沉默信息调节因子1(Sirt1)对子痫前期的发病机理的影响.方法 收集2018年1月至2018年12月期间,选择本院妇产科收治的子痫前期患者和正常孕妇胎盘样本各25例.采用RT-qPCR法检测胎盘中miR-155-5p和Sirt1...     

miR-497-5p靶向WWP1调控人瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和凋亡

目的探讨微小RNA-497-5p(miR-497-5p)是否通过靶向含有WW结构域的E3泛素蛋白连接酶1(WWP1)调控人瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和凋亡。方法实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)测定瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)和正常皮肤成纤维细胞(NFB)中miR-497-5p、WWP1 mRNA和蛋白表达。TargetScan预测miR-497-5p和WWP1的靶向关系,双荧光素酶报告和Western blot进一步验证。构建miR-497-5p过表达或抑制WWP1表达的细胞,Western blot检测WWP1、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。共转染miR-497-5p和pcDNA-WWP1,观察WWP1过表达对miR-497-5p过表达诱导的KFB细胞增殖和凋亡的影响。结果与NFB相比,KFB内miR-497-5p表达量明显下调(P0.05),WWP1mRNA和蛋白表达量显著上调(P0.05)。miR-497-5p靶向调控WWP1的表达。miR-497-5p过表达明显降低KFB 48h、72h的细胞活性、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达,提高细胞凋亡率、p21、Bax蛋白水平(P0.05),与抑制WWP1表达结果相同。WWP1过表达逆转了miR-497-5p过表达对KFB增殖、WWP1、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达的抑制作用,以及对细胞凋亡、p21、Bax蛋白表达的促进作用。结论过表达miR-497-5p通过靶向调控WWP1抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,并诱导其凋亡。     

MiR-325-3p通过靶向PBOV1抑制人肝癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:研究miR-325-3p抑制肝癌细胞增殖和转移的作用以及其作用靶点。方法:通过qRT-PCR方法研究肝癌组织以及肝癌细胞中miR-325-3p的表达情况。肝癌细胞HepG2转染miR-325-3p mimic后,通过CCK-8和Transwell法研究miR-325-3p对肝癌细胞HepG2增殖和转移的影响。通过双荧光素实验研究miR-325-3p的作用靶点。通过CCK-8和Transwell实验验证miR-325-3p与PBOV1相互作用调控HepG2细胞增殖与迁移。结果:肝癌组织和肝癌细胞中miR-325-3p表达量明显低于癌旁正常组织或正常肝细胞。miR-325-3p-mimic可显著抑制HepG2细胞增殖、侵袭和迁移。PBOV1是miR-325-3p的靶基因。与转染miR-325-3p-mimic+Lenti-Con比较,转染miR-325-3p-mimic+Lenti-PBOV1的HepG2细胞增殖、迁移与侵袭增强。结论:MiR-325-3p通过靶向结合PBOV1来抑制肝癌细胞增殖和转移。     

miR-1225-5p靶向调控S100A9抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨miR-1225-5p对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肝癌细胞系Huh7、MHCC97H和MHCCLM3及正常肝细胞系THLE-2中miR-1225-5p和S100钙结合蛋白A9(S100A9)mRNA表达水平。采用Western blot试验检测S100A9的表达水平。以Huh7细胞作为研究对象,分别转染miR-1225-5p模拟物(mimics)、S100A9的小干扰RNA至Huh7细胞,四甲基噻唑蓝染色法检测miR-1225-5p过表达或下调S100A9表达对Huh7细胞增殖的影响,Transwell检测miR-1225-5p过表达或下调S100A9表达对Huh7细胞迁移和侵袭的影响,Western blot试验检测miR-1225-5p过表达或下调S100A9表达对Huh7细胞细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、p27、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、MMP-14蛋白表达的影响。生物信息学软件预测S100A9的3′非翻译区中含有与miR-1225-5p互补的核苷酸序列,双荧光素酶报告基因试验验证miR-1225-5p与S100A9的靶向关系。结果与正常肝细胞THLE-2比较,肝癌细胞系Huh7、MHCC97H和MHCCLM3中miR-1225-5p表达水平均降低,差异均有统计学意义(P0.05),S100A9mRNA和S100A9表达水平均升高,差异均有统计学意义(P0.05)。过表达miR-1225-5p或下调S100A9表达均可抑制Huh7细胞增殖、迁移和侵袭,以及CyclinD1、MMP-2、MMP-9、MMP-14蛋白表达(P0.05),促进p21和p27蛋白的表达(P0.05)。miR-1225-5p在Huh7细胞中负调控S100A9表达,过表达S100A9逆转了miR-1225-5p过表达对Huh7细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-1225-5p过表达可能通过下调S100A9的表达抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

microRNA-138通过靶向作用于CCND1抑制结肠癌细胞增殖

目的探讨人结肠癌细胞SW620中细胞周期蛋白1(CCND1)的表达情况及其异常表达对细胞增殖的影响,阐述microRNA-138(miR-138)在SW620增殖中的可能机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)以及Western blot确定结肠癌组织和癌旁组织中CCND1的表达情况;随后采用qT-PCR检测结肠癌组织内miR-138的表达,并通过统计学分析miR-138与CCND1表达的相关性,培养SW620细胞并转染miR-138模拟物(mimics)后验证miR-138与CCND1的相关性,在SW620细胞内进一步转染miR-138模拟物后,Transwell和MTT检测不同处理组中细胞增殖和迁移能力的改变情况;继续转染CCND1 siRNA后,探索miR-138影响细胞生物学过程的可能机制。结果结肠癌组织中,与相应癌旁组织相比,CCND1表达显著升高,miR-138表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);转染miR-138mimics后,与空白对照组(未转染组)相比,细胞迁徙能力下降,同时增殖降低,差异有统计学意义(P<0.05);转染CCND1 siRNA后,与未转染组相比,miR-138表达变化无显著差异(P>0.05),而细胞侵袭能力和增殖能力较未转染组相比显著改变,差异有统计学意义(P<0.05)。结论结肠癌组织中CCND1异常升高可能与miR-138的表达降低有关,且miR-138影响SW620细胞的迁移和增殖能力可能是通过影响CCND1的表达实现的。     

IL-32α通过调控miR-216b-5p/AKR1B10轴抑制食管癌KYSE450细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨IL-32α对食管癌KYSE450细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制.方法 IL-32α诱导KYSE450细胞、IL-32α作用于转染miR-216b-5p mimics或si-AKR1B10的KYSE450细胞后,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,qRT-PCR检测miR-216...     

miR-130a-3p通过抑制CXCL12抑制鼻咽癌细胞增殖与侵袭

目的探讨miR-130a-3p对人鼻咽癌细胞CNE-1功能的影响及其可能的靶向基因。方法采用脂质体介导方法将miR-130a-3p模拟物(实验组)或对照模拟物(对照组)转染CNE-1细胞,分别用CCK-8法和Transwell试验检测细胞增殖侵袭和迁移能力变化,Western Blot检测趋化因子CXCL12蛋白表达。结果相较对照组,实验组CNE-1细胞的增殖,侵袭和迁移能力增强(P0.05),细胞中CXCL12蛋白表达水平明显下调(P0.05)。结论 miR-130a-3p可能通过调节CXCL12蛋白表达抑制人鼻咽癌细胞CNE-1细胞的增殖、侵袭和迁移。     

miR-199a-5p介导的lncRNA ANRIL通过调节HIF-1α促进多发性骨髓瘤的恶性增殖

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)ANRIL在多发性骨髓瘤(MM)中的生物学功能及其可能的作用机制。方法 采集MM患者与健康志愿者血浆,采用qRT-PCR检测lncRNA ANRIL、微小RNA(miR)-199a-5p和低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的相对表达水平。分析lncRNA ANRIL、miR-199a-5p和HIF-1α之间的靶向作用关系,进一步分析lncRNA ANRIL与miR-199a-5p表达及miR-199a-5p和HIF-1α表达的调控关系。敲减lncRNA ANRIL、miR-199a-5p和HIF-1α的mRNA水平后,或者上调lncRNA ANRIL、miR-199a-5p和HIF-1α表达后,采用CCK-8测定U266细胞增殖活力,流式细胞术测定细胞凋亡率,Western blot检测Bax、Bcl-2、caspase3和caspase9蛋白表达。结果 与健康志愿者相比,MM患者血浆lncRNA ANRIL和HIF-1α表达上调。miR-199a-5p在MM患者血浆中表达下调。此外,lncRNA ANRIL可与miR-199a-5p相互作用。...     

miR-203a-3p 靶向GLS1 调控HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的机制研究

目的　探究微小核糖核酸（microRNAs, miRNA, miR）-203a-3p 对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其潜在分子机制。方法　采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRTPCR）检测HCC 细胞、人正常肝细胞以及临床HCC 组织中miR-203a-3p 相对表达;采用细胞增殖实验、细胞划痕实验和Transwell 实验分别检测miR-203a-3p 对HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的影响;生物信息学网站预测miR-203a-3p 的潜在靶基因（GLS1）,双荧光素酶实验进行验证;探究HCC 细胞对谷氨酰胺的依赖性及抑制谷氨酰胺酶1(glutaminase 1,GLS1) 对HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的影响;蛋白免疫印迹（Western blot）实验检测Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β 和c-Myc 表达。结果　HCC 癌组织中miR-203a-3p（0.32±0.07）表达明显低于癌旁正常组织（1.02±0.03）,差异有统计学意义（t ＝ 41.105,P ＜ 0.001）;HCC 细胞HepG2（0.34±0.05）,HCCLM3（0.58±0.06）,Huh7（0.43±0.05）,Hep3B（0.29±0.04）中miR-203a-3p 相对表达水平明显低于人正常肝细胞LO2（1.01±0.02）中miR-203a-3p 表达,差异有统计学意义（F ＝ 119.080,P ＜ 0.001）。与Blank 组相比,miR-203a-3p 过表达组HCC细胞增殖（0.61±0.05 vs 1.24±0.06）, 迁移率（21.43%±2.01% vs 60.22%±3.14%） 及侵袭能力（76.54±13.56 vs221.06±16.54）均明显降低,差异有统计学意义（t ＝ 14.849,13.900,10.562,均P ＜ 0.001）。GLS1 是miR-203a-3p的靶基因,miR-203a-3p 靶向负调控GLS1 表达。HCC 细胞中GLS1 高表达呈现高酶活性,HCC 细胞对谷氨酰胺存在明显依赖性。GLS1 抑制组α-KG,谷氨酸水平均较Blank 组和siRNA-NC 组明显降低,差异有统计学意义（F ＝ 64.754,35.627,均P ＜ 0.001）。GLS1 抑制组细胞增殖（0.59±0.04）、迁移率（30.15%±1.02%）和侵袭能力（69.59±15.74）较Blank 组明显降低（1.29±0.07,59.67%±1.45%,202.14±13.52）,差异均有统计学意义（t ＝ 16.499,16.278,11.215,均P ＜ 0.001）。miR-203a-3p 过表达和GLS1 表达抑制明显抑制了Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β 和c-Myc 的表达,差异均有统计学意义（t ＝ 11.129 ～ 28.213,均P ＜ 0.001）。转染GLS1 可逆转miR-203a-3p 对HCC 细胞生物学行为及Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白表达的抑制作用。结论　HCC 中miR-203a-3p 显著低表达,其过表达能够抑制HCC 细胞的增殖、迁移和侵袭,可能与GLS1 调控谷氨酰胺代谢及miR-203a-3p 靶向GLS1调控Wnt/β-catenin 信号通路活性有关。     

血清miR-193a-3p,miR-337-5p和miR-483-5p在食管鳞状细胞癌诊断和预后中的应用

目的探讨miR-193a-3P,miR-337-5p和miR-483-5p在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)患者血清中的表达水平,评估其临床应用价值。方法收集2011年6月~2014年5月南京军区南京总医院及徐州市肿瘤医院住院的63例ESCC患者术前、术后血清及随访信息,同时收集63例年龄、性别相匹配的健康体检者血清作为正常对照。利用TaqMan低密度芯片方法筛选出ESCC患者中异常表达的miRNA;实时荧光定量PCR法验证芯片检测到的ESCC中明显上调的miR-193a-3p,miR-337-5P以及文献报道在口腔鳞状细胞癌(OSCC)表达上调的miR-483-5P;最后评价它们的诊断和预后价值。结果与健康对照相比,ESCC患者血清miR-193a-3p(0.459±0.339 vs 0.195±0.084),miR-337-5p(5.686±5.211 vs 2.476±0.808)和miR-483-5p(32.545±22.479 vs 19.509±10.601)的相对含量均显著升高(U值分别为591,605和1037,P值均0.0001),且在患者术后明显降低(P值均0.05);三种miRNA的ROC AUC分别为0.851,0.848和0.739,三种miRNA组合在一起的AUC为0.873,均明显大于癌胚抗原;术后高表达miR-483-5p的患者较之低表这的生存期短(P=0.022)。结论血清miR-193a-3p,miR-337-5p和miR-483-5p可作为ESCC患者诊断或预后评估的潜在分子标志物。