苦参素注射液联合顺铂对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡相关基因c-myc、bcl-2和bax表达的影响

目的探讨苦参素注射液(MI)联合顺铂(DDP)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡相关基因c-myc、bcl-2和bax表达的影响。方法分别采用MI、顺铂及MI联合顺铂干预SMMC-7721细胞。TUNEL法检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR法检测c-myc、bcl-2和bax mRNA表达,二步法免疫组化检测c-myc、bcl-2和bax蛋白表达。结果苦参素组、顺铂组和联合用药组细胞凋亡率显著上升,与对照组(不干预)比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),联合用药具有单纯相加或协同作用;联合用药组的细胞凋亡率显著增加,bax mRNA和蛋白表达显著升高,c-myc、bcl-2 mRNA和蛋白表达显著减少,与DDP单药组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论苦参素注射液联合顺铂具有单纯相加或协同诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡作用,其机制可能与bax基因表达上调和c-myc、bcl-2基因表达下调有关。     

真核起始因子2α的磷酸化抑制顺铂介导的肝癌细胞凋亡

目的 探讨真核起始因子2α (eIF2α)的磷酸化对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响. 方法 将肝癌细胞随机分为对照组和实验组,在用突变载体eIF2αS51A转染和小分子抑制剂salubrinal 改变实验组细胞在顺铂作用条件下eIF2α磷酸化的基础上,用流式细胞和Western blot分别检测细胞凋亡的百分率和细胞凋亡的分子标志物.多组间比较采用方差分析,两组间比较采用t检验. 结果 顺铂诱导肝癌细胞eIF2 α发生51位丝氨酸磷酸化.在突变载体转染条件下,顺铂(10μg/m1)诱导对照组和实验组SMMC-7721细胞在24 h凋亡的平均百分率分别为21.7％±1.5％和50.7％±2.1％(t=19.454,P＜0.05);顺铂诱导对照组和实验组HepG2细胞在24h凋亡的百分率分别为21.0％±1.0％和57.3％±2.1％ (t=27.250,P＜0.05).在抑制剂作用条件下,顺铂(15 μ g/ml)诱导对照组和实验组SMMC-7721细胞在36 h凋亡的百分率分别为50.3％±2.5％和16.3％±2.1％ (t=18.031,P＜0.05);顺铂诱导对照组和实验组HepG2细胞在36 h凋亡的百分率分别为42.0％±2.6％和12.0％±2.0％ (t=15.667,P＜0.05).同时,Western blot检测显示eIF2α的磷酸化抑制顺铂诱导的凋亡蛋白抗多聚ADP-核糖聚合酶的剪切. 结论 eIF2α的磷酸化在肝癌细胞抵抗顺铂介导的凋亡中起重要作用.     

大蒜素对卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP增殖的影响及机制

目的探讨大蒜素对卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP凋亡的影响及机制。方法将SKOV-3/DDP细胞随机分为四组,大蒜素组加入40μg/mL的大蒜素,顺铂组加入40μg/mL的顺铂,联合组加入大蒜素和顺铂各40μg/mL,对照组不干预。各组分别培养24、48 h。采用MTT法检测各组细胞增殖抑制率;RT-PCR法测定Bax、Bcl-2mRNA表达;Western blot法测定Bax、Bcl-2蛋白表达。结果顺铂组、大蒜素组、联合组各时点(24 h、48 h)增殖抑制率明显高于对照组,联合组明显高于大蒜素组、顺铂组,P均<0.05。顺铂组、大蒜素组、联合组各时点Bax mR-NA和蛋白水平明显高于对照组,大蒜素组、联合组Bcl-2 mRNA和蛋白水平明显低于对照组,P均<0.05;顺铂组48 h Bcl-2蛋白明显高于对照组,P<0.05;联合组各时点Bax mRNA和蛋白水平明显高于、Bcl-2 mRNA和蛋白水平明显低于对照组,P均<0.05。结论大蒜素诱导SKOV-3/DDP凋亡作用优于顺铂,两者联合具有协同作用,其机制可能为上调Bax表达和下调Bcl-2表达有关。     

HDAC1对结直肠癌细胞凋亡及侵袭能力的影响

目的研究组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)对结直肠癌细胞凋亡及侵袭能力的影响。方法结直肠癌细胞Caco2中转染HDAC1 siRNA和siRNA control记为HDAC1 siRNA和siRNA-NC,以不做转染的细胞为Control。qRT-PCR、Western blotting检测细胞HDAC1 mRNA、HDAC1蛋白水平,流式细胞术测定细胞凋亡,Transwell小室测定细胞侵袭和迁移,Western blotting测定基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)蛋白水平。结果 siRNA-NC细胞HDAC1 mRNA、HDAC1蛋白、细胞凋亡率、细胞侵袭、迁移数目和MMP-2、MMP-9、Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平与Control相比无明显变化(P0.05)。HDAC1 siRNA细胞HDAC1 mRNA、HDAC1蛋白明显降低,细胞凋亡率明显升高,细胞侵袭和迁移数目明显减少,细胞MMP-2、MMP-9蛋白水平表达下降,Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平升高,与Control相比,差异有统计学意义(P0.05)。结论 HDAC1表达下调诱导结直肠癌细胞凋亡,抑制结直肠癌细胞侵袭及迁移,其作用机制与下调MMP-2、MMP-9和促进Bax、Cleaved caspase-3表达有关。     

EZH2抑制剂联合顺铂对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨EZH2抑制剂UNC1999联合顺铂对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响。方法传代培养人肺癌A549细胞系,取生长良好的传代细胞分为对照组、联合用药组、顺铂组和UNC1999组。所有组均给予RPMI 1640培养液及10%的胎牛血清培养,对照组不加药液,联合用药组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L UNC1999药液及2.5、5、10、20、40μg/ml顺铂药液;顺铂组分别加入2.5、5、10、20、40μg/ml顺铂药液;UNC1999组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L的UNC1999药液;采用MTT比色法检测各组细胞增殖抑制率中IC50及联合指数(CI)。Western印迹法检测各组相关凋亡蛋白及细胞外调节蛋白激酶(ERK)及p-ERK的表达水平。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果与对照组相比,UNC1999组、顺铂组、联合用药组细胞增殖均受到不同程度抑制(P0.05)。各组细胞增殖抑制作用存在剂量-时间依赖关系,且UNC1999与顺铂存在协同作用。UNC1999组、顺铂组、联合用药组与对照组比较细胞凋亡差异显著(P0.05)。UNC1999组、顺铂组、联合用药组中凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达明显升高,p-ERK蛋白表达明显降低,联合用药组Bcl-2表达低于对照组(P0.05)。结论 EZH2特异性抑制剂UNC199可能通过抑制MAPK-ERK细胞通路起到抑制肺癌A549细胞增殖,促进其凋亡,与顺铂单药或联合均具有协同效应。     

miR-26b通过信号通路Wnt调控肝癌细胞分化、增殖、凋亡

目的探讨miR-26b对肝癌细胞分化增殖凋亡的影响及机制。方法以qRT-PCR方法检测肝癌细胞SMMC-7721、HuH-7、HepG2和正常肝细胞HL-7702中miR-26b的表达水平。在肝癌细胞中转染miR-26b mimic、mimic control,qRT-PCR测定转染后细胞中miR-26b水平。CCK-8测定细胞增殖情况,流式细胞术测定细胞凋亡情况,Western印迹测定细胞中β-连环蛋白(catenin)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、剪切型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平。结果 HL-7702细胞中miR-26b表达水平显著高于SMMC-7721、HuH-7、HepG2细胞(P0.05)。SMMC-7721细胞中miR-26b表达水平显著低于HuH-7、HepG2细胞(P0.05)。选用SMMC-7721细胞作为研究对象。转染miR-26b mimic后的细胞中miR-26b水平显著升高(P0.05)。高表达miR-26b后的肝癌细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著提高,细胞中促凋亡蛋白Cleaved Caspase-3、Bax水平也显著升高,细胞中Wnt关键蛋白β-catenin、CyclinD1水平显著降低(均P0.05)。结论 miR-26b诱导肝癌肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞增殖,作用机制与抑制Wnt信号通路有关。     

川芎嗪、顺铂对小细胞肺癌NCI-H446细胞株体外增殖的影响

目的观察川芎嗪、顺铂对小细胞肺癌NCI-H446细胞株体外增殖的影响。方法将在体外培养的NCI-H446细胞分为川芎嗪组、顺铂组及川芎嗪联合顺铂组,分别加入相应药物,同时设空白对照组。MTT法检测各组细胞光密度值,进行集落形成实验,Western blot检测各组细胞的Cyclin D1、p16蛋白。结果加入川芎嗪、顺铂及川芎嗪＋顺铂培养后细胞变圆、坏死,存活的细胞减少。MTT实验显示在体外培养72 h及96 h时,川芎嗪组的光密度值分别为1.031±0.034、1.129±0.049,顺铂组分别为0.986±0.028、1.018±0.038,川芎嗪联合顺铂组分别为0.854±0.036、0.923±0.041,与空白对照组的1.336±0.067、1.437±0.045相比,P均〈0.05;川芎嗪联合顺铂组与单药组相比,P均〈0.05。细胞集落形成率川芎嗪组为17.9%±3.7%、顺铂组为15.8%±3.5%、川芎嗪联合顺铂组为11.2%±2.9%,与空白对照组的23.8%±4.2%相比,P均〈0.05;川芎嗪联合顺铂组与单药组相比,P均〈0.05。用药72 h后与对照组相比,川芎嗪组、顺铂组以及川芎嗪联合顺铂组p16蛋白表达水平升高（P均〈0.05）,川芎嗪联合顺铂组又高于单药组（P均〈0.05）;三组Cyclin D1蛋白表达水平下降（P均〈0.05）,川芎嗪联合顺铂组又高于单药组（P均〈0.05）。结论川芎嗪、顺铂均可抑制NCI-H446的增殖,二者联合应用抑制作用更明显,同时可降低细胞Cyclin D1的表达水平、升高p16的表达水平。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合索拉非尼对肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂(HDACI)亚甲酰胺异羟肟酸(SAHA)联合索拉非尼(SRFN)对HepG2细胞增殖、凋亡的影响。方法用SAHA、SRFN或SAHA联合SRFN后,采用噻唑蓝(MTT)、流式细胞术和Western印迹等方法检测HepG2细胞的增殖、周期/凋亡相关蛋白表达,设未处理细胞为对照组。结果在浓度范围内,SAHA或SRFN分别以浓度和时间依赖性方式抑制HepG2细胞增殖,SAHA联合SRFN增强了抗增殖作用。SAHA、SRFN或SAHA联合SRFN治疗后,HepG2细胞周期G0/G1期分别比对照组增加87.16%、68.81%和109.17%。SAHA组和SRFN组HepG2细胞的凋亡率(19.71%和12.86%)显著高于对照组(4.64%),但显著低于SAHA联合SRFN组(31.22%)。SAHA、SRFN和SAHA联合SRFN均能显著上调p21的表达(P<0.05),下调Cyclin D1、Bcl-2的表达,而对Bax蛋白表达无明显影响。结论 SAHA或SRFN通过上调p21的表达,下调Cyclin D1、Bcl-2的表达,抑制HepG2细胞增殖,促进细胞凋亡。SAHA和SRFN之间存在协同和叠加效应。     

金雀异黄素诱导人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的 探讨金雀异黄素(Genistein,Gen)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡调控的作用.方法将Gen分为5.0、10.0、20.0 μg/ml 三个浓度处理组和对照组(未加金雀异黄素),作用SMMC-7721细胞不同时间后,透射电镜观察细胞超微结构变化;免疫组化法检测细胞内Bax、Bcl-2蛋白的表达水平.结果 与对照组比较,Gen处理组可使细胞核内异染色质呈块状凝集、胞质内线粒体肿胀空化,随着作用浓度增加,细胞核呈固缩状,核内异染色质趋边凝集,细胞质空化明显;免疫组化显示,随着Gen浓度增加,Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减弱,并呈剂量依赖性(P＜0.01).结论 金雀异黄素可以诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡.上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达可能是其诱导细胞凋亡的作用机制.     

NRF2/PI3K通路介导肝癌细胞SMMC-7721出现索拉非尼耐药的机制研究

目的探讨NRF2PI3K通路介导肝癌细胞SMMC-7721出现索拉非尼耐药的机制研究。方法建立肝癌细胞系SMMC-7721耐药细胞株SMMC-7721-SR,构建NRF2-siRNA转染肝癌细胞,并给与10μmol/L索拉非尼处理48 h。采用CCK-8法检测细胞活力,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测NRF2、Keap1、ARE、p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平。Real-Time PCR检测NRF2、Keap1、ARE、p-PI3K和p-Akt基因表达水平。结果索拉非尼明显抑制肝癌细胞SMMC-7721的存活率,促进肝癌细胞SMMC-7721凋亡发生(P0.05)。索拉非尼对SMMC-7721细胞促凋亡作用明显强于SMMC-7721-SR细胞(P0.05)。SMMC-7721-SR细胞中NRF2蛋白水平及mRNA表达明显高于SMMC-7721细胞,Keap1、ARE、PI3K和Akt蛋白水平及mRNA表达明显增加(P0.05)。索拉非尼明显上调SMMC-7721细胞中NRF2蛋白水平及mRNA表达(P0.05)。抑制NRF2 mRNA表达并给予索拉非尼处理后,SMMC-7721-SR细胞存活率明显降低,凋亡率显著升高,Keap1、ARE、p-PI3K和p-Akt蛋白水平及mRNA表达明显降低(P0.05)。结论索拉非尼激活NRF2后诱导肝癌细胞SMMC-7721出现耐药;抑制NRF2可逆转肝癌细胞SMMC-7721对索拉非尼的耐药情况。     

热疗联合旋毛虫肌幼虫排泄分泌蛋白对小细胞肺癌H446凋亡及S期阻滞的影响北大核心CSCD

目的观察热疗联合旋毛虫肌幼虫排泄分泌蛋白对小细胞肺癌H446凋亡及周期阻滞的影响。方法将对数生长期的H446细胞随机分为4组。对照组:H446细胞培养过程中不作任何处理;热处理组:将细胞消化后放置离心管中42℃水浴加热2 h;ESPs处理组:将提取的旋毛虫肌幼虫ESPs(0.30 mg/ml)与H446细胞共培养;热处理联合ESPs组:先经水浴处理后加入ESPs(0.30 mg/ml)与H446细胞共培养。采用流式细胞术(FCM)检测各组细胞凋亡率,分析细胞周期变化情况;采用Western blot法检测各组细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、周期蛋白Cyclin D1、p27的表达情况。结果流式细胞术(FCM)检测显示,对照组细胞总凋亡率为11.39%,ESPs处理组细胞总凋亡率为15.94%,热处理组细胞总凋亡率为22.35%,热疗联合ESPs组细胞总凋亡率为29.32%。组间细胞凋亡率差异有统计学意义(P<0.01)。对照组S期细胞所占比例为27.01%, ESPs处理组S期细胞占39.83%,热处理组S期细胞占51.54%,热疗联合ESPs组S期细胞占51.83%。ESPs处理组、热处理组、热疗联合ESPs组S期细胞所占比例与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。Western blot检测热处理联合ESPs组与对照组比较Bax、Cyclin D1、p27蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调。结论热疗联合旋毛虫肌幼虫排泄分泌蛋白可诱导小细胞肺癌H446凋亡,存在S期细胞阻滞,可能与Bax、Cyclin D1、p27蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调有关。     

美洲大蠊提取物诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及作用机制

目的 探讨美洲大蠊提取物对人肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡的影响并探讨其相关机制.方法 取对数生长期状态良好的SMMC-7721细胞分为三组,观察组常规培养24h后加入美洲大蠊提取物,使终浓度分别为300、100、33.3 μg/mL,顺铂组加入顺铂20 μg/mL作用细胞48 h,对照组不做任何处理.采用MTT比色法检测细胞增殖抑制率;采用流式细胞仪分析细胞凋亡率;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位变化;分光光度法检测Caspase-3活性变化.结果 观察组和顺铂组细胞抑制率明显高于对照组,IC50为100 μg/mL,并呈现时间一剂量依赖关系(P＜0.05);观察组和顺铂组细胞凋亡率明显高于对照组,呈现剂量依赖性(P＜0.05).凋亡过程中线粒体膜电位下降,Caspase-3活性升高(P＜0.05).结论 美洲大蠊提取物具有抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖并诱导其凋亡作用,线粒体途径可能是其诱导肝癌细胞凋亡的主要机制之一.     

宁夏密点麻蜥不同部位干预顺铂耐药胃癌模型裸鼠的效应及机制研究

目的:通过建立人胃癌耐药细胞株MKN-45/顺铂皮下瘤裸鼠模型，探讨宁夏密点麻蜥身体不同部位联合顺铂对顺铂耐药胃癌模型裸鼠的干预作用。方法:将36只BALB/c裸鼠均注射MKN-45/顺铂单细胞悬液于右前腋侧皮下制备胃癌裸鼠顺铂耐药模型。造模成功后随机分为模型组、顺铂组、宁夏密点麻蜥头部+顺铂组、宁夏密点麻蜥四肢+顺铂组、宁夏密点麻蜥躯干+顺铂组、宁夏密点麻蜥尾部+顺铂组共6组。除模型组外，余组均给予相应药物治疗28 d。测定各组裸鼠肿瘤体积大小、肿瘤重量及抑瘤率；分别采用免疫印迹法及免疫组织化学法检测各组裸鼠瘤组织中耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药蛋白1(MRP1)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平；采用TUNEL法检测各组裸鼠瘤组织中耐药细胞凋亡情况。结果:与模型组比较，各给药组肿瘤重量均减轻(P<0.05),各给药组中P-gp、MRP1、Bcl-2的表达均显著降低(P<0.05),Bax的表达均显著增高(P<0.05),耐药细胞凋亡率均显著增高(P<0.05);与顺铂组比较，宁夏密点麻蜥不同部位+顺铂各组肿...     

shRNA干扰GRP78基因对肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响

目的:研究shRNA干扰GRP78基因对肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响。方法:将GRP78特异性shRNA质粒载体Pla-anti-GRP78转染SMMC-7721,采用流式细胞术(FCM)检测转染效率、分析细胞周期分布和凋亡,从蛋白和mRNA水平检测干扰GRP78效果,MTT法检测干扰GRP78对SMMC-7721增殖的影响。结果:Pla-antiGRP78转染SMMC-7721细胞48h后,GRP78表达下降,空白对照组GRP78 mRNA的表达量为1,无关对照组组为0.95,而Pla-anti-GRP78组为0.25(P0.05);转染Pla-anti-GRP78的SMMC-7721细胞G2期阻滞(55.2%,P0.05);空白对照组凋亡率为6.6%,无关对照组为8.1%,而Pla-anti-GRP78组高达58.2%(P0.05)。结论:shRNA干扰GRP78表达抑制SMMC-7721的增殖,并诱导其凋亡。     

谷氨酰胺体外抑制脂多糖诱导的NCM460细胞线粒体途径凋亡作用的研究

目的探讨谷氨酰胺对小鼠NCM460细胞线粒体凋亡的影响及其机制。方法对数生长期NCM460细胞分为正常组、脂多糖组、谷氨酰胺组,脂多糖组予以加5μg/ml的脂多糖,谷氨酰胺组予以加5μg/ml的脂多糖和12 mmol/L的谷氨酰胺。CO_2培养箱培养24 h后,收集各组细胞,采用Western blotting检测各组细胞Bcl2、Bax及Cyt-c蛋白的表达量,采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况。结果 Western blotting检测脂多糖组细胞中Bax、Cyt-c蛋白的表达均明显升高(P均0.05),Bcl-2蛋白的表达较正常组低,Bcl-2/Bax值较正常组下降;而谷氨酰胺组肠组织中Bax、Cyt-c蛋白的表达均弱于脂多糖组(P均0.05),Bcl-2蛋白的表达较脂多糖组高(P0.05),Bcl-2/Bax值较脂多糖组升高。流式细胞仪检测三组细胞的凋亡率,显示脂多糖组细胞出现大量凋亡,其早期凋亡率及晚期凋亡率均明显高于正常组,差异有统计学意义(P0.05);谷氨酰胺组细胞的凋亡较脂多糖组减轻,其早期凋亡率及晚期凋亡率均低于脂多糖组,差异有统计学意义(P0.05)。结论谷氨酰胺能体外抑制脂多糖诱导的NCM460细胞凋亡,可能是通过抑制NCM460细胞线粒体凋亡途径来实现其保护作用。     

汉防己甲素联合顺铂对 NCI-H446细胞的影响及相关机制分析

目的：研究汉防己甲素(tetrandrine,TET)联合顺铂(cisplatin,DDP)对人小细胞肺癌细胞株 NCI-H446体外抗肿瘤效果,探讨 TET 增强 NCI-H446细胞对 DDP 敏感性的可能机制。方法体外培养人小细胞肺癌株 NCI-H446;药物作用48 h 后,采用 CCK-8法测定各组细胞活力;Edu 染色观察各组细胞增殖情况;Hoechst 染色检测各组细胞凋亡情况;Western blot 检测各组磷酸化Akt、Bax、Bcl-2、cleaved-caspase-3、LC3等蛋白表达水平变化。结果低浓度的 TET 与 DDP 联合后可有效抑制 NCI-H446细胞株的增殖,诱导其凋亡;联合组半数抑制浓度较单药组显著降低;联合组磷酸化 Akt 表达显著下降,Bax、cleaved-caspase-3表达显著提高,抗凋亡蛋白 Bcl-2表达下降;自噬相关蛋白 LC3表达明显上调。结论低浓度 TET 与顺铂具有协同效应,其机制可能是通过上调促凋亡蛋白 Bax,下调抗凋亡蛋白 Bcl-2来诱导细胞凋亡;并且自噬可能在其中发挥重要作用。     

胡桃醌对胃癌细胞耐药性及细胞中ANXA2、ERCC1表达和AKT/mTOR信号通路的影响

目的研究胡桃醌对胃癌细胞顺铂耐药性及细胞中膜联蛋白A2(ANXA2)和切除修复交叉互补基因1(ERCC1)表达,及对AKT/mTOR信号通路的影响。方法将BGC-823/DDP细胞株随机分为5组:对照组、胡桃醌组、顺铂组、胡桃醌联合顺铂组、LY294002(AKT抑制剂)联合顺铂组。采用MTT法和流式细胞术检测细胞活性和凋亡率,Western blotting检测细胞中相关蛋白表达。结果与对照组比较,顺铂组细胞凋亡率及细胞中Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平升高(P<0.05),而ANXA2、ERCC1、p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平降低(P<0.05);与顺铂组比较,胡桃醌不同浓度组细胞中P-gp、MRP1蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞增殖抑制率、细胞凋亡率及细胞中Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平升高(P<0.05),ANXA2、ERCC1、p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平降低(P<0.05);与顺铂组比较,LY294002处理后,细胞增殖抑制率和凋亡率升高(P<0.05)。结论胡桃醌增强胃癌细胞对顺铂的敏感性,抑制细胞中ANXA2和ERCC1表达,抑制AKT/mTOR信号通路。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂ACY1215对急性肝衰竭小鼠肝脏炎症反应的影响

目的观察D-氨基半乳糖/脂多糖(D-Gal N/LPS)诱导的急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)模型小鼠在组蛋白去乙酰化酶抑制剂ACY1215的作用下,炎症相关指标降钙素原(procalcitonin,PCT)、高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)、微小RNA-141(microRNA-141,miR-141)的表达情况。方法将18只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组(n=6)、ALF模型组(n=6)、ACY1215干预组(n=6),ALF模型组和ACY1215干预组采用D-Gal N/LPS联合诱导ALF小鼠模型,其中ACY1215干预组在造模前2 h腹腔注射ACY1215。24 h后检测各组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和总胆红素(TBIL)水平,取肝组织进行HE染色观察肝组织结构变化并检测肝组织PCT、HMGB1、miR-141的表达情况。结果与ALF模型组相比,ACY1215干预组小鼠肝组织结构破坏程度明显减轻,炎性细胞浸润明显减少;血清AST、ALT、TBIL水平显著下降,肝组织HMGB1及PCT表达显著降低,miR-141表达显著升高。结论 ACY1215对ALF小鼠肝组织具有保护作用,可能与其能减轻肝组织炎症反应有关。     

YB-1基因沉默对肝癌细胞化学治疗敏感性的影响及可能机制

目的探讨沉默YB-1基因对肝癌细胞化学治疗敏感性的影响及可能机制。方法根据YB-1靶点序列设计YB-1基因siRNA干扰序列,与Eco RⅠ和Bam HⅠ双酶切后的线性化pLKD-CMV-GPR-U6慢病毒载体连接及转化形成重组慢病毒;参照此方法设计并构建阴性对照重组慢病毒,并将其转染肝癌细胞SMMC-7721,分别命名为YB-1-siRNA组和NC-siRNA组,设置空白对照组(未经任何处理的肝癌细胞SMMC-7721),分别加入含顺铂(1μg/ml)和多柔比星(1μg/ml)的现配培养基。采用实时荧光定量PCR检测各组药物处理前后YB-1 mRNA表达水平;采用MTT法检测药物处理前后各组细胞的增殖情况;采用流式细胞术检测药物处理前后各组细胞的凋亡情况,采用Western blot检测各组药物处理后PI3K、AKT和GSK-3β蛋白的表达。结果处理前后,YB-1-siRNA组、NC-siRNA组和空白对照组间YB-1 mRNA表达水平及细胞活力差异均有统计学意义(P 0.05),与处理前比较,处理后YB-1-siRNA组、NC-siRNA组和空白对照组YB-1 mRNA表达水平和细胞活力均显著下降(P 0.05)。处理前后,YB-1-siRNA组、NC-siRNA组和空白对照组间细胞凋亡率的差异有统计学意义(P 0.05);与处理前比较,处理后各组细胞凋亡率均显著升高(P 0.05)。经药物处理后,3组间PI3K、AKT和GSK-3β蛋白表达差异均有统计学意义(P 0.05)。结论靶向敲除YB-1基因联合化学治疗可显著增强抑制肝癌细胞增殖及促进其凋亡的能力,可能与PI3K/AKT/GSK3β信号转导通路有关。     

益气活血软坚解毒方对荷H_(22)615小鼠肝癌细胞凋亡相关基因Fas、FasL、Bcl-2、Bax、P~(53)、NF-κB表达的影响

目的:研究益气活血软坚解毒(YHRJ)方对荷H22615小鼠肝癌细胞凋亡调控基因Fas、FasL、Bcl-2、Bax、P53、NF-κB表达的影响。方法:将动物分组为NS组(正常对照组)、DDP组(顺铂组)、YHRJ等效剂量组、YHRJ高剂量组、YHRJ等效剂量+DDP组、YHRJ高剂量+DDP组,应用免疫组化、原位杂交、RT-PCR等方法对用药后的荷H22615小鼠肝癌细胞凋亡主要相关基因Fas、FasL、Bcl-2、Bax、P53、NF-κB蛋白与mRNA表达进行检测。结果:免疫组化检测结果显示:与NS组比较,各加药组均能增高Fas、Bax基因蛋白表达(均P0.01),均能降低NF-κB蛋白表达(P0.05或P0.01)及降低突变型P53基因蛋白表达(P0.01)。与NS组比较,YHRJ等效剂量+DDP组能明显降低FasL基因蛋白表达(P0.01)。与DDP组比较,中药组及中药含DDP组能明显降低FasL及突变型P53基因蛋白表达(均P0.01)。与DDP组比较,YHRJ等效剂量组、YHRJ高剂量组、YHRJ高剂量+DDP组能降低NF-κB蛋白表达(均P0.01)。与DDP组比较,YHRJ高剂量组及中药含DDP组明显增高Bax基因蛋白表达(均P0.01)。与NS组与DDP组比较,中药组及中药含DDP组能明显降低Bcl-2基因蛋白表达(P0.05或P0.01)。原位杂交检测NF-κB mRNA表达结果:与NS组及DDP组比较,YHRJ等效剂量组及中药含DDP组明显降低NF-κB mRNA表达(均P0.01)。RT-PCR检测Bax、Bcl-2 mRNA表达结果:与NS组及DDP组比较,YHRJ等效剂量组能明显增高Bax基因mRNA表达(均P0.001)。与NS组比较,各加药组能明显降低Bcl-2 mRNA表达(P0.05或P0.001);与DDP组比较,YHRJ高剂量组能明显降低Bcl-2 mRNA表达(P=0.01)。结论:YHRJ方能够提高荷H22615小鼠肝癌细胞凋亡促进基因Fas、Bax表达,减低细胞凋亡抑制基因FasL、Bcl-2表达,降低细胞凋亡保护基因突变型P53蛋白与NF-κB基因表达,这些作用是诱导肝癌细胞凋亡的分子基础。