血小板无力症患者血小板GPⅡbⅢa受体亲和力的改变及临床意义

目的探讨血小板无力症(Glanzmann's Thrombasthenia,GT)患者血小板聚集功能异常的可能机制.方法采用Westem印迹分别检测正常人、GT患者及其父母血小板CPⅡbⅢa的含量,流式细胞术分析血小板膜CPⅢa的表达和血小板结合活化型单抗PAC-1的能力.结果与正常人相比,GT患者GPⅡbⅢa明显减少,其血小板结合PAC-1的能力亦明显低下.结论GPⅡbⅢa激活受阻可能为部分GT患者血小板聚集功能障碍的分子基础.     

血小板无力症患者其血小板GPⅡb／Ⅲa受体检测及其机制的探讨

目的：探讨血小板无力症（Glanzmann’s thrombasthenia，GT）患者血小板聚集功能异常的可能机制。方法：采用流式细胞仪检测血小板糖蛋白Ⅱb（GPⅡb，CD41）／Ⅲa（GPⅢa，CD61）含量，并通过血小板聚集试验，血小板黏附试验和血块收缩试验对血小板功能进行检测。结果：GT患者血小板糖蛋白Ⅱb（GPⅡb，CD41）／Ⅲa（GPⅢa，CD61）含量明显低于正常，血小板聚集试验，血小板黏附试验和血块收缩试验明显较正常低下，出血时间较正常明显延长。结论：血小板GPⅡb／Ⅲa量的减少及功能障碍是导致血小板无力的原因，其机制可能与相关基因突变有关。     

血小板膜糖蛋白αⅡb P126H突变导致血小板无力症的分子机制

目的 探讨血小板膜糖蛋白aⅡb P126H突变导致血小板无力症的分子发病机制.方法 采用PCR定点突变的方法构建aⅡb Pl26H真核表达载体,测序正确后用脂质体将其与表达β3亚基的真核表达质粒PCDM8Ⅲa共转染293T和CHO细胞.采用流式细胞仪检测转染细胞膜上aⅡ b的表达,用Western印迹法鉴定aⅡb P126H突变体在转染细胞内的总体表达,采用免疫荧光共聚焦显微镜确定aⅡb P126H突变体的细胞内定位.结果 转染突变体的细胞膜表面仅可见痕量表达的aⅡb,突变aⅡb P126H与β3共表达后,可检测到前体aⅡb,但未检测出成熟aⅡb.突变aⅡb β3蛋白主要分布于内质网,仅有极少量进入高尔基体中.结论 aⅡb P126H突变阻碍了pro-aⅡbβ3复合物由内质网向高尔基体的转运,导致细胞内滞留,从而影响了aⅡb β3在细胞表面的表达,是导致血小板表面缺乏aⅡb β3复合物,产生血小板无力症的分子机制.     

血小板无力症与GPⅢa基因表达

血小板无力症是遗传性出血性疾病，因血小板膜糖蛋白（ＧＰ）Ⅲｂ／Ⅲａ基因异常造成ＧＰⅡｂ／Ⅲａ缺失，而使血小板缺乏凝聚能力。应用逆转录ＰＣＲ（ＲＴ—ＰＣＲ）技术，对一例血小板无力症患者进行基因表达分析表明６ＰⅢａ的翻译水平异常；提示ＧＰⅢａｍＲＮＡ未被翻译表达是ＧＰⅢａ缺失的原因之一。     

血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa及其受体拮抗剂与冠心病

血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa是血小板膜上的一种糖蛋白受体,在凝血过程中的血小板黏附和聚集中起关键作用,血小板激活导致GPⅡb/Ⅲa构型发生变化,继而使GPⅡb/Ⅲa受体与配体纤维蛋白原的结合加强,纤维蛋白原在相邻血小板分子间形成桥梁,导致血小板聚集的加速。GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂正是基于这一原理应用于冠心病的治疗中,临床实验已证实其在PTCA术后、不稳定性心绞痛、急性心肌梗死具有良好的疗效,研究GPⅡb/Ⅲa及其受体拮抗剂具有重要意义。因而,本文对GPⅡb/Ⅲa及其受体拮抗剂与冠心病作一简要阐述。     

5个遗传性血小板无力症家系的临床表型分析及发病机制研究

目的对5个遗传性血小板无力症（GT）家系进行临床特征分析及基因突变检测,以探索其发病机制。方法通过出血病史、家族史调查,止血和凝血指标检测,血小板聚集实验和流式细胞术检测血小板表面整合素αⅡbβ3表达情况明确5个GT家系的诊断,并用PCR扩增结合直接测序法分析先证者及家系成员的整合素αⅡb基因和β3基因的所有外显子及其侧翼序列,突变位点经检索SNP数据库及查找相关文献排除多态性可能。结果 5个GT家系先证者血小板计数基本正常,凝血象正常,血小板对诱导剂二磷酸腺苷（ADP）反应低下,而对诱导剂瑞斯托霉素反应基本正常;流式细胞术检测结果显示：先证者一为变异型GT,先证者二为Ⅱ型GT,其余3个先证者均为Ⅰ型GT。基因分析共发现1例杂合突变及4例纯合突变：发生在αⅡb基因的4种突变分别为1652C〉T（551Arg〉Gln）、2671C〉T（891Gln〉stop）、2870C〉T（957Ser〉Leu）、2893-2897insC,发生在β3基因的2种突变分别为1199G〉A（400Cys〉Tyr）、1574G〉A（525Gly〉Asp）。结论β3 1199G〉A纯合突变是家系一先证者发生GT的原因;β3 1574G〉A纯合突变是家系二先证者发生GT的原因;αⅡb 1652C〉T纯合突变是家系三先证者发生GT的原因;αⅡb 2671C〉T（891Gln〉stop）纯合突变是家系四先证者发生GT的原因;αⅡb 2870C〉T（957Ser〉Leu）、2893-2897insC双重杂合突是家系五先证者发生GT的原因。其中2671C〉T（891Gln〉stop）、2870C〉T（957Ser〉Leu）和2893-2897insC这3种突变为首次报道发生于αⅡb基因的突变,1574G〉A（525 Gly〉Asp）为首次报道发生于β3基因的突变。     

GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂RGDS对血小板聚集和胞浆游离钙的影响

[目的]探讨血小板GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂RGDS对血小板聚集和血小板[Ca2+]i的影响.[方法]比浊法测定PAG;采用Fura-3/AM荧光探针标记血小板胞浆钙离子,使用共聚焦显微镜观察单个血小板荧光强度的变化,计算机图像系统分析血小板[Ca2+]i的变化.[结果]凝血酶(0.03 U/mL)为激动剂时,血小板PAG(M)为(78.2±12.4)%.在所取的62.5～1 000μmol/L RGDS内的5种浓度下,RGDS可呈浓度依赖性地抑制凝血酶诱导的PAG(M).正常人静息血小板[Ca2+]i荧光强度值为376.1±70.5;凝血酶(0.03 U/mL)激动的血小板[Ca2+]i荧光强度值升高为977.9±108.8;GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂RGDS(250 μmol/L)对静息血小板的[Ca2+]i荧光强度值无抑制作用;GPⅡ b/Ⅲa受体拮抗剂RGDS(250μmol/L)作用于血小板后,凝血酶(0.03 U/mL)激动的血小板[Ca2+]i荧光强度值升高受到抑制,抑制率为(9.37±7.5)%.[结论]凝血酶(0.03 U/mL)可以引起血小板的聚集和血小板[Ca2+]i的升高.GP Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂RGDS可以抑制凝血酶(0.03 U/mL)引起的血小板聚集和[Ca2+]i的升高.     

血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂致血小板减少症

血小板糖蛋白GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂目前被越来越多地应用在急性冠脉综合征的药物非手术治疗和冠状动脉介入手术中,但该药可以引起严重的血小板减少,应当引起临床医生高度重视。本文综述了国内外关于糖蛋白GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂导致的血小板减少的发生率、发生机制、临床症状以及相应的处理原则。     

血小板GPⅡb/Ⅲa受体及其拮抗剂与冠状动脉疾病

血小板在动脉粥样硬化性心血管疾病的血栓并发症及急性冠状动脉综合征的发生中起重要作用。血小板的主要作用是在血管损伤部位发生粘附 ,聚集而形成血栓。血小板表面的膜糖蛋白 (GP)Ⅱb Ⅲa受体与纤维蛋白原连接 ,并在血小板之间交叉连接 ,完成血小板聚集的最后一步。由于此受体是血小板聚集、冠脉血栓形成的最后途径 ,因此抗血小板治疗最有前途的是血小板GPⅡb Ⅲa受体拮抗剂。本文就血小板GPⅡb Ⅲa受体及其拮抗剂在心血管疾病中的应用做一综述。1　血小板GPⅡb Ⅲa复合物1.1　血小板GPⅡb Ⅲa复合物的分子结构[1,2 ] 　血小板GPⅡb …     

GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂在急性冠状动脉综合征中的应用

血小板在动脉粥样硬 化性心血管病的血栓并发症及急性冠状动脉综合征的发生中起了重要作用。血小板的主要作用是在血管损伤部位发生粘附、聚集而形成血栓。血小板膜表面的糖蛋白(GP)Ⅱb/Ⅲa受体与纤维蛋白原连接,并在血小板之间交叉连接完成血小板聚集的最后一步。抗血小板治疗方面最有前途的是血小板GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂。该药的临床试验结果表明,GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂能明显减少接受介入治疗的高危或低危病人的死亡、AMI及血管重建的危险。     

宫内胎肝细胞移植形成血小板GPⅡb Bak a/b嵌合体的研究

目的　探讨宫内胎肝细胞移植是否形成人工血小板杂合子嵌合体 ,评估其在治疗血小板无力症的临床应用前景。方法　选择血小板膜GPⅡbBaka/b(GPⅡb异亮氨酸 84 3丝氨酸多态性 )作为遗传标记 ,采用等位基因特异引物PCR和FOKⅠ限制性内切酶消化技术从 4 2名引产妇筛选一例纯合子GPⅡbBaka/a作为供者 ,一例纯合子GPⅡbBakb/b作为受者 ,制备供者胎肝细胞 ,取 4ml(2 2× 10 5细胞 )在B超引导下通过脐静脉穿刺输给受者。结果　移植后 2 1天 ,用PCR FOKⅠ消化技术检测引产后受者外周血DNA和血小板RNA ,发现已形成Baka/b嵌合体。结论　我们认为宫内胎肝细胞移植可能提供一种治疗血小板无力症和其他遗传性疾病的方法。     

噬菌体表面展示技术筛选抗血小板GPⅡb/Ⅲa复合物单链抗体

目的 用噬菌体表面展示技术，直接从抗血小板表面蛋白全套单链抗体噬菌体展示文库中筛选能与糖蛋白(GP)Ⅱb/Ⅲa复合物高亲合力结合的单链抗体克隆，为开发有自主知识产权的抗栓药物奠定基础。方法 从活化血小板免疫的小鼠脾淋巴细胞中提取总RNA，反转录成cDNA后，用抗体可变区混合引物扩增全套轻、重链可变区基因，经重叠延伸反应，装配成单链抗体(ScFv)基因，将其克隆到噬菌体载体pHENl中，构建单链抗体噬菌体抗体库。对抗体库进行亲合筛选后，ELISA法鉴定抗GPⅡb/Ⅲa复合物单链抗体。结果 经过4轮“吸附——竞争性洗脱——扩增”的富集过程，Phage—ELISA得到一个ELISA活性较高的能与GPⅡb/Ⅲa结合的克隆。序列测定符合抗体可变区结构特点。结论 成功构建了全套抗血小板表面蛋白单链抗体噬菌体展示文库，并筛选得到具有GPⅡb/Ⅲa结合能力的单链抗体基因。     

抑制血小板聚集功能的抗血小板膜糖蛋白GPⅡbⅢa自身抗体的筛选

目的：筛选出血浆中含有抑制血小板聚集的血小板膜糖蛋白GPⅡbⅢa自身抗体的血小板减少性紫癜(ITP)患者，为人源化抗GPⅡbⅢa基因工程抗体的研制做准备。方法：用改良MAIPA法检测24例慢性ITP患者血浆有无血小板膜糖蛋白GPⅡbⅢa自身抗体，用血小板聚集试验研究抗GPⅡbⅢa自身抗体对血小板聚集的影响。结果：24例慢性ITP患者中10例(41．7％)血浆中抗GPⅡbⅢa自身抗体阳性，2例明显抑制血小板聚集功能。结论：少数抗GPⅡbⅢa自身抗体可抑制血小板聚集功能。     

血小板GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂在冠心病介入治疗中的临床应用现状

近年来经皮冠状动脉内介入治疗（PCI）术已广泛开展,明显降低了冠心病患者的再梗死率和病死率,改善了预后,并显示出较溶栓治疗更大的优越性。但随之而来的一些不良后果,如靶血管的突发闭塞及再狭窄成为亟待解决的问题。血栓形成是这一问题的罪魁祸首,其中血小板在血栓形成过程中起着非常重要的作用。     

糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂在抗血小板治疗中的应用及其研究进展

近年来,抗血小板药物在基础研究及临床应用方面取得了一些新的进展,尤其在心脑血管疾病的预防和治疗中疗效显著.新型的抗血小板药物正在不断进入临床试用,特别是抗血小板膜糖蛋白药物在广泛深入的研究之中.本文对近年来糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂在抗血小板治疗中的应用及其研究进展进行了综述.     

血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa的P1A基因多态性与心肌梗死关系的研究

目的对血小板糖蛋白Ⅱb／Ⅲa的P1^A基因多态性与心肌梗死(AMI)的关系进行探讨。方法运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR—RFLP)技术检测64名AMI患者及47名健康对照者GPⅡb／Ⅲa的P1^A的基因多态性。结果所有患者和正常对照者均为P1^A1／A1基因型。P1^A2基因型的检出率为0％。结论血小板糖蛋白Ⅱb／Ⅲa的P1^A的基因多态性与中国人群AMI危险度的增加无关。在中国汉族人群中P1^A2基因型分布是极低的,此基因型分布存在东西方差异。     

子痫前期孕妇孕中期GPⅡb/Ⅲa受体的表达及其对母婴结局的影响

目的 探讨子痫前期(PE)孕中期孕妇血清GPⅡb/Ⅲa受体的表达水平变化及对母婴预后的影响.方法 选取2016年9月至2018年9月于本院住院分娩的PE患者70例为PE组,对照组为50例正常妊娠妇女.PE组以GPⅡb/Ⅲa受体表达水平中位数为界,分为高GPⅡb/Ⅲa组和低GPⅡb/Ⅲa组各35例.采用流式细胞仪检测血清...     

阵发性非瓣膜病心房颤动患者血小板P选择素、GPⅡb/Ⅲa表达及纤溶活性的研究

目的　探讨阵发性非瓣膜病心房颤动患者血小板P选择素 ,GPⅡb/Ⅲa表达及纤溶活性的变化。方法　测定 41例阵发性非瓣膜病心房颤动患者血小板P选择素 ,GPⅡb/Ⅲa表达及全套纤溶指标 ,并与 2 7例正常人对比。结果　阵发性非瓣膜病房颤患者血小板P选择素表达明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,差异有显著意义 ,且GPⅡb/Ⅲa表达亦有增高趋势 ,t -PA活性 ,血浆PIg明显下降 ,而PAL -1活性增高。 结论　阵发性非瓣膜病房颤患者已存在血栓前状态且有明显的低纤溶活性