生存素反义寡核苷酸诱导HL-60细胞凋亡的作用探讨

目的:探讨特异性生存素(survivin)反义寡核苷酸(ASODN)对急性早幼粒细胞系HL-60细胞增殖、凋亡的影响。方法:人工合成survivin硫代ASODN,通过脂质体转染HL-60细胞后,采用MTT法检测细胞增殖抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态学变化,原位末端标记(Tunel)法检测细胞凋亡指数(AI),RT-PCR半定量测定细胞中survivinmRNA的表达。结果:(1)survivinASODN各浓度组对HL-60细胞的增殖均有抑制作用,且呈时间-剂量依赖性。(2)survivinASODN处理组HL-60细胞的凋亡率与空白对照组、正义对照组和空转染组相比,差异有显著性(P<0.01)。(3)survivinASODN处理组HL-60细胞的survivinmRNA表达水平明显下调。结论:survivinASODN能明显抑制HL-60细胞中survivinmRNA的表达,诱导细胞凋亡。     

吉西他滨对HL-60细胞c-myc基因表达的影响及其诱导细胞凋亡作用

本研究探讨吉西他滨对HL-60细胞c-myc基因表达及细胞凋亡的影响及吉西他滨应用于白血病治疗的可行性。体外培养人白血病细胞系HL-60细胞,以不同浓度吉西他滨作用于HL-60细胞,用RT-PCR方法检测细胞c-myc mRNA表达的变化;以Western blot方法检测细胞C-MYC蛋白表达水平;原位酶标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡情况。结果表明,1.0μg/ml吉西他滨作用于HL-60细胞12、24、36、48小时后,不同程度地抑制HL-60细胞c-myc mRNA的表达,并具有时间依赖性,其最适作用时间为24小时,与阿糖胞苷(Ara-C)组及空白对照组比较,抑制作用差异有统计学意义(p0.05)。1.0μg/ml吉西他滨作用于HL-60细胞24、48、72小时后,C-MYC蛋白表达水平明显下降,于48小时抑制作用最明显,抑制率为94.16%,方差分析显示,各时间点吉西他滨组与空白对照组和Ara-C组比较,差异均有统计学意义(p0.01);吉西他滨作用24小时组、48小时组及72小时组组间比较,也有显著性差异(p0.01)。1.0μg/ml吉西他滨作用于HL-60细胞24小时后,出现明显的诱导细胞凋亡作用,阳性率83.67%,与空白对照组(阳性率3.00%)和Ara-C组(阳性率10.67%)比较差异均有统计学意义(p0.01)。结论:吉西他滨对HL-60细胞c-myc基因及C-MYC蛋白表达有显著的抑制作用,能够诱导HL-60细胞凋亡,其抑制及诱导凋亡作用强于阿糖胞苷,提示吉西他滨可能作为白血病治疗的新选择。     

Manumycin对白血病细胞生长及survivin基因表达的影响

目的:观察不同浓度的Manumycin对白血病K562细胞生长及survivin基因表达的影响,初步探讨其诱导细胞凋亡的分子机制.方法:体外培养K562细胞,采用不同浓度的Manumycin(0、0.5、1、2、4、8 μmol/L)掺入细胞,作用48 h后采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测凋亡率,RT-PCR检测细胞中survivin mRNA表达.结果:MTT法显示,1～8 μmol/L组对K562细胞具有明显的增殖抑制作用.流式细胞术结果显示,1～8μmol/L组均可诱导细胞凋亡(P＜0.01).RT-PCR结果显示1～8 μmol/L组细胞的survivin mRNA水平明显低于空白对照组(P＜0.01).结论:Manumycin可有效抑制K562细胞的增殖,诱导其凋亡,分子机制可能与下调survivin的表达有关.     

高三尖杉酯碱诱导HL-60细胞人端粒酶逆转录酶mRNA的变化

为了探讨高三尖衫酯碱(homohardngtonine，HHT)抑制HL-60细胞端粒酶活性的机制及意义，采用半定量RT-PCR和PCR-ELISA法检测HHT作用后的HL-60细胞人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达和端粒酶活性的变化，用TUNEL法检测HL-60细胞的凋亡率。结果发现：与空白对照相比，0．005-0．03μg/ml,HHT作用HL-60细胞12小时，hTERTmRNA表达无明显变化，随HHT浓度增加至0．04-0．05μg/ml，hTERTmRNA表达明显下降至检测不出。与0小时相比，0．02μg/ml HHT作用6-18小时后，HL-60细胞hTERT mRNA表达无明显变化，24小时后hTERT mRNA表达明显减少，至30小时未能检出hTERT mRNA表达。HL-60细胞端粒酶活性的抑制与hTERT mRNA的表达下降趋势基本一致。随HL60细胞hTERT mRNA的表达下降和端粒酶活性的抑制，其凋亡率明显增加。结论：HHT能抑制HL-60细胞hTERT mRNA的转录，其与细胞凋亡的关系值得进一步研究。     

TGF-β1诱导HL-60细胞凋亡后Smads蛋白的变化

【目的】探讨转化生长因子（TGF-β1）诱导HL-60细胞凋亡后Smads蛋白的变化。【方法】用不同浓度的TGF-131处理HL-60细胞,采用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR方法检测Smads蛋白。【结果ITGF-β1对HL-60细胞有增殖抑制作用,其抑制效应呈时间及剂量依赖性,10．4ng／mL TGF-β1增殖抑制作用较为明显;在细胞凋亡过程中,Smad3、Smad7表达呈逐渐升高趋势（P〈0．05）,而Smad2、Smad4则无明显变化。【结论】TGF-β1可抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡,且呈时间、剂量依赖性;Smad3、Smad7可能参与TGF-β1诱导HL-60细胞凋亡过程,其变化与HL-60细胞凋亡密切相关。     

小檗碱对HL-60细胞增殖、凋亡及血管内皮生长因子受体2表达的影响

本研究旨在观察小檗碱对人早幼粒白血病HL-60细胞的增殖、凋亡及血管内皮生长因子受体-2(VEGFR2)表达的影响。选用HL-60细胞体外培养,在不同浓度的小檗碱(6-96μg/ml)作用下,应用CCK-8法检测小檗碱对HL-60细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞仪检测HL-60细胞的凋亡水平及细胞周期的分布;用RT-PCR及Western blot分别检测VEGFR2 mRNA及VEGFR2蛋白表达的变化。结果显示,小檗碱能抑制HL-60细胞的增殖,促进其凋亡,呈浓度和时间依赖关系。随着小檗碱浓度增加,G1期细胞增多,S期细胞减少,同时VEGFR2 mRNA和VEGFR2蛋白表达减少。结论:小檗碱可抑制HL-60细胞增殖,促进细胞凋亡,改变HL-60细胞周期,下调VEGFR2 mRNA及VEGFR2蛋白的表达。     

大黄素抑制HL-60/ADR耐药细胞增殖和诱导凋亡的作用

本研究探讨中药大黄素(emodin)对人白血病耐药细胞株HL-60/ADR的增殖、凋亡影响及其相应的可能作用机制。采用MTT法绘制细胞生长曲线;集落培养法观察大黄素对HL-60/ADR克隆形成的影响;细胞周期分析、线粒体跨膜电位检测、Caspase-3酶活性检测、Annexin V FITC/PI法、TdT酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)分析凋亡细胞;RT-PCR及Western blot法检测大黄素作用后不同时间段bcl-2、c-myc mRNA及Bcl-2、c-Myc、Caspase-3前体蛋白表达水平的变化。结果表明,大黄素对HL-60/ADR细胞增殖具有明显的抑制作用,呈时间和浓度依赖性。较低浓度大黄素即可抑制HL-60/ADR细胞集落形成,IC50值为5.79μmol/L。细胞周期分析显示,与对照组比较,40、80μmol/L浓度组细胞被阻滞于G0/G1期比率明显增高(p<0.01),G2/M期细胞比率降低(p<0.01),而20μmol/L浓度组细胞周期改变差异不具有显著性(p>0.05),各浓度组均检测到典型的亚二倍体峰(凋亡峰)。大黄素作用12小时HL-60/ADR细胞线粒体跨膜电位降低,Annexin V FITC/PI法检测到早期凋亡细胞,作用24小时caspase-3酶活性显著升高,作用48小时TUNEL法检测到晚期凋亡细胞,细胞凋亡率呈药物浓度依赖性。大黄素作用HL-60/ADR细胞不同时间段,bcl-2、c-myc mRNA和Bcl-2、c-Myc、Caspase-3前体蛋白表达水平均有不同程度下调,并呈时间依赖性。结论:大黄素能够有效抑制HL-60/ADR细胞增殖,并诱导其凋亡,bcl-2、c-myc表达水平下调,线粒体跨膜电位水平降低和caspase-3激活可能参与了该过程。     

TIEG1对HL-60细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的影响

本研究旨在观察TIEG1对HL-60细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的影响。用不同浓度的TIEG1处理HL-60细胞,采用MTT法检测细胞生长抑制率。用12.03 ng/ml TIEG1处理HL-60细胞,以流式细胞术检测细胞凋亡,以RT-PCR方法检测Bcl-2及Bax的表达变化。结果表明,TIEG1对HL-60细胞具有增殖抑制作用,其抑制效应呈时间及剂量依赖性。TIEG1 12.03 ng/ml增殖抑制作用较为明显。在细胞凋亡过程中,Bax表达呈升高趋势,而Bcl-2呈下降趋势(P<0.05)。结论:TIEG1可以抑制HL-60细胞增殖,进而诱导其凋亡,且呈时间、剂量依赖性。在TIEG1诱导HL-60细胞凋亡的过程中,Bcl-2/Bax与TIEG1诱导HL-60细胞凋亡相关。     

Survivin在白血病细胞中的表达及GM-CSF对其影响的研究

本研究旨在探讨凋亡存活蛋白survivin在白血病的原代细胞和白血病细胞系中的表达情况，并观察粒-巨噬细胞细胞集落刺激因子（GM-CSF）对其的影响。用RT-PCR方法检测37例白血病患者、10例正常成人骨髓和3种白血病细胞系（K562、HL-60、U937）中survivin的表达。以HL-60细胞为对象，加入合适浓度的GM-CSF，用RT-PCR和Western blot分别检测加药前后surivin mRNA和蛋白水平的变化。结果显示：37例白血病患者中有25例表达survivin，阳性率为67．6％，其中急性淋巴细胞白血病（ALL）细胞中survivin mRNA表达阳性率为73．3％，高于急性髓系白血病（AML），但均高于正常对照组（20．0％）（P〈0．05）。3种细胞系K562、HL-60和U937全部表达survivin。合适浓度的GM-CSF作用2天后，HL-60细胞中survivin的表达明显升高，其中mRNA水平升高了26％，蛋白水平升高了49％。结论：suvivin在白血病的原代细胞和细胞系中均有较高表达，而GM-CSF能显著提高HL-60细胞中survivin的水平。     

血管内皮生长因子反义寡核苷酸对白血病细胞系HL-60细胞作用的研究

本研究探讨VEGF ASODN抑制白血病细胞内源性VEGF mRNA的表达作用及其与白血病细胞凋亡的关系。用阳离子聚合物介导硫代修饰VEGF ODN转染体外培养白血病细胞系HL-60细胞后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,RT-PCR检测VEGF mRNA表达,以细胞形态学,凝胶电泳,流式细胞术观察细胞凋亡。结果显示：反义组与错义组、空白对照组相比,在细胞增殖抑制率和VEGF mRNA的表达水平方面均具有显著性差异（p〈0.05）;错义组与空白对照组相比无统计学差异（p〉0.05）。反义组可见细胞皱缩,颗粒增多,核固缩并出现细胞碎片,而错义组、空白对照组细胞轮廓清楚,胞体透亮,生长旺盛;反义组有凋亡梯形带,错义组和空白对照组仅见1条DNA条带;反义组细胞凋亡率达19.46%,与错义组、空白对照组相比具有显著性差异（p〈0.05）;错义组与空白对照组相比,无统计学差异（p〉0.05）。VEGF ASODN联合VP16的细胞凋亡率与等同条件单用VP16组相比有统计学差异（p〈0.05）;且凋亡率具有时间和剂量依赖关系。结论：VEGF ASODN能抑制白血病细胞内源性VEGF mRNA的表达,诱导白血病细胞的凋亡,抑制增殖,且增强VP16对白血病细胞诱导凋亡作用,两者联合效应具有相加作用。