刀豆蛋白A诱导鼠肝损伤的荧光组织化学和超微病理研究

观察了刀豆蛋白Ａ诱导小鼠急性肝损伤模型的荧光组织化学和超微病理改变。小鼠注射ＣｏｎＡ后，经超微病理观察发现，肝损伤突出表现为肝细胞凋落，用生物素化的ＣｏｎＡ注射于小鼠，切肝制成冰冻切片，再加入异硫氰荧光素标记的亲合素可见大部分荧光分布于肝脏。结果表明，细胞凋落可能是ＣｏｎＡ在体内造成肝细胞死亡的机制，ＣｏｎＡ具有亲肝特性。     

Toll样受体2配体对刀豆蛋白A诱导小鼠肝脏损伤的保护作用

目的：研究Toll样受体2配体（Pam3CSK4）对刀豆蛋白A（ConA）诱导小鼠免疫性肝损伤的干预效果及机制。方法：尾静脉注射ConA（15mg／kg）诱导小鼠肝损伤模型,在ConA注射前24h腹腔注射Pam3CSK4。检测血清谷丙转氨酶（ALT）和γ-干扰素水平,并观察肝组织的病理改变。结果：与ConA模型组比,PamCSK4预处理组血清ALT水平明显降低（P〈0．01）,肝脏病理损伤明显减轻,血清γ-干扰素水平明显下降（P〈0．01）。结论：Pam3CSK4对ConA诱导小鼠肝损伤具有保护作用,该作用可能与γ-干扰素水平的下调有关。     

小鼠急性肝损伤血清及肝组织中白细胞介素-18的检测意义

目的观察急性肝损伤后小鼠血清和肝组织白细胞介素-18（IL—18）水平，探讨IL—18与肝损伤的关系及意义。方法用刀豆蛋白A（ConA）诱导小鼠急性肝损伤构建实验动物模型，将80只小鼠随机分成对照组和实验组，每组40只。对照组经尾静脉注射生理盐水0．3ml／只，实验组注射等体积的ConA（20mg／kg）。经上述处理后4h取血并切下适量肝组织制成匀浆，测定血清IL-18、丙氨酸氨基转移酶（ALT）和肝匀浆中的IL-18水平。结果实验组血清IL—18、ALT和肝组织IL—18水平均显著高于对照组，两两比较差异有统计学意义；实验组血清及肝组织匀浆中IL—18均与血清AIJT呈显著正相关；实验组肝组织IL—18与血清IL—18水平也呈显著正相关。结论IL—18与ConA诱发的小鼠急性肝损伤有密切关系，提示动态检测1L-18可作为肝损伤严重程度的一种指标。     

乙型肝炎病毒转基因小鼠病理学观察

目的 观察乙型肝炎病毒（HBV）ayw亚型转基因小鼠的肝、肾等组织的病理改变。方法 选取15只5-48周龄的清洁级C57BL/6J-HBV转基因小鼠及15只C57BL/6J小鼠为对照进行病理大体观察，并取心、肝、脾、肺、肾、肠等组织，切片HE染色和免疫组化特殊染色后进行光镜观察。结果 C57BL/6J-HBV转基因小鼠肝脏产生局部明显的炎症反应；肝细胞肿胀，毛玻璃样变性，灶性坏死伴淋巴样细胞浸润，可见肝细胞质内嗜酸性小体，局部可见巨核肝细胞，偶见多核肝细胞，心，脾、肺、肾、肠等脏器未见明显的病理改变，免疫组化分析说明，血清HBsAg(乙型肝炎病毒表面抗原）为阳性的15只小鼠肝组织有HBsAg的存在，且HBsAg的分布呈胞质型，但不存在于脾、肺、心等组织中，血清HBsAg为阴性的15只小鼠其心、肺，肝，脾，肾，肠等组织中均未见HBsAg的存在；发现两只48周龄C57B羁J-HBV转基因小鼠患肝细胞癌。     

肝细胞刺激因子对骨髓单个核细胞向肝归巢的影响

目的:探讨肝细胞刺激因子对骨髓单个核细胞(BMMNC)在小鼠体内向肝归巢的影响。方法:制备BALB/c小鼠2-乙酰氨基芴-四氯化碳肝损伤模型,供鼠分离BMMNC,体外经PKH26染色,经尾静脉途径输入肝损伤小鼠体内,实验组立即以80μg/(kg.d)剂量腹腔内注射肝细胞刺激因子,对照组注射等量5%葡萄糖溶液。移植2周后取小鼠肝,冷冻切片计荧光细胞数,苏木精-伊红(H-E)染色观察病理组织学变化。结果:实验组小鼠肝冷冻切片上平均荧光细胞数多于对照组(84vs61,P<0.05)。H-E切片上新生肝细胞较多。结论:肝细胞刺激因子对BMMNC向肝归巢有一定的促进作用。     

β-胡萝卜素对小鼠肝纤维化的预防作用

目的：了解β-胡萝卜素对腹腔注射Con A诱导昆明鼠肝纤维化有无预防作用。方法：30只Balb／c鼠随机分组：对照组10只，PBS腹腔注射、生理盐水灌胃。未预防组10只，腹腔注射ConA、生理盐水灌胃8周。预防组10只，ConA腹腔注射、β-胡萝卜素灌胃。第9周处死所有小鼠，测血清ALT、AST，肝组织病理检查。结果：未预防组有典型肝纤维化；对照组与预防组未出现肝纤维化。结论：β-胡萝卜素对肝纤维化有预防作用。     

混合核苷酸对刀豆蛋白A所致肝损伤的保护作用

目的 探讨混合核苷酸对刀豆蛋白A（ConA）所致肝损伤的保护作用。方法 用ConA诱导小鼠肝损伤．用混合核苷酸灌胃治疗，3d后取血，检测血清ALT、AST活性和一氧化氮（NO）含量，检测肝组织超氧化物歧化酶（SOD）的活性和丙二醛（MDA）含量，并观察肝组织病理学变化。结果混合核苷酸大剂量组ALT、AST活性均明显低于模型组（P〈0.01），但与联苯双酯组比较，差异无显著性意义（P〉0．05）；混合核苷酸大、中剂量组肝组织SOD活性明显升高、MDA含量显著降低，与模型组比较，差异有显著性意义（P〈0.05）；混合核苷酸大、中、小剂量组血清NO含量较模型组明显降低（P〈0.05）；混合核苷酸中剂量组肝组织病理改变明显减轻。结论 混合核苷酸对conA所致小鼠肝损伤具有较好的保护作用，其保肝机制与抗脂质过氧化损伤和抑制NO的产生密切相关。     

15例肝细胞癌的电镜观察——与早期人胚肝的超微结构对比分析

作者用光镜及电镜观察了１５例肝细胞癌。用电镜观察了５例早期人胚肝作对比，两者在超微结构上有相似之处，这对电镜判断肝细胞癌，特别是肝外转移的肝细胞癌有重要意义，两者较多差别，如癌细胞多形性，异质性，细胞结构成分的不分化，经及浸润性生长特点。这给电镜下判断肿瘤的良恶性，提供了重要依据。还观察了多个单个的死亡癌细胞，这些细胞虽未见凋落小体形成，但仍属癌细胞的凋落性死亡，在肝细胞癌半数病例中见到淋巴细胞溶     

苦参碱对免疫性肝损伤小鼠肝组织Fas、FasL表达的影响

目的观察苦参碱对豆蛋白A（Concanavalin A,ConA）所致免疫性肝损伤小鼠肝组织Fas、FasL表达的影响,探讨其抗肝损伤的作用机制。方法70只NIH小鼠随机分为5组,分别为正常对照组,模型组、苦参碱高剂量组、低剂量组和联苯双酯治疗组。除正常对照组外,其他组于实验首日静脉注射ConA20mg／kg后,苦参碱高剂量组、低剂量组均采用尾静脉注射给药,联苯双酯灌胃口服,1次/d,连续5d,末次给药后4h,再次尾静脉注射Con A20mg／kg。8h后检测血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）活性,观察肝组织病理学变化和Fas、FasL的表达。结果苦参碱高、低剂量组小鼠血清ALT、AST活性均明显低于模型组,差异有显著性意义（P〈0．01）,苦参碱各剂量组肝脏病理改变明显减轻,肝组织Fas、FasL的表达明显减弱,与模型组比较,差异均有显著性意义（P〈0．01）。结论苦参碱对ConA所致小鼠免疫性肝损伤具有较好的保护作用,抑制肝组织中Fas、FasL的表达,从而减轻Fas／FasL系统介导的肝细胞凋亡,是其抗肝损伤的作用机制之一。     

骨髓间充质干细胞移植对严重烧伤大鼠肝损伤的修复作用及其机制

目的：探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植对严重烧伤大鼠肝损伤的修复作用，初步阐明其作用机制。方法：体外分离、培养、扩增、鉴定并标记大鼠BMSCs。将30只Wistar大鼠随机分成正常对照组、模型组和细胞治疗组,每组10只。制备大鼠烧伤模型，将氯甲基苯甲酰胺（CM-Dil）标记的BMSCs经球后静脉移植到细胞治疗组大鼠体内，模型组大鼠注射生理盐水。观察各组大鼠的一般状况。细胞移植后2周取大鼠肝组织，进行病理组织学观察和评分；TUNEL法检测肝细胞凋亡率；激光共聚焦显微镜观察BMSCs在大鼠肝组织中的定植情况。结果：细胞移植后2周，模型组大鼠精神明显萎靡、少动；细胞治疗组大鼠精神状态较好，大鼠体质量显著高于模型组（P<0.05）。病理组织学观察，模型组大鼠肝小叶结构消失，肝索排列紊乱，部分肝窦扩张充血，散在淋巴细胞浸润，偶见小灶性聚集，肝细胞浊肿，有些细胞胞浆疏松，脂肪变性；细胞治疗组大鼠肝组织的病理学改变较轻，明显好于模型组；细胞治疗组大鼠病理组织学评分明显低于模型组(P<0.05)。TUNEL法检测，模型组大鼠肝组织出现较多凋亡肝细胞，细胞治疗组大鼠肝细胞凋亡率明显低于模型组（P<0.05）。激光共聚焦显微镜观察，细胞治疗组大鼠肝组织中有CM-Dil标记的BMSCs。结论：BMSCs移植后能够向受损肝组织定植，对烧伤引起的肝损伤有明显的修复作用，其机制可能与抑制细胞凋亡有关。     

双环醇对刀豆蛋白A 所致小鼠肝细胞核DNA损伤的保护作用

目的探讨双环醇对刀豆蛋白A(ConA)引起小鼠肝脏细胞核和DNA损伤的保护作用。方法用ConA诱发小鼠肝损伤模型,观察双环醇对血清转氨酶(ALT),肝细胞核DNA片断化、肝细胞核内DNA对CuSO4-邻啡罗啉-维生素C-H2O2系统损伤的敏感性以及肝脏中H2O2含量的作用。结果双环醇50、150mg/kg灌胃能保护ConA引起的小鼠肝损伤,降低血清中ALT水平,P值分别小于0.05、0.01;减轻肝脏细胞核和DNA的损伤,荧光测定DNA片断化数值降低（P<0.05,P<0.01）,DNA条带出现百分率由ConA组的100%降低至25%;防止肝细胞核DNA对CuSO4-邻啡罗啉-维生素C-H2O2系统损伤的敏感性的降低,并能阻抑肝脏H2O2的升高（双环醇150mg/kg组P<0.05）。双环醇在体外加药（终浓度分别为4,16,64×10-7mol/L）也能直接保护CuSO4-邻啡罗啉-维生素C-H2O2系统对纯品DNA的损伤。结论双环醇对ConA引起的小鼠肝细胞核DNA损伤具有明显的保护作用。     

P物质及其受体在小鼠免疫性肝炎中的作用

目的观察P物质（SP）及其受体NK-1R介导的神经源性炎症在小鼠免疫性肝炎发病中的作用和可能机制。方法小鼠尾静脉注射刀豆蛋白A（Con A）建立免疫性肝炎模型组，注射生理盐水作为对照组。HE染色观察肝脏病理变化；肝组织匀浆SP测定采用酶联免疫吸附(ELISA)法；同时应用RT PCR法对各组动物肝脏组织中NK-1RmRNA的表达水平进行相对定量比较。结果模型组肝脏损害严重，以肝细胞肿胀和免疫细胞浸润为特征；肝组织匀浆SP含量模型组(507.25±30.35) 显著高于对照组 (238.59±21.90) (P＜0.01)；而且模型组NK-1R mRNA的表达显著上调（P＜0.05）。结论P物质及其受体参与了小鼠免疫性肝炎的起始阶段，并在炎症的激发和扩大方面发挥了重要作用。     

Role of CpG ODN in concanavalin A-induced hepatitis in mice

OBJECTIVE: To investigate the effects of an intradermal injection of oligodeoxynucleotides (ODNs) containing unmethylated CpG motifs on concanavalin A (Con A)-induced hepatitis, an experimental model of immune-mediated hepatitis. METHODS: Con A was injected intravenously into Balb/c mice. Twelve hours after Con A challenge, blood and liver samples were obtained. CpG ODN was injected intradermally 48 hours before Con A challenge. The extent of liver injury was assessed by determining serum alanine transaminase (ALT) and by liver histology. Serum levels of cytokines, including interferon (IFN)-gamma, tumor necrosis factor (TNF)-alpha, interleukin (IL)-4 and IL-5, were measured by enzyme-linked immunosorbent assay. RESULTS: Co-administration of Con A and CpG ODN significantly increased serum ALT in mice compared with that in the case of administration of Con A alone (10,268 +/- 4,654 and 1,140 +/- 832 IU/1, respectively, p<0.05). In liver histology, mice treated with CpG ODN and Con A showed more extensive midzonal necrosis than did mice treated with Con A alone. These mice also showed significant increases in serum TNF-alpha and IFN-gamma and decrease in serum IL-5. CONCLUSIONS: The results indicate that CpG ODNs aggravate Con A-induced hepatitis by stimulating the production of T-helper-1 (Th1) cytokines, TNF-alpha and IFN-gamma, suggesting that bacterial DNA that contains unmethylated CpG motifs may contribute to the exacerbation of immune-mediated liver injury.     

激活素A及其ⅡA型受体在小鼠肝损伤模型肝组织中的表达

目的：探讨激活素A及其ⅡA型受体在Con A诱导的小鼠肝损伤模型肝组织中的表达形式及其可能的作用。方法：小鼠尾静脉注射Con A（10 mg•kg^-1）,每周1次,连续4周,建立小鼠肝损伤模型（n=24）,另设正常对照组（n=24）,于末次注射后的24、72、120 及168 h,各组（n=6）分批检测小鼠血清酶变化及肝脏组织病理损伤程度,同时采用荧光定量RT-PCR法检测激活素A及其ⅡA型受体的表达水平。结果：在末次注射后72 h肝组织病理损伤最为严重,肝小叶结构紊乱,肝细胞索消失,细胞肿胀,呈气球样变,以后逐渐恢复;激活素A蛋白水平及其mRNA表达与其ⅡA型受体mRNA表达呈平行状态,于注射后72 h达高峰,与对照组比较差异具有显著性(P<0.05)。结论：激活素A与其Ⅱ A受体变化与肝组织病理损伤呈平行状态,提示激活素A可能参与了Con A诱导肝损伤模型小鼠的肝损伤。     

可溶性mB7-H4对ConA诱导小鼠肝损伤的保护作用

目的: 探讨可溶性mB7-H4蛋白对肝脏的免疫性损伤的保护作用,阐明其作用机制。 方法: 采用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导pET/mB7-H4表达,通过纯化、复性以及去除内毒素,获得具有生物活性的可溶性mB7-H4蛋白。小鼠随机分为对照(生理盐水)组、Con A组和mB7-H4蛋白100、200及400 μg组,除对照组外其余各组小鼠通过尾静脉注射Con A建立肝损伤模型(mB7-H4蛋白组小鼠在注射Con A前2 h和注射后8 h分2次给予mB7-H4蛋白),并于注射Con A后24和48 h,摘取各组小鼠眼球取血及引颈处死取肝脏,分离血清,检测天冬氨酸氨基转移酶(ALT)、丙氨酸氨基转移酶(AST)、白细胞介素4(IL-4)和γ干扰素(IFN-γ)水平,并检测肝脏组织病理学变化。 结果: 与对照组比较,其他各组小鼠血清ALT、AST、IL-4和IFN-γ水平较均明显升高(P<0.05);与Con A组比较,mB7-H4蛋白组小鼠血清ALT、AST、IL-4和IFN-γ水平均明显降低(P<0.05或 P<0.01)。HE染色,mB7-H4蛋白组小鼠肝脏损伤均较Con A组有不同程度的减轻。 结论: 可溶性mB7-H4蛋白对Con A诱导的肝脏免疫性损伤具有保护作用,可能是通过抑制IL-4和IFN-γ的产生和(或)分泌而发挥作用。     

刀豆蛋白A引起小鼠免疫性肝损伤机制研究

目的:建立刀豆蛋白A(Con A)引起小鼠免疫性肝损伤模型,并考察其损伤机制。方法:ICR小鼠随机分为正常对照组和Con A模型组,每组10只。Con A模型组小鼠尾静脉注射Con A2.5 mg·ml-1·kg-1,对照组给予等体积生理盐水。造模后8 h断头处死小鼠,分别取肝脏和血液,采用生化法测定小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸转移酶(AST)水平,苏木精-伊红染色法测定肝组织病理学改变,ELISA法测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)含量。结果:与正常对照组比较,Con A模型组小鼠血清ALT和AST水平均显著升高(P<0.01),肝细胞明显坏死,伴炎细胞浸润,同时血清中TNF-α和IFN-γ含量亦均显著升高(P<0.01)。结论:尾静脉注射Con A 2.5 mg·ml-1·kg-1可建立免疫性肝炎模型,其损伤机制与炎症因子表达相关。     

白藜芦醇对刀豆蛋白A所致肝损伤的保护作用

目的探讨白藜芦醇对刀豆蛋白A(ConA)所致肝损伤的保护作用。方法用ConA诱导小鼠肝损伤,用白藜芦醇灌胃治疗,3d后取血,检测血清ALT、AST活性和一氧化氮(NO)含量,检测肝组织超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)含量,并观察肝组织病理学变化。结果白藜芦醇中剂量组ALT、AST活性均明显低于模型组(P<0.01),但与联苯双酯组比较,差异无显著性意义(P>0.05);白藜芦醇大、中剂量组肝组织SOD活性明显升高、MDA含量显著降低,与模型组比较,差异有显著性意义(P<0.05);白藜芦醇大、中、小剂量组血清NO含量较模型组明显降低(P<0.05);白藜芦醇中剂量组肝组织病理改变明显减轻。结论白藜芦醇对ConA所致小鼠肝损伤具有较好的保护作用,其保肝机制与抗脂质过氧化损伤和抑制NO的产生密切相关。     

iRGD肽修饰阿霉素脂质体的理化性质和对肿瘤细胞增殖抑制作用的初步研究

目的 制备整合素分子识别配体（RGD）iRGD多肽修饰阿霉素脂质体（iRGD-LP-DOX）,研究iRGD-LP-DOX的理化性质,体外肺癌细胞A549靶向性和肿瘤细胞增殖抑制率。方法 制备iRGD-LP-DOX,透射电镜观察其形态,采用透析袋法检测iRGD-LP-DOX中阿霉素的释放特点;流式细胞术检测A549细胞对iRGD-LP-DOX的摄取效率;构建肺癌A549细胞肿瘤球模型,激光共聚焦定性观察iRGD-LP-DOX 对肿瘤球的穿透能力;MTT实验检测空白脂质体和不同阿霉素剂型的细胞毒性,并计算50%抑制浓度（IC ₅₀ ）。结果 制备的iRGD-LP-DOX粒径均一,呈球形。游离DOX在5 h内全部释放,而LP-DOX和iRGD-LP-DOX 48 h内释放约40%。定量摄取实验表明A549细胞对iRGD-LP-DOX的摄取效率高于LP-DOX,差异有统计学意义（ P<0.01）;肿瘤球穿透实验结果显示iRGD-LP-DOX组的荧光强度显著强于LP-DOX组。MTT实验表明,iRGD-LP-DOX组A549细胞增殖能力受到抑制,差异有统计学意义（ P<0.01）,其IC ₅₀ 值低于LP-DOX组细胞。结论 阿霉素脂质体经过iRGD修饰后,具有缓释能力,增强了DOX高效进入肿瘤细胞并抑制肿瘤细胞生长能力。