IL-8对血管内皮细胞通透性的影响

目的研究白细胞介素-8（IL-8）对血管内皮细胞通透性的影响。方法采用Transwell弥散模型,以标志物漏出法检测IL-8不同浓度、不同作用时间对EA.hy926细胞单层通透性的影响;结晶紫染色法检测细胞形态学改变;透射电镜进行细胞连接形态学观察。结果IL-8可明显增加血管内皮细胞单层的通透性（P〈0．05）,呈一定的剂量和时间依赖关系;荧光倒置相差显微镜观察,随着IL-8浓度和作用时间的增加,细胞明显回缩,细胞间隙明显增加;透射电镜实验表明,随着IL-8浓度和作用时间的增加。细胞连接逐渐打开、破坏。结论IL-8以时间和剂量依赖方式引起血管内皮细胞通透性升高、细胞及细胞连接形态学的改变。     

剪切力对血管内皮细胞表达IL-8的影响

本文利用改进的流室装置, 通过精密蠕动泵提供剪切力, 选择5dyne/cm2、10dyne/cm2、15dyne/cm2三种剪切力, 施加于体外培养的血管内皮细胞, 作用不同时间, 用RIA的方法检测流体动力学对血管内皮细胞表达IL-8的影响.结果表示, 不同剪切力作用内皮细胞后, IL-8的表达量与剪切力大小及作用时间有关, 为时间依赖性增长, 在5dyne/cm2组和10dyne/cm2组中, IL-8表达量明显高于空白对照组, 而15dyne/cm2组与对照组相比有下降趋势, 提示高剪切力有可能抑制IL-8的分泌.通过观察不同大小剪切力对血管内皮细胞表达IL-8的影响, 为探讨剪切力对动脉粥样硬化的影响提供一些数据.     

流体切应力作用强度对内皮细胞IL-8生成的影响

血管内皮细胞衬于血管腔的表面，是血流机械应力的主要感受者。切应力可以直接调节内皮细胞生物活性物质的合成和分泌，其中包括诱导内皮细胞生成IL-8，而且IL-8的生成量与切应力作用时间有关。为阐明内皮细胞IL-8的生成除了与切应力的作用时间有关外还与切应力的强度有关，我们用不同强度的流体切应力(2．09、4．61、6．19、8．51、10．50、12．59、14．41、17．22、18．32dyne／cm^2)处理培养的人脐静脉内皮细胞，然后采用双抗体夹心ABC-ELISA技术检测内皮细胞IL-8蛋白质的生成。结果显示：未用切应力处理的内皮细胞只有极少量的IL-8蛋白质生成；切应力处理内皮细胞后，低切应力(2．09dyne／cm^2)时IL-8蛋白质生成量明显增加，约为高切应力(18．32dyne／cm^2)时IL-8蛋白质生成量的6(作用5h)或7倍(作用6h)。IL-8蛋白质生成量与内皮细胞所施加的切应力强度呈反变关系；直线回归方程：5h时为y=760．12—36．06x，相关系数7=-O．978；6h时为y=781．87—36．66x，相关系数7=-O．980。式中：y为切应力作用下内皮细胞IL-8的生成量；x为施加于内皮细胞的切应力强度(dyne／cm^2)。不同的切应力作用时间(5h、6h)均表现出相同的IL-8蛋白质生成量随切应力强度的变化规律。提示流体切应力诱导内皮细胞生成IL-8的量，不仅与切应力的作用时间有关，而且IL-8的生成量与切应力强度有关。流体低切应力诱导内皮细胞IL-8的生成量急剧增高，可能在急性炎症和动脉粥样硬化的发生、发展过程中具有重要作用。     

流体切应力作用时间对内皮细胞IL-8生成的影响

内皮细胞对力学刺激反应敏感 ,流体切应力可以直接调节内皮细胞生物活性物质的产生。为阐明内皮细胞白细胞介素 - 8(IL- 8)蛋白质的生成受力学因素的影响 ,本文用流体切应力 (2 .0 9、4 .6 1、6 .19dyne/cm2 )处理培养的人脐静脉内皮细胞 ,然后采用双抗体夹心 ABC- EL ISA技术检测内皮细胞 IL- 8蛋白质的生成。结果显示 :未用切应力处理的内皮细胞只有极少量的 IL- 8蛋白质生成 ;切应力处理内皮细胞 1h,IL- 8蛋白质生成增加 ,处理 5 hIL- 8蛋白质生成量至最高值 ,处理 8h IL- 8蛋白质生成量下降 ,10 h后 IL- 8蛋白质维持在一个较高的水平 ;各实验组 (2 .0 9、4 .6 1、6 .19dyne/cm2 )均表现出相同的 IL- 8蛋白质随力学刺激时间的变化规律。提示流体切应力确实可以诱导内皮细胞生成 IL- 8,并且 IL- 8的生成量与切应力的作用时间有关 ,呈双相性变化。流体切应力诱导内皮细胞生成 IL- 8,可能在急性炎症或动脉粥样硬化的发生、发展过程中具有重要作用     

流体切应力强度对内皮细胞IL-8基因表达的影响

内皮细胞位于血流与血管之间，内皮细胞调控的机械力相关反应已成为正常血管反应的一部分。切应力在调节内皮细胞功能上具有重要作用。流体切应力可以直接调节内皮细胞基因的表达，其中包括诱导内皮细胞表达IL－8，而且IL－8的表达量与切应力作用时间有关。 为阐明内皮细胞IL－8基因的表达除了与切应力的作用时间有关外还与切应力的强度有关，我们用不同强度的流体切应力（2．23、4．20、6．08、8．19、9．67、12．15、14．40、16．87、19．29dyne/cm^2）处理培养的人脐静脉内皮细胞，然后采用定量RT－PCR的方法检测内皮细胞IL－8 基因的表达情况。结果显示：未用切应力处理的内皮细胞没有IL－8基因的表达，切应力处理内皮细胞后，低切应力（2．23dyne/cm^2）时IL－8mRNA表达量明显增加为高切应力（19．29dyne/cm^2）时IL－8mRNA表达量的约68（作用1小h）或52倍（作用2h）。IL－8mRNA的表达量与内皮细胞所施加的切应务强度呈反变关系，直线回归方程，1h时为y=7.57-0.11x，相关系数r=7.97;2h时为y=7.92-0.10x，相关系数r＝0．96。式中：y为切应力作用下内皮细胞IL－8mRNA的表达量（拷贝数的对数值）；x为施加于内皮细胞的切应力强度（dyna/cm^2)。不同的切应力作用时间（1h,2h）均表现出相同的IL-8mRNA随切应力强度的变化规律。提示流体应力诱导内皮细胞表达IL－8，不仅与切应力的作用时间有关，而且IL－8的表达量与切应力强度有关。流体切应诱导内皮细胞IL－8mRNA的表达急剧增高，可能在炎症机制和动脉粥样硬化的发生、发展过程中具有重要作用。     

生物材料对血管内皮细胞IL-8和TNF-α表达的影响

目的是研究不同生物材料对血管内皮细胞中细胞因子表达水平的影响，探讨与血栓形成有关的细胞因子mRNA表达变化与生物材料血液相容性之间的关联性。实验选择8％有机锡的聚氯乙烯为阳性对照，细胞培养用的聚苯乙烯为阴性对照，聚四氟乙烯、膨体聚四氟乙烯以及两种医用聚氨酯（PU-50和PU-60）作为实验材料，采用人脐静脉内皮细胞株ECV-304，通过细胞与不同材料的接触，运用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法，测定内皮细胞中与凝血功能密切相关的两种重要的细胞因子：白介素-8（IL-8）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的mRNA表达水平。结果显示：与阴性材料相接触的内皮细胞其IL-8和TNF-α的表达均呈阴性，与阳性材料接触的细胞因子表达均呈强阳性，两种聚氨酯材料尽管在细胞生长、附着和形态变化等方面经肉眼观察未见明显差异，但是两者在细胞因子的表达上却出现显著的不同，其中PU-60组表达水平明显高于PU-50组；聚四氟乙烯和膨体聚四氟乙烯材料表现出程度不等的表达增强，前者比后者更明显。将IL-8和TNF-α在上述6种材料中的表达情况进行秩相关分析，得到相关系数为r=0.88571（P〈0.05）。由此提示：血管内皮细胞对不同生物材料刺激所产生的反应在细胞水平和分子水平上可出现不完全一致的现象，后者显然较前者更为灵敏，通过检测血管内皮细胞中IL-8和TNF-α的mRNA表达改变，在一定程度上可推测生物材料血液相容性的优劣。     

补体旁路激活对内皮细胞表达IL-8的影响

目的:探讨补体旁路活化途径直接促进内皮细胞表达IL-8,以及核转录因子kappa B(NF-κB)对该效应的调控作用。方法:应用酵母多糖活化人血清(ZAHS)直接作用于体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)单层,检测如下指标:①放射免疫(RIA)检测IL-8的表达水平,并用原位杂交(ISH)检测胞浆中mRNA水平;②凝胶电泳迁移率(EMSA)方法测定NF-κB的活化。 结果:① 0.14 mL ZAHS能够诱导内皮细胞表达IL-8,4 h开始即有明显上升,ZAHS作用6 h,内皮细胞胞浆中IL-8 mRNA含量明显增加;②ZAHS能够激活NF-κB,30 min时即有活化,60 min明显增加,120 min达到高峰。NF-κB抑制剂咯啶二硫氨基甲酸脂(PDTC) 20 μmol/L预处理HUVECs 单层2 h,可以明显降低IL-8的表达(P＜0.05)。结论:补体旁路活化直接在转录水平诱导HUVECs表达IL-8,NF-κB参与调控该过程。     

TLR-4信号转导通路介导层流切应力诱导血管内皮细胞IL-8基因表达的研究

目的: 观察TLR-4信号转导通路在层流低切应力诱导血管内皮细胞IL-8基因表达中的作用。方法: 设计突变引物, 用RT-PCR技术从血管内皮细胞扩增出胞内区段缺失突变TLR4 cDNA, 用PCR技术从其DNA中扩增出IL-8上游调控序列(IL-8USCS), 分别克隆于真核表达质粒pcDNA3及绿色荧光增强蛋白报告基因pEGFP1质粒,构建出重组TLR-4缺失突变基因真核表达质粒pcDNA3-mTLR4和IL-8报告基因表达质粒pEGFP1-IL8USCS。用pEGFP1-IL8USCS转染或pcDNA3-mTLR4和pEGFP1-IL8USCS共转染ECV304细胞, 用4.2 dyne/cm²层流切应力刺激3 h, 流式细胞仪观察荧光蛋白表达强度变化。细胞裂解物IκB免疫印迹和NF-κB p65免疫荧光细胞化学染色检测IκB的磷酸化及降解和NF-κB的活化。结果: 用pEGFP1-IL8USCS转染细胞, 经层流切应力刺激3 h后荧光蛋白表达增强(1.06:2.71), 同样用pcDNA3-mTLR4和pEGFP1-IL8USCS共转染细胞, 层流切应力刺激3 h后荧光蛋白表达未明显增强。细胞裂解物免疫印迹显示, 刺激10 min时磷酸化IκB即显著增强, 1 h后磷酸化IκB印迹强度几乎降到基线水平, 而IκB随刺激时间延长而逐渐降低, 1 h后几乎测不到IκB。NF-κB p65免疫荧光细胞化学染色显示, 切应力刺激0.5 h, 胞核即出现阳性反应, 刺激1.5 h、2 h后, 胞核呈强阳性染色。结论: 本研究提示, TLR4/NF-κB信号转导通路可能介导层流切应力诱导血管内皮细胞IL-8基因的表达。     

流体切应力作用强度对内皮细胞IL一8生成的影响

血管内皮细胞衬于血管腔的表面,是血流机械应力的主要感受者.切应力可以直接调节内皮细胞生物活性物质的合成和分泌,其中包括诱导内皮细胞生成IL一8,而且IL一8的生成量与切应力作用时间有关.为阐明内皮细胞IL一8的生成除了与切应力的作用时间有关外还与切应力的强度有关,我们用不同强度的流体切应力(2.09、4.61、6.1 9、8.51、10.50、12.59、14.41、17.22、18.32 dyne/cm2)处理培养的人脐静脉内皮细胞,然后采用双抗体夹心ABC-ELISA技术检测内皮细胞IL一8蛋白质的生成.结果显示未用切应力处理的内皮细胞只有极少量的IL一8蛋白质生成;切应力处理内皮细胞后,低切应力(2.09dyne/cm2)时IL一8蛋白质生成量明显增加,约为高切应力(18.32 dyne/cm2)时IL-8蛋白质生成量的6(作用5 h)或7倍(作用6 h).IL一8蛋白质生成量与内皮细胞所施加的切应力强度呈反变关系;直线回归方程5 h时为y=760.12-36.06x,相关系数γ=-0.978;6 h时为y=781.87-36.66x,相关系数γ=-0.980.式中y为切应力作用下内皮细胞IL-8的生成量;x为施加于内皮细胞的切应力强度(dyne/cm2).不同的切应力作用时间(5 h、6 h)均表现出相同的IL-8蛋白质生成量随切应力强度的变化规律.提示流体切应力诱导内皮细胞生成IL一8的量,不仅与切应力的作用时间有关,而且IL-8的生成量与切应力强度有关.流体低切应力诱导内皮细胞IL-8的生成量急剧增高,可能在急性炎症和动脉粥样硬化的发生、发展过程中具有重要作用.     

内皮细胞源性IL—8对人树突状细胞作用的研究

目的：探讨内皮源性白细胞介素－８（ＩＬ－８）对人树突状细胞（ＤＣ）的作用。方法：用ＴＮＦ－α分别诱导内皮细胞和单核细胞产生ＩＬ－８,并将这２种不同来源的ＩＬ－８分别加入ＤＣ常规诱导培养的早期（第３天）及后期（第７天）,培养至第９天收获细胞。采用流式细胞术（ＦＣＭ）分析ＤＣ的表型;体外混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）测定ＤＣ刺激Ｔ细胞增殖能力;ＥＬＩＳＡ检测培养上清中ＩＬ－１２的含量;ＰＩ染色观察ＤＣ凋亡。结果：在ＤＣ培养的早期（第３天）加入内皮源性ＩＬ－８可以抑制ＤＣ的成熟,ＦＣＭ分析表明：ＣＤ１ａ,ＣＤ４０,ＣＤ８０,ＣＤ８３,ＨＬＡ－ＤＲ等ＤＣ表面标志显著下降,而ＣＤ１４表达率明显高于常规培养组。同时,激发同种Ｔ细胞增殖的能力及分泌的ＩＬ－１２量均显著低于常规组（Ｐ〈０．０１）,而加入单核细胞来源的ＩＬ－８则无此     

Effects of vascular endothelial growth factor released from cultured dermal substitute on proliferation of vascular endothelial cells in vitro

Allogeneic cultured dermal substitute (CDS) was prepared by culturing fibroblasts on a two-layered spongy matrix of hyaluronic acid and atelocollagen. CDS can be cryopreserved and transported to other hospitals in a frozen state. The present study was designed to analyze the amounts of vascular endothelial growth factor (VEGF) released from fibroblasts in fresh and cryopreserved CDS and to investigate the effects of this VEGF on proliferation of vascular endothelial cells in vitro. The culture medium used in preparing CDS (fresh CDS culture medium sample) was collected and stored at –30°C for the quantitative analysis of VEGF. After thawing cryopreserved CDS, it was recultured in a culture medium for 1 week. The culture medium used was collected and stored at –30°C for quantitative analysis of VEGF. The amounts of VEGF released from the fresh and cryopreserved CDS into the culture medium were about 610pg/ml and 640pg/ml, respectively. This finding suggests that the cryopreserved CDS retains its ability to release VEGF. Immunohistological analysis indicated that some of the VEGF adhered to the matrix. Human vascular endothelial cells were cultured in medium mixed with the fresh or cryopreserved CDS culture medium sample. Proliferation of vascular endothelial cells was enhanced by increasing the concentration of both CDS culture medium samples. When antihuman VEGF antibody was added to the culture medium, the proliferative activity of vascular endothelial cells was reduced. These findings confirm that VEGF released from CDS promotes proliferation of vascular endothelial cells.     

血管内皮细胞的活化有利于造血干细胞的归巢

目的:探讨影响造血干细胞归巢的因素,为提高造血干细胞移植的效率奠定基础。方法:传代培养的血管内皮细胞长成单层后,用血管内皮细胞生长因子(VEGF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和脂多糖(LPS)激活内皮细胞,再将经过去除红细胞、粒细胞、单核细胞和T淋巴细胞而富集的脐血造血干细胞与内皮细胞共同培养,使之发生粘附。用双抗体夹心ELISA法测定C-Kit⁺的造血干细胞与血管内皮细胞的粘附情况。并比较VCAM-1单克隆抗体封闭血管内皮细胞对造血干细胞粘附的影响。结果:静息状态的血管内皮细胞能够与C-Kit⁺的造血干细胞发生粘附,但粘附率较低。用VEGF、G-CSF和LPS激活血管内皮细胞后,造血干细胞的粘附显著增加。用粘附分子VCAM-1单克隆抗体预处理激活血管内皮细胞后,造血干细胞的粘附明显下降。结论:激活的血管内皮细胞明显增加对造血干细胞的粘附,这种粘附与粘附分子的作用有关。     

阿托伐他汀钙对高血压大鼠血管内皮细胞的保护作用

目的:观察高血压状态下阿托伐他汀钙对SD大鼠胸主动脉血管内皮细胞的保护作用。方法:构建两肾一夹SD大鼠肾性高血压模型。研究动物随机分为高血压组、他汀治疗组和假手术组,每组8只,术后第4周他汀治疗组给予阿托伐他汀钙20mg·kg-1.d-1灌胃8周。术后第4、12周测血压、血脂,第12周通过扫描电镜方法观察胸主动脉内皮细胞层的完整性,检测血液中循环内皮细胞数量,并测定循环内皮祖细胞(CEPCs)的数量及增殖能力、黏附能力及凋亡情况。结果:他汀治疗组大鼠胸主动脉内皮细胞受损轻于高血压组,但重于假手术组,高血压组、他汀治疗组和假手术组大鼠循环内皮细胞数量(5.9×106、3.9×106、2.0×106)与CEPCs凋亡率(22.1%±2.1%、13.4%±1.6%、7.4%±1.3%)依次降低(均P0.01);而CEPCs数量(21.63±2.33、40.38±6.00、65.38±2.97)、CEPCs增殖能力(0.13±0.01、0.17±0.01、0.29±0.03)与CEPCs黏附能力(12.25±2.49、21.50±2.20、28.88±2.85)依次增高(均P0.01)。结论:(1)高血压状态可导致大鼠血管内皮细胞严重受损,CEPCs数量增加,而CEPCs数量与功能降低,凋亡率增高,继而引起CEPCs对血管内皮细胞的修复能力降低。(2)阿托伐他汀钙对血管内皮细胞具有直接保护作用,并可能通过提高CEPCs数量及功能、降低CEPCs凋亡、增强CEPCs对血管内皮细胞的修复能力而发挥作用。     

纤维蛋白对大鼠脑血管内皮细胞白细胞介素6表达的影响

目的：观察纤维蛋白对离体培养的大鼠脑血管内皮细胞白细胞介素6（IL-6）转录及蛋白水平表达的影响。方法：大鼠脑血管内皮细胞分离后培养，加入不同浓度的纤维蛋白，通过real-time PCR检测脑血管内皮细胞中IL-6转录水平，应用酶联免疫方法(ELISA)定量检测培养基和细胞裂解液中的IL-6水平。结果：加入不同浓度（0.03 g/L、0.1 g/L、0.3 g/L和1.0 g/L）的纤维蛋白24 h后，1.0 g/L纤维蛋白组的培养基中IL-6水平显著增高（P<0.01）；然后加入1.0 g/L纤维蛋白2、4、8、24 h，培养基中的IL-6水平均显著升高（P<0.05）；而加入不同浓度的胶原蛋白不引起IL-6水平的明显变化；real-time PCR结果显示，脑血管内皮细胞IL-6 mRNA的上调呈现出剂量和时间依赖性增加。结论：纤维蛋白是血管内皮细胞活化剂，可以上调大鼠脑血管内皮细胞中IL-6的表达，在蛋白和mRNA均呈现出剂量和时间依赖性增加。     

供体血管内皮细胞对小鼠-大鼠移植心脏存活时间的影响

目的 探讨供体血管内皮细胞对小鼠-大鼠移植心脏存活时间的影响.方法 分离小鼠血管内皮细胞并于移植前14 d注入大鼠阴茎背静脉2×106细胞/只或联合注射环磷酰胺20 mg/kg·d.异位小鼠-大鼠心脏移植后观察供心存活时间. 结果 成功分离小鼠血管内皮细胞,注射小鼠血管内皮细胞14 d后,移植心脏平均存活时间(10±1.414)min, 组化染色显示供心有IgM、C3沉积,血浆IgM、IgG、C3、C4较未注射血管内皮细胞组明显增高;联合使用环磷酰胺能延长供心成活时间(19.44±2.603 4)min(t=2.880,P ＜ 0.01).结论 外周静脉注射供体血管内皮细胞不能诱导延迟性异种移植排斥反应(DXR)的免疫耐受,却促使发生HAR.联合环磷酰胺可延长供心存活时间.     

白细胞介素-8研究进展

白细胞介素-8（IL-8）在趋化性细胞因子家族中属于C-X-C亚家族，IL-8是一个多种细胞来源的趋化性细胞因子，而且不同类型的细胞对不同的诱导剂的反应也不相同，因为由不同的实验室从不同的来源得到该因子，所以对于IL-8的许多不同的描述术语，对于IL-8的生理生化特性，目前已基本清楚，对于IL-8基因表达的调节，现认为主要是在转录水平的调控，并且发现其基因5′-侧翼区的AP-1，NF-кB及NF-IL-6结合位点是调节IL-8启动子功能的主要顺式作用元件，IL-8基因的表达需要这些元件之间高度的协同以达到有效的转录，IL-8受体则是一个由59KDa和67KDa亚单位组成的二聚体糖蛋白，存在于多种类型的细胞上，甚至包括一些不表达IL-8的细胞，IL-8的生物学活性并不表现出种族的特异性，IL-8可激活中性粒细胞，对T-淋巴细胞有趋化性并能刺激嗜碱性粒细胞，内皮细胞IL-8基因的表达除了受化学因子的调节外还受力学因素的影响，流体切应力诱导内皮细胞表达IL-8，可能在急性炎症和动脉粥样硬化的发生，发展过程中具有重要作用。     

Amyloid beta-peptide1-42 alters tight junction protein distribution and expression in brain microvessel endothelial cells

Alzheimer's disease is characterised by neuronal loss, numerous intraneuronal deposits of neurofibrillary tangles, senile plaques, and cerebrovascular amyloid deposits. The major component of senile plaques and cerebrovascular deposits is the 39-43 amino acid beta-amyloid peptide (Abeta). The effects of Abeta on cerebral endothelium and thus the blood-brain barrier remain unclear. Utilising endothelial cells isolated from rat cerebral cortex microvessels, we have examined effects of Abeta peptides on tight junction protein behaviour. The transmembrane tight junction proteins occludin, claudin-1 and claudin-5, as well as the cytoplasmic accessory proteins ZO-1 and ZO-2 displayed a continuous distribution at cell boundaries. Endothelial cells exposed to Abeta1-42 (20 microM) for 3 days showed a disrupted plasma membrane pattern of claudin-5 and ZO-2 with relocation to the cytoplasm. These effects were not seen with Abeta25-35 or Abeta1-40[Gln22] (Dutch type). Abeta1-42 treatment altered also protein expression: occludin was lower at 1st day, claudin-1 increased at all times, and ZO-2 increased after 1 day and then decreased. These data suggest that Abeta1-42 effects on tight junction protein complexes may alter blood-brain barrier integrity and contribute to the neuropathological sequelae of Alzheimer's disease.     

微重力对血管内皮细胞生物学特性的影响

微重力状态下,人体将表现出一系列的心血管去适应性反应.由于血管内皮细胞是血管壁最重要的组成部分,因此血管内皮细胞生物学特性的改变将与去适也性反应直接相关.研究微重力状态下血管内皮细胞生物学特性的改变对预防和治疗航天员心血管的去适应性反应尤为重要.