骨髓间充质干细胞复合聚乳酸-羟基乙酸材料治疗大鼠神经损伤的实验研究

目的 研究骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)及其分化的神经样细胞分别与聚乳酸-羟基乙酸(polylactic glycolic acid,PLGA)支架材料复合修复大鼠神经损伤的效果.方法 将BMSCs复合PIGA培养,通过扫描电镜观察BMSCs在PLG...     

静脉移植骨髓间充质干细胞治疗大鼠脊髓损伤的实验研究

细胞移植已成为目前脊髓损伤（SCI）修复研究的热点之一，本试验观察静脉移植骨髓间充质干细胞对脊髓损伤后功能恢复的影响并探讨其机理。     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后功能恢复影响的研究

目的 :探 讨骨 髓 间充 质干 细 胞(M SCs)移植 对 大鼠 受伤 脊 髓功 能恢 复 的影 响。方法 :32 只 成 年 W istar 大鼠随 机 分 成 对 照 组 和 移 植 组 ,用 改 良 的 A llen's 方 法 制 作 脊 髓 损 伤 模 型 (致 伤 能 量 75gcm ),1 周 后 分 别 在 脊 髓损伤 处注 入 生理 盐水 和 骨髓 间充 质 干细 胞悬 液 ,处 理后 1、4、8 周分 别 对两 组大 鼠 进行 动物 行 为学 和 脊 髓诱 发电位 检测 。结果 :处 理后 1周时 ,两 组动 物 脊髓 神经 功 能均 无明 显 恢复 ; 4、8 周时 , M SCs 移植 组 大鼠 斜板 试 验角度和 BBB 评 分 均 高 于 对 照 组 大 鼠 (P<0.01);脊 髓 诱 发 电 位 潜 伏 期 和 波 幅 明 显 恢 复 ,与 对 照 组 比 较 有 显 著 性 差异(P<0.01)。结 :M SCs移 论 植 可以 促进 大 鼠损 伤脊 髓 功能 的恢 复 。     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后功能恢复的影响

目的 观察骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对脊髓损伤修复的促进作用.方法 用改良Allen法制作大鼠脊髓损伤动物模型.随机分成对照组(A组),脊髓损伤9 d后脊髓内微量注射生理盐水溶液5μl;骨髓间充质干细胞移植组(B组),脊髓损伤9 d后脊髓内注射骨髓间充质干细胞悬液5μl.移植后7、14、28 d采用斜板实验、脊髓运动功能BBB评分法观察大鼠运动功能恢复情况,脊髓诱发电位的检测观察神经功能恢复,苏木素-伊红(HE)染色观察脊髓损伤处空洞面积的改变情况,免疫组织化学法观察移植的骨髓间充质干细胞的存活及分化情况,损伤部位神经纤维的再生情况.结果 移植后28 d,两组斜板倾斜角度差异有统计学意义[A组(44.96±5.70)度,B组(53.19±6.51)度,P＜0.05];两组BBB评分差异有统计学意义[A组(6.8±1.2),B组(10.1±3.5),P＜0.05].同时,两组MEP潜伏期差异有统计学意义[A组(4.69±0.47)ms,B组(3.97±0.83)ms,P＜0.05],两组SEP潜伏期差异有统计学意义[A组(4.19±1.97)ms,B组(2.60±0.92)ms,P＜0.05].两组神经轴突计数差异有统计学意义[A组(32.8±6.1)条/mm2,B组(39.0±4.6)条/mm2,P＜0.05].实验组可见明显星形胶质细胞和神经纤维再生,脊髓损伤处的空洞面积明显减小.结论 骨髓间充质干细胞可在脊髓损伤处分化为神经元和神经胶质细胞,能够减小脊髓损伤处的空洞面积,促进受损轴突的再生和运动功能的恢复.     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后氧化应激的影响

目的研究骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）移植对大鼠脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）后氧化应激的影响。方法取大鼠股骨和胫骨骨髓培养BMSCs并传代。参照Taoka方法制作30只大鼠脊髓压迫损伤模型,随机分为3组,损伤组（SCI）、假移植组（SCI＋生理盐水）、移植组（SCI＋BMSCs）。脊髓损伤30 min时,假移植组和移植组于损伤周围相应注射生理盐水和BMSCs。在损伤后第3天、7天、14天和28天,进行BBB（Basso-Beattie-Bresnahan,BBB）行为学评价。应用MTT方法检测血清中超氧化物岐化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）水平。结果脊髓损伤后,BMSCs移植第14天即可观察到大鼠后肢运动功能明显改善,第28天BBB评分有明显提高。与损伤组和假移植组大鼠相比,第7天、14天和28天移植组血中MDA水平降低（P〈0.05）;血中SOD水平较高（P〈0.05）。结论 BMSCs移植对SCI神经功能恢复有促进作用,其机制可能与其抑制氧化应激有关。     

骨髓间充质干细胞移植修复脊髓损伤的研究进展

脊髓损伤的治疗目前仍然是世界性难题,至今未能有理想的方法.随着对中枢神经再生研究的深入,尤其是1992年Revnolds等从成年鼠脑中首先分离出神经干细胞（NSC）,1998年Eriksson等证实成人脑部存在NSC后.人们对神经再生和神经疾病的治疗有了新的认识.然而内源性NSC在神经受损时因量少且缺乏正向信号的激活,无法进行组织修复;外源性NSC又不易获取,从活体组织中获得NSC具有危险性,而从胚胎中获得NSC又涉及伦理问题,不能满足大量的临床及实验需要,寻找一种新的神经干细胞或神经细胞的来源对于中枢神经系统移植治疗至关重要.     

骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤研究

20世纪90年代成功分离出骨髓间充质干细胞(BMSC)并移植用于治疗急性脊髓损伤动物模型,引起了广泛关注。BMSC移植治疗脊髓损伤的实验研究主要有单独移植、联合支架移植、联合细胞移植、联合药物移植及转基因干细胞移植等。该文就BMSC生物学特性、BMSC移植治疗脊髓损伤研究现状及进展作一简要综述。     

静脉移植骨髓间充质干细胞在大鼠损伤脊髓中的存活与分化

目的:探讨脊髓损伤后静脉移植骨髓间充质干细胞(bonemarrowstromalcells,BMSCs)治疗脊髓损伤的可行性。方法:体外分离、培养、扩增、纯化、BrdU(5-溴尿嘧啶)标记10只同种异体SD大鼠的BMSCs;WD法制成同种SD大鼠完全性截瘫的脊髓损伤动物模型,制模后7d随机分为A、B、C三组,A组22只,为应用BM-SCs移植组,B组22只,作为对照组,C组16只,作为空白对照组。A组经鼠尾静脉注射BMSCs悬液(2×106个/ml)1ml,B组经鼠尾静脉注射1mlL-DMEM液,C组作为空白对照组。注射后2、3、6周用免疫组织化学检测BMSCs在损伤段脊髓的存活、分布、分化情况并作计数观察。结果:A组移植后2、3、6周BrdU阳性的BMSCs主要分布于损伤段及邻近节段脊髓内;移植后2周BrdU阳性的BMSCs约占移植细胞数的4.9%,移植后3周占4.4%,移植后6周占2.9%。移植后2周,BMSCs形态大多变为圆形或椭圆形,部分阳性标记的细胞长出神经元样突起,约12.6%表达星形胶质细胞特异性蛋白GFAP,约5.4%表达神经元特异性核蛋白(NeuN)。B、C组损伤段脊髓内未见有BrdU阳性细胞。结论:脊髓损伤后静脉移植的BMSCs能在脊髓损伤灶内停留、存活,表现出对损伤灶的趋化性,部分存活的BMSCs可向神经元和星形胶质细胞分化,可用于脊髓损伤的细胞移植治疗。     

骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤的研究现状

目的综述有关骨髓间充质干细胞（marrow mesenchymal stem cells,MSCs）移植治疗脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）的新进展。方法广泛查阅近年来国内外相关文献,对MSCs生物学特性、移植治疗SCI的实验研究、移行机制、治疗机制和存在的问题进行讨论和分析。结果动物实验和临床研究表明,MSCs移植治疗SCI已有很大进展,移植治疗后,移植细胞能向损伤部位移行,并能分化为神经样细胞和分泌神经营养物质,具有促进损伤脊髓修复和神经功能恢复的作用,但也存在许多问题。结论MSCs移植治疗SCI是一种行之有效的方法,但仍有许多问题有待解决。     

3D打印组织工程支架联合骨髓间充质干细胞移植修复脊髓损伤

目的:通过组织学分析、免疫荧光染色、电生理检测和感觉运动功能评价等实验方法,探讨3D打印水凝胶支架联合骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）促进脊髓损伤功能恢复的有效性。方法:将10%的GelMA水凝胶和10 6 U的BMSCs悬液配置成的生物墨...     

骨髓间质干细胞的分离培养鉴定与生物学特性

目的 观察贴壁法分离提取大鼠乳鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)并进行体外扩增培养的可行性并探讨其生物学特性,为进一步实验研究作基础.方法 实验2008-01/06于南昌大学第一附属医院泌尿外科研究所完成.贴壁法分离培养SD大鼠乳鼠MSCs,经CD29、CD34、CD44、CD45鉴定MSCs,并绘制不同代数细胞生长曲线和贴壁率曲线分析其生物学特性.结果 ①原代细胞生长潜伏期略长,孵育24 h后小部分圆形单核细胞开始贴壁,48 h可见巢状克隆集落形成,贴壁细胞呈多形性,贴壁3d后增殖加快,9d后基本融合.②生长曲线及贴壁率曲线提示第2至第6代细胞接种存活率基本相同,生长曲线基本一致,而第7代以后细胞的生长速度渐缓,贴壁时间延长,细胞接种存活率也明显降低,并出现衰化现象.③免疫组化鉴定结果 显示CD29、CD44表达基本阳性,而CD34、CD45表达阴性.结论 贴壁法比较容易分离培养MSCs,为组织工程的应用提供了足够的种子来源,MSCs有一定的增殖能力但并不是无限的,而是随传代扩增逐渐衰化,因此了解和掌握MSCs的生物学特性为进一步研究应用打下基础.     

Stem Cell-Based Therapies for Spinal Cord Injury

Summary: Spinal cord injury (SCI) results in loss of nervous tissue and consequently loss of motor and sensory function. There is no treatment available that restores the injury-induced loss of function to a degree that an independent life can be guaranteed. Transplantation of stem cells or progenitors may support spinal cord repair. Stem cells are characterized by self-renewal and their ability to become any cell in an organism. Promising results have been obtained in experimental models of SCI. Stem cells can be directed to differentiate into neurons or glia in vitro, which can be used for replacement of neural cells lost after SCI. Neuroprotective and axon regeneration-promoting effects have also been credited to transplanted stem cells. There are still issues related to stem cell transplantation that need to be resolved, including ethical concerns. This paper reviews the current status of stem cell application for spinal cord repair.     

不同剂量的骨髓间充质干细胞移植与改善缺血心脏功能的量效关系

目的探讨不同剂量的骨髓间充质干细胞移植梗死的心肌与改善缺血心脏功能的量效关系。方法结扎F344大鼠的冠状动脉,制作大鼠心肌梗死模型,于模型建立1周后将32只大鼠采用随机数字表法分为4组,每组8只。将经5-溴脱氧尿苷(BrdU)标记的不同剂量的骨髓间充质干细胞,分别为1×103个(组1)、1×105个(组2)、1×107个(组3)注入心肌缺血区;对照组注射等量的无血清IMDM。于模型建立前、细胞移植前和细胞移植后4周采用超声心动图检测射血分数(EF)。细胞移植后4周行BrdU、闰盘连接蛋白(Connexin43)、肌球蛋白重链β(MHC)、平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)的免疫组织化学染色。计数α-SMA着色的功能小血管数量。结果细胞移植后4周,组1EF与对照组比较差异无统计学意义(0.34±0.16vs.0.36±0.15,P>0.05),组2EF较组1明显增高(0.54±0.20vs.0.34±0.16,P=0.004),组3EF较组2明显增高(0.71±0.24vs.0.54±0.20,P=0.018)。细胞移植后4周,组2BrdU和MHC双阳性的细胞个数明显多于组1(323.20±91.62个/高倍视野vs.51.75±27.58个/高倍视野,P=0.049),组3的细胞个数明显多于组2(409.75±106.65个/高倍视野vs.323.20±91.62个/高倍视野,P<0.001),对照组为0±0个/高倍视野。组1、组2和组3大部分移植细胞MHC、Connexin43染色呈阳性,心肌缺血区内可见大量α-SMA抗体,部分形态不规则。对照组和组1梗死区域有新生血管形成,组2较组1增多(28.38±12.79个/高倍视野vs.22.75±9.07个/高倍视野,P=0.015),组3较组2增多(35.63±13.27个/高倍视野vs.28.38±12.79个/高倍视野,P=0.002)。结论骨髓间充质干细胞移植能明显改善缺血心脏的功能,且心肌细胞新生和心功能改善的程度均呈现移植细胞剂量依赖性。     

骨髓间充质干细胞移植修复大鼠肝缺血再灌注损伤最佳剂量的研究

目的探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植修复大鼠肝缺血再灌注损伤的最佳剂量,为细胞移植修复肝缺血再灌注损伤提供前期的实验依据。方法采用全骨髓直接贴壁法分离培养BMSCs,取第4代细胞进行移植。将30只健康雄性Wistar大鼠建立肝缺血再灌注损伤模型后,随机分成空白对照组、5×10^5个组、1×10^6个组、2×10^6个组及3×10^6个组5组,每组6只。后4组大鼠均在建立肝缺血再灌注损伤模型后,立即抽取200μL细胞悬液（数量分别为5×10^5、1×10^6、2×10^6及3×10^6个）,通过门静脉注射;空白对照组大鼠注射等体积的PBS溶液。于移植术后24h采血检测血清天门冬氨酸氨基转移酶（AST）和丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平;取肝脏组织检测阿二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性及核因子-κB（NF-κB）p65蛋白的表达,并行HE染色。结果1×10^6个组和2×10^6个组与空白对照组、5×10^5个组及3×10^6个组比较,其AST、ALT及MDA水平均降低（P〈0．05）,而SOD活性均增高（P〈0．05）;NF-κBp65蛋白的表达均明显下调;肝组织的病理学损伤均改善。但该2组的AST、ALT、MDA及SOD水平比较差异均无统计学意义（P〉0．05）,且肝组织的病理学改变也无明显差别。结论大鼠BMSCs移植治疗肝缺血再灌注损伤的最佳剂量为1×10^6个细胞。     

骨髓间充质干细胞结合Masquelet技术治疗感染性骨缺损的临床疗效观察

目的 观察应用骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)结合Masquelet技术治疗感染性骨缺损的临床疗效.方法 回顾性分析2016年6月至2019年1月河南省洛阳正骨医院采用BMSCs结合Masquelet技术治疗的30例感染性骨缺损病人的临床资料.其中男2...     

BMSCs联合3D打印PLLA支架促进兔颅骨PDO的研究

目的探讨骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)促进骨膜牵张成骨(Periosteal distraction osteogenesis,PDO)的可行性。方法全骨髓贴壁培养法获取新西兰白兔BMSCs,体外扩增培养并进行成骨、成脂、成软骨诱导分化。用3D打印(Three-dimensional printing,3D printing)的左旋聚乳酸(Poly l-lactic acid,PLLA)支架牵张兔颅骨骨膜,在牵张期结束时,实验组于骨膜与颅骨间隙内注射兔BMSCs,对照组则注射等量生理盐水(Normal saline,NS)。分别在固定期后的4周和8周,对兔颅骨的牵张部位进行取材,行Micro-CT扫描和组织学染色,评价新骨形成情况。结果全骨髓培养法获取的兔BMSCs具有多向分化能力。Micro-CT显示实验组和对照组的牵张区域在4周和8周均有新骨生成,实验组在两个时间点的新生骨量(Bone volume,BV)、骨量/组织量(Bone volume/Tissue volume,BV/TV)、骨密度(Bone mineral density,BMD)、骨小梁数量(Trabecular number,Tb.N)和厚度(Trabecular thickness,Tb.Th)均明显高于对照组,骨小梁间隔(Trabecular separation,Tb.Sp)小于对照组。HE染色显示,实验组与对照组均有新骨生成,实验组新生骨小梁增厚增多,比对照组成熟,且与颅骨皮质的界线不明显。结论在兔颅骨PDO区域内注射自体BMSCs可以补充成骨细胞的不足,有利于骨膜牵张成骨。     

Review of Immune Function,Healing of Pressure Ulcers,and Nutritional Status in Patients with Spinal Cord Injury

Abstract

The immune, neural, and endocrine systems do not act autonomously; rather, multiple communicative pathways exist among the nervous, endocrine, and immune systems that facilitate physiological immunoregulation. Patients with spinal cord injury (SCI) have decreased natural and adaptive immune responses by 2 weeks after injury. In patients with SCI, adrenocorticotropic hormone (ACTH) and urine-free cortisol levels were increased while zinc and albumin levels were decreased, respectively. In addition, the surface markers α2, α3, α4, CD11 a, CD11 b, CD1S, CD 54, and CDS found on lymphocytes and α3, α4, CD11a, CD1S, and CDS surface markers found on granulocytes were also decreased in the patient population. Finally, the adhesion molecules binding ability in the SCI group was also decreased when compared with a control group. Overall, the investigation showed that patients with SCI have a decreased immune function, especially succeeding the SCI injury, an impaired nutrition status, and a decreased number of adhesion molecules, all of which contribute to delayed wound healing.     

Increased Osteoclast-Like Cells Formation in Long-Term Bone Marrow Cultures from Patients with a Spinal Cord Injury

Patients with a spinal cord section loose a significant amount of bone. After paraplegia, bone loss occurs below the lesional level and is the more dramatic in iliac bones and in the metaphyseal area of long bones. A peak of urinary calcium and hydroxyprolinuria is observed approximately 6 weeks after their lesion. To further understand the mechanisms underlying the bone damage, we used long-term bone marrow cultures to compare osteoclast-like (OCL-like) cell formation above and below the lesional level. Seven paraplegic, one quadriparetic, one quadriplegic patients and five normal subjects were investigated. Six weeks after their spinal cord section, the number of OCL-like cells formed in iliac bone marrow cultures was significantly greater than those formed in sternal bone marrow cultures for all paraplegic patients tested. No significant differences were seen between iliac and sternal bone marrow cultures for the quadriparetic, the quadriplegic patient, or for the five normal subjects. Conditioned media (CM) from iliac marrow of paraplegic patients increased OCL-like cell formation in normal bone marrow cultures. IL-1, TNF-alpha, IL-6, and PGE₂ were measured in the CM after 3 weeks of culture. IL-6 was found to be significantly higher in iliac CM compared with sternal CM in six out of seven paraplegic patients. In two patients, addition of an anti-IL-6 monoclonal antibody to the marrow cultures significantly decreased the number of OCL-like cells formed at 3 weeks. We conclude that paraplegia caused by a cord section locally induces an increase in the capacity of progenitors to form OCL-like cells in long-term bone marrow cultures. A locally increased IL-6 production in the marrow below the lesional level could be partly responsible for this observation. Received: 25 July 1997 / Accepted: 5 March 1998     

电针联合隔药饼灸治疗脊髓损伤后神经源性膀胱的疗效观察

目的:观察电针联合隔药饼灸治疗脊髓损伤后神经源性膀胱的临床疗效。方法:选取2016 年8 月—2019 年5 月我院收治的72 例脊髓损伤后神经源性膀胱患者为研究对象。按随机数字表法分为观察组和对照组,每组36 例。对照组在采用膀胱功能训练等常规治疗基础上给予隔药饼灸治疗,观察组在对照组基础上加用电针治疗。治疗4 周后,比较两组患者膀胱最大容量、膀胱残余尿量、尿常规阳性率和总有效率。结果:两组患者膀胱最大容量均高于治疗前,且治疗前后差值观察组明显大于治疗组,差异有统计学意义(P ＜ 0.05);两组患者膀胱残余尿量均低于治疗前,且治疗前后差值观察组明显大于对照组,差异有统计学意义(P ＜ 0.05)。在治疗第3、4 周后,观察组患者的尿常规阳性率明显低于对照组,差异有统计学意义P ＜ 0.05)。观察组总有效率为83.33%,明显优于对照组63.89%,差异有统计学意义(P ＜ 0.05)。所有患者治疗过程中无不良反应发生。结论:电针联合隔药饼灸治疗脊髓损伤后神经源性膀胱疗效满意,并具有安全、方法简易、易于实施的优点,是一种值得推荐的中医外治法,适合在临床上推广和应用。