成年大鼠视网膜中脑红蛋白表达的亚细胞分布

目的:电镜下观察正常成年大鼠视网膜中脑红蛋白(Ngb)的表达。方法:用电镜免疫金-银细胞化学法研究Ngb在成年大鼠视网膜中的亚细胞定位。结果:Ngb在视网膜除外核层和视锥视杆层的外节段以外的其它各层均有分布。在细胞层Ngb定位于细胞的胞质内,线粒体周围多见,内质网和高尔基复合体的管腔外侧也可见Ngb阳性着色;在丛状层Ngb分布于突触前成分的突触小泡之间。结论:Ngb的特殊亚细胞分布提示其与神经元供氧的紧密关系。     

斑马鱼视网膜感光细胞的发育及视蛋白的表达

目的研究斑马鱼视网膜感光细胞的发育和视蛋白的表达，明确利用斑马鱼研究视网膜和感光细胞的可行性。方法制备斑马鱼视网膜感光细胞视蛋白（视杆细胞视紫质、视锥细胞紫外线视蛋白和视锥细胞蓝色视蛋白）的RNA探针。收集受精后72，96，120h的斑马鱼眼球组织进行切片、电镜观察和整体原位杂交。结果斑马鱼的神经视网膜分层排列，包括3个细胞层和2个丛状层。随时间发展，视网膜的发育逐渐成熟，3个细胞层的细胞排列更加整齐，感光细胞的外节盘发育更加成熟，3种视蛋白的表达逐渐增强，范围扩大。结论利用斑马鱼进行视网膜和感光细胞的研究是可行的，视蛋白可作为感光细胞的标记。     

兔眼视网膜下注射N-甲基右旋天冬氨酸诱导视网膜变性的组织病理学研究

目的研究视网膜下注射兴奋性氨基酸N-甲基右旋天冬氨酸（NMDA）对神经细胞变性的作用。方法取12只1个月龄有色家兔,视网膜下注射10μl（30mmol／L）NMDA（溶剂为DMEM-F12）,形成视网膜隆起,在注射12、24、48h及1周后分别处死家兔,取其视网膜组织进行免疫组织化学检测和电镜观察。应用抗Calretinin、Calbindin、PKCα抗体,分别标记视网膜无长突细胞、水平细胞及视杆双极细胞;采用原位缺口末端标记技术（TUNEL）技术标记凋亡细胞。结果损伤早期（12～24h）,实验组视网膜可见散在细胞核固缩浓染的光感受器细胞,并有无长突细胞和神经节细胞的早期严重变性;中期（48h）视网膜各层神经元均出现病理性改变;损伤晚期（1周）视网膜各层细胞数目明显减少。损伤早期,TUNEL技术标记的阳性细胞位于视网膜各层。免疫组织化学和形态学计量资料显示视网膜下注射NMDA后,水平细胞、无长突细胞及神经节细胞数目明显减少,视杆双极细胞数目基本无变化。超微结构观察显示有凋亡、坏死、水肿变性及混合型细胞死亡等多种变性形式。结论视网膜下聚集NMDA时,光感受器细胞、水平细胞、视杆双极细胞、无长突细胞及神经节细胞均表现为视网膜兴奋性毒性反应,与以往体内及体外研究结果显示的仅有内核层神经元死亡情况不同。     

鼠视网膜感光细胞移植术后超微结构观察

目的 以遗传性视细胞变性动物ＲＣＳ鼠为受体,Ｗｉｓｔａｒ鼠为供体,观察纯视锥、杆细胞移植术后ＲＣＳ鼠视网膜外层超微结构的变化。方法 应用视网膜板层切削技术或准分子激光技术制备供体层状视细胞;视网膜板层外路移植技术,获得视网膜移植动物模型。术后２周及４周时处死动物,眼球常规切片后于光镜及透射电镜下观察受体视网膜。结果 移植的视细胞大多成层排列于受体鼠的视网膜色素上皮层及内颗粒层之间。重新出现的外网状     

自主感光视网膜神经节细胞与彩色光瞳孔测量

自主感光视网膜神经节细胞（ipRGCs）是除视杆细胞、视锥细胞以外的第三类光感受器细胞,位于视网膜内层,由于其内含黑视蛋白,故具备自主感光能力。瞳孔对光反应（PLR）主要由ipRGCs介导产生。ipRGCs可通过黑视蛋白直接感受光信号产生PLR,也可被来自视杆、视锥细胞的信号激活产生PLR。由于视杆细胞、视锥细胞和黑视蛋白产生的PLR各具特点,可采用不同强度和波长的光信号选择性刺激视杆细胞、视锥细胞和黑视蛋白,通过对产生的PLR进行分析可间接反映视杆细胞、视锥细胞和含黑视蛋白的ipRGCs的功能,这一方法称为彩色光瞳孔测量。现主要对ipRGCs介导PLR的通路、视杆/视锥细胞和黑视蛋白引起的PLR特点、彩色光瞳孔测量及其临床应用作一综述,希冀为相关眼科疾病的诊断及鉴别诊断提供新思路。     

晚期青光眼视网膜超微结构的观察

目的 为研究青光眼视网膜的病理改变。方法 用透射电镜观察了６例（６只眼）晚期青光眼的视网膜超微结构的改变。结果 发现视网膜神经纤维层明显变薄，轴突严重破坏并丧失，神经节细胞几乎消失，可见大量细胞样体。视网膜内、外核层神经细胞数目减少、变性、排列紊乱，视杆、视锥细胞外节变性水肿。结论 提示青光眼的病理改变主要是神经节细胞及其轴突变性、萎缩。这些病理改变导致青光眼视功能永久性损害。     

家兔视网膜缺血-再灌注损伤后形态学的动态变化

目的　观察家兔视网膜缺血 -再灌注后视网膜结构的动态变化。方法　通过前房灌注加压至 16 .7k Pa,维持 1h,建立缺血模型 ,观察再灌注 2～ 14d内其结构变化及内层视网膜平均厚度的变化。结果　家兔视网膜在缺血 -再灌注后 2～ 14d内表现为神经细胞持续丢失 ,视网膜层次逐渐不清 ,萎缩、变薄。其中神经节细胞、神经纤维及视锥、视杆对缺血最敏感 ,外颗粒层次之 ,内颗粒层最能耐受缺血 -再灌注后的损伤。结论　视网膜缺血 -再灌注损伤是个持续性、进行性的损伤过程 ,与功能变化相一致     

大鼠骨髓间充质干细胞视网膜下移植观察

目的：鉴定骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs)在体外不诱导的条件下视网膜下移植后的定位。方法：体外培养雄性大鼠MSCs，直接作为细胞供体视网膜下移植于成年雄性大鼠视网膜下，4周后将动物处死，取眼球做石蜡切片，用Y染色体鉴定，为做进一步验证，将MSCs用重组腺相关病毒AAV－gfp感染后移植，分别于4、8周取动物眼球作冰冻切片，于荧光显微镜下做绿色荧光蛋白（green fluorescence protein，GFP）表达观察。结果：培养的MSCs集落生长迅速，均一性好；Y染色体原位杂交鉴定表明来源于MSCs的阳性细胞融合入了原来的视网膜结构，在光学显微镜下可分布于视锥，视杆细胞层，双极细胞层及节细胞层；在荧光显微镜下可见GFP标记的阳性细胞存在，分布于视网膜色素上皮层、视锥，视杆细胞层，双极细胞层及节细胞层，细胞形态与结构同周围的视网膜相似；2种标记方法检测到的视网膜结构完整，未见到玫瑰花结样结构。结论：MSCs可在视网膜下移植后4周与原视网膜结构相融合，2种方法检测到的阳性细胞分布于视网膜色素上皮层，视细胞层，双极细胞层及节细胞层。     

不同激光强度经瞳孔温热疗法对色素兔视网膜细胞凋亡的影响

目的 观察不同激光能量的经瞳孔温热疗法（TTT）对色素兔视网膜的病理损伤及对细胞凋亡的影响。 方法 将14只有色家兔随机按不同激光能量分为空白组、50、70、90、110、130、150 mW组，每组2只兔4只眼行TTT治疗照射后,分别于24、48 h后取视网膜组织进行光学显微镜检查及用原位末端转移酶标记（TUNEL）技术和流式细胞仪检测细胞凋亡。 结果 直接检眼镜下激光反应斑颜色随能量增加由灰变白逐渐变浅，即由灰白——白——浓白，直径逐渐增大。苏木素 伊红（HE）染色：50~70 mW组光学显微镜下视网膜各层结构无明显改变；90~130 mW组视网膜结构完整,视锥、视杆细胞肿胀，内颗粒层可见少量的固缩核和细胞浆空泡化。以上能量组激光照射后24、48 h，光学显微镜下视网膜结构与空白对照组无明显差别。150 mW组激光照射后24 h视网膜组织各层肿胀、变性，感光细胞内外节部分缺失；而激光照射后48 h视网膜组织可见明显坏死，全层均可见细胞缺失。TUNEL检测结果显示，各能量组外颗粒层均可见阳性细胞，随激光能量的增加而增加，并逐渐累及内颗粒层和神经节细胞层。流式细胞仪检测结果显示，激光照射后24 h，各能量组均可见细胞凋亡峰。 结论 兔视网膜在能量为50~70 mW的TTT照射后，视网膜组织未见明显改变，但感光细胞凋亡显著增加。随着TTT激光能量增加，视网膜组织出现肿胀、变性甚至坏死。细胞凋亡逐渐累及内颗粒层和神经节细胞层。 (中华眼底病杂志, 2006, 22: 249-252)     

大鼠尾芽胚视杯干细胞的分布与特征

目的探索视杯干细胞在大鼠尾芽胚(第12.5天胚龄)的分布与特征。方法采用免疫组织化学技术，检测视杯干细胞在大鼠尾芽胚(第12.5天胚龄)视杯组织中的分布；分离视杯细胞，体外无血清培养，应用免疫细胞化学技术分析其增生能力以及血清诱导分化前后CHX10和多种成熟视网膜细胞特异性标记蛋白的表达，以了解这一发育时期视杯组织的分化特点。结果大鼠尾芽胚(第12.5天胚龄)的视杯干细胞主要分布在视杯的内外层和边缘层，不表达成熟视网膜细胞特异性标记蛋白。从尾芽胚视杯中分离出的细胞具有单细胞克隆能力，CHX10表达阳性，血清诱导后表达多种成熟视网膜细胞特异性标记蛋白：Thy1.1、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、蛋白激酶C(PKC)α和rhodopsin。结论大鼠尾芽胚(第12.5天胚龄)视杯主要由未分化的细胞组成，视杯干细胞的分布集中在视杯内层和边缘层。体外培养的视杯干细胞增生能力强，经诱导分化后表达多种成熟视网膜细胞特异性标记蛋白。(中华眼底病杂志,2005,21:159-162)     

人视网膜发育分化过程中基质金属蛋白酶9表达的变化

目的 观察人视网膜发育和分化过程中基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达水平与细胞分布特点,探讨其在人视网膜发育和分化过程中的可能作用.方法 胚胎发育早期、中晚期及成人视网膜石蜡切片,抗MMP-9免疫组织化学染色,观察MMP-9表达水平和分布的变化.结果 胚胎发育早期的视网膜仅在外成神经细胞层的外侧可见弱阳性细胞;胚胎发育中期外成神经细胞层的外侧,即将来要发育成盘膜处出现明显的特异性染色,而其他细胞染色仍然较弱;成人视网膜的外核层出现显著的特异性染色细胞,胞质明显着色,胞体轮廓清晰,并可观察到锥体的结构以及突触的特异染色,判断这些细胞主要是光感受器细胞中的视锥细胞.结论 MMP-9在视网膜中的表达与视网膜的成熟和细胞分化关系密切,在光感受器中的视锥细胞高水平表达,提示MMP-9可能参与视觉信号的处理.     

小鼠实验性视网膜脱离后光感受器细胞的凋亡

目的 研究小鼠实验性视网膜脱离后光感受器细胞的凋亡情况。 方法 将成年C57Bl/6J小鼠36只分为2组：实验组小鼠18只左眼视网膜下注射1.4%透明质酸钠造成视网膜脱离，对照组小鼠18只左眼仅作巩膜穿刺。分别于手术后1、3、7和28 d摘除眼球，视网膜切片进行组织化学、免疫荧光染色，共聚焦显微镜检查。抗视锥和抗视杆细胞的抗体分别标记视锥和视杆细胞，dUTP缺口末段标记法(TUNEL)标记凋亡细胞。通过计数存活和凋亡的视锥和视杆细胞来定量光感受器细胞的凋亡和细胞丢失。 结果 凋亡细胞只存在于脱离部分视网膜的外核层，凋亡细胞在视网膜脱离后1 d即可检测得到，3 d时达到高峰，7 d后陡然减少。视网膜脱离后视杆和视锥细胞的死亡呈现同样的时程。 结论 凋亡是视网膜脱离后光感受器细胞死亡的主要病理改变。 (中华眼底病杂志, 2006, 22: 124-127)     

大鼠骨髓间充质干细胞视网膜下移植的短期观察

目的探索骨髓间充质干细胞（MSCs）视网膜移植的可行性。方法采用贴壁筛选法分离、培养SD大鼠骨髓MSCs，将溴脱氧尿嘧啶（BrdU）标记的大鼠MSCs悬液经玻璃体腔注入大鼠视网膜下腔。术后14d处死大鼠，取新鲜眼球，连续冰冻切片，经BrdU单抗、FITC标记二抗和Rhodopsin单抗、Cy3标记二抗免疫荧光双重标记后，荧光显微镜下观察。结果荧光显微镜下可见移植后的MSCs主要分布于视网膜色素上皮层和视锥、视杆细胞层，未表达视网膜光感受器细胞的特异性抗原视紫红质。结论移植14d后MSCs可在视网膜下腔存活，主要分布于视网膜色素上皮层和视锥、视杆细胞层，未分化成视网膜光感受器细胞。     

正常婴儿的闪光视网膜电图特性

目的：探讨4至5个月龄正常婴儿视网膜功能特性。方法：选取正常4个月龄婴儿17例(34只眼)、5个月龄婴儿13例(26只眼)和正常成年对照39例（78只眼)进行闪光视网膜电图（electroretinogram,ERG)检测，记录视杆细胞反应、视锥细胞反应及最大混合反应。对比分析两个婴儿组的ERG各个反应的b波振幅及潜伏期，并与正常成人组作比较。结果：两个正常婴儿组ERG各个反应的b波振幅和潜伏期与正常成人组相比都有非常显著差异，婴儿组的振幅低、潜伏期长。两个正常婴儿组之间相比，视锥反应有显著性差异，5个月龄组振幅较高，潜伏期较短；而视杆反应和最大混合反应无显著性差异。4个月和5个月龄婴儿组的视杆反应b波平均振幅分别为正常成人38．9％和36．7％，而视锥反应b波的平均振幅分别为正常成人的62．6％和71．5％。结论：在4至5个月龄期，婴儿ERG的各个反应都没达到正常成年人水平。视锥细胞反应与视杆细胞反应相比，在4至5个月龄期，增长得更快，发育得更成熟。     

蛋白激酶Cα亚型在视网膜视杆-双极细胞发育过程中表达规律的体外实验研究

目的明确新生小牛视网膜视杆-双极细胞体外发育过程中蛋白激酶Cα亚型(PKCα)的表达规律。方法分离培养新生小牛视网膜神经细胞,培养10、20、30和40 d的神经元用于免疫细胞化学染色,采用PKCα抗体标记视网膜视杆-双极细胞,用图像分析系统定量测量阳性细胞的免疫反应强度。结果培养10 d时,PKCα阳性神经元只有1~2个较短的神经突起;到培养20 d时,阳性细胞的一端为1个细长的神经突起,相对的另一端为丛状的短的树状突起,培养30 d及40 d的神经元保持培养20 d时神经元的形态特征。不同培养阶段的阳性细胞中PKCα免疫反应物质均位于细胞体和神经突起,定量分析显示培养20 d的阳性细胞免疫反应强度最高,培养30 d和40 d时阳性细胞PKCα免疫反应强度下降。结论培养20 d的视杆-双极细胞具备细胞形态和免疫反应特性上的成熟特征,PKCα的表达水平最高,为发育成熟的神经元。培养30 d以后,视杆-双极细胞逐渐衰老。实验结果为选择合适的供体材料进行视网膜移植提供了理论依据。     

改良法制作的视网膜切片内核层神经元的形态和电学特性

目的:探讨低温琼脂包埋振动切片机切片法制作的大鼠视网膜切片内核层神经元的形态和基本电生理学特性。方法:采用低温琼脂包埋振动切片机切片的方法制作大鼠视网膜切片,对内核层的神经元进行膜片钳全细胞记录,同时在胞内液中加入荧光黄观察记录细胞的形态。结果:该方法制作的视网膜切片切面平整、细胞活性好、保留了细胞之间的突起联系,能够根据细胞胞体的大小、位置初步辨别细胞的种类。在视网膜切片上荧光黄显示的细胞形态表明,双极细胞胞体呈梭形,突起主要沿纵向延伸;而水平细胞和无长突细胞胞体圆形或椭圆形、胞体较大,分别位于内核层的最外层和最内层。水平细胞和无长突细胞的静息膜电位(RMP)和膜电容(Cm)明显高于双极细胞。给予时程40ms,步阶10mV从-60mV至+40mV的电压刺激,41.7%的视锥双极细胞和64.7%的无长突细胞表现出内向钠电流和外向钾电流,其他细胞则只表现出外向钾电流。结论:采用低温琼脂包埋振动切片机切片的方法操作简单,制作的切片质量稳定可靠,使得在视网膜切片上对包括水平细胞在内的不同内核层神经元进行膜片钳记录成为可能。进一步研究视网膜内核层神经元的电生理学特性,有助于揭示视觉信号的发生、传导和调控机制。     

鸡胚视网膜细胞RNA合成的放射自显影研究

目的　研究视网膜细胞发生过程中的形态变化与RNA合成代谢的关系。方法应用光镜放射自显影技术 ,对 1、2、3、4、7d鸡胚视网膜氚标尿嘧啶的分布进行了观察。结果　视杯各部的氚标尿嘧啶银颗粒数均随胚龄增加而增多 ,以前部最为显著 ;标记细胞的银颗粒主要分布在细胞核内。结论　伴随视网膜细胞的分化成熟 ,RNA的合成数量和区域分布表现为明显的动态变化。     

新感光视蛋白视黑质的研究进展

视黑质是一种新近发现的、主要分布于视网膜神经节细胞的光感受器视蛋白,这一发现打破了一直以来持有的光感受器视蛋白仅分布于视杆和视锥细胞的观点。与经典的感光视蛋白功能不同,视黑质的主要功能是参与引发昼夜节律变化、瞳孔对光反应、体内激素水平的变化等非视觉成像光反应。本文就视黑质的形态和功能特点等作一综述。     

人和小鼠视网膜双极细胞的形态及功能比较

目的比较人和小鼠视网膜视杆双极细胞形态和药物模拟对光反应的电流特性。方法实验研究。对视网膜冰冻切片行免疫荧光染色,用PKC-α抗体标记视网膜视杆双极细胞,以观察其形态分布特点。在灌流充氧的情况下制备视网膜薄片切片,行视网膜ON型以及OFF型双极细胞的全细胞膜片钳记录。分别在ON型双极细胞和OFF型双极细胞上给予快速加药40 µmol/L LY3414925或100 µmol/L AMPA,诱导出谷氨酸电流,以记录双极细胞模拟对光反应,并比较人和小鼠的谷氨酸电流动力学的差异,人和小鼠各项数据比较采用非参数检验（Mann-Whitney检验）进行处理。结果人和小鼠的视网膜视杆双极细胞形态分布相似,但PKC-α表达略有不同。膜片钳结果显示人视网膜ON型双极细胞的模拟对光反应的上升相的达峰时间为（1.91±0.11）ms,与小鼠视网膜ON型双极细胞[（0.83±0.08）ms]相比明显较长（U=0.00,P＜0.01）,而人视网膜ON型双极细胞的模拟对光反应恢复时间为（1.34±0.40）ms,明显短于小鼠[（20.06±3.07）ms]（U=0.00,P＜0.01）。但人和小鼠视网膜OFF型双极细胞电流动力学即电流幅度[人：（143.0±2.1）pA;小鼠：（136.3±2.2）pA]、反应上升时间[人：（1.91±0.35）ms;小鼠：（1.28±0.52）ms]和恢复时间[人：（220.5±10.8）ms;小鼠：（168.1±29.3）ms]差异均无统计学意义。结论 视杆双极细胞在人和小鼠视网膜中分布位置和形态大致相似。人和小鼠视网膜ON型双极细胞电流特性有差异。     

视网膜干细胞移植任重而道远

进行性视网膜感光细胞的死亡是许多视网膜变性疾病的共同特征。现有的治疗方法不能恢复已经丧失的视功能。视网膜干细胞移植研究的不断深入在为视网膜变性患者带来希望的同时也面临一些严峻挑战：如何获得理想的视网膜干细胞？如何诱导视网膜干细胞分化成视杆及视锥细胞？如何诱导移植的细胞与受体细胞形成功能性突触连接？感光细胞丧失的早期,内部的视网膜神经通路是完整的,新的感光细胞只需与双极细胞形成突触连接就能恢复完整的视网膜神经通路。而感光细胞替换通常比其它神经元更直接更容易。因为感光细胞是感觉神经元,只在一个方向上与双极细胞一水平细胞形成连接。另外,视网膜特殊的层状结构决定了视网膜外层的感光细胞层是视网膜干细胞移植最理想的位置。视网膜干细胞研究的进展、视网膜变性疾病的特征及视网膜的特殊结构让我们有理由相信,干细胞移植的成功将首先来自视网膜感光细胞移植。