长沙地区淋病奈瑟菌的耐药性及耐药性质粒分型研究

目的：了解长沙地区淋病奈瑟菌对抗生素的敏感性以及耐青霉素和耐四环素性质粒的流行情况。方法：采用纸片扩散法检测80株淋病奈瑟菌对7种抗生素的敏感性；碱裂解法分析产青霉素酶的淋病奈瑟菌（PPNG）株及耐四环素的淋病奈瑟菌（TRNG）株的质粒图谱；PCR扩增tetM基因片段，并经测序分析其基因型。结果：在测定的7种抗生素中，耐药性最高的为环丙沙星，耐药率为86．25％，敏感性最高的为大观霉素，为100％；PPNG和TRNG的检出率分别为50.0％和27．5％；40株PPNG株质粒电泳后发现除1株为非洲型耐青霉素质粒外，其余均为亚洲型耐青霉素质粒；22株TRNG株的PCR产物电泳条带均在约443bp处，取典型株经DNA测序分析与荷兰型tetM基因具有96％～98％的同源性。结论：质粒介导的淋病奈瑟菌对青霉素和四环素的耐药已普遍存在，本次研究中介导的耐青霉素和耐四环素质粒分别以亚洲型和荷兰型为主。     

淋病奈瑟菌对氟喹诺酮的耐药性及GyrA耐药基因突变类型的研究

目的探讨江苏省淋病奈瑟菌(NG)对氟喹诺酮的耐药状况、耐药基因突变型的分布情况及二者之间的关系。方法采用琼脂稀释法检测江苏省三个地区临床分离的95株NG氟喹诺酮类药物的最小抑菌浓度(MIC),根据结果抽取部分菌株采用PCR法扩增gyrA基因的氟喹诺酮耐药决定区(QRDR),并进行测序分析。结果根据所测MIC,95株NG对环丙沙星100%的耐药;60株通过测序分析,检测到gyrA的五种突变形式,以gyrA出现272位碱基C→T和283位G→A的突变型的MIC最高。结论在江苏省,NG对氟喹诺酮耐药严重,氟喹诺酮药物已不再适合用于临床治疗淋病。     

2019～2022年重庆地区淋病奈瑟菌的耐药性分析

目的 分析2019～2022年重庆地区242株淋病奈瑟菌对抗生素的耐药性,为临床合理用药提供依据。方法 从患者尿道或阴道分泌物中分离收集淋病奈瑟菌,利用微量肉汤稀释法分别检测青霉素、四环素、环丙沙星、大观霉素、头孢曲松、阿奇霉素和头孢克肟七种抗菌药物对淋病奈瑟菌的最小抑菌浓度（MIC）及菌株对药物的敏感性;利用纸片酸度法测定β-内酰胺酶（PPNG）。结果 242株淋病奈瑟菌中,PPNG和耐四环素淋球菌（TRNG）阳性检出率分别为59.50%和40.91%,对环丙沙星、四环素、青霉素和阿奇霉素耐药率分别为99.17%、92.56%、66.53%、17.36%。大观霉素、头孢曲松、头孢克肟低敏菌株分别占0.83%、7.02%、9.50%,且后两者的比例存在逐年增加的趋势。结论 淋病奈瑟菌对大观霉素、头孢曲松和头孢克肟敏感度较高,可作为重庆地区治疗淋病的首选用药,但考虑头孢曲松和头孢克肟低敏株正在逐年增加,因此长期密切监测其耐药动态十分必要。     

淋病奈瑟球菌的耐药性分析

目的:对228例淋病患者淋病奈瑟球菌的耐药性进行探讨分析。方法:对淋病奈瑟球菌采用纸片扩散法(K-B法)进行检测,对β内酰胺酶采用头孢硝噻吩纸片法进行检测。结果:228株淋病奈瑟球菌中,来自宁海县中医医院的有72株,其中β内酰胺酶检测阳性的有19株;来自湖州市妇幼保健院的有156株,其中β内酰胺酶检测阳性的有41株。所有检测为阳性的菌株在228株菌株中占26.32%。来自所有的淋病奈瑟球菌菌株对5种抗菌药物的耐药性有明显的区别,菌株对四环素、青霉素和环丙沙星的耐药性比较高,对头孢曲松、大观霉素的耐药性比较低一些。结论:根据研究数据,在临床上应当避免使用四环素、青霉素等作为抗菌的首选药物,应适当选取头孢曲松、大观霉素作为临床治疗淋病奈瑟球菌感染的首选药物。     

南宁地区2000～2007年淋病奈瑟菌耐药性监测分析

目的研究南宁地区2000-2007年淋病奈瑟菌对临床常用几种抗生素的耐药性及产青霉素酶淋病奈瑟菌（PPNG）和高水平耐四环素淋病奈瑟菌（TRNG）的流行情况，为制定防治策略和治疗方案提供参考依据。方法对临床分离的694株淋病奈瑟菌进行系统鉴定后，用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度（MIC），用纸片酸度定量法测定β-内酰胺酶。结果在检测的694株淋病奈瑟菌中检出PPNG阳性77株（11．10％），TRNG阳性389株（56．05％），对环丙沙星、头孢曲松和大观霉素的耐药率分别为90．92％，0．86％和0．14％。结论南宁地区淋病奈瑟菌耐药形势严峻，其中对环丙沙星的耐药最为严重，且PPNG菌株和TRNG菌株流行严重，对大观霉素和头孢曲松仍较敏感。     

体外诱导解脲脲原体对喹诺酮类药物交叉耐药的研究

目的 探讨经次抑菌浓度喹诺酮类药物多代培养后,解脲脲原体（Uu）敏感株对喹诺酮类药物敏感性的变化及其机制.方法 将3株Uu临床分离株及标准株Uu3在含有次抑菌浓度诺氟沙星、氟罗沙星、环丙沙星或左氧氟沙星的液体培养基中传代培养10-12代后,检测其对4种药物的MIC值.提取标准株及耐药株的DNA,PCR扩增喹诺酮耐药决定区的gyrA和parC基因,测序分析耐药株的基因突变情况.结果 经次抑菌浓度喹诺酮类药物多代培养诱导后,3株临床分离敏感株与Uu3均出现对诱导药物的耐药及交叉耐药,共诱导出16株药物诱导耐药株.在它们及9株临床分离耐药株中,parC基因未检出错义突变,但gyrA基因检出2种错义突变,即：V175A（n=8）和N165D（n=1）.结论 次抑菌浓度喹诺酮类药物可诱导解脲脲原体出现交叉耐药,其产生可能与gyrA基因突变有关.     

淋病奈瑟菌137株对5种抗菌药物的耐药性结果分析

目的 了解本院泌尿生殖道淋病奈瑟菌的感染情况,并对其常用抗菌药物的耐药性进行分析,以指导临床合理用药,并为本院淋病防控提供依据.方法 回顾性收集并分析本院2012年1月-2020年12月分离的137株淋病奈瑟菌对青霉素、头孢曲松、环丙沙星、四环素和大观霉素等5种常见抗菌药物的耐药情况,其中药敏试验采用K-B法,对所获数...     

琼海地区淋病奈瑟菌的耐药性分析

目的了解本地区泌尿生殖道患者感染淋病奈瑟菌的情况,以及对常见抗菌药物的耐药性,为临床合理用药提供科学依据。方法采用常规淋病奈瑟菌培养分离技术;运用生物梅里埃公司VITEK-2 compact全自动细菌鉴定仪上机鉴定;药敏试验方法采用K-B纸片法,操作方法参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)规定的标准执行。结果 2010～2016年共培养分离出210株淋病奈瑟菌,对6种抗生素的耐药率依次为环丙沙星93.5%、四环素87.1%、青霉素71.9%、头孢呋辛6.5%、头孢曲松0.0%、大观霉素0.0%。结论在淋病奈瑟菌感染患者中,环丙沙星、四环素、青霉素的耐药率较高,不宜作为一线药物应用。第二、第三代头孢菌素、大观霉素的耐药率较低,可作为本地区治疗淋病的首选药物。     

人型支原体对8种药物的敏感性及喹诺酮类药物耐药基因gyrA突变的研究

目的：检测人型支原体(Mh)对8种药物的敏感性，并检测喹诺酮类药物耐药株gyrA基因突变情况。方法：应用微量肉汤稀释法检测Mh对8种药物的敏感性，用PCR和DNA测序及序列比较检测基因突变。结果：大环内酯类药物中只有交沙霉素抗Mh活性较强，MIC50和MIC90分别为0．25μg／ml和0．5μg／ml，四环素类药物中多西环素的抗Mh活性优于四环素，MIC50仅为0．06μg／ml，MIC90仅为1μg／ml；喹诺酮类药物环丙沙星和氧氟沙星的抗Mh活性较强。基因序列分析表明gyrA基因碱基113位C到T的突变为有义突变，导致所编码的83位丝氨酸被亮氨酸替代，其余均为同义突变。结论：8种药物中以交沙霉素、多西环素、环丙沙星和氧氟沙星的抗Mh的活性较强；gyrA基因113位碱基C到T的突变与Mh耐喹诺酮类药物密切相关。     

淋病奈瑟菌129株耐药性分析

目的监测海口地区淋病奈瑟菌对常用抗生素的耐药状况。方法收集本院性病门诊2004年11月--2007年6月患者泌尿生殖道分泌物中分离的淋病奈瑟菌共129株，用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度（MIC），用纸片酸度法测定β-内酰胺酶。结果产青霉素酶淋病奈瑟菌（PPNG）阳性28株（21．71％），高水平耐四环素淋病奈瑟菌（TRNG）阳性45株（34．88％）；环丙沙星耐药127株（98．45％），大观霉素和头孢曲松未发现耐药菌株。结论海口地区的淋病奈瑟菌对环丙沙星的耐药性较高，未发现对大观霉素和头孢曲松耐药的菌株，持续开展常规耐药性监测十分重要。     

DNA芯片快速检测淋球菌gyrA基因突变

目的 研制一种新型DNA芯片,用于快速检测淋球菌gyrA基因突变。方法 根据淋球菌gyrA基因的序列信息设计探针并制作DNA芯片,PCR扩增并荧光标记包含gyrA基因突变的目的DNA片段,与芯片杂交,同时以测序法为对照。结果 50份泌尿生殖道拭子全部可用DNA芯片检测出来,芯片检测结果与药敏结果符合率为100%,与测序结果二者符合率为98%。结论 DNA芯片检测淋球菌gyrA基因突变具有快速、高特异性和高灵敏度,可以应用于临床耐药性检测。     

淋球菌rpsE基因突变与大观霉素耐药性的研究

目的 探讨淋球菌rpsE基因突变与淋球菌大观霉素耐药的相关性。 方法 对临床分离的4株大观霉素耐药的淋球菌株（MIC128 μg/ml、256 μg/ml）的rpsE基因进行PCR扩增测序分析,寻找可能的突变位点,通过DNA转化技术将含有突变基因的细菌基因组DNA转化入敏感的淋球菌株,检测转化成功的淋球菌的MIC并进行PCR扩增测序,分析发现的突变位点与淋球菌大观霉素耐药的相关性。 结果 4株大观霉素耐药的菌株均发现rpsE基因A70C（Thr24Pro）突变,而16S rRNA大观霉素耐药决定区（SRDR）未发现任何突变;大观霉素敏感菌株的16S rRNA和rpsE基因均未发现突变。转化后获得的大观霉素耐药淋球菌中亦发现了同样的rpsE基因突变。 结论 rpsE基因单点突变与淋球菌对大观霉素耐药相关。     

解脲脲原体中tetM基因的检测及其临床应用评价

目的检测解脲脲原体(Uu)tetM基因,并与临床疗效进行综合分析.方法以多聚酶链反应(PCR)法检测tetM基因;用多西环素对患者进行治疗,并观察其疗效.结果 120株Uu分离株中,有32株Uu检测tetM基因阳性;tetM基因检测阳性患者及阴性患者用多西环素治疗的有效率分别为11.1%和100%.结论 tetM基因检测能较准确地反应Uu对四环素类的耐药性,且与临床疗效有很高相关性.     

Antimicrobial resistance patterns (1999-2002) and characterization of ciprofloxacin-resistant Neisseria gonorrhoeae in Korea

BACKGROUND: Antimicrobial susceptibilities of Neisseria gonorrhoeae were monitored during 4 years. In Korea, ciprofloxacin-resistant N. gonorrhoeae has dramatically increased after recommendation as a therapeutic drug. GOAL: The goal of this study was to determine the resistance patterns and characterize Korean ciprofloxacin-resistant N. gonorrhoeae. STUDY DESIGN: Antimicrobial susceptibilities were performed. PFGE profile and DNA sequencing of gyrA and parC genes were used to characterize the ciprofloxacin-resistant isolates in Korea. RESULTS: Tetracycline, ofloxacin, ciprofloxacin-resistant isolates were increased and among them, the proportion of isolates resistant to ciprofloxacin increased remarkably from 1% in 1999 to 48.8% in 2002. Fifteen different types by PFGE profile were identified. Major alteration type was M12 (67%), which have amino acid substitution in gyrA (S-91-->F, D-95-->G) and parC (S-87-->A). CONCLUSION: We could conclude that resistance for ciprofloxacin was remarkably increased during 4 years. Ciprofloxacin-resistant N. gonorrhoeae was supposed by the spread of several strains that had a small number of origins.     

广州淋球菌基因特征及其多抗原序列分型与环丙沙星耐药相关性研究

目的 探讨2014年广州市97株淋球菌环丙沙星耐药株的基因特征及其多抗原序列分型（NG-MAST）与淋球菌耐环丙沙星的相关性。 方法 用琼脂稀释法测定淋球菌对环丙沙星的最低抑菌浓度（MIC）,PCR分别扩增淋球菌的gyrA、parC基因和NG-MAST分型基因porB、tbpB基因并测序,获取耐药菌株的ST型别。 结果 97株淋球菌中95株（97.9%）对环丙沙星耐药。95株环丙沙星耐药菌株均在gyrA基因对应丝氨酸的第91和95位点上发生了突变,其中93株菌出现了parC基因突变。41株高水平耐药株（MIC ≥ 16 mg/L）中35株（85.4%）出现了parC基因87位点突变,54株低水平耐药株中32株（59.3%）出现此突变,差异有统计学意义（χ2 = 7.64,P < 0.05）。96株淋球菌分离株配对后,50株为网站已编号型别,共35个不同的ST型,其中10个ST型含有2 ~ 4个不同的分离株,ST型别中最常见ST5309。对淋球菌菌株系统进化树分析,淋球菌流行株可分为两群,第1群84株中MIC ≥ 16 mg/L的菌株39株占46.4%,第2群12株中只有1株MIC值为16 mg/L,差异有统计学意义（χ2 = 6.27,P = 0.012）。 结论 淋球菌对环丙沙星的高水平耐药主要与parC基因87位点突变相关。NG-MAST分型与环丙沙星耐药程度高低可能存在相关性。     

淋球菌对头孢克肟等6种抗生素敏感性及耐药质粒分型研究

目的:检测2011年广东省广州、佛山、江门、肇庆四市临床分离的淋球菌流行株对青霉素、四环素、环丙沙星、头孢克肟、头孢曲松和大观霉素等6种抗生素的敏感性,对质粒介导的产β-内酰胺酶淋球菌(PPNG)和四环素高水平耐药淋球菌(TRNG)进行耐药质粒TEM-1和tetM基因分型。方法:采用琼脂稀释法测定菌株对6种抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC),判断敏感性按WHO西太区淋球菌耐药性监测统一标准,其中头孢克肟敏感性试验和判断标准按美国临床和实验室标准化研究所(CLSI)判断。用纸片酸度法检测产β-内酰胺酶淋球菌(PPNG)菌株,多重PCR方法鉴定β-内酰胺酶质粒并进行TEM-1和TRNG tetM基因分型。结果:来自四市429株淋球菌中检出青霉素耐药364株(84.8%),四环素和环丙沙星耐药株(率)分别为389株(90.7%)和418株(97.4%),未发现对大观霉素、头孢克肟和头孢曲松耐药菌株,但头孢曲松低敏率达到34.0%(146/429),头孢克肟低敏只有1株(0.2%)。青霉素、四环素和环丙沙星的MIC50及MIC90均已超过耐药标准。检出PPNG株156株(36.4%),TRNG株201株(46.9%)。耐药质粒TEM-1基因分型以亚洲型为主(94.9%,148/156),只有8株携带非洲型质粒;tetM基因分型均为荷兰型。结论:四市淋球菌对青霉素、四环素和环丙沙星耐药率较高,对大观霉素、头孢克肟和头孢曲松的敏感性较高,TEM-1基因质粒分型以亚洲型为主,tetM基因分型均为荷兰型。     

Characterization of ciprofloxacin resistance in Neisseria gonorrhoeae isolates in Canada

BACKGROUND: Ciprofloxacin (500 mg orally, single dose) is one of the recommended therapies for gonorrhea in Canada. In Canada, the first ciprofloxacin-resistant (CipR) Neisseria gonorrhoeae strain was isolated in 1993. Antimicrobial susceptibilities of N gonorrhoeae isolates were monitored as part of a national surveillance program to ensure efficacy of antimicrobial therapies. GOAL: The goal was to determine the characteristics of ciprofloxacin resistance in Canadian gonococcal isolates. STUDY DESIGN: Susceptibility testing was performed on gonococcal strains from different provinces in Canada to determine the prevalence of CipR strains and their distribution. The CipR strains were further differentiated according to auxotype (A), serotype (S), plasmid profile (P), and pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) profile. DNA sequencing and DNA microarray technology were used to determine mutations in gyrA and parC. RESULTS: In Canada, between 1997 and 1999, 4.8% of resistant strains (130 of 2687 antibiotic-resistant N gonorrhoeae isolates) were CipR (MICs of 1-32 microg/l) and belonged to 48 A/S/P classes. Sixty-eight of the strains that were not differentiated by A/S/P were subtyped into 47 classes with PFGE. DNA sequencing and DNA microarray showed that the most common mutations had amino acid substitutions of Ser-->Phe at codon 91 and Asp-->Gly at codon 95 of the gyrA and Ser-->Arg at codon 87 of parC. CONCLUSION: The CipR strains isolated in Canada are phenotypically and genotypically diverse, indicating that they were imported from overseas and not endemic in Canada. Mutations in gyrA and parC previously only identified by DNA sequencing were successfully identified with DNA microarray technology. DNA microarray technology could be an alternative tool for identifying point mutations in resistance genes or other epidemiologic markers when clinical laboratories replace culture methods with rapid and automated molecular methods for diagnosis.     

DNA芯片检测泌尿生殖道病原体及耐药的研究

目的 研制一种DNA芯片,结合多重PCR方法快速检测泌尿生殖道炎症3种病原体及其耐药类型。方法 根据泌尿生殖道病原体淋球菌、沙眼衣原体和解脲脲原体的基因保守序列设计引物和探针,分别检测3种病原体;根据淋球菌gyrA、parC和16srRNA基因序列突变位点设计引物和探针,分别检测淋球菌对喹诺酮类药物和大观霉素的耐药性;根据淋球菌和解脲脲原体的共同tetM基因序列设计引物和探针,检测对四环素的耐药性。制备芯片,对152份泌尿生殖道拭子提取DNA进行7重PCR扩增,并且Cy5荧光标记包含上述基因序列的目的DNA片段,与固定在芯片上的探针杂交,芯片信号分析系统Scanarray 4000在635nm处扫描并分析结果,并与临床检查结果比较。结果 DNA芯片敏感性是0.01fg质粒DNA。152份泌尿生殖道炎症拭子其病原体种类及其耐药类型全部可用DNA芯片检测出来,与目前临床检查结果有较好的一致性(K>0.8)。结论 研制的DNA芯片结合7重PCR方法快速检测泌尿生殖道淋球菌、沙眼衣原体和解脲脲原体3种病原体及其对喹诺酮类药物、大观霉素和四环素的耐药类型,具有快速、高特异性和高灵敏度,可以应用于临床检测。     

Surveillance of antimicrobial susceptibilities in Neisseria gonorrhoeae in Nanjing, China, 1999-2006

OBJECTIVE: To monitor the frequency and types of antibiotic resistance of Neisseria gonorrhoeae in Nanjing, China, between 1999 and 2006. METHODS: beta-Lactamase production was determined by paper acidometric testing. Minimum inhibitory concentrations (MICs) to penicillin, ceftriaxone, tetracycline, ciprofloxacin, and spectinomycin were determined by agar plate dilution. Plasmid types were determined for TRNG and PPNG isolates by PCR. RESULTS: One-thousand two-hundred and eight N. gonorrhoeae isolates were examined. The rate of PPNG rose from 8.0% (9 of 112) in 1999 to 57.36% (113 of 197) in 2004, and declined to 44.44% (88 of 198) in 2006. Prevalence of TRNG increased from 1.8% (2 of 112) in 1999 to 32.82% (65 of 198) in 2006. 99.23% (258 of 260) of TRNG contained the Dutch-type tetM gene and 2 strains contained the American-type tetM gene. All PPNG examined contained the Asian type plasmid. Among non-PPNG, chromosomally mediated resistance to penicillin varied from 57.84% (59 of 102) to 87.80% (72 of 82). Chromosomal resistance to ciprofloxacin (QRNG) was detected in 83.93% (94 of 112) of the strains in 1999 and 98.99% (196 of 198) in 2006. Eight spectinomycin-resistant N. gonorrhoeae strains were detected between 2001 and 2006. None of the gonococcal isolates tested was resistant to ceftriaxone but decreased susceptibility was observed in some strains. CONCLUSIONS: Among N. gonorrhoeae strains isolated in Nanjing, China, plasmid mediated resistance including PPNG and TRNG increased significantly between 1999 and 2006. Chromosomally mediated resistance to both penicillin and ciprofloxacin was also high during this period. Spectinomycin resistance of N. gonorrhoeae was sporadic. Ceftriaxone and spectinomycin can be considered effective antimicrobial agents for the treatment of gonorrhea in Nanjing at the present time.     

广州地区106株淋球菌中脂蛋白分型与环丙沙星耐药相关性研究

目的:研究广州地区106株淋球菌中脂蛋白分型与环丙沙星耐药的相关性.方法:用糖琼脂稀释法测定淋球菌对环丙沙星的MIC值,PCR分别扩增淋球菌的gyrA、parC和脂蛋白基因并测序分析.结果:广州地区106株淋球菌对环丙沙星的耐药率为95 3%,共有19个脂蛋白亚型,最常见的亚型是17c,有49株(46 2%).对环丙沙...