缺血预处理对大鼠缺血再灌注肝组织NF-κB表达、炎症及氧化应激反应的影响

目的：探讨缺血预处理（IP）减轻大鼠肝缺血再灌注（I/R）损伤的作用及机制。
　　方法：将15只雄性SD大鼠随机均分为假手术组、I/R组、IP+I/R组,采用Pringle法制作肝I/R模型（缺血30min+再灌注3h）,IP采用I/R前肝缺血10min+再灌注10min诱导。各组大鼠于再灌注3h后处死取材,行肝组织病理学、血请谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）检测,同时检测肝组织NF-κB蛋白的表达,以及炎性细胞因子IL-1β、TNF-α与氧化应激指标丙二醛（MDA）、髓过氧化物酶（MPO）水平。
　　结果：除假手术组外,I/R组与IP+I/R组大鼠肝组织均出现肝损伤是病理学改变,IP+I/R组的损伤程度明显轻于I/R组;与假手术组比较,I/R组与IP+I/R组大鼠血清AST、ALT水平明显升高,肝组织NF-κB蛋白表达、IL-1β与TNF-α水平、MDA与MPO浓度均明显升高（均P<0.05）,但IP+I/R组的各指标的升高幅度均明显小于I/R组（均P<0.05）。
　　结论：IP减轻大鼠肝I/R损伤的作用与抑制NF-κB活性,从而减轻炎症与氧化应激反应有关。     

缺血后处理对缺血再灌注大鼠肝细胞即刻早期基因c-fos和c-jun表达的影响

目的 观察缺血后处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响。方法 120只Wistar大鼠随机分为缺血再灌注组（IRI），缺血后处理组（IPO）和假手术组（S），于复灌后0，0．5，1，2，4，8，12，24h取材，应用RT-PCR法检测各组c-fos，c-jun mRNA的表达。结果 （1）在IRI组再灌注后0．5～2h，c-fos和c—jun的表达均增高，1h达高峰；4h后仅c-jun有持续较高的表达，c—fos的表达开始下降；（2）IPO组各时点c-fos mRNA的表达均较IRI组低，但无统计学差异（P〉0．05）；（3）与IRI组相比，IPO组c-jun mRNA在0．5，1h和2h组明显降低（P〈0．05）。结论 缺血后处理能有效地保护肝脏免受缺血再灌注造成的损伤，这种保护效应的机制可能与影响即早基因的转录有关。     

TLR2/4蛋白在小鼠全肝缺血再灌注损伤肝脏的表达及意义

目的观察Toll样受体2／4蛋白在小鼠全肝缺血再灌注损伤中肝脏的表达，并分析其与肝功能损伤的关系。方法通过夹闭BALB／c小鼠肝门，复制小鼠全肝缺血再灌注损伤模型。采用Western blot方法定量检测缺血肝叶中TLR2／4蛋白的表达变化，并检测门静脉血浆丙氨酸氨基转移酶（pALT）、肿瘤坏死因-α（TNF-α）及门静脉血清内毒素（endotoxin，EN）水平。结果与假手术组（sham-operated group，SH组）相比：（1）全肝缺血20min并行再灌注后，缺血再灌注组（ischemic／reperfusion group，I／R组）血清ALT在再灌注1h即明显升高，且在再灌注3h时较1h时明显升高；（2）I／R组缺血肝脏TLR2／4蛋白的表达（OD值）明显升高，TLR2蛋白的表达在再灌注3h较1h明显高；而TLR4蛋白的表达以再灌注1h时水平最高。（3）I／R组中门静脉血清TNF-α在再灌注1h即开始高，在再灌注3h达高峰。（4）门静脉血清内毒素水平明显升高（与SH相比，P〈0．01），但I／R组在不同灌注时间点之间无显著性差异（P〉0．05）。结论TLR2／4蛋白表达的上调参与了小鼠全肝脏缺血再灌注中肝脏的损伤。     

缺血预处理对大鼠皮瓣缺血再灌注后Bcl-2和Bax基因表达的影响

目的探讨缺血预处理（IPC）对大鼠皮瓣缺血再灌注（I／R）后凋亡相关蛋白表达的影响及其对皮瓣缺血再灌注损伤保护作用机制。方法采用Wistar大鼠为实验动物，制备右下腹岛状皮瓣I／R模型。90只大鼠随机分为对照组、I／R组和IPC组。采用SABC法观察IPC对大鼠皮瓣缺血再灌注后Bcl-2、Bax蛋白表达规律。结果SABC法观察显示Bcl-2在缺血再灌注后4h有少量表达，24h达峰值，7d时明显减少。IPC组再灌注后4h表达较弱，3d达峰值，7d时明显减弱。IPC组与I／R组比较，Bcl-2在I／R后3d差异有统计学意义（P〈0．01）。Bax基因在I／R后4h表达，3d时达峰值，7d时仍有较高水平表达；IPC组各时间点Bax基因呈低表达，与I／R组比较，3d和7d时差异最显著（P〈0．01）。结论IPC诱导Bcl-2基因表达增加和抑制Bax基因表达可能是IPC诱导抗凋亡、产生皮瓣保护机制的原因之一。     

白藜芦醇对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

摘要：探讨白藜芦醇对肝脏缺血再灌注损伤的防护作用。将雄性SD大鼠随机分为空白对照组、缺血再灌注组（I/R组）、I/R加生理盐水处理组和I/R加白藜芦醇处理组。观察肝脏缺血40 min再灌注1，3，6，12h后血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）及肝组织丙二醛（MDA）含量的变化以及肝组织病理学改变。结果示肝脏I/R后血清ALT，AST及肝组织MDA含量均显著升高，肝脏缺血再灌注前用白藜芦醇15 mg/kg者，血清ALT，AST及肝组织MDA含量均明显降低，且肝组织病理学损害明显减轻。结果表明白藜芦醇对肝脏I/R损伤具有保护作用     

缺血预处理对大鼠移植胰腺缺血再灌注损伤的保护作用及其机制的研究

目的：探讨缺血预处理对大鼠移植胰腺冷缺血再灌注损伤和细胞凋亡的保护作用及其机制。方法：24只糖尿病SD大鼠随机分为缺血再灌注组（I/R组,n=6）和缺血预处理组（IPO组,n=18）,IPO组又根据不同方法分为3个亚组：IPO1组（再灌注30s,缺血30s1次,n=6）、IPO2组（再灌注30s,缺血30s3次,n=6）和IPO3组（再灌注30s,缺血30s6次,n=6）。24只SD大鼠为供体,I/R组和IPO组均行同种胰腺移植。另取6只SD大鼠为对照组。检测各组再灌注前、后血糖及再灌注后2h移植胰腺组织中SOD和MDA含量;TUNEL法观察移植胰腺组织细胞凋亡情况,WesternBlot检测移植胰腺组织Bax和Bcl-2蛋白表达情况。结果：1）再灌注后IPO各组相对于I/R组血糖低（P〈0.05,P〈0.01,P〈0.05）;IPO2组较IPO1组和IPO3组血糖低（P均〈0.05）;2）再灌注后IPO组较I/R组移植胰腺组织中SOD含量高（P均〈0.01）,MDA含量低（P均〈0.01）,IPO2组相对于IPO1组和IPO3组SOD含量高（P均〈0.05）、MDA含量低（P均〈0.05）。3）再灌注后IPO组较I/R组移植胰组织中AI值低（P均〈0.01）,IPO2组相对于IPO1组和IPO3组AI值低（P均〈0.05）;4）I/R组胰组织Bax蛋白高表达,Bcl-2蛋白低表达,IPO各组再灌注后移植胰组织Bax蛋白低表达,Bcl-2蛋白高表达,而IPO2组Bcl-2蛋白表达最高,Bax蛋白表达最低。结论：缺血预处理对大鼠移植胰腺的缺血再灌注损伤具有保护作用,并可以减少移植胰腺缺血再灌注后的细胞凋亡,机制与减少氧自由基、上调Bcl-2蛋白和下调Bax蛋白有关。再灌注30s缺血30s重复3次是最佳的大鼠移植胰缺血预处理诱导办法。     

Genistein预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨genistein预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。
方法：54只SD大鼠完全随机分成3组。A组为I/R组:70%热缺血60 min及再灌注;B组为I/R
 genistein（GST）预处理组;C组为假手术组。于成模后2,6,12 h取大鼠血清和肝组织,检测血清AST,ALT浓度和肝组织MDA浓度,免疫组化法检测肝组织casepase-3蛋白的表达,光镜下观察肝脏组织病理变化。
结果：与I/R组相比,genistein预处理血清中AST及ALT浓度明显降低,肝组织病理损伤明显减轻。肝组织casepase-3蛋白表达及MDA浓度显著降低（均P＜0.05）。
结论：genistein预处理对大鼠肝脏热缺血再灌注具有保护作用,其机制与清除氧自由基,抑制细胞凋亡有关。     

TLR4和NF-κB在大鼠肾缺血再灌注损伤中的表达及意义

目的：观察大鼠肾缺血再灌注损伤后Toll样受体4（TLR4）和核因子-κB（NF-kB）的表达变化及其关系.方法：将40只SD大鼠随机等分为假手术组（S组）和肾缺血再灌注损伤组（I/R组）,建立肾缺血再灌注模型.在肾缺血再灌注后24 h切取肾脏.采用免疫组织化学法观察TLR4蛋自及NF-κB蛋白在肾脏组织中的表达变化及其相关性 采用半定肇逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测两组肾组织中TLR4、NF-κB的mRNA水平表达变化.结果：TLR4蛋白在S组大鼠肾小管细胞中有少量表达,在I/R组24 h后肾组织中表达明显增加,与S组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）.NF-κB P65蛋白在S组大鼠肾小管细胞胞浆和少量胞核中有表达.在I/R组24 h后肾小管细胞胞浆和胞核均可见NF-κB P65明显表达.差异有统计学意义（P〈0.01）.TLR4和NF-κB在肾缺血再灌注损伤组织中的表达具有明显的相关性.I/R组中的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达均较S组上调,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论：大鼠肾缺血冉灌注损伤后,肾组织TLR4和NF-κB P65的表达明显上调,且有明显的相关性.TLR4有可能通过激活NF-κB继而引起下游的炎症因子募集,介导肾缺血再灌注损伤.     

葛根素对大鼠肝缺血再灌注损伤脑组织c-fos和Bcl-2表达的影响

目的：观察肝缺血再灌注损伤时c-fos、Bcl-2与脑细胞凋亡的关系及葛根素对其影响的可能机制。方法：建立肝缺血再灌注损伤动物模型。选健康雄性SD大鼠56只,随机分为对照组、缺血30min组（I组）、缺血30min即刻再灌注组（I/R组）、缺血30min再灌注1h组（I/R1h）、缺血30min再灌注2h组（I/R2h）、30min再灌注4h组（I/R4h）及葛根素预处理组（PUE＋I/R4h组）,每组8只。观缺血察各组肝、脑HE染色;应用免疫组织化学方法测定各组大鼠脑组织c-fos、Bcl-2的表达;应用原位细胞凋亡法测定脑细胞凋亡。结果：I/R2h组、I/R4h组肝组织中散在分布大量炎症细胞,肝细胞明显肿胀,有的呈空泡状变性,肝脏结构紊乱;PUE＋I/R4h组上述改变明显改善。I/R2h、I/R4h组脑组织水肿明显,PUE＋I/R4h组明显改善。与对照组比较,其余各组脑组织c-fos表达均增高﹙P〈0.01）,I/R4h组水平最高,PUE＋I/R4h组较I/R1h组、I/R2h组、I/R4h组明显降低（P〈0.01）。与对照组比较,其余各组脑组织Bcl-2表达增高（P〈0.01）,I/R4h组与I/R2h组差异无统计学意义﹙P〉0.05）,PUE＋I/R4h组较对照组、组表达增多（P〈0.01）,较I/R1h组、I/R2h组、I/R4h组明显降低（P〈0.01）。I组、I/R组细胞I凋亡指数较对照组明显增加（P〈0.01）,随着再灌注时间的延长细胞凋亡指数逐渐增加。PUE＋I/R4h组较I/R2h组、I/R4h组明显降低（P〈0.01）。结论：肝缺血再灌注损伤可引起脑组织的损伤及脑细胞凋亡。随着再灌注时间的延长,脑组织中c-fos表达增高,脑细胞凋亡与c-fos的表达有关。Bcl-2在缺血期发挥了抑凋亡的作用,随着再灌注时间的延长,其作用减弱,脑细胞凋亡指数增加。葛根素可能通过抑制c-fos的表达、增加Bcl-2的表达发挥减轻肝缺血再灌注损伤所致脑细胞凋亡的作用。     

缺血后处理对骨骼肌缺血再灌注后肺损伤保护作用的机制

目的：探讨缺血后处理（I-postC）对大鼠双侧后肢骨骼肌缺血再灌注（I/R）后肺损伤的保护作用及机制。方法：阻断肾下腹主动脉建立大鼠双侧后肢骨骼肌I/R损伤模型。48只大鼠随机分为3组：I/R组、缺血预处理（IPC）组及I-postC组,每组16只。分别于再灌注后12、24h各处死8只,取肺组织标本,观察肺组织形态学、湿/干重比、丙二醛（MDA）及髓过氧化物酶（MPO）的变化。原位杂交和RT-PCR方法检测肺组织中细胞间黏附分子（ICAM）-1mRNA的表达,Western blot检测ICAM-1蛋白表达。结果：再灌注12或24h后I/R组有明显的弥散功能障碍,表现为间质浸润细胞增多并伴有明显水肿。IPC组和I-postC组的各项指标均较I/R组明显降低,差异有统计学意义（P〈0.01）,但2组之间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：I-postC可以减轻大鼠双侧后肢骨骼肌I/R后肺损伤,与IPC可能存在共同的作用机制。     

缺血预处理对肺缺血再灌注损伤的影响

目的观察缺血预处理（ＩＰＣ）对肺缺血再灌注（Ｉ／Ｒ）损伤的影响。方法建立兔单肺原位热缺血再灌注损伤模型。３０只兔分Ｉ／Ｒ组、ＩＰＣ组和对照组。对比观察各组平均动脉压、动脉血氧分压、肺组织１２５Ｉ标记牛血清白蛋白漏出量、肺湿干重比、髓过氧化物酶活性。结果经９０分钟缺血１８０分钟再灌注后,ＩＰＣ组肺组织１２５Ｉ标记牛血清白蛋白漏出量、肺湿干重比、髓过氧化物酶活性低于Ｉ／Ｒ组（Ｐ＜０．０５）,平均动脉压、动脉血氧分压高于Ｉ／Ｒ组（Ｐ＜０．０５）。结论ＩＰＣ能减轻肺Ｉ／Ｒ导致的肺毛细血管通透性增高、中性粒细胞浸润,减轻肺Ｉ／Ｒ引起的平均动脉压和动脉血氧分压的下降程度,表明ＩＰＣ能减轻肺Ｉ／Ｒ损伤。     

Mesenteric ischemia

Mesenteric ischemia secondary to vascular disease remains a significant problem in patients presenting with acute abdominal conditions, especially if they are elderly. Although rare, it is nevertheless an important and perhaps increasing cause of death or significant morbidity. Occasionally, it may be a mode of dying, but more often, it is the reason for death. Individual cases can manifest an almost overwhelming spectrum from chronic to acute, mild to catastrophic, arterial to venous, occlusive to hemodynamic, extensive to limited, or precisely diagnosed to accidentally found. Treatment principles are well defined, but continued refinement of supportive therapies of several types is occurring. In contrast, improved screening tests that can lead to early specific etiologic diagnosis remain at the experimental stage. Thus, good "clinical suspicion" is foremost and essential.     

Comparison of skeletal muscle microcirculation between clamp ischemia and microsurgical ischemia

We compared ischemia reperfusion injury-associated vasospasm and perfused capillary density (PCD) at the microcirculatory level between clamp ischemia and microsurgical ischemia in rat skeletal muscle. Rat cremaster muscle was prepared as an island flap, attached only with pudic-epigastric vessels branching from external iliac vessels. Two types of ischemia, with clamping only or with microvascular anastomosis, were applied at the external iliac vessels for 2 hours followed by 1-hour reperfusion before in vivo microscopic examination for hemodynamic changes. At the end of observation, small segments of the vessels at the clamping site and microsurgical anastomoses site were also harvested for histological examination. It was found that the first- and second-order arterioles had about 12–15% diameter reductions in both groups, whereas diameter reductions of the third-order arterioles were up to 37.8% in the microsurgical ischemia group, much greater than that in the clamp ischemia group (2.3%). There was also no significant difference in PCD reduction between the two groups, although the red blood cell velocity was much slower in the microsurgical ischemia group. Histological examination of the anastomosis site showed massive accumulation of polymorphonuclear neutrophils on the venous endothelium. These results suggested a different degree of endothelial damage and local leukocyte activation between microsurgical ischemia and clamp ischemia. Therefore, we conclude that clamp ischemia cannot replace microsurgical ischemia for studying microcirculatory changes in free tissue transfer. © 1996 Wiley-Liss, Inc.