粉防己碱对喉癌耐药细胞株KBV200耐药逆转作用的研究

目的:研究天然有效成分粉防己碱(Tetrandnne,TET)对喉癌耐药细胞株KBV200的耐药逆转作用.方法:本研究以喉癌耐药细胞株KBV200为研究对象,采用粉防己碱逆转KBV200对常用抗肿瘤药物阿霉素的多药耐药作用,以经典逆转剂维拉帕米(Verapamil,VRP)为对照组,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定其对实验细胞的增殖抑制率.结果:低毒剂量的粉防己碱能逆转实验细胞株埘阿霉素的多药耐药(muhidrug resistance,MDR)作用,逆转指数为22.96;维拉帕米逆转指数为9.31.结论:低毒浓度的天然药物粉防己碱能逆转喉癌耐药细胞株KBV200对阿霉素的耐药作用,其逆转效果优于经典逆转剂维拉帕米.     

红霉素逆转口腔鳞癌多药耐药的临床研究

目的；研究红霉素逆转口腔鳞癌多药耐药（MDR）的临床疗效。方法：采用免疫组化SP法检测口腔鳞癌P－糖蛋白（P－gp)表达，并依P－gp表达随机分组，给以单纯化疗或加红霉素治疗。结果：P－gp阳性治疗组CR＋PR11例（73．3％），P－gp阳性对照组3例（20．0％），两组比较差异有显著性（P＜0．05），P-gp阴性治疗组及对照组疗效无差异（P＞0．05）。结论：红霉素对逆转口腔鳞癌MDR具有明确作用。     

洛美利嗪逆转K562/A02细胞多药耐药的研究

目的 :研究洛美利嗪对肿瘤多药耐药的逆转作用 ,探讨洛美利嗪逆转肿瘤细胞多药耐药的机制。方法 :以人红白血病细胞系K5 6 2及其耐药细胞系K5 6 2 /A0 2 (耐阿霉素 )为研究对象 ,采用MTT法检测细胞毒作用 ;免疫组化测定法检测P 糖蛋白 (P glycoprotein ,P gp)表达水平 ;RT PCR法检测mdr1mRNA水平 ;以流式细胞术测定两种细胞系内罗丹明 12 3(Rh12 3)的潴留来反映P gp的外排功能。结果 :与K5 6 2细胞系相比 ,K5 6 2 /A0 2耐药细胞系mdr1mRNA及P gp高表达 ,Rh12 3潴留减少。洛美利嗪 (10 μmol/L)对K5 6 2 /A0 2细胞的mdr1mRNA及P gp表达水平无明显影响 (P >0 .0 5 )。洛美利嗪对K5 6 2 /A0 2细胞的阿霉素 (ADM)、长春新碱 (VCR)细胞毒性有剂量相关性增敏作用。洛美利嗪能增加K5 6 2 /A0 2耐药细胞系的Rh12 3潴留。结论 :洛美利嗪对K5 6 2 /A0 2细胞的ADM、VCR细胞毒性有剂量相关性增敏作用 ,其机制可能与增加细胞内药物浓度有关。     

粉防己碱对喉癌耐药细胞株Hep-2/ADM多药耐药逆转作用研究

目的 探讨天然有效成分粉防己碱(tetrandrine,TET)对喉癌耐药细胞株Hep-2/ADM的多药耐药逆转作用及其可能机制.方法 采用MTT法检测不同浓度粉防己碱对Hep-2/ADM细胞的增殖抑制效应,选取其无毒剂量;MTT法检测长春新碱(vineristine,VCR)对HEP-2和Hep-2/ADM细胞增殖的抑制作用及加用粉防己碱后的变化;采用流式细胞仪检测细胞内药物蓄积和外排程度以及细胞凋亡.结果 1.5μg/ml及更低浓度的粉防己碱对Hep-2/ADM细胞无明显细胞毒性作用.加入1.0μg/ml和1.5μg/ml粉防己碱后,Hep-2/ADM对VCR的耐药逆转倍数分别为1.72和2倍.1.5 μg/ml浓度的粉防己碱可提高VCR在Hep-2/ADM细胞内药物的蓄积,增强VCR诱导的Hep-2/ADM细胞凋亡.结论 粉防己碱可以部分逆转Hep-2/ADM细胞的多药耐药,随药物浓度增加,逆转效果有可能增强,其逆转机制可能与抑制P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)外排功能和增强化疗药物诱导的细胞凋亡有关.     

乳腺癌组织中多药耐药基因产物的表达及其相互关系

目的　探讨多药耐药 (MDR)基因产物在乳腺癌组织中的表达及其相互关系。方法　应用免疫组织化学方法 ,检测6 9例乳腺癌组织中MDR基因产物 (P gp、GST π、TOPOⅡ )。结果　乳腺癌组织中以P gp和GST π表达为主 ,其表达率分别为88 4 1%和 79 71% ,二者均明显高于TOPOⅡ表达率 5 7 97% (P <0 0 1) ;2种MDR基因产物共表达率为 33 33% ,3种MDR基因产物共表达率为 5 5 0 7% ,均明显高于单独表达率 11 5 9% (P <0 0 1) ;GST π和TOPOⅡ的表达均同时伴有P gp的表达 ,在P gp为阴性情况下 ,没有发现GST π和TOPOⅡ的单独表达和共表达现象。P gp和GST π的表达呈显著正相关 (P <0 0 1) ;P gp和TOPOⅡ的表达呈明显负相关 (P <0 0 5 ) ;GST π和TOPOⅡ的表达呈明显负相关 (P <0 0 5 )。结论　P gp、GST π、TOPOⅡ在乳腺癌组织中表达对肿瘤耐药起重要作用 ,单基因和多基因协同作用 ,以多基因共表达为主。     

拮新康逆转K562/A02细胞多药耐药的机理研究

目的利用血清药理学方法探讨中药拮新康复方逆转K5 62 /A0 2细胞多药耐药的机理 ,为临床应用提供理论和实验依据。方法分别采用MTT法、RT—PCR、Western印迹法观察含拮新康大鼠血清处理后K5 62 /A0 2细胞的增殖及mdr—1 /P—gp表达的改变。结果含 1 0 %拮新康血清 +ADM组对K5 62 /A0 2细胞的抑制率比 1 0 %正常大鼠血清 +ADM组明显增加 (P <0 .0 5 ) ;含 1 0 %拮新康血清 +ADM组K5 62 /A0 2细胞的mdr—1及P—gp的表达比ADM组及 1 0 %正常大鼠血清 +ADM组均降低 (P <0 .0 1 )。结论拮新康能抑制K5 62 /A0 2细胞的增殖 ,通过降低mdr—1 /P—gp的表达逆转K5 62 /A0 2细胞的多药耐药。     

核因子-κB靶向性圈套策略逆转人膀胱癌耐药细胞多药耐药性的实验研究

目的:靶向性治疗是当前恶性肿瘤治疗的新方向,文中研究观察针对核因子-κB(NF-κB)为靶序列的特异性环状哑铃寡聚脱氧核苷酸(CD-ODN)对人膀胱癌耐药细胞株多药耐药性的逆转作用. 方法:脂质体介导法转染NF-κB-CD-ODN人人膀胱癌细胞株BIU-87及其多药耐药(MDR)亚株BIU-87/A,荧光素酶报告基因质粒检测不同处理组NF-κB活性的改变;RT-PCR、Western-blot、MTT法检测NF-κB-CD-ODN对2株细胞γ-GCSh mRNA表达、细胞内GSH水平及其对5种抗癌药物肿瘤细胞抑制率的变化. 结果:NF-κB-CD-ODN转染48 h后,2株细胞内NF-κB活性、γ.GCSh mRNA的表达和GSH的水平均下降;同时5种抗癌药物对2株细胞的抑制率大部分都有提高. 结论:γ-GCSh特异性的NF-κB-CD-ODN可通过降低细胞内GSH水平增强膀胱癌细胞对化疗的敏感性,逆转肿瘤细胞的耐药.     

黄酮类化合物逆转HeLa细胞株多药耐药性

目的　探讨黄酮类化合物对人类子宫颈癌 He L a细胞多药耐药 (MDR)的逆转作用。　方法　采用WST- 1法鉴定多药耐药亚系 Hvr1 0 0 - 6细胞对抗癌药物长春碱、阿霉素、柔红霉素及 5 -氟尿嘧啶 (5 - Fu)的耐药性 ,观察槲皮素等黄酮类化合物对其耐药的逆转作用 ;采用 RT- PCR法检测联用黄酮类化合物前后 Hvr1 0 0 - 6细胞mdr1 m RNA表达水平。　结果　 Hvr1 0 0 - 6细胞与亲本株 He L a细胞相比 ,对长春碱、阿霉素、柔红霉素均表现出显著耐药性 (P<0 .0 0 1 ) ,耐药倍数分别为 4 96 ,5 2和 1 98倍。加入槲皮素 (1 0μmol/ L )的长春碱、柔红霉素、5 - Fu组与相应浓度单用药物组比较 ,其细胞抑制率差异均有显著性 (P<0 .0 5 ) ,但细胞 m dr1 m RNA表达量在使用槲皮素前后没有变化。　结论　槲皮素对长春碱、柔红霉素、5 - Fu的细胞毒性有增敏作用 ,可逆转 He L a细胞耐药株对部分化疗药物的多药耐药     

多药耐药基因/P-糖蛋白介导的多药耐药逆转策略的研究进展

化疗是目前治疗恶性肿瘤的主要手段之一,然而化疗过程中产生的多药耐药(MDR)却是造成化疗中断、导致治疗失败的主要因素。目前的研究表明,肿瘤细胞产生MDR的原因和机制非常复杂,其中多药耐药基因(MDR1)的过度表达最主要也最为经典。MDR1基因编码的P糖蛋白(P gp)是一ATP依赖性的药物泵,其可以通过水解ATP提供的能量,将进入细胞内的药物泵出细胞,使得细胞内药物浓度不断下降,最终造成其细胞毒作用减弱甚至丧失,从而出现耐药。1981年Tsuruo等[1]开始尝试用低剂量的维拉帕米抑制P gp对长春新碱的外排作用,以增加其在细胞内的有效浓度,…     

甲状腺癌多药耐药基因MRP、P-gp的表达及临床意义

目的　探讨多药耐药相关蛋白 (MRP)和P 糖蛋白 (P gp)在甲状腺癌中的表达及临床意义。方法　采用免疫组化SP法回顾性检测分析 80例甲状腺癌组织MRP和P gp表达状况。结果　MRP和P gp表达阳性率分别为 86 .3%、76 .3% ,二者有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,两者在甲状腺癌各类型中表达较一致 ,乳头状癌和髓样癌表达阳性率无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,滤泡癌中表达阳率明显低于乳头状癌和髓样癌 (P <0 .0 5 )。MRP与P gp共表达率为 76 .3% (6 1/ 80 ) ,具有相关性(P <0 .0 1)。结论　MRP和P gp在甲状腺癌中阳性率较高 ,提示甲状腺癌对化疗有一定多药耐药性。     

小分子干扰RNA片段逆转KBv200细胞多药耐药的实验研究

目的：研究小分子干扰RNA片段（siRNA）对舌癌多药耐药（MDR）细胞系KBv200细胞的MDR1基因表达及其功能的影响，探讨siRNA作为未来化疗增敏剂的可能性。方法：运用针对MDR1基因序列的siRNA（MDR1-siRNA）在脂质体的介导下转染KBv200细胞；用RT—PCR分析MDR1 mRNA的表达水平；流式细胞术检测P-糖蛋白（P-gP）的表达；荧光分光光度法检测细胞内多柔比星（Dox）的积蓄；MTT法检测KBv200细胞对长春新碱（VCR）和Dox的敏感性变化。结果：MDR1-siRNA作用24和48h能抑制MDR1基因的表达（P〈0．05），其mRNA水平和P-gP水平均明显下降，同时使KBv200细胞对VCR和Dox的敏感性显著增加（P〈0．01），并显著增加细胞内Dox的蓄积（P〈0．01）。结论：MDR1-siRNA能显著抑制KBv200细胞内MDR1基因介导的MDR。     

姜黄素逆转HL60/ADR 及MCF-7/ADR的多药耐药研究

目的观察姜黄素对HL60/ADR以及MCF-7/ADR多药耐药(MDR)的逆转。方法用MTT法观察细胞的生长抑制效应,流式细胞仪检测凋亡以及细胞内阿霉素浓度,RT-PCR以及Western Blot检测Mdr1、MRP基因和Bcl-2蛋白表达。结果加入姜黄素后耐药细胞系逆转指数分别为4.18(HL60/ADR)和3.39(MCF-7/ADR),与单纯应用阿霉素相比差异有统计学意义;流式细胞仪检测显示有明显的促凋亡作用,耐药细胞系内的ADR浓度明显升高;RT-PCR以及Western Blot检测发现姜黄素对上述耐药细胞系的MRP以及Bcl-2表达有抑制作用。结论姜黄素可能作为多药耐药的逆转剂应用于MDR逆转。     

人肺腺癌多药耐药细胞系SPC-A1/TAX的耐药机制初探

目的 初步探讨人肺腺癌多药耐药细胞系SPC-A1／TAX的耐药机制。方法 免疫组织化学S-P染色法检测多药耐药基因mdr1的表达产物P-糖蛋白(P-go)。结果 在人肺腺癌多药耐药细胞系SPC-A1／TAX与其亲本细胞系SPC-A1中P-gp的表达均为阴性。结论 该多药耐药细胞系的多药耐药性(MDR)表型可能是非P-gp机制的。     

人舌鳞状细胞癌耐放疗细胞系的构建及多药耐药基因和蛋白的表达

目的:建立人舌鳞状细胞癌耐放疗细胞系并检测多药耐药基因和蛋白的表达.方法:利用人舌鳞癌细胞株Tca8113, 采用单次剂量1 Gy,每周2次的60Co照射,诱导其耐放疗性,建立一株耐放疗的人舌鳞癌细胞系.并用免疫组化以及RT-PCR检测多药耐药基因的表达.结果:耐放疗的Tca8113细胞最大耐受剂量为20 Gy,多药耐药基因和蛋白表达水平明显增高. 结论:成功建立耐放疗细胞系,为口腔癌放疗耐药研究提供了细胞模型.     

四碘甲腺乙酸对耐药性人胃癌细胞系体内和体外增殖的抑制作用

目的：研究四碘甲腺乙酸(Tetrac)对阿霉素(Dox)抵抗性人胃癌细胞系SGC-7901/R体内及体外扩增的抑制作用及作用机制。方法：体外实验分为SGC-7901与SGC-7901/R两组,分别与不同浓度的Tetrac和Dox共同培养4 d。MTT法检测其细胞活性,以不同药物浓度下的肿瘤细胞存活率来表示;Western blotting检测2组中相关耐药基因P-gp、SOD和GST的表达。分别将Dox、依拉泊苷(Etop)、顺铂(Cisp)3种药物单独或联合Tetrac作用于SGC-7901/R细胞系,用MTT法、衰老相关的β-半乳糖苷酶(SA-b-Gal）染色法与凋亡相关的烟酸已可碱（Hoechst）染色法检测肿瘤细胞活性、衰老及凋亡情况,检测结果以染色阳性细胞比例表示。体内实验中,腋部皮下注射SGC-7901/R细胞（10⁶ /100 μL）的裸鼠被分成4组（每组7只）：生理盐水对照组、Tetrac治疗组（30 mg/kg）、Dox治疗组（2 mg/kg）和Tetrac（30 mg/kg）+Dox（2 mg/kg）联合药物治疗组,检测各组小鼠肿瘤生长情况。结果：体外实验中,2组肿瘤细胞均随Tetrac浓度的升高而坏死明显加快,在100 mg/L时全部死亡;P-gp转运子仅在SGC-7901/R细胞中过表达;Dox、Etop、Cisp与 Tetrac联合用药时,SGC-7901/R细胞存活率较单独用药明显降低(P<0.001);Dox与Tetrac联合用药时,SGC-7901/R细胞衰老、死亡较单独用药明显增加(P<0.05)。体内实验中,Dox与Tetrac联合用药可以明显抑制肿瘤生长。结论：Tetrac可能通过降低药物转运子P-gp表达来促进SGC-7901/R细胞的衰老和凋亡,对于治疗Dox抵抗性肿瘤是一种有效的化疗药物。     

双氢青蒿素对白血病多药耐药K562/ADM细胞的逆转作用

目的:探讨双氢青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)在白血病多药耐药中的应用。方法:采用MTT检测DHA联合阿霉素(adriamycin,ADM)对白血病多药耐药细胞(K562/ADM)生长增殖的影响;应用流式细胞技术分析细胞内罗丹明123(Rhodamine 123)浓度,以检测DHA对白血病细胞膜P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)泵功能的影响;免疫组化方法检测DHA对白血病细胞P-gp表达水平的影响。结果:10、20、40μmol/L DHA实验组的细胞耐药逆转倍数分别为1.46、2.16和3.52倍。DHA使用前、后K562/ADM细胞膜P-gp表达水平无明显差异;Rh123蓄积试验中DHA应用后使K562/ADM细胞内Rh123浓度由用前的22.16%升至89.18%,Rh123外排试验中DHA应用后使K562/ADM细胞内Rh123浓度由用前的27.15%升至60.51%。结论:DHA:能有效逆转白血病细胞的MDR机制为通过抑制肿瘤细胞膜上P-gp的药泵功能,增加耐药细胞内化疗药物浓度逆转耐药性,而不是抑制和P-gp表达。     

小干扰RNA诱导人卵巢癌细胞MDR1基因沉默的研究

目的 采用RNA干扰技术逆转人卵巢癌OVCAR8/TR细胞中多药耐药基因,探讨该技术能否有效地抑制多药耐药基因MDR1的表达,降低该基因编码的糖蛋白P-gp的水平.方法 设计合成针对MDR1的小片段RNA(siRNA),将合成的siRNA用脂质体转染具有多药耐药基因MDR1高表达的人卵巢癌泰素耐药细胞株OVCAR8/TR,用荧光定量RT-PCR检测转染后不同时间点MDR1的mRNA的变化,流式细胞仪定量测定转染后不同时间点P-gp表达的情况.结果 MDR1的siRNA转染细胞48 h基因的抑制达最高,转染的第5 d回到正常水平.阴性对照组mRNA的量与未转染组的mRNA的量差异无统计学意义.P-gp在转染后的72 h其抑制最强,至第5 d时恢复接近正常水平,阴性对照组蛋白表达与未转染组的蛋白表达差异无统计学意义.结论 siRNA能够有效地抑制多药耐药基因MDR1的mRNA和P-gp的表达,为逆转卵巢癌的多药耐药带来了新的希望.     

黄酮类化合物抵抗P-糖蛋白介导肿瘤多药耐药特性机制研究进展

多药耐药（MDR）的产生是临床上治疗肿瘤失败的重要原因之一,而MDR的相关机制却十分复杂。目前认为P-糖蛋白（P-gp）是介导MDR的主要因素之一,它能将不同结构和功能的化疗药物排出细胞外,明显降低化疗的成功率。黄酮类化合物存在于多种植物中,具有广泛的药理活性,近年研究发现,黄酮类化合物具有逆转肿瘤MDR作用,能影响外排转运蛋白特别是P-gp的表达和功能。本文从黄酮类化合物抑制P-gp蛋白表达的分子机制、抑制P-gp的外排功能、阻止P-gp与底物结合等方面来阐述黄酮成分抵抗P-gp介导肿瘤MDR特性的机制,为黄酮类化合物在肿瘤治疗方面的应用提供思路和借鉴。     

Establishment of multidrug-resistance cell line C6/adr and reversal of drug-resistance

Objective To investigate the mechanism of multidrug resistance (MDR) in a human glioma cell and methods for overcoming multi-drug resistance.Methods MDR cell line C［6］/adr was established. The expression of the mdr-1 gene and its P-glycoprotein (P-gp) in the C［6］/adr cell line was observed by RT-PCR and flow cytometry. The reversal of MDR by verapamil, erythromycin, dihydropyridine, P-gp monoclonal antibody and Salvia miltiorrhiza (SM) was studied by microtiter tetrazolium (MTT) assay or by high performance liquid chromatographic assay.Results The mdr-1 gene of the C［6］/adr cell line was positive, over-expressing P-gp. The drug-resistance of the C［6］/adr cell lines could be partly reversed by 2-6μg/ml of verapamil, 50-100μg/ml of erythromycin, or 5μg/ml of dihydropyridine. As concentration increased, they had a better effect. Among these drugs, 100μg/ml of erythromycin had the best result of reversal. Dihydropyridine 1μg/ml, P-gp monoclonal antibody and SM had no effect.Conclusion The mdr-1 gene and its expression might be associated with the MDR of glioma cells. Verapamil, erythromycin and dihydropyridine could reverse the MDR of glioma cells.     

三种细胞因子对恶性肿瘤多药耐受影响的实验研究

通过体外转染多药耐受相关蛋白(MRP)基因和化疗药物VP-16、5-Fu诱导的方法分别建立了膀胱癌多药耐受(MDR)细胞亚系EJ／MRP和鼻咽癌MDR亚系LCE／VP、LCE／Fu,并观察了细胞因子rhG-CSF、IFN-αlb和IL2对这些亚系MDR水平的影响。结果发现IFNalb和IL-2可以一定程度地逆转3种MDR细胞对VP-16耐受程度,逆转倍数在3．4与5．2之间,可以增加柔红霉素Dau在MDR细胞内的聚集程度;相反地,rhG-CSF增强了MDR细胞对VP-16的耐受程度和降低了Dau的胞内聚集程度。以上揭示IFNalb、IL-2对P-gp或(和)MRP介导的MDR具有逆转作用,rhG-CSF则增强了P-gp或(和)MRP介导的MDR程度,这为MDR研究和临床癌症治疗提供了一定参考。