IDA对白血病骨髓基质培养体系中HL-60细胞杀伤效应的观察

目的：研究细胞毒药物对体外残留白血病模型中HL-60细胞的杀伤效应。方法：采用Dexter型骨髓培养体系形成白血病骨髓基质细胞贴壁层，接种HL-60细胞共培养，用去甲氧基柔红霉素(IDA)处理后，动态观察HL-60细胞的活性变化。结果：随着IDA剂量的增加及培养时间的延长，HL-60细胞活力逐渐减弱，去甲氧基柔红霉素(IDA)与骨髓基质细胞层或单纯的培养基体外孵育对HL-60细胞杀伤能力减弱。结论：急性白血病骨髓基质有助于HL-60细胞逃避化疗药物杀伤，对残留白血病的形成具有重要作用。     

c-myc特异性siRNA 对HL-60细胞作用的研究

目的研究针对c-myc基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对白血病细胞株HL-60细胞增殖及c-myc蛋白表达的影响,探讨应用siRNA进行白血病基因治疗的可能性。方法制备特异性对应c-myc基因的siRNA转染HL-60细胞,倒置显微镜观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞增殖状态,免疫细胞化学染色法检测c-myc蛋白表达的改变。结果siRNA转染HL-60细胞后,细胞生长受抑,增殖能力减弱,其增殖抑制作用于转染后48h、72h最明显,增殖抑制率分别为53.2%和51.5%;免疫细胞化学染色结果显示c-myc蛋白阳性率从空白组(76.67±4.35)%下降至(23.33±3.56)%。结论针对c-myc基因的siRNA对HL-60细胞增殖及c-myc蛋白表达有明显抑制作用,有望为白血病提供新的治疗途径。     

PARP抑制剂olaparib对急性髓系白血病细胞HL-60抑制作用研究

目的 研究PARP抑制剂olaparib对人急性髓系白血病细胞株HL-60细胞的抑制作用。方法 对数生长期HL-60细胞经不同浓度(0、1.25、2.5、5、10 μmol/L)olaparib作用不同时间后,CCK-8法检测olaparib对HL-60细胞的增殖抑制作用;Annexin-V/PI双标法检测HL-60细胞凋亡水平,Western blot检测HL-60细胞内相关信号蛋白(PARP-1、Caspase-3)表达变化。结果 与对照组相比,经不同浓度(1.25、2.5、5、10 μmol/L)olaparib作用48 h后的HL-60细胞出现增殖抑制,并且随着作用时间的延长,抑制率逐渐增加;同时发现olaparib诱导HL-60细胞发生凋亡,并显示出剂量依赖效应;Western blot结果显示,olaparib处理后的HL-60细胞内PARP活性受到抑制,Caspase-3活化。结论 PARP抑制剂olaparib对HL-60细胞不仅具有增殖抑制作用,同时可通过激活Caspase-3,抑制PARP活性,诱导HL-60细胞凋亡。     

三氧化二砷对白血病HL-60细胞株分化影响的研究

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)治疗白血病的作用机制.方法:1)用流式细胞仅检测细胞膜上的CD11b的表达和细胞凋亡率.2)用RT-PCR方法检测c-myc基因在mRNA水平上的表达.结果:2.5 μmol/LAs2O3处理HL-60细胞90 h后,细胞分化的标志性细胞膜抗原CD11b表达明显升高,由(14.5±2.1)%升高到(35.4±5.7)%,P<0.05;NBT阳性细胞由(10.0±2.1)%升高到(31.25±3.4)%(P<0.05),同时c-myc基因在mRNA水平也明显降低.结论:As2O3通过降低c-myc基因表达及上调细胞分化抗原CD11b表达,从而促进HL-60细胞分化.     

白血病骨髓基质细胞对白血病细胞屏蔽效应的体外实验研究

背景与目的:肿瘤微环境是影响肿瘤细胞转归的关键因素之一。骨髓微环境能保护白血病细胞,促进白血病细胞耐药、抗凋亡存活,但机制未完全阐明。本研究中我们主要观察骨髓基质细胞促白血病细胞抵抗柔红霉素(daunorubicin,DNR)杀伤的屏蔽效应,旨在探讨骨髓基质细胞增强Jurkat细胞抗凋亡、抗药特性的可能机制。方法:应用Percoll分离正常及白血病性骨髓单个核细胞,体外培养骨髓基质细胞模拟骨髓微环境功能,与白血病细胞Jurkat体外共培养。AnnexinV/PI双标法流式细胞仪检测0.5μmol/LDNR处理后Jurkat细胞凋亡率的变化。PI染色流式细胞仪检测细胞周期分布。结果:共培养后正常骨髓基质细胞抑制DNR诱导的Jurkat细胞凋亡,与单独悬浮培养组比较显著降低[(8.39±4.08)%和(16.02±1.00)%,P<0.05]。白血病骨髓基质细胞对Jurkat细胞的屏蔽效应强于正常骨髓基质细胞[Jurkat细胞凋亡率分别是(5.73±1.78)%和(8.39±4.08)%,P<0.05]。DNR处理正常或白血病骨髓基质细胞共培养组G0/G1期Jurkat细胞比例高于悬浮培养DNR处理组,而正常与白血病骨髓基质细胞屏蔽的Jurkat细胞G0/G1期阻滞现象无显著性差异[(47.96±5.88)%和(39.25±3.04)%,P>0.05]。结论:骨髓基质细胞可能部分通过阻滞白血病细胞于G0/G1期,抑制DNR诱导的白血病细胞     

mPGES-1抑制剂MK886对白血病HL-60细胞的增殖抑制作用

目的:观察膜结合型前列腺素E2合酶1(mPGES-1)抑制剂MK886对急性髓细胞白血病细胞株HL-60的增殖抑制作用。方法:不同浓度的MK886作用于HL-60细胞不同时间后,CCK-8测定其对HL-60细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测HL-60细胞的凋亡情况,Western blot法检测mPGES-1、Bax、Bcl-2蛋白的表达,ELISA法检测PGE2。结果:HL-60细胞株高表达mPGES-1。MK886可时间、剂量依赖性地抑制HL-60细胞mPGES-1表达和PGE2合成,同时细胞增殖受到抑制,凋亡增加,Bax蛋白表达上调,Bcl-2表达下降。结论:MK886可抑制HL-60细胞增殖,诱导凋亡,其机制与下调mPGES-1表达、抑制PGE2合成和调控Bcl-2/Bax等有关。     

用骨髓细胞培养净化法对白血病人进行自体骨髓移植

对白血病人的骨髓细胞进行长期培养可以选择性地对白血病细胞抑制，而有利于正常造血组细胞的增长。我们利用此特点进行对白血病人自身骨髓移植前的骨髓净化。     

正常人骨髓成纤维样基质细胞对HL-60/VCR耐药细胞增殖的影响

目的观察正常人骨髓成纤维样细胞系HFCL对白血病多药耐药细胞HL-60/VCR增殖和分化的影响.方法采用四唑氮蓝(MTT)法进行HL-60/VCR细胞药物敏感实验.建立HL-60/VCR细胞和HFCL细胞共培养体系,苔盼蓝拒染法测定生长曲线;硝基四氮唑蓝(NBT)确定细胞分化;流式细胞仪检测细胞周期和CD11b、CD13、CD14、CD33细胞表面抗原进一步鉴定细胞分化;Western blot检测增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)和P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp).结果HL-60/VCR细胞对多种药物耐药.与HFCL细胞共培养后,HL-60/VCR细胞生长受抑,且与HFCL细胞直接接触组的抑制作用＞用transwell组.同时发现HL-60/VCR细胞与HFCL细胞共培养后,G1期细胞增多,S期细胞减少;同时CD11b和CD14表达增高,CD13和CD33变化不大;且NBT阳性细胞轻度增多.Western blot检测结果显示,PCNA表达下调,以直接接触组为甚.但是P-gp表达无变化.结论正常人骨髓成纤维样细胞HFCL能抑制白血病MDR细胞HL-60/VCR的增殖,抑制PCNA的表达,出现G1期阻滞,并部分向单核细胞分化.     

甲异靛诱导白血病细胞HL-60凋亡及机制探讨

背景与目的:甲异靛可有效治疗慢性粒细胞白血病,但其抗白血病的机制尚不清楚。本研究拟观察甲异靛诱导急性白血病细胞株HL-60细胞凋亡的作用及促凋亡机制。方法:用台盼蓝拒染实验观察甲异靛对HL-60细胞增殖抑制作用;琼脂糖凝胶电泳检测DNA条带;荧光显微镜观察细胞形态学的变化;流式细胞术检测细胞凋亡率和Fas蛋白的表达;免疫蛋白印迹法分析caspase-9、caspase-8、caspase-3、PARP、bcl-2、bax和胞浆细胞色素c的含量。结果:甲异靛可抑制HL-60细胞增殖和诱导其凋亡。20μmol/L甲异靛处理HL-60细胞12～48h可明显抑制HL-60细胞增殖;20μmol/L甲异靛作用于HL-60细胞1h,凋亡百分比为(3.70±0.56)%,当延长至3h、6h和12h凋亡细胞比例分别上升至(19.80±1.13)%、(29.20±2.69)%和(47.05±7.70)%,较阴性对照组[(2.65±0.78)%]明显增高(P<0.05)。HL-60细胞经甲异靛处理3h后出现细胞核染色质浓集和DNA梯形条带。甲异靛处理HL-60细胞1h后死亡受体Fas阳性率由(9.35±0.21)%升高到(21.30±1.27)%(P<0.05)。甲异靛可活化HL-60细胞的caspase-8、caspase-9、caspase-3和PARP,降低抗凋亡蛋白bcl-2的表达和上调促凋亡蛋白bax,并升高细胞浆中细胞色素c的浓度。caspase-3抑制剂(z-DEVD-fmk)可以减少甲异靛对HL-60细胞的增殖抑制,降低细胞凋亡率。100μmol/Lz-DEVD-fmk预处理HL-60细胞后再加入20μmol/L甲异靛,5h后凋亡率为(16.5±5.5)%,甲异靛组为(29.8±5.4)%(P<0.05);12h后计数,抑制剂加甲异靛组活细胞高达(3.57±0.18)×105/ml,甲异靛组活细胞仅为(1.80±0.14)×105/ml(P<0.05)。结论:甲异靛可诱导HL-60细胞凋亡,其机制与caspases和bcl-2家族蛋白的调节有关。     

水杨酸钠对HL-60/VCR细胞多药耐药的部分逆转

目的 :研究水杨酸钠 (Na Sal)对HL 6 0 VCR细胞多药耐药的部分逆转作用。方法 :采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术等方法 ,观察非甾体抗炎药Na Sal对HL 6 0 VCR细胞多药耐药的部分逆转作用。结果 :Na Sal对HL 6 0 VCR细胞的生长具有抑制作用并表现出剂量依赖性 ,1mmol L的非细胞毒剂量的Na Sal和化疗药物联合应用可以提高多种化疗药物的细胞毒性作用 ,逆转倍数为 1 0 1～ 3 2 6 ,相对逆转效率为 0 5 2 %～ 73 6 2 %。流式细胞仪测定细胞内柔红霉素 (DNR)浓度发现 ,Na Sal并不增加HL 6 0 VCR细胞内DNR浓度。结论 :Na Sal能有效地部分逆转HL 6 0 VCR细胞的多药耐药性     

半边旗提取物6F诱导HL-60细胞凋亡

目的 :探讨蕨类植物半边旗提取物 6F杀伤HL 60细胞的作用机制。方法 :应用倒置显微镜观察细胞形态、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞光度术、DNA片段形成率等方法检测细胞凋亡。结果 :5 8～ 2 31nmol L 6F作用HL 60细胞 12～ 2 4h后 ,呈现典型的凋亡细胞的形态学改变 ,琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯状条带 ,流式细胞光度术结果显示有亚倍体 (Sub G1)峰 ,DNA片段率结果显示 6F诱导HL 60细胞凋亡呈时间和剂量效应关系 ,6F达到 2 9μmol L时只需作用 3h即可直接使细胞坏死。 结论 :6F可诱导HL 60细胞凋亡 ,药物在一定的浓度范围内是其杀伤HL 60细胞的机制之一     

苯丙氨酸解氨酶诱导人白血病HL-60细胞凋亡的初步研究

目的 :研究苯丙氨酸解氨酶(L phenylalanineammonia lyase ,PAL)对白血病HL 60细胞生长的抑制作用 ,探讨其作用机制。方法 :应用MTT比色法观察PAL对HL 60细胞的生长抑制作用 ,应用倒置显微镜和DNA琼脂糖凝胶电泳技术分析细胞凋亡。结果 :PAL与HL 60细胞共育时 ,能明显抑制细胞生长 ,半数抑制浓度 (IC50 )为 3 0 2U/mL ;细胞呈典型的凋亡形态学改变 ,细胞皱缩 ,染色质凝集 ,沿核膜内侧分布 ,可见新月形 ;细胞DNA裂解成 180～ 2 0 0bp及其倍数的片段 ,电泳得到特有的梯形条带 ,凋亡率与PAL剂量和作用时间呈依赖关系。结论 :PAL能抑制HL 60细胞的生长 ,诱导细胞凋亡是其抗肿瘤的作用机制之一。     

Influence of idarubicinol on the antileukemic effect of idarubicin

We investigated the antileukemic potency of idarubicinol (IDAol), a 13-dihydro (13-OH) metabolite of idarubicin (IDA), on the HL60 line of human leukemia cells. In contrast to daunorubicinol (DNRol) and to doxorubicinol (DOXol), IDAol showed an extensive accumulation in HL60 cells. The high affinity for DNA and the strong DNA cleavage activity of IDAol were comparable to values for IDA; consequently, IDAol was strongly cytotoxic against HL60 cells. IDAol may play an important role in the clinical efficacy of IDA in patients with acute leukemia, particularly since it persists in the blood for prolonged periods after the administration of IDA.     

Synergistic Effects of Highly Unsaturated Fatty Acid-containing Phosphatidyl-ethanolamine on Differentiation of Human Leukemia HL-60 Cells by Dibutyryl Cyclic Adenosine Monophosphate

Highly unsaturated fatty acid-containing phospholipid (HUFA-PL) has many nutritional and medical applications. We investigated the effect of HUFA-PL on differentiation of human leukemia HL-60 cells induced by dibutyryl cyclic adenosine monophosphate (dbcAMP). HUFA-containing phosphatidylethanolamine (HUFA-PE), such as salmon testis PE, significantly enhanced dbcAMP -induced cell differentiation. A combined treatment of 200 μM dbcAMP with 50 μ M HUFA-PE increased the nitroblue tetrazolium (NBT)-reducing activity, which is an indicator of differentiation, to a level comparable to that in the case of 500 μ M dbcAMP treatment. In contrast, HUFA-lyso PE (a monoacyl form) did not exert an enhancing effect on dbcAMP-induced differentiation. The enhancing effect of HUFA-PE was suppressed by a protein kinase C inhibitor, staurosporine, while a protein kinase A inhibitor, H-8, did not suppress the enhancing effect. These findings suggest that HUFA-PE might enhance dbcAMP-induced differentiation through modulation of the protein kinase C signaling pathway in HL-60 cells.     

淫羊藿苷对急性早幼粒白血病细胞体内外效应的研究

目的 :探讨淫羊藿苷 (ICA)对急性早幼粒白血病细胞的诱导分化作用。方法 :采用ICA与全反式维甲酸 (ATRA)对比试验 ,观察ICA在体外及小鼠体内对白血病细胞增殖分化的影响。结果 :ICA在体内外对白血病细胞均有较明显的诱导分化和抑制增殖作用 ,且与ATRA合用可产生明显的协同效应。结论 :ICA具有明显的抗白血病细胞作用     

洛伐他汀对 HL-60、 KG-1、 K562白血病细胞体外作用的研究

目的：观察胆固醇合成抑制剂洛伐他汀（lovatatin,LOV)对HL－60、KG－1、K562白血病细胞增殖、凋亡的影响，并进一步探讨其作用机制。方法：首先利用MTT法、台盼蓝拒染法观察LOV对HL－60、KG－1、K562细胞增殖及活力的影响。再通过细胞形态观察，DNA凝胶电泳，流式细胞术分析，RT－PCR半定量测定bcl-2mRNA水平等技术，系统观察LOV对HL－60、KG－1、K562体外诱导凋亡的情况。结果：（1）LOV抑制HL－60、KG－1、K562细胞增殖，IC50分别为17．16、51．65、58．95μmol/L；(2)LOV诱导HL－60、KG－1、K562细胞凋亡，影响细胞周期进程，细胞阻滞于G1／S期；LOV在诱导HL－60细胞凋亡过程中随作用时间延长，bcl-2表达水平逐渐下降。结论：LOV抑制HL－60、KG－1、K562细胞增殖并诱导凋亡，阻滞细胞周期进程于G1／S期；bcl-2参与了LOV诱导凋亡的基因调控。     

Wnt5a修饰的bMSCs对白血病小鼠造血及白血病细胞生长的影响

探讨Wnt5a基因修饰的骨髓间充质干细胞（bMSCs）对急性髓系白血病小鼠体内造血和白血病细胞生长的影响。方法:外周血瑞氏染色、骨髓流式细胞仪鉴定移植性HL60人白血病重度联合免疫缺陷(SCID)小鼠模型。造模成功的SCID小鼠,随机分为实验组（A组:Ad5-Wnt5a-bMSCs+模型小鼠）;对照组（B组:Ad5-GFP-bMSC+模型小鼠;C组:bMSC+模型小鼠;D组:模型小鼠）。RT-PCR检测外源性Wnt5a基因经骨髓腔移植入白血病小鼠模型后的定植情况。骨髓MSC及CFU-Mix培养、流式细胞仪、组织细胞化学及组织病理检测白血病小鼠移植前后各组外周血、骨髓、肝、脾、肾中的白血病细胞以及骨髓造血的变化。结果:成功建立急性髓性白血病模型;外源性Wnt5a基因转染人bMSCs,转染率达37.38%。外源性Wnt5a基因成功定植于受体骨髓中。Wnt5a基因修饰bMSCs移植后,与对照组比较,实验组SCID小鼠生存率明显提高,差异有统计学意义（P<0.05）;外周血有核细胞及瘤细胞计数明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）;CFU-Mix和MSC集落生长恢复较快,集落数明显增多,差异有统计学意义（P<0.05）;小鼠骨髓、肺、肝、脾、肾CD33阳性率明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:Wnt5a基因修饰的bMSCs在体内能有效地抑制白血病细胞生长,支持骨髓造血。      

IA、MA和DA方案治疗急性髓系白血病临床疗效分析

[目的]观察IA、MA和DA方案治疗成人急性髓系白血病（AML）的疗效和不良反应。[方法]105例AML患者随机分为3组,其中IA组35例,MA组34例,DA组36例。以完全缓解率和总有效率作为临床疗效观察指标。[结果]IA、MA和DA组完全缓解率分别为82.9%、76.5%和52.8%,总有效率分别为94.3%、85.3%和61.1%。IA组与DA组、MA组与DA组完全缓解率和总有效率比较均有显著性差异（P〈0.05）。3组不良反应主要表现为骨髓抑制和恶心呕吐。MA组心脏毒性发生率低于IA和DA组（P〈0.05）;各组其它不良反应发生率无显著性差异（P〉0.05）。[结论]IA和MA方案疗效优于DA方案,不良反应可耐受。     

成人急性淋巴细胞性白血病周围血粒细胞左移的临床意义

本文分析44例成人急性淋巴细胞性白血病患者,按外周血出现未成熟粒细胞与否,分为左移与非左移两组进行对照,发现左移组具有生存期长,死亡率低;外周血粒细胞明显高于非左移组,原幼淋巴细胞明显低于非左移组等特点,表明左移组肿瘤细胞负荷较低,预后较好。