抗原致敏DC诱导CIK细胞对肺腺癌细胞的杀伤作用

[目的]研究肿瘤抗原致敏的树突状细胞（DC）诱导淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK）和细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对肺腺癌原代细胞的杀伤作用，并与单独LAK、CIK细胞的杀伤效果进行比较。[方法]取健康人外周血单个核细胞（PBMNC），常规诱导出DC、CIK、LAK细胞；用肺癌A549细胞提取的肿瘤抗原冲击DC，倒置显微镜下观察DC形态，流式细胞仪检测DC经抗原冲击和未经抗原冲击后其表型变化；把CIK细胞、DC-CIK细胞、LAK细胞和DC-LAK细胞作为效应细胞，肺腺癌原代细胞作为靶细胞，共分为4组，在10：1、20：1、50：1的效靶比时，进行杀伤试验，使用LDH释放法测定杀伤活性。[结果]DC经肿瘤抗原冲击后在镜下呈典型成熟形态；流式细胞仪检测DC经肿瘤抗原冲击和未经肿瘤抗原冲击其表面分子CD40、CD80、CD86和HLA-DR的表达，前者明显高于后者，两者有显著性差异（P〈0．01）；DC—CIK细胞对肺腺癌原代细胞的杀伤活性高于DC—LAK细胞、CIK细胞和LAK细胞（P〈0．05），随着效靶比的升高，DC-CIK细胞对肺癌细胞的杀伤效应随之增强（P〈0．05）。[结论]肿瘤抗原致敏的DC可诱导特异性CIK细胞，DC-CIK细胞对肺腺癌原代细胞的杀伤作用明显高于DC—LAK、CIK、LAK细胞。     

CD_3单克隆抗体激活细胞的体外抗肿瘤作用

目的:观察CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞(CD3AK)的体外杀伤肿瘤作用。方法:采用MTT法测定不同时期CD3AK细胞的杀伤活性。结果:培养到第4天的CD3AK细胞已有明显的杀伤活性,第10天达高峰;CD3AK对K562、H7402和MNK45肿瘤细胞的杀伤活性显著高于LAK和NK细胞(P<0.05),对Hela-3肿瘤细胞的杀伤活性略低于LAK细胞。结论:CD3AK是一种广谱、高效的肿瘤杀伤细胞,但它对不同种类的肿瘤细胞的杀伤效应又存在着较大的差异。     

抗原致敏树突状细胞诱导CIK对肺癌细胞杀伤作用的研究

[目的]研究肿瘤抗原致敏的树突状细胞（DC）诱导淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK）和细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对肺癌细胞株A549和肺腺癌原代细胞的杀伤作用。[方法]取健康人外周血单个核细胞,常规诱导出DC、CIK、LAK细胞。用肺癌A549细胞提取的肿瘤抗原冲击DC,倒置显微镜下观察DC形态。流式细胞仪检测DC经抗原冲击和未经抗原冲击后其表型变化。LDH释放法测定杀伤活性。[结果]DC经肿瘤抗原冲击后在镜下呈典型成熟形态,其表面分子CD40、CD80、CD86和HLA-DR的表达明显较未经肿瘤抗原冲击的DC高。DC＋CIK细胞对A549和肺腺癌原代细胞的杀伤活性高于CIK细胞、LAK细胞和DC＋LAK细胞（P〈0.05）,随着效靶比的升高,其杀伤效应随之增强（P〈0.05）。[结论]肿瘤抗原致敏的DC可诱导特异性CIK细胞,DC＋CIK细胞对A549和肺腺癌原代细胞的杀伤作用明显高于DC＋LAK、CIK、LAK细胞。     

肝癌患者自体CD3AK细胞与LAK细胞的杀伤活性比较

目的 比较肝癌患者自体CD3AK细胞和LAK细胞的杀伤活性,为临床是供依据。方法 以流式细胞仪检测细胞的杀伤活性。结果 原发性肝癌患者自体的CD3AK细胞的NK活性和LAK活性均高于LAK细胞。结论 CD3AK细胞效果稳定,抗瘤效应明显高于LAK细胞,CD3AK细胞可望作为一种新的生物治疗手段用于肿瘤治疗。     

骨肉瘤患者外周血经体外诱导的rIL-2-CL和杀伤细胞的抗瘤活性

目的　研究骨肉瘤患者外周血淋巴细胞体外刺激后经rIL2诱导形成的细胞毒淋巴细胞和杀伤细胞的体外抗瘤活性。　方法　外周血淋巴细胞(PBL)在体外用患者肿瘤组织学相关传代骨肉瘤细胞刺激5d再经rIL2诱导12d;单独rIL2激活培养PBL3～5d;分别获取rIL2诱导体外刺激细胞毒淋巴细胞和LAK细胞。　结果　rIL2对两种效应细胞诱导作用基本平行;rIL2CL第12d达到峰值,二周后仍保持相当强度;rIL2CL对人骨肉瘤细胞(OS细胞系)杀伤活性明显强于LAK细胞。　结论　rIL2CL主要是一种特异性较高、杀伤活性强烈CTL细胞群,对抗LAK细胞的骨肉瘤细胞具有明显杀伤效应     

抗原致敏DC联合CIK细胞对肺癌细胞杀伤作用的研究

[ 目的]研究肿瘤抗原致敏的树突状细胞（DC）联合细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对肺腺癌原代细胞的杀伤作用，及肺癌细胞杀伤作用中细胞因子水平。[方法]取健康人外周血单个核细胞（PBMNC），常规诱导出DC、CIK、LAK细胞；用肺癌A549细胞提取的肿瘤抗原冲击DC，倒置显微镜下观察DC形态，流式细胞仪检测DC经抗原冲击和未经抗原冲击后其表型变化：把CIK细胞、DC-CIK细胞、LAK细胞和DC-LAK细胞作为效应细胞，肺腺癌原代细胞作为靶细胞，共分为4组，在10：1、20：1、50：1的效靶比时，进行杀伤试验，使用LDH释放法测定杀伤活性；ELISA法检测杀伤试验中细胞因子IL-2、IL-12、IFN-γ的分泌水平。[结果]DC经肿瘤抗原冲击后在镜下呈典型成熟形态；DC—CIK细胞对肺腺癌原代细胞的杀伤活性高于CIK细胞、LAK细胞和DC—LAK细胞（P〈0．05），随着效靶比的升高，DC—CIK细胞对肺癌细胞的杀伤效应随之增强（P〈0．05）；细胞杀伤试验中DC—CIK细胞组中IFN-γ、IL-12的分泌量明显高于其它3组（P〈0．05）：而IL2的分泌量以DC-LAK细胞组为最高，DC—LAK和LAK细胞组明显高于其他2组（P〈0．05）。[结论]肿瘤抗原致敏的DC可诱导特异性CIK细胞，显著提高CIK细胞对肺腺癌原代细胞的杀伤作用，其杀伤作用可能与IFN-γ、IL12的分泌量有关。     

白细胞介素2／LAK细胞过继性免疫疗法在肿瘤治疗中的应用

经临床验证,以白细胞介素2和淋巴因子活化的杀伤细胞(LAK细胞)治疗肿瘤具有一定的效果.LAK细胞具有广谱抗肿瘤活性.继LAK细胞之后,肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)以其较强的特异性抗瘤活性而令人注目.肿瘤的过继性免疫疗法在理论研究和临床应用方面正不断取得进展,与传统肿瘤治疗措施相配合,可望提高疗效.     

肿瘤过继性细胞免疫治疗的研究进展

肿瘤过继性细胞免疫治疗(adoptive celular immunotherapy。ACI)是指转输具有抗瘤活性的效应细胞治疗肿瘤。目前ACI已逐步发展成为一类重要的肿瘤生物治疗方法。根据诱导方法和来源的不同效应细胞常包括如下几种：肿瘤浸润淋巴细胞(tumour infiltrating lymphocyte。TIL)、淋巴因子诱导的杀伤细胞(lymphokine-activated killer cells,LAK)、     

A-NK细胞抗肝癌Walker256瘤株的实验研究

目的:观察A-NK细胞的体外生长与增殖,以及杀伤肿瘤细胞的能力,研究A-NK细胞局部注射的体内抗肿瘤作用。方法:用淋巴细胞分离液分离单个核细胞(PBMC),培养LAK细胞和A-NK细胞,分别将LAK细胞、A-NK细胞和Walker-256瘤株细胞接种于培养板中,培养24h后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法测定吸光度,计算肿瘤杀伤率。复制鼠肝癌模型,分别将LAK、A-NK细胞经肝动脉注入鼠肝癌模型中,观察两组动物的生存时间。结果:A-NK细胞的增殖明显快于LAK细胞(P<0.05),A-NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性比LAK细胞强(P<0.01),A-NK细胞能显著延长肝癌动物模型的生存期,与LAK细胞比较,具有显著性差异(P<0.01)。结论:A-NK细胞具有增殖快,抗瘤活性强,在体内能抑制肿瘤生长,延长荷瘤动物的生存期。     

IL—2/LAK细胞在白血病、淋巴瘤治疗中的应用

自1982年Grimm等首先描述了淋巴因子激活的杀伤细胞(Lymphokine activated killer cells,LAK)现象以来,对LAK细胞的研究日益深入。LAK细胞不仅有广谱的体外杀瘤效应,临床应用也具有抗肿瘤作用。LAK细胞和白细胞介素2(Interleukin—2,IL—2)疗法已成为临床上肿廇的继承性免疫治疗的主要方法之一。本文对近年来LAK细胞的研究及在血液病中的临床应用进展做一简要的概述。一、LAK细胞的生物学特性及其制备方法 LAK细胞是淋巴细胞在含有IL—2条件下经短期体外液体培养后能杀伤对自然杀伤(NK)敏感和不敏感的瘤细胞系及原代肿瘤细胞的一类功能细     

骨肉瘤患者外周血淋巴细胞体外相关瘤细胞致敏和rIL-2诱导的杀伤细胞

本实验对骨肉瘤患外周血淋巴细胞(PBL)采用2种培养方法；(1)PBL在体外用患肿瘤组织学相关传代骨肉瘤细胞(灭活处理)刺激5天再经rIL-2诱导12天；(2)单独rIL-2激活培养PBL3～5天；分别获取rIL-2诱导体外刺激细胞毒淋巴细胞(rIL-2-CL)和LAK细胞。借助^51Cr释放试验对2种效应细胞形成及体外抗瘤能力进行比较性研究。结论：rIL-2-CL主要是一种特异性较高，杀伤活性强烈CTL细胞群，对抗LAK细胞的骨肉瘤细胞具有明显杀伤效应。     

以SMMC—7721为靶细胞MTT法检测LAK细胞活性方法的建立

目的建立以贴壁生长的癌细胞为靶细胞、MTT法检测LAK细胞活性的方法。方法用MTT比色法测定LAK细胞对体外培养的K562、Raji、SMMC－7721细胞的杀伤活性。结果LAK细胞对已知的NK敏感细胞K562及NK耐受细胞Raji均有明显杀伤作用,贴壁生长的SMMC-7721肝癌细胞对NK细胞不敏感,而对LAK细胞敏感,在效靶比为40：1时,LAK细胞对肝癌细胞的杀伤率达90％以上,其杀伤效应随效靶比增高而增高。结论SMMC-7721细胞可作为检测LAK细胞活性的靶细胞。以贴壁细胞作为靶细胞的MTT法检测LAK细胞活性较传统的悬浮细胞如Raji作为靶细胞具有灵敏、准确、简单、可靠的优点,更适用于国内一般实验室开展。     

异体LAK细胞回输对肿瘤患者血清铜锌影响的初步观察

LAK细胞(Lymphokine activated killer cell)为淋巴因子激活的杀伤细胞，对肿瘤细胞有杀伤作用。国外应用LAK细胞回输治疗某些肿瘤取得了较好的效果。国内用于各类肿瘤的治疗亦见有效。有关肿瘤患者血清铜锌的变化报道甚多，但异体LAK细胞回输对其影响尚不甚清．为此，我们对肿瘤患者接受异体LAK细胞回输治疗中的血清铜(Cu)锌(Zn)变化进行了观察，以期了解这些变化与LAK细胞回输间的关系。     

骨肉瘤患者外周血淋巴细胞体外相关瘤细胞致敏和rIL-2诱导的杀伤细胞

本实验对骨肉瘤患者外周血淋巴细胞(PBL)采用2种培养方法:(1)PBL在体外用患者肿瘤组织学相关传代骨肉瘤细胞(灭活处理)刺激5天再经rIL-2诱导12天;(2)单独rIL-2,激活培养PBL3～5天;分别获取rIL-2诱导体外刺激细胞毒淋巴细胞(rIL-2-CL)和LAK细胞。借助~(51)Cr释放试验对2种效应细胞形成及体外抗瘤能力进行比较性研究。结论:rIL-2-CL主要是一种特异性较高,杀伤活性强烈CTL细胞群,对抗LAK细胞的骨肉瘤细胞具有明显杀伤效应。     

同种LAK细胞治疗癌性胸腹水的疗效观察

采用同种淋巴因子激活的杀伤细胞(简称同种 LAK 细胞)进行过继性免疫治疗是恶性肿瘤免疫治疗的新领域。同种 LAK 细胞临床应用的关键问题近年来已逐步得到解决。现已证明同种 LAK 细咆具有与同系 LAK 细胞相同的抗肿瘤作用。临床应用结果表明同种 LAK细胞对某些肿瘤具有一定的抗肿瘤效果,可使肿瘤不同程度的缩小或完全消失。近年来我们研究室对同种 LAK 细胞进行了较为系统的基础与临床应用研究。在此基础上,我们用同种 LAK 细胞对84例癌性胸水及20例癌性腹水进行了治疗,现将结果报告如下。     

脐血CD_3AK细胞的制备、生物活性测定及临床应用初探

 目的　研究用脐血单个核细胞制备CD3 AK细胞的抗肿瘤作用 ,探讨肿瘤生物治疗近期疗效的免疫指标。方法　分离脐血单个核细胞 ,分别用IL 2和IL 2 +CD3 Ab诱导LAK和CD3AK细胞 ,并测其扩增数量和对K5 6 2细胞的杀伤活性 ;测定肿瘤患者用CD3 AK细胞治疗前后外周血单核细胞(PBMC)的NK杀伤活性。结果　脐血LAK细胞和脐血CD3 AK细胞均于培养后第 11天时扩增倍数最高 ,分别是培养前的 18倍、2 4倍 ,对K5 6 2的杀伤活性分别是培养前的 2 .6倍和 3.2倍 ;肿瘤患者输注CD3 AK细胞一疗程后 ,其PBMC的NK杀伤活性由 6 2 %升高到 82 % ,平均升高 32 %。结论　 (1)脐血单个核细胞是LAK细胞和CD3 AK细胞良好的前体细胞。 (2 )LAK和CD3 AK细胞的数量和杀伤能力在培养的第 11天时达高峰 ,而且CD3 AK细胞数量和杀伤活性明显优于LAK细胞。 (3)CD3 AK细胞输注能明显提高肿瘤患者PBMC的NK活性。 (4 )肿瘤病人PBMC的NK活性测定可望成为肿瘤生物治疗的一个近期疗效参数     

A-NK细胞的抗肿瘤作用

过继免疫治疗（AIT）是肿瘤生物治疗中的主要疗法。20世纪80年代起，LAK、TIL、CIL、CD3AK等效应细胞陆续被研究，国内外基础研究和临床应用报道层出不穷。1988年Vujanovic首次从LAK细胞中分离纯化了一种具有高效杀伤活性的LAK亚群，因其具有黏附在塑料表面的特征，故命名为A-LAK（adherent LAK）。20世纪90年代后以A—NK（IL-2 activated NK cell）代替了A-LAK。本实验参照文献简便快速地制备A-NK细胞，并在动物肝癌模型研究其抗肿瘤作用。     

LAK细胞杀伤耐药胃癌细胞的实验研究

生物反应调节剂(Biological Response Modifiers,BRMs)已成为肿瘤治疗第四模式,尤其是白细胞介素2激活的淋巴细胞(LAK 细胞)用于肿瘤临床治疗取得一定的疗效.LAK细胞能否杀伤耐药肿瘤细胞是化疗后能否进行LAK治疗的关键.本研究采用体外诱导法建立了4株耐药胃癌细胞,体外药敏实验表明它们均对5氟尿嘧啶、丝裂霉素、长春新碱及氨甲喋呤耐药,耐药指数为9.1～15.63倍,但对顺铂敏感或低度耐药.LAK细胞与肿瘤细胞的结合实验显示细胞获得耐药性后与LAK细胞的结合增加.LAK细胞杀伤实验表明SGC7901耐药后对LAK细胞敏感性增加.结论:胃癌细胞耐药后对LAK细胞敏感性增加.化疗后选用LAK细胞治疗有可能改善肿瘤治疗效果.     

恶性肿瘤过继免疫治疗在国内的应用

肿瘤过继免疫治疗(Adoptive immunotherapy)是指将具有杀伤活性的免疫效应细胞如LAK、TIL、CD_3AK、单核—巨噬细胞或免疫介质如Interleukins、IFN、TNF、GM—CSF等转输或回输给肿瘤患者,提高机体的抗肿瘤能力,从而直接或间接地导致肿瘤消退。其中LAK/IL—2过继免疫治疗的方法目前应用最广,疗效也最为确切。自     

可溶性结肠癌抗原与CD3mAb,IL-2联合诱导杀伤细胞的实验研究

IL-2诱导体外杀伤细胞扩增慢,高依赖IL-2,特异性差,影响了其疗效的发挥.根据报道CD3mAb与IL-2在杀伤细胞的诱导过程中有增强作用.为了获得具有高效,特异细胞毒活性的抗肿瘤效应细胞,我们采用CD3mAb、IL-2与可溶性肿瘤抗原(结肠癌抗原)联合诱导正常人外周血单个核细胞获得相对特异的杀伤细胞(TAK),并对TAK与LAK在增殖活性、杀伤活性及表型上进行了对比.