附子和四逆汤表观药动学参数的测定

以毒性为指标测定附子及四逆汤的表观药动学参数。方法为:先测小鼠ipLD_(50),另取小鼠ip首次剂量后分为不同间隔时间组,分别通过LD_(50)补量法测定间隔不同时间后首次注入药物的体存量,以log体存量对用药后间隔时间作图得药物体存量的经时性变化曲线,并计算药动学参数。经判断附子和四逆汤在体内的经时性变化均符合二室模型。计算结果二药分布相的半衰期分别为1.15h及0.35h,消除相的半衰期分别为17.0h及5.8h。     

四逆汤组方不同配伍毒效关系研究

目的: 从药效和毒性两个方面对于四逆汤处方配伍进行研究,为四逆汤复方配伍的合理性提供实验依据。 方法: 平行比较附子、四逆汤全方、附子配伍甘草、附子配伍干姜对小鼠急性毒性,测定其半数致死剂量（LD₅₀）。开展了附子、四逆汤全方、附子配伍甘草、附子配伍干姜对阿霉素导致大鼠心衰模型影响研究,观察了受试物对心衰大鼠颈总动脉血流量、心率（HR）、左室收缩压（LVSP）、左室舒张末压（LVEDP）、左室内压力上升的最大速率（+dp/dt_max） 及左室内压力下降的最大速率（-dp/dt_max）的影响。 结果: 急性毒性实验结果显示,四逆汤处方配伍中附子配伍甘草对附子的减毒作用要优于附子配伍干姜,在减毒方面甘草起主要作用。四逆汤对阿霉素导致大鼠心衰模型试验结果显示,四逆汤全方、附子配伍甘草、附子配伍干姜和单用附子药效作用相似,均是通过增加心率、提高LVSP、增加+dp/dt_max,提高颈动脉血液流量起到治疗作用。附子配伍干姜对于附子的药效促进作用优于甘草,在增加处方药效方面干姜起主要作用。 结论: 四逆汤组方中甘草在减低处方的毒性方面起主要作用,干姜在增强附子药效方面起主要作用,从药效和毒性两方面阐明四逆汤处方配伍规律的合理性。     

附子,四逆汤抗实验性心率减慢药效动力学研究

本文以附子、四逆汤抗实验性心率减慢为指标,确定药物的量效关系,并通过测定其给药后不同时间的效应推算出药物的体存量,从体存量的经时性变化判断药物有效成分衰减模式并计算其药动学参数。结果所测药物的有效成分均属二室模型,消除相半衰期分别为9.98h及6.67h。     

四逆汤中甘草减附子之毒的代谢组学研究

基于GC-MS代谢组学方法分析四逆汤和缺甘草四逆汤干预后大鼠血浆中的内源性代谢物变化,研究四逆汤中甘草对附子的减毒作用。18只SD大鼠,随机平均分为正常组、四逆汤组和缺甘草四逆汤组。四逆汤组和缺甘草四逆汤组分别灌胃药液(生药质量浓度为0.8 g·m L~(-1)),剂量为0.02 m L·g~(-1),每日1次,连续7 d;正常组给予等体积的生理盐水。末次给药0.5 h,收集血浆样本,应用GC-MS检测。数据进行多元统计分析,得到14个潜在代谢标志物(指认13个),并对其相对含量及代谢途径进行分析。与缺甘草方组相比,四逆汤组对7个代谢标志物进行了回调。通过对这些代谢标志物的生理功能分析,推测四逆汤中甘草可以通过调节方中附子对糖酵解、脂质代谢、三羧酸循环和部分氨基酸等生物代谢途径的影响减低附子之毒性。     

附子不同炮制品对四逆汤质效影响的研究

目的:研究不同附子炮制品对四逆汤药效、毒性成分控制及药效学的影响,揭示国家药品标准中使用淡附片炮制品的科学性。方法:取生附片、淡附片、白附片、黑顺片、炮附片分别制备成四逆汤1、2、3、4、5,采用HPLC法测定不同四逆汤中单酯型生物碱、双酯型生物碱、甘草酸、甘草苷和6-姜辣素的含量;采用小鼠急性抗脑缺氧模型,以喘气次数和喘息时间为药效指标,对比不同四逆汤的药效学差异。结果:不同附子炮制品制备的四逆汤中,单酯型生物碱的总含量排列顺序为四逆汤4四逆汤2四逆汤1四逆汤5四逆汤3;双酯型生物碱的总含量排列顺序为四逆汤5四逆汤1四逆汤3四逆汤4四逆汤2;甘草酸和甘草苷的总含量排列顺序为四逆汤3四逆汤5四逆汤1四逆汤4四逆汤2;6-姜辣素的含量排列顺序为四逆汤1四逆汤4四逆汤3四逆汤5四逆汤2;且不同附子炮制品制备的四逆汤中,只有四逆汤2(淡附片)对喘气次数和喘息时间的影响均具有显著差异,有明显的脑缺氧保护作用。结论:从化学成分和药理作用两个方面综合分析,初步揭示了《中国药典》2015年版明确规定四逆汤方中使用淡附片炮制品的合理性和科学性。     

四逆汤及不同组方配伍对大鼠心肌缺血影响的对比研究

目的研究四逆汤及其不同组方配伍对垂体后叶素(Pit)所致大鼠心肌缺血模型的影响。方法建立大鼠心肌缺血模型,观察四逆汤、附子甘草合煎液、附子干姜合煎液、甘草干姜合煎液、附子单煎液、干姜单煎液、甘草单煎液对大鼠心肌梗死范围、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、天冬氨酸转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸的影响。结果四逆汤组、附子甘草组、附子干姜组、附子组能显著减少心肌梗死范围(P0.01)、减少心肌MDA、乳酸释放(P0.05、0.01)、降低血清LDH、CK、AST水平(P0.05、0.01);四逆汤组、附子干姜组能提高心肌SOD活性(P0.05);四逆汤组能显著提高心肌GSH-Px活性(P0.01);四逆汤组在心肌LDH水平上低于附子组(P0.05)。结论对大鼠缺血心肌的保护程度依次为四逆汤组附子干姜组附子甘草组附子组,从药效的角度揭示了四逆汤配伍的科学性,体现了四逆汤遣方用药之精准。     

四逆汤及其不同配伍方对心力衰竭大鼠的保护作用及机制探讨

目的:研究四逆汤及其不同配伍方对阿霉素诱导大鼠心力衰竭的保护作用及可能的作用机制。方法:SPF级雄性SD大鼠85只,其中75只大鼠采用ip阿霉素(2.5 mg·kg-1)法,每周1次,共6周,建立大鼠慢性心力衰竭模型。将造模成功大鼠随机分为模型组,附子组(1.5 g·kg-1),附子-甘草组(3 g·kg-1),附子-干姜组(2.5 g·kg-1),四逆汤组(4 g·kg-1)及卡托普利阳性药组(6.25 mg·kg-1),并另设正常组10只。各治疗组连续ig给药4周,模型组和正常组予同体积蒸馏水。末次给药后,称取各组全心和左心室质量,计算心重指数;取左心最大横切部位HE病理染色,观察心肌组织形态学变化;ELISA法检测血液中大鼠脑钠肽(BNP)、大鼠血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和大鼠醛固酮(ALD)水平。结果:与正常组比较,心衰模型组大鼠左心室质量指数(LVWI)和全心质量指数(HWI)明显增加(P0.05),大鼠血清BNP,AngⅡ和ALD含量较正常组显著升高(P0.01),组织形态学观察发现正常组心肌细胞排列整齐,细胞大小均一,模型组出现心肌纤维排列紊乱,胞质疏松,细胞肿胀等现象。与模型组比较给予四逆汤干预后,各用药组大鼠心肌病变情况均较模型组有不同程度改善,以四逆汤组改善情况显著,HWI指数明显减低(P0.05),各治疗组较模型组大鼠血清BNP,AngⅡ和ALD含量及LVWI指数均有不同程度的下降(P0.05),且四逆汤组在降低BNP和ALD水平上优于附子组(P0.05)。结论:四逆汤及其不同配伍方通过减轻心衰大鼠的症状,减缓心脏重塑,抑制神经内分泌因子的过度激活,多靶点、多途径的预防和缓解CHF的发生和发展,以四逆汤全方抗心衰效应更为明显,附子配干姜能部分改善相应指标,附子配甘草的强心作用较弱,单用附子的作用最弱。     

四逆汤及其不同配伍方对心力衰竭大鼠心肌能量代谢的影响

目的:研究四逆汤及其不同配伍方对阿霉素诱导大鼠心力衰竭心肌能量代谢的影响。方法:采用腹腔注射阿霉素(2.5 mg/kg)法,每周1次,共6周,建立大鼠慢性心力衰竭模型。将造模成功大鼠随机分为模型组、附子组(1.5 g/kg)、附子-甘草组(3 g/kg)、附子-干姜组(2.5 g/kg)、四逆汤组(4 g/kg)及卡托普利阳性药组(6.25 mg/kg),并设正常对照组。各治疗组连续灌胃给药4周,模型组和正常组予同体积蒸馏水。采用高效液相色谱法测定各组心肌磷酸腺苷(ATP、ADP和AMP)的含量变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠ATP含量明显减少(P0.01),AMP和ADP含量升高(P0.05);附子-甘草组、附子-干姜组、四逆汤组和卡托普利组较模型组大鼠心肌ATP含量增加(P0.05),AMP和ADP含量降低(P0.05)。结论:四逆汤及其不同配伍方可有效调节心衰大鼠的心肌能量代谢紊乱,延缓慢性心衰的发展,以四逆汤全方效应更为明显。     

四逆汤组方配伍减毒实验研究

目的针对四逆汤组方中所含的有毒中药附子,从毒理学角度研究四逆汤组方配伍的合理性。方法通过平行比较附子、附子配伍甘草、附子配伍干姜和四逆汤全方水煎液小鼠急性毒性、大鼠心脏毒性和毒性成分,测定小鼠急性毒性的半数致死剂量(LD50)、大鼠心脏毒性半数中毒剂量(TD50)和水煎液液中乌头碱类生物碱含量,从急性毒性、毒性靶器官和毒性成分3个方面研究四逆汤组方中不同配伍对附子毒性的影响。结果四逆汤组方中附子配伍甘草急性毒性的 LD50和心脏毒性的 TD50高于单用附子与四逆汤全方。而附子配伍干姜对附子的急性毒性的 LD50和心脏毒性的 TD50影响不明显。附子配伍甘草水煎液中主要毒性成分双酯型生物碱含量低于附子配伍干姜。结论四逆汤组方配伍药物中甘草对附子毒性具有减毒作用。     

四逆汤及拆方对缺血缺氧大鼠心肌细胞H9C2保护作用的探讨

目的:研究四逆汤及拆方水煎液对体外培养的缺血缺氧大鼠心肌细胞H9C2的保护作用。方法:利用厌氧培养盒构建厌氧环境,以D-Hanks液模拟缺血液,构建H9C2的缺血缺氧模型;将加有D-Hanks稀释过的四逆汤及拆方水煎液的H9C2置于厌氧盒中培养,MTT法测定H9C2的存活率;ELISA法测定细胞培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)的含量。结果:四逆汤及拆方加药组(四逆汤加药组、附子+干姜加药组、附子+甘草加药组、甘草+干姜加药组、甘草加药组、附子加药组、干姜加药组)在浓度均为5mg生药/ml时,与模型组比较均能提高H9C2的存活率;其中附子+干姜组(108.2±5.0)、四逆汤全方组(82.3±2.0)、附子组(78.4±10.0)均能明显提高缺血缺氧H9C2的存活率;细胞上清中CK-MB含量与TNF-α含量呈正相关(r=0.866),细胞存活率与TNF-α含量呈负相关(r=-0.0846)。结论:四逆汤及拆方水煎液通过抑制细胞TNF-α的释放,显著减少H9C2的凋亡,提高细胞存活率,对缺血缺氧的H9C2有直接保护作用。     

头孢呋辛酯干混悬剂人体相对生物利用度研究

 目的 考察头孢呋辛酯干混悬剂的人体相对生物利用度及生物等效性,从而评价其临床疗效。方法 本研究以市售的进口头孢呋辛酯片剂(西力欣)为对照,选用20名健康志愿受试者,进行了随机的2周期交叉实验。以HPLC测定血药浓度并计算药动学参数及生物利用度,进而对主要动力学参数进行统计学分析。结果 20名受试者交叉po单剂量头孢呋辛酯干混悬剂和西力欣片(250 mg)后两者的主要药动学参数较接近,头孢呋辛酯干混悬剂的相对生物利用度(F)达92.88%。主要参数的方差分析和双单侧t检验结果表明,头孢呋辛酯干混悬剂和西力欣片的AUC_0～inf之间无显著性差异(P＞0.05),91%置信区间在81.6%～97.2%之间;两种制剂的c_max之间也无显著性差异(P＞0.05),90%置信区间为93.6%～121%。结论 头孢呋辛酯干混悬剂与西力欣片具生物等效性。     

Kinetics of pharmacologic effects of radix Aconiti Lateralis Preparata and sini decoction]

In the study of analgesic action of Radix Aconiti Lateralis Preparata and Sini Decoction hot-plate method was used and the time-effect relationship was determined. The biological half-lives were 11.05 h and 6.84 h respectively. In the study of the effect on inflammation induced by egg white in the ankle joints of rats, the method of complement ED50 was used. The residual rates of the dosages after an interval of 6 hours were 0.60 and 0.69, and the biological half-lives were 8.11 h and 11.35 h respectively.     

神经生长因子的药代动力学研究

 目的：研究神经生长因子(nerve growth factor,简称NGF)在小鼠体内的药代动力学。方法：〈sup〉125〈/sup〉I-NGF用氯胺T法制备经静注和肌注两种途径,血装中NGF的浓度采用同位素示踪结合三氯醋酸(TCA)沉淀法或SDA-PAGE电泳法,测定小鼠血浆NGF的浓度。结果：静注〈sup〉125〈/sup〉I-NGF 25 μg·kg〈sup〉-1〈/sup〉,电泳法测得消除半衰期t〈sub〉1/2β〈/sub〉为2.223 h,酸沉法为2.264 h。酸沉法为2.264 h。肌注〈sup〉125〈/sup〉I-NGF 75,25,10μg·kg〈sup〉-1〈/sup〉电泳法测得消除半衰期t〈sub〉1/2β〈/sub〉分别为2.140,2.331,3.173 h,酸沉法测得消除半衰期t分别为2.480,2.552,2.642 h,达峰时间t〈sub〉max〈/sub〉为0.583 h,电泳法和酸沉法测得〈sup〉125〈/sup〉I-NGF平均血装清除率(Cl)分别为0.321和0.332 L·h〈sup〉-1〈/sup〉·kg〈sup〉-1〈/sup〉表观分布容积(Vd)为1.259和1.315 L·kg〈sup〉-1〈/sup〉,体内平均滞留时间(MRT)为3.592和3.539 h。结论：NGF在体内消除半衰期较短。本研究为今后的临床应用提供了必要的参考资料。     

mPEG-DSPE修饰的紫杉醇脂质体的制备及其药动学研究

 目的采用甲氧基聚乙二醇磷脂酰乙醇胺(mPEG-DSPE)修饰紫杉醇脂质体,并考察其在大鼠体内的药动学行为。方法合成两亲线型聚合物mPEG-DSPE;采用薄膜分散法制备mPEG-DSPE修饰的紫杉醇脂质体;并用HPLC测定紫杉醇在大鼠体内的血药浓度。结果得到的紫杉醇脂质体粒径为(411.8±31.9)nm,包封率为(82.47±2.15)%。紫杉醇注射液和修饰后脂质体的t_1/2β分别为1.48和10.48h,后者AUC约为前者的3.13倍。结论mPEG-DSPE修饰的紫杉醇脂质体具有显著的长循环特性,并可提高其体内的利用度。     

RP-HPLC测定氟康唑血药浓度及其药动学和生物利用度

 目的：建立RP HPLC快速测定人血清中氟康唑(FCZ)浓度。研究该药物在人体内的药动学和生物利用度。方法：血样经碱化、乙酸乙酯提取后，在Spherisorb C₁₈(200 mm×4.0 mm，5μm)不锈钢柱上分离，流动相为乙腈-水-磷酸(250∶750∶1.2，以二乙胺调pH 4)，以氨苯蝶啶为内标，在260 nm处检测，所得血浓数据用Z89NLF程序进行模型嵌合，求出有关药动学参数。结果：FCZ血清浓度在0.25 μg·ml^-1～10.0 μg·ml^-1范围内线性良好，最低检出浓度为0.1 μg·ml^-1，日内及日间精密度分别为6.30%(n=5)和8.98%(n=5)，方法回收率为99.33%～102.28%。对8名健康志愿受试者单剂量po FCZ片剂150 mg后研究表明，其药时曲线符合零级吸收的开放一室模型，达峰时间t_max为1.69 h，血清峰浓度c_max为3.30 μg·ml^-1，消除半衰期t_1/2约为27 h。双单侧检验结果显示，FCZ片剂与进口胶囊剂生物等效，相对生物利用度F rel为108.32%。结论：本方法简便、准确，能较好地满足FCZ临床血药浓度监测及人体药动学研究。     

FLU-HPLC测定复方吴茱萸巴布膏中阿魏酸血药浓度及药动学研究

 目的建立大鼠血浆中阿魏酸的FLU-HPLC测定方法,研究大鼠透皮给药复方吴茱萸巴布膏的药物动力学。方法色谱柱Venusil ASB-C_l8柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-水-冰醋酸(35∶65∶0.6),流速0.8 mL·min^-1,激发波长352nm,发散波长467 nm。采用固相萃取法去除血浆中杂质,荧光检测-高效液相色谱法测定了血样中阿魏酸的浓度,并用3P97软件进行了药动学参数的计算。结果方法的最低检测浓度为1.5μg·L^-1(S/N=3),绝对回收率范围为87.82%～96.51%。透皮给药后,药-时曲线符合一室模型,主要药动学参数A457.569μg·L^-1,K_a 0.146 h^-1,K_e0.090 h^-1,ρ_max 81.581μg·L^-1,t_max 8.639 h,Lag time 0.290 h。结论与传统方法比较,本方法灵敏度高、准确,更适用于阿魏酸血药浓度的测定及药动学研究。     

RP-HPLC测定西洛他唑的血药浓度及药动学研究

 目的建立RP-HPLC测定人血浆中西洛他唑含量,并研究西洛他唑片在健康人体内的药动学。方法色谱柱为HypersilODS-2(4.6 mm×150 mm,5μm)柱,流动相为乙腈-水(45∶55),流速1.0 mL·min^-1,柱温35℃,检测波长254 nm。结果西洛他唑在25～2 000μg·L^-1内线性关系良好(r=0.999 2),血浆最低检测浓度为10μg·L^-1,日内及日间RSD均小于6%,在3种不同浓度下,平均回收率分别为102.71%,102.03%和99.01%。人体药动学研究表明,药-时曲线符合二房室模型,主要药动学参数t_max 3.7 h,ρ_max749.2μg·L^-1,AUC_0～48 10 088.5μg·h·L^-1,t_1/2α 2.5 h,t_1/2β11.9 h。结论此法简便、灵敏、准确、稳定,可用于药物分析,其药动学参数可为临床合理用药提供理论依据。     

甲磺酸帕珠沙星对氨茶碱在兔体内药动学影响的研究

 目的研究甲磺酸帕珠沙星对兔体内氨茶碱药动学的影响。方法采用自身对照法,以HPLC测定兔单用氨茶碱及与甲磺酸帕珠沙星合用后的茶碱血清浓度,计算药动学参数。结果经BAPP2.3药动程序拟合,甲磺酸帕珠沙星使兔血清中茶碱的曲线下面积AUC由152.0mg·h·L^-1增加到361.4mg·h·L^-1;半衰期t_1/2由2.292h延长至6.823h;MRT由4.944h延长到9.383h,均有非常显著性差异(P<0.01)。结论家兔体内合用甲磺酸帕珠沙星对氨茶碱的消除药动学有显著抑制作用。     

药动学和药效学方法考察沙丁胺醇报雾剂的生物等效性

 目的以药效学方法评价结果为参照，考察药动学方法评价沙丁胺醇气雾剂生物等效性的适用性。方法采用随机分组、自身对照、开放试验设计，舒喘灵为试验制剂，喘乐宁为参比制剂。轻中度哮喘患者单剂量吸入沙丁胺醇400μg，给药后0，5，10，15，20，30min采血，并在6h内定时测定肺功能指标FEV_1.0，PEF，FVC和FEF_25～75及不良反应指标HR。以HPLC测定血浆药物浓度，非房室模型计算生物利用度参数c_max,t_max,AUC_{0～20 min}和AUC_{0～30 min}，通过双向单侧t检验和90%置信区间评价生物等效性。计算FEV_1.0，FVC，PEF，FEF_25～75改善百分数的最大值与平均值，AUC_ΔFEV1.0＞0，AUC_{ΔFEV1.0＞15%}，t_{ΔFEV1.0(0～15%)}，t_{ΔFEV1.0＞15%}，t_max(FEV1.0)，分别进行配对t检验，并对有显著差异的药效学参数进行多因素方差分析。结果两种制剂的c_max分别为(1.22±0.73)和(0.98±0.52 ) ng·mL^-1，t_max分别为(0.21±0.09)和(0.26±0.08) h。AUC_{0～20 min}分别为(0.25±0.10)和(0.18±0.10) ng·h·mL^-1。舒喘灵相对于喘乐宁的生物利用度为63%(90% CI 45%～88%)。双向单侧t检验和90%置信区间显示两种沙丁胺醇气雾剂生物不等效。两种制剂的药效学指标AUC_ΔFEV1.0＞0，AUC_{ΔFEV1.0＞15%}，ΔFEV_1.0(mean)，t_{ΔFEV1.0＞15%}，ΔPEF(max)，ΔHR(mean)有显著差异。舒喘灵的扩支气管作用仅为喘乐宁的70%左右。方差分析显示两种制剂药效学不等效。结论在评价沙丁胺醇气雾剂的生物等效性方面，药动学方法能够得出与药效学方法一致的结论，提示该方法适用于沙丁胺醇气雾剂生物等效性评价。     

Pharmacokinetics of Hesperetin and Naringenin in the Zhi Zhu Wan,a Traditional Chinese Medicinal Formulae,and its Pharmacodynamics Study

Zhi Zhu Wan (ZZW), a classical Chinese medical formulae consisted of Atractylodes Rhizome and Fructus Citrus Immaturus, has been commonly used for treatment of gastrointestinal diseases. Hesperetin and naringenin are the main components of ZZW, and both can alleviate intestinal tract disorders. In this work, plasma pharmacokinetics and pharmacodynamics characteristics of ZZW after oral administration were investigated using a rapid and sensitive ultra performance liquid chromatography–tandem mass spectrometry method with an electrospray ionization source in positive ion mode. Biosamples were prepared using methanolic precipitation, and the separation of hesperetin and naringenin was achieved on a Waters ACQUITY HSS BEH (2.1 mm × 5 mm, 1.7 µm) column by linear gradient elution, and the total run time was only 3 min. Data were analyzed and estimated using WinNonlin Professional version 5.1. With pharmacokinetic analysis, the estimated pharmacokinetic parameters (i.e. C_max, area under the concentration–time curve (AUC) and t_1/2), were C_max = 776.06 ng/mL, AUC = 9473 ng/mL·h, t1/2 = 5.26 h for hesperetin and C_max = 2910.6 ng/mL, AUC = 40607.9 ng/mL·h, t1/2 = 4.69 h for naringenin, respectively. In the present study, we have also valuated and clarified the effect of ZZW on small intestinal movement. It was found that ZZW can accelerate intestinal motility in mice and may hold a promising treatment for intestinal diseases. Copyright © 2012 John Wiley & Sons, Ltd.