慢病毒介导的Cdh1-siRNA在大鼠全脑缺血再灌注损伤后的表达及功能

目的：探讨慢病毒介导RNA干扰Cdhl的表达对全脑缺血再灌注损伤的影响。方法：将150只雄性SD大鼠随机分成生理盐水组（A组）、空慢病毒组（B组）和重组慢病毒组（C组）各50只。分别给予3组大鼠注射生理盐水、空慢病毒和重组慢病毒,注射3d后采用改良4-VO法建立SD大鼠全脑缺血再灌注损伤模型,采用荧光定量PCR检测大鼠海马组织CdhlmRNA表达,Westernblot检测CyclinB的变化,TUNEL法检测海马CAl区凋亡细胞指数（AI）。于全脑缺血再灌注术后第7天行Morris水迷宫测试认知功能的变化。结果：c组CdhlmRNA表达明显低于A、B组（P〈0．05）;AI值及CyclinB表达均明显高于A、B组（P〈0．05）;水迷宫测试结果显示,术后第9～11天各时间点C组的寻台潜伏期明显长于A、B组（P〈0．05）。结论：细胞周期末期分裂促进复合物及其调节亚基Cdhl可能通过CyclinB堆积介导缺血性神经元的凋亡。     

慢病毒介导shRNA LINGO-1质粒转染促进骨髓间充质干细胞向神经细胞转化的研究

目的:探究慢病毒介导shRNA LINGO-1质粒转染促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经细胞转化的研究。方法:利用shRNA基因干扰技术,构建shRNA LINGO-1干扰载体,慢病毒转染BMSCs,根据病毒转染情况分成空白对照组(未转染慢病毒的BMSCs)、空载体病毒组(转染不含shRNA LINGO-1干扰载体慢病毒的BMSCs)、干扰载体病毒组(转染shRNA LINGO-1干扰载体慢病毒的BMSCs)。利用流式细胞仪检测BMSCs的表面蛋白,利用RT-PCR和Western-Blot检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、巢蛋白的表达。结果:CD44和CD29在第2代BMSCs的表达为60.2%和58.3%;CD34和CD45在第2代BMSCs的表达为3.4%和2.6%。慢病毒转染效率为90%以上。空白对照组、空载体病毒组和干扰载体病毒组的GFAP、NSE、NF和巢蛋白m RNA的相对表达量比较差异有统计学意义(P<0.05),其中空载体病毒组和空白对照组的比较差异无统计学意义(P>0.05),干扰载体病毒组和空载体病毒组的差异有统计学意义(P<0.05)。Western-blot检测蛋白表达量也具有同样的表达特点。结论:慢病毒介导shRNA LINGO-1干扰载体转染促进BMSCs可提高BMSCs向神经细胞转化的效率。     

腺病毒表达谷氨酸受体羧基肽段对大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2磷酸化及与Bax结合的影响

目的:研究大鼠脑缺血再灌注后腺病毒表达谷氨酸受体羧基肽段对海马CA1区神经元的保护和Bcl-2磷酸化及与Bax结合的影响.方法:将SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注对照组、表达病毒组、非表达病毒组及溶剂组.采用焦油紫染色、免疫沉淀和免疫印迹检测大鼠缺血再灌注后海马神经元损伤、脑组织Bcl-2的磷酸化及与Bax结合情况.结果:表达病毒组与缺血再灌注对照组、非表达病毒组及溶剂组相比海马CA1区神经元损伤明显减轻,脑组织中Bcl-2磷酸化明显降低,Bcl-2/Bax的结合明显升高(P<0.05).结论:腺病毒表达谷氨酸受体羧基肽段可能通过降低脑组织中Bcl-2的磷酸化从而增加Bcl-2/Bax的结合,进而对海马CA1区神经元起保护作用.     

脑缺血再灌注糖尿病大鼠海马CA1区凋亡基因的表达

目的 观察凋亡基因Bcl-2、Bax在糖尿病大鼠脑缺血再灌注海马CA1区神经元损伤中的表达。方法 采用链脲佐菌素（STZ）诱导和线栓法制备糖尿病大脑中动脉闭塞模型（MCAO）,应用HE染色和免疫组化方法比较糖尿病脑缺血再灌注组与缺血再灌注组海马CA1区神经元缺失、凋亡基因Bcl-2、Bax的表达。结果 糖尿病脑缺血再灌注组海马CA1区神经元缺失,明显高于缺血再灌注组（P〈0.05）;缺血再灌注组及糖尿病脑缺血再灌注组大鼠海马CA1区Bcl-2、Bax阳性染色阳性细胞与正常对照组及假手术组比增多,差异显著（P〈0.05）,而糖尿病脑缺血再灌注组比缺血再灌注组增加得更明显,差异有显著性（P〈0.05）,其中Bax上调幅度大。结论 糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤后海马CA1区细胞发生凋亡,Bcl-2、Bax介导的细胞凋亡机制可能是糖尿病加重脑缺血再灌注海马神经元损伤机制之一。     

骨髓间充质干细胞在大鼠视网膜光感受器细胞损伤中的应用研究

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)在大鼠视网膜光感受器细胞损伤中的作用机制。方法选取24只SD大鼠,分为正常组(n=6)、光损伤组(n=6,视网膜下注射无菌生理盐水4μl)、磷酸盐(PBS)视网膜下注射组(n=6,视网膜下注射PBS 4μl,其中溶质为BMSCs)和BMSCs视网膜下移植组(n=6,视网膜下移植2×10~5个BMSCs),除正常组外,其余各组光照射24 h,光照后10 d进行手术。术后14 d将眼球摘除,培养大鼠BMSCs原代及传代,制作冰冻切片,行HE染色,计算视网膜外核层层数。采取免疫荧光法,检测大鼠BMSCs表面标志物表达情况。采取TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果与正常组比较其视网膜外核层层数明显减少,细胞凋亡百分比有所升高;与光损伤组、PBS组相比,BMSCs组视网膜外核层层数明显增加,细胞凋亡百分比有所降低;其中BMSCs细胞在视网膜下腔不表达MAP2、CD11b、Rh0dopsin、Calretintin,部分表达Nestin阳性;同时4',6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐(DAPI)阳性的BMSCs细胞视网膜下腔表达b FGF,不表达BDNF和CNIF。结论大鼠实验结果表明,BMSCs视网膜下移植,可减少视网膜光感受器细胞凋亡,作用原理是可能通过视网膜下腔分泌的b FGF发挥作用。     

神经节苷酯GM1对BCL-2及BDNF蛋白表达的调控在原代培养大鼠海马神经元放射性损伤防护中的意义

[目的]研究神经节苷酯GM1对原代培养大鼠海马神经元放射性损伤的保护作用及机制,为放射性脑损伤的预防提供理论依据及新的方法.[方法]30 Gy 的X射线单次照射培养至12d的海马神经元,用DAPI染核法检测海马神经元凋亡,用免疫组化法检测海马神经元BCL-2及BDNF蛋白表达情况.实验分组：0Gy组,单纯神经节苷酯GM1预处理组,30Gy组,30Gy＋神经节苷酯GM1预处理组.[结果]在照射后24 h,30Gy组核固缩百分数为（24.5±3.80）%,较0Gy组（2.00%±0.10%）有显著性差异（P〈0.01）;30Gy＋神经节苷酯GM1 100 ng/mL组核固缩百分数为（7.43±0.61）%,较30Gy组（P〈0.01）及0Gy组（P〈0.01）均有显著性差异.30Gy组海马神经元BCL-2表达阳性率为（32.89±2.82）%,较0Gy组[（93.42±2.70）%]有显著性差异（P〈0.01）,30Gy＋神经节苷酯GM1 100 ng/mL组海马神经元BCL-2表达阳性率为（77.43±0.69）%,较30Gy组（P〈0.01）及0Gy组（P〈0.01）均有显著性差异.30Gy组海马神经元BDNF表达阳性率为（88.18±3.50）%,较0Gy组[（24.28±2.96）%]有显著性差异（P〈0.01）,30Gy＋神经节苷酯GM1 100 ng/mL组海马神经元BDNF表达阳性率为（77.86±0.91）%,较30Gy组（P〈0.01）及0Gy组（P〈0.01）均有显著性差异.[结论]应用神经节苷酯GM1可以分别通过上调及下调X线照射后BCL-2及BDNF的表达而显著减少神经元的凋亡.     

加兰他敏对急性酒精中毒大鼠海马神经元NMDAR2B的影响

目的：探讨加兰他敏对急性酒精中毒大鼠海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）·R2B的影响。方法：将60只大鼠分为对照组、酒精组及加兰他敏组,每组各20只。酒精组以50%（v/v）酒精12 mL/kg灌胃两次/日,共7d。加兰他敏组酒精（浓度、剂量同上）灌胃的同时腹腔注射加兰他敏2mg/kg一次/日,共7d。对照组以等量生理盐水灌胃。实验第8天取大鼠海马区做苏木精-伊红（HE）染色,观察海马区的病理学变化;免疫组织化学采用SABC法,观察海马区神经元NR2B的表达。结果：病理学观察结果：对照组海马区神经细胞排列整齐,胞质淡染,无变性、坏死;酒精组神经细胞层次不清、排列松散、细胞数量减少,部分细胞变性;加兰他敏组神经细胞层次较清、排列较密,细胞数目较酒精组增;免疫组织化学结果：酒精组与对照组比较NR2B阳性表达细胞数量明显减少（P〈0.01）;加兰他敏组与酒精组比较NR2B阳性表达细胞数量明显增高（P〈0.05）;加兰他敏组与对照组比较NR2B表达细胞数量无明显差异（P〉0.05）。结论：急性酒精中毒与海马区神经细胞的NR2B表达下调有关;加兰他敏具有保护急性酒精中毒导致的大鼠海马区神经细胞毒性的作用,其机制可能与加兰他敏上调NR2B的表达有关。     

腺病毒介导脑源性神经营养因子基因转移对大鼠创伤性脑损伤后诱导型一氧化氮合酶表达及细胞凋亡的影响

目的 :研究重组腺病毒介导的脑源性神经营养因子 (BDNF)基因转移对创伤性脑损伤 (TBI)后诱导型一氧化氮合酶 (i NOS)表达及细胞凋亡的影响。方法 :将 4μl重组腺病毒载体注入承受单侧大脑皮质重锤打击大鼠的海马 ,对照组注射病毒缓冲液。伤后 3小时及 1、3、7和 14日 ,利用免疫组织化学单标和双标染色、原位杂交 /组织化学染色及 DNA原位末端标记等方法 ,检测大鼠伤侧大脑皮质和海马各区 i NOS、BDNF及凋亡相关信号表达的改变。结果 :与对照组相比 ,各损伤组大鼠大脑皮质及海马各区 i NOS阳性细胞于伤后 3小时开始显著增多 ,3日达高峰。多数 i NOS阳性细胞同时呈现凋亡相关蛋白阳性反应或分子生物学标记方法(TUNEL )阳性反应 ,但很少同时表达 BDNF m RNA。注射病毒载体组伤后 3日和 7日 ,海马 CA1区和海马齿状回门区 (DH)表达 i NOS、凋亡相关蛋白的细胞及凋亡细胞均显著减少 (P均 <0 .0 1) ,而表达 BDNF m RNA的神经元显著增多。结论 :TBI诱导海马细胞表达 i NOS及诱导海马细胞凋亡 ;腺病毒介导的 BDNF基因转移通过下调 i NOS表达 ,增加 BDNF表达及减少细胞凋亡而保护海马神经元。     

丰富环境对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马神经元凋亡及脑源性神经营养因子/酪氨酸蛋白激酶受体信号通路的影响

目的探讨丰富环境对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠海马神经元凋亡及脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸蛋白激酶受体(TrkB)信号通路的影响。方法将48只7日龄Wistar大鼠幼仔,随机分成假手术组、模型组和丰富环境组,每组再分为14 d和28 d两个亚组,每个亚组8只。采用Rice方法制作缺氧缺血性脑损伤模型。模型组和假手术组不进行处理,丰富环境组在造模24 h后应用丰富环境进行刺激。造模后14 d和28 d,采用TUNEL法和双重免疫荧光染色法检测海马区神经元凋亡水平;采用免疫组化染色法检测海马区BDNF、TrkB蛋白表达情况。结果造模后14 d、28 d,与假手术组比较,模型组海马区TUNEL阳性细胞数、双标记阳性细胞数以及海马BDNF和TrkB阳性细胞数显著增加(t 27.214, P 0.001),丰富环境组TUNEL阳性细胞数、双标记阳性细胞数显著少于模型组(t 12.687, P 0.001),丰富环境组造模后28 d海马BDNF和TrkB阳性细胞数显著高于模型组(t 137.998, P 0.001)。结论丰富环境刺激可以降低缺血缺氧性脑损伤新生大鼠海马神经元凋亡,上调BDNF、TrkB蛋白表达。     

不同途径骨髓间充质干细胞移植对颅脑损伤大鼠海马的作用

背景：近年来骨髓间充质干细胞移植在中枢神经系统中的应用越来越广泛,研究其最佳的移植方式具有重要意义。目的：观察不同途径移植骨髓间充质干细胞对创伤性脑损伤大鼠海马神经元的影响。方法：分离培养Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,以PKH26标记第3代骨髓间充质干细胞,荧光显微镜观察并流式细胞仪检测标记率;采用改进Feeney法制作脑损伤致海马神经元损伤模型。60只Wistar大鼠随机分为3组,脑损伤区移植组：造模后注射含骨髓间充质干细胞的生理盐水10μL;尾静脉移植组：自尾静脉注入含骨髓间充质干细胞的生理盐水1mL;创伤性脑损伤组：不给予任何处理。结果与结论：荧光显微镜观察PKH26标记的BMSCs呈球形,呈现均匀分布的红色荧光;PKH26标记BMSCs的阳性率〉99%。脑损伤区移植组大鼠学习记忆功能明显好于其他两组,PKH26阳性细胞和苏木精-伊红染色切片中的神经元数量脑损伤区移植组多于尾静脉移植组,尾静脉移植组多于创伤性脑损伤组（P〈0.05）。GAP-43mRNA的表达脑损伤区移植组高于尾静脉移植组,尾静脉移植组高于创伤性脑损伤组（P〈0.05）。提示移植骨髓间充质干细胞对创伤性脑损伤大鼠海马神经元有保护作用,脑损伤区移植优于尾静脉移植。     

碱性成纤维细胞生长因子在癫痫大鼠海马中的表达

目的：探讨急性癫痫大鼠模型脑海马中碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的表达、分布及其意义.方法：将39只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组（A组）3只、生理盐水组（B组）和癫痫模型组（C组）各18只,A组不处置,C组大鼠以氯化锂-匹罗卡品诱导急性癫痫模型,B组以相同体积的生理盐水代替匹罗卡品,A组大鼠处死,B、C组分别于造模后6、12、24 h及3、7、14 d时各处死3只,检测各组大鼠海马中bFGF的表达规律及其在海马细胞中的分布情况.结果：造模后A和B组海马区发现有bFGF蛋白的表达,但表达水平较C组低（P〈0.05）;C组癫痫发作后6 h海马区bFGF表达开始增加,24 h达高峰,以后逐渐下降,14 d时仍维持较高水平（P〈0.05）;bFGF主要表达于星形胶质细胞,CA2区部分神经元表达.结论：bFGF在急性癫痫大鼠模型脑海马中呈规律性表达,以星形胶质细胞表达为主,CA2区部分神经元表达;bFGF可能对癫痫后的脑损伤起保护作用.     

高功率微波辐射对大鼠脑皮质及海马神经肽Y、nNOS表达的影响

目的：探讨高功率微波（HPM）辐射对大鼠脑皮质和海马形态结构以及神经元神经肽Y（NPY）、神经型-氧化氮合酶（nNOS）表达的影响。方法：分别采用10，30和100mW／cm^2HPM辐射Wistar大鼠，并于微波辐射后6h，1d，3d，7d，14d和28d时处死，同时取出大脑皮质和海马组织。通过HE染色观察实验大鼠脑皮质及海马的形态结构改变情况；采用免疫组化和图像分析技术检测实验大鼠脑皮质和海马神经元NPY、nNOS表达的变化。结果：实验大鼠经10，30，100mW／cm^2HPM辐射后，其脑皮质及海马区神经元固缩、深染；HPM辐射后3d时，大鼠神经元胞浆内nNOS表达显著增加（P〈0.05），NPY表达显著降低（P〈0.01）。结论：10，30及100mW／cm^2HPM辐射可引发大鼠脑皮质和海马神经元损伤，致使其NPY及nNOS表达异常。     

大鼠脑缺血损伤后骨髓间充质干细胞移植抑制Bcl-2及Bax介导的神经元凋亡

背景:骨髓间充质干细胞移植技术对脑损伤修复具有重要的意义,但其作用途径尚需讨论。目的:观察脑缺血模型大鼠移植骨髓间充质干细胞后,皮质及海马区Bcl-2和Bax的表达变化,分析骨髓间充质干细胞颅内的移植抑制神经元凋亡的作用机制。设计:随机对照实验。单位:青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所。材料:选用雄性成年Wistar大鼠24只,体质量180～240g,由山东大学实验动物中心提供实验大鼠随机分为对照组、损伤组、损伤移植组,每组8只。溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU,Sigma公司);TUNEL试剂盒,Bcl-2,Bax抗体试剂盒购自北京中山生物工程公司。方法:实验于2005-04/2006-09在青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所完成。损伤组和移植组大鼠采用颈外动脉线栓法建立脑缺血模型,移植组大鼠造模成功7d后在脑皮质和纹状体区注射浓度为2×10~(12)L~(-1)的原代体外培养的骨髓间充质干细胞悬液。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学要求。主要观察指标:分别于造摸成功后7和14d进行TUNEL染色及免疫组织化学检测大脑皮质、海马区神经元凋亡和Bcl-2,Bax表达的变化。结果:①神经元凋亡情况:造模成功后7d,对照组来发现凋亡细胞,移植组凋亡细胞的数量少于损伤组,差异有非常显著性意义(P<0.01)。②Bcl-2和Bax表达:造模成功后14d,损伤组大鼠皮质和海马区Bcl-2阳性神经元的表达低于对照组和移植组,差异有非常显著性意义(P<0.01)。损伤组大鼠皮质和海马区Bax阳性神经元的表达高于对照组和移植组,差异有非常显著性意义(P<0 01)。结论:大鼠脑缺血后,骨髓间充质干细胞能够促进Bcl-2表达并抑制Bax表达,从而减少神经元凋亡。     

不同途径骨髓间充质干细胞移植对颅脑损伤大鼠海马的作用

背景:近年来骨髓间充质干细胞移植在中枢神经系统中的应用越来越广泛,研究其最佳的移植方式具有重要意义。目的:观察不同途径移植骨髓间充质干细胞对创伤性脑损伤大鼠海马神经元的影响。方法:分离培养Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,以PKH26标记第3代骨髓间充质干细胞,荧光显微镜观察并流式细胞仪检测标记率;采用改进Feeney法制作脑损伤致海马神经元损伤模型。60只Wistar大鼠随机分为3组,脑损伤区移植组:造模后注射含骨髓间充质干细胞的生理盐水10μL;尾静脉移植组:自尾静脉注入含骨髓间充质干细胞的生理盐水1mL;创伤性脑损伤组:不给予任何处理。结果与结论:荧光显微镜观察PKH26标记的BMSCs呈球形,呈现均匀分布的红色荧光;PKH26标记BMSCs的阳性率>99%。脑损伤区移植组大鼠学习记忆功能明显好于其他两组,PKH26阳性细胞和苏木精-伊红染色切片中的神经元数量脑损伤区移植组多于尾静脉移植组,尾静脉移植组多于创伤性脑损伤组(P<0.05)。GAP-43mRNA的表达脑损伤区移植组高于尾静脉移植组,尾静脉移植组高于创伤性脑损伤组(P<0.05)。提示移植骨髓间充质干细胞对创伤性脑损伤大鼠海马神经元有保护作用,脑损伤区移植优于尾静脉移植。     

早期运动干预对脑缺血缺氧幼鼠海马区突触素蛋白表达的影响

目的 观察早期运动干预对缺血缺氧性脑损伤（HIBD）幼鼠大脑海马区神经元突触素(Syn)蛋白表达及尼氏体的变化,探讨HIBD早期运动干预的疗效机制。 方法 取3窝新生7d的幼鼠35只,按随机数字表法分为对照组（11只）、干预组（13只）和假手术组（11只）。制作新生Wistar大鼠幼鼠HIBD模型。干预组造模成功后7d开始早期运动干预,每天游泳10min,持续14d;对照组只造模不进行运动干预;假手术组只分离左侧颈总动脉但不结扎,不进行运动干预。采用免疫印迹（Western blot）法检测大脑海马区Syn蛋白的表达水平,以Syn和β带灰度值的比值表示syn蛋白相对表达量;采用尼氏染色方法依据形态学结果观察幼鼠海马区神经元尼氏体数量和细胞形态。 结果 对照组病灶侧海马组织Syn表达(0.447±0.141)较假手术组左侧海马组织Syn表达(1.027±0.035)显著降低(P<0.01)、海马区神经元尼氏体明显减少;干预组病灶侧海马区Syn表达(0.772±0.121)较对照组病灶侧海马组织Syn表达(0.447±0.141)明显升高(P<0.05)、海马区神经元尼氏体显著增多。 结论 早期运动干预可增强缺血缺氧幼鼠病灶侧海马区Syn蛋白的表达和增加神经元内尼氏小体数量。     

骨髓间充质干细胞移植在脑缺血损伤中的作用与生长相关蛋白-43表达的相关性

目的：探讨脑缺血/再灌注损伤后大鼠脑内介导骨髓间充质干细胞（MSCs）后神经组织修复和行为学变化的作用机制;观察生长相关蛋白-43（GAP-43）在神经元可塑性中的作用。方法：成年健康雄性Wistar大鼠118只分为假手术组42只,再灌注组42只及移植组30只,另4只大鼠为细胞的移植供体。将再灌注组及移植组成功制备为脑缺血再灌注损伤模型。移植组大鼠于造模3 d时颅内注射经培养纯化后的MSCs 10μl。造模后3、8、164、8 h及5、91、6 d时再灌注组及假手术组各取6只,移植组于8、164、8 h及5、91、6 d时取5只,观察凋亡细胞及GAP-43阳性细胞在皮质及海马区的表达;缺血半影区梗死灶的形成和移植细胞定向迁移的动态变化。结果：与再灌注组比较,移植组在移植后5 d梗死灶区MSCs及GAP-43阳性细胞数明显增加,9 d时达高峰,16 d时呈低水平表达;16 d时神经功能缺损程度评分明显降低（均P〈0.05,0.01）。结论：MSCs脑内移植可介导缺血半影区梗死面积的修复;GAP-43表达抑制神经元凋亡,促进细胞的可塑性。     

神经保护肽重组慢病毒对老年痴呆大鼠行为学及海马结构内NF-kBmRNA表达的影响

目的 探讨神经保护肽慢病毒（rLent／NT4-NAP）感染老年痴呆大鼠鼻粘膜后分泌的NAP对老年性痴呆（AD）大鼠行为学及海马内NF-kBmRNA表达的影响。方法 选择无菌级雄性Wister大鼠40只，随机分为对照组，假手术组，AD组，rLent／NT4-NAP组，每组10只。建立β-淀粉样蛋白（Aβ）大鼠海马注射的实验性AD大鼠动物模型，利用水迷宫试验检测大鼠记忆能力，利用原位杂交的方法观察大鼠海马内NF-kBmRNA的表达。结果 与AD组相比，rLent／NT4-NAP组水迷宫试验逃避潜伏期明显缩短，错误次数显著降低（P〈0．01）；原位杂交结果：AD组可见较多的NF-kBmRNA阳性神经元，rLent／NT4-NAP组大鼠海马区NF-kBmRNA表达较AD组明显减少，但较对照组NF-kBmRNA表达增多。AD组的平均光密度及平均灰度值均较对照组，假手术组，rLent／NT4-NAP组有显著差异（P〈0．01），而在其他3组之间无显著差异（见表2）。结论 NAP对老年性痴呆大鼠海马神经元具有保护作用，进一步证实了神经细胞中NF-kB活化受到抑制是可以延缓神经细胞凋亡的发生。     

高压氧对急性一氧化碳中毒大鼠迟发型脑损伤影响的组织病理学特点

背景：临床上有3％～30％的急性一氧化碳中毒患者会发生一氧化碳中毒后迟发性脑病，出现以痴呆、精神症状和锥体外系症状为主的神经系统症状。目前，其发病机制还不清楚。 目的：探讨一氧化碳中毒迟发性脑损伤的病理损伤机制，及高压氧对迟发性脑损伤的影响。 设计：随机对照动物实验。 单位：解放军第四军医大学航空航天医学系航空卫生教研室。 材料：实验于2004-03在解放军第四军医大学航空航天医学系航空病理学和分子生物学实验室进行。取清洁级健康雄性Sprague-Dawley大鼠80只，单纯随机分为3组，正常对照组1O只，模型组35只，高压氧组35只，后2组又分为染毒后6h、1，3，5，7，14，21d7个时间点，每个时间点5只。 方法：①模型组：将大鼠放入染毒罐中，吸入一氧化碳与空气的混合气体60min，一氧化碳的体积分数保持在2500&;#215;10^-6，制备急性CO中毒动物模型。②高压氧组：同模型组造模，染毒后3h开始行高压氧治疗，压力0．2MPa，氧的体积分数保持在0．90以上，整个过程共115min，染毒后前3d2次／d，之后1次／d，每周休息1d。③正常对照组不干预。 主要观察指标：①采用组织病理学、免疫组织化学等方法检测大鼠染毒后各时间点大鼠脑组织病理改变的特点。②通过细胞超微结构观察和原位末端转移酶标记（TUNEL）等方法进行细胞凋亡的检测，观察急性各组大鼠脑神经元凋亡的发生情况。 结果：造模后大鼠死亡率约为10％。①模型组大鼠脑内发生广泛的病理损伤，脑皮质、海马，纹状体和小脑等部位神经元出现变性坏死，其中大脑皮质、海马等部位损伤较重。苏木精-伊红、TUNEL染色和电镜观察表明大鼠海马神经元发生凋亡，凋亡神经元从染毒后第3天开始显著增加，第7天达到高峰（P〈0．01），以后逐渐减少。②高压氧组：与模型组相比，脑内神经元变性坏死明显减轻，各时间点大鼠海马区损伤均轻于模型组；凋亡神经元数目减少，尤以中毒后5和7d明显（P〈0．01）。高压氧促进模型大鼠海马区Bcl-2蛋白表达，尤以CO暴露后3，5d明显（P〈0．01）。 结论：①急性一氧化碳中毒大鼠出现广泛的迟发性神经元损伤，表现为迟发的神经元坏死和凋亡。②高压氧治疗可以有效减少变性坏死神经元，促进凋亡抑制基因bcl-2表达，从而抑制神经元坏死和凋亡。     

骨髓间充质干细胞对制动大鼠骨骼肌细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的 观察早期注射骨髓间充质干细胞(BMSCs)对制动大鼠骨骼肌细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。 方法 取幼龄大鼠(80～100g)胫骨和股骨，分离培养大鼠BMSCs。用可塑性石膏制备右下肢管型固定肌萎缩模型，根据随机数字表法将24只大鼠分成假手术组、干细胞组、磷酸缓冲液（PBS）组，干细胞组大鼠下肢制动48h后于比目鱼肌局部多点注射1×106个BMSCs；PBS组大鼠下肢制动48h后注射等量PBS；假手术组大鼠下肢包裹相同重量石膏且不限制关节活动，48h后注射等量PBS，14d后各组大鼠拆除石膏取标本分析。 结果 培养中的大鼠BMSCs以梭形细胞为主，呈放射状排列的细胞集落，细胞生长旺盛，可连续稳定传代10代以上。实验中第4代BMSCs表面标志CD44、CD90均呈阳性表达，阳性率分别为95.84%、96.00%，而CD34、CD45阳性率极低。与假手术组大鼠比目鱼肌中Bax和Bcl-2蛋白表达量［(0.14±0.11）、(0.81±0.06)］比较，干细胞组和PBS组Bax蛋白表达量［(0.41±0.08)、(0.63±0.10)］明显升高，两组Bcl-2蛋白表达量［(0.47±0.14)、(0.22±0.13)］明显降低；干细胞组中Bax蛋白的表达水平较PBS组低，Bcl-2蛋白的表达水平显著增高，差异有明显统计学意义(P<0.05)。 结论 制动大鼠骨骼肌早期注射BMSCs，可引起抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平上调、促凋亡蛋白Bax表达水平下调。     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑出血后神经可塑性的影响

目的观察骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植对大鼠脑出血后神经可塑性的影响。方法利用脑立体定位仪制作大鼠脑出血模型;将120只大鼠随机分成BMSCs移植组、模型组,每组各60只;利用透射电镜观察血肿周围神经组织超微结构及神经突触的变化并应用Simple-PCI图像分析系统,选定测量参数计算突触数量,突触界面曲率,突触后致密区宽度及突触间隙;利用免疫组化技术检测大鼠血肿周围神经组织中神经突触相关蛋白Shank1、Nestin的表达;利用Berderson评分标准对大鼠进行神经功能评价。结果透射电镜观察,BMSCs移植组脑出血灶周围可见大量新生神经元及神经胶质细胞,神经突触数量为16.27±2.14,神经突触界面曲率为1.57±0.04,突触后致密区为68.32±10.54,突触间隙为14.65±1.58,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。BMSCs移植组及模型组Shank1表达分别为：75.82±10.65、14.33±1.14,两者比较差异有统计学意义（P〈0.01）;BMSCs移植组及模型组Nestin阳性细胞表达分别为：68.87±7.46、12.64±0.07,两者比较差异有统计学意义（P〈0.01）。BMSCs移植组神经功能评分明显降低,与模型组比较有统计学意义（P〈0.05）。结论 BMSCs可促进大鼠脑出血后神经组织修复,增强神经可塑性,促进神经功能恢复。