血清斯钙素⁃1在稳定期慢性阻塞性肺病中的表达及意义

目的：探讨斯钙素?1（stanniocalcin?1,STC1）在稳定期慢性阻塞性肺病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）患者血清中的表达及意义。方法：收集55例稳定期COPD患者,根据肺功能和问卷评分进行相应分组,且以24例健康者作为对照。采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定各研究对象的血清斯钙素?1表达情况,进行相关分析。结果：①与健康对照组相比,稳定期COPD患者血清斯钙素?1表达水平明显降低（P < 0.05）。②血清斯钙素?1在初筛COPD上具有一定价值（P=0.025,AUC=0.659）,最佳阈值为1 350 pg/mL（敏感度81.82%;特异度50.00%）。③血清斯钙素?1与稳定期COPD患者病情严重程度［包括GOLD分级、慢阻肺评估测试（COPD assessment test,CAT）评分、ABCD分组、肺功能］无明显相关性。结论：血清斯钙素?1在COPD中显著降低,可能对于COPD的诊治具有一定临床意义。     

上皮间充质转化介导慢性阻塞性肺疾病的研究进展

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种以持续性气流受限为特征的常见呼吸系统疾病,气道重塑是COPD气流受限的重要病理生理学基础,近年来,有研究表明,上皮间充质转化(EMT)与COPD气道重塑的发生、发展密切相关,抑制EMT可能成为治疗COPD的新方向.     

上皮间充质转化与呼吸系统疾病研究进展

上皮间充质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)是指上皮细胞逐渐失去其原有的特性和功能,并获得间质细胞表型的过程.EMT在肺发育和许多肺部疾病如慢性阻塞性肺疾病、肺癌和肺纤维化中起着重要作用.本文介绍了EMT的形态学变化和潜在的分子机制,并讨论了它如何有助于慢性肺疾病的发病机...     

RNAi干扰WT1和Pax2表达对逆转肾小管上皮间充质转化的作用

 【目的】 探讨抑制肾小管上皮间充质转化(EMT)过程中胚胎发育关键基因WT1和Pax2的表达对EMT的逆转作用。【方法】 采用RNAi技术分别抑制WT1和Pax2。分别构建pshRNA-WT1和pshRNA-Pax2表达载体,采用脂质体转染技术,使质粒瞬时转染NEK52E细胞后用10 ng/mL IL-1α刺激细胞,分别提取不同时间点细胞的RNA和蛋白质,采用RT-PCR和Western blot检测细胞WT1、Pax2、Snail、上皮细胞标志E-cadherin和间充质标志α-SMA的mRNA和蛋白质的表达,并观察NRK52E细胞的形态。【结果】构建的pshRNA-WT1和pshRNA-Pax2表达载体可在转染细胞内发挥RNAi作用抑制WT1和Pax2基因的表达,抑制率分别为80.4 %和82.7 %。分别抑制WT1和Pax2基因后EMT过程受阻,α-SMA和Snail的表达显著减少,E-cadherin的表达无显著性变化,细胞形态未发生明显的成纤维化样改变。【结论】 WT1和Pax2基因是EMT中的关键基因,分别抑制胚胎发育关键基因WT1和Pax2均可使EMT受阻。阻断WT1和Pax2的表达有望中止EMT及肾纤维化的发生。     

蛋白酶激活受体2经ROS信号调控支气管上皮间充质表型转化

目的：探讨蛋白酶激活受体2（protease?activated receptor 2,PAR2）在人支气管上皮细胞间充质转化（epithelial?mesenchymal transition,EMT）中的作用及可能机制。方法：16HBE细胞予以不同浓度类胰蛋白酶（PAR2激动剂）处理,采用划痕实验、Transwell小室、蛋白质免疫印迹等方法观察类胰蛋白酶对细胞EMT过程的影响;通过DCFH?DA探针测定细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）的水平;外源性加入ROS清除剂N?乙酰半胱氨酸（N?acety?1?cysteine,NAC）后,划痕、Transwell小室观察类胰蛋白酶诱导的细胞修复与迁移功能。结果：类胰蛋白酶呈剂量依赖性地促进16HBE修复与迁移;下调E?cadherin、上调N?cadherin及α?平滑肌肌动蛋白（α?smooth muscle actin,α?SMA）表达（P < 0.05）。类胰蛋白酶增加16HBE细胞内ROS水平,而PAR2抑制剂FSLLRY?NH2可逆转上述改变（P < 0.05）。NAC可有效抑制类胰蛋白酶诱导的细胞修复与迁移（P < 0.05）。结论：激活PAR2可经由ROS信号调控人支气管上皮细胞EMT过程,是细胞表型转化与重塑调控的潜在靶标。     

FGF23对支气管上皮细胞生长、免疫平衡和上皮间充质转化的影响

目的 探究成纤维细胞生长因子23（FGF23）对支气管上皮细胞16HBE生长、免疫平衡和上皮间充质转化（EMT）的影响。方法 使用Lipofectamine 3000转染试剂对16HBE细胞分别转染NC-shRNA或FGF23-shRNA。转染后,使用10 ng/mL TGF-β1处理细胞48 h。16HBE细胞分为对照组、NC-shRNA组、FGF23-shRNA组、TGF-β1组、NC-shRNA+TGF-β1组和FGF23-shRNA+TGF-β1组。通过CCK-8法检测细胞增殖。使用ELISA试剂盒检测16HBE细胞上清液中IFN-γ、IL-4、IL-17和IL-10的水平。通过qRT-PCR、Western blot或免疫荧光染色检测16HBE细胞中FGF23、Klotho、FGFR4、E-cadherin、α-SMA和N-cadherin的mRNA或蛋白表达水平。结果 与TGF-β1组相比,FGF23-shRNA+TGF-β1组的OD 450nm 值降低（P<0.05）。与TGF-β1组相比,FGF23-shRNA+TGF-β1组的IFN-γ和IL-10的水平升高,而IL-4和IL-17降低（P<0.05）。与TGF-β1组相比,FGF23-shRNA+TGF-β1组的E-cadherin蛋白表达水平升高,而α-SMA降低（P<0.05）。与TGF-β1组相比,FGF23-shRNA+TGF-β1组的E-cadherin相对荧光强度升高,而N-cadherin降低（P<0.05）。与TGF-β1组相比,FGF23-shRNA+TGF-β1组的FGF23和FGFR4的mRNA和蛋白表达水平均降低,而Klotho均升高（P<0.05）。结论 下调FGF23抑制了TGF-β1诱导的16HBE细胞的生长和EMT过程,并纠正了Th1/Th2和Treg/Th17的失衡,FGF23-Klotho-FGFR4信号可能是哮喘治疗的一种分子靶标     

转化生长因子-β1诱导人肺上皮细胞E-钙黏蛋白表达的变化

目的观察重组人转化生长因子-β1（rhTGF-β1）诱导人肺上皮细胞（A549）E-Cad蛋白表达的变化。方法将体外培养的A549用不同浓度的rhTGF-β1干预,48h后收集蛋白用Westerblot和间接免疫荧光方法检测上皮细胞表型E-钙黏蛋白（E-Cad）表达的变化。结果rhTGF-β1诱导A549下调上皮细胞表型E-Cad表达,并呈浓度依赖性。结论rhTGF-β1可诱导A549细胞E-Cad表达下调,支持在肺上皮细胞发生上皮细胞-间质转化（EMT）的观点。     

雷公藤甲素通过调节TGF-β1信号通路和Hippo信号通路影响肾小管上皮细胞的上皮-间充质转化

目的:研究雷公藤甲素（TP）对肾小管纤维化抑制作用的机制。方法:将HK-2分成3组,阴性对照组不做处理,TGF-β1组用 TGF-β1处理,TGF-β1+TP组用TGF-β1和TP处理,培养48 h观察细胞的形态,利用RNA 测序技术检测各组中mRNA的表达,通过KEGG基因富集筛选相关通路,用Western blot检测EMT相关蛋白及富集所得信号通路中重要蛋白的表达。结果:TP处理可致HK-2形态改变。RNA测序和KEGG富集分析显示,TP显著影响TGF-β信号通路和Hippo信号通路相关基因的表达。Western blot结果表明TP可影响HK-2细胞EMT相关蛋白、TGF-β1信号通路和Hippo信号通路中的重要指标蛋白的表达。结论:TP可通过调节TGF-β1信号通路和Hippo信号通路抑制肾小管上皮细胞发生上皮-间充质转化。     

转化生长因子β1诱导A549细胞上皮-间充质转化的时间相关性

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)诱导A549细胞发生上皮-间充质转化(EMT)的时间相关性。方法:将体外培养的A549细胞分为空白组(加入F-12培养基)、模型组(加入10ng/ml TGF-β1)后继续培养。采用MTT实验检测细胞的增殖能力,光学显微镜下观察细胞形态学改变,实时荧光定量PCR和Western blot法检测E-Cad、Vim、FN mRNA的蛋白表达水平。结果:模型组在48h、72h时与空白组比较,A549细胞显著增殖(均P<0.01)、细胞形态明显改变,72h时几乎所有细胞呈纺锤形;48h、72h时与空白组比较,模型组FN mRNA表达显著上调(P<0.05,P<0.01),E-Cad mRNA表达显著下调(P<0.01)。48h时与空白组比较,模型组FN蛋白表达上调(P<0.05),E-Cad蛋白表达显著下调(P<0.01)。在72h时与空白组比较,模型组FN、Vim蛋白表达明显上调(P<0.01),E-Cad mRNA表达显著下调(P<0.01)。结论:A549细胞发生EMT与TGF-β1刺激的时间长短有关。72h和48h为体外实验EMT发生的时间,72h为EMT的最佳时间点。     

ANKRD1通过介导上皮细胞间充质转化促进肝细胞肝癌增殖与转移

目的：探究ANKRD1在肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）中的表达情况,研究ANKRD1促进HCC细胞增殖和转移的功能及其机制。方法：通过实时定量RT-PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)与Western blot检测ANKRD1在肝细胞肝癌及癌旁组织中的相对表达量,临床病理学分析ANKRD1表达与HCC患者临床特征的相关性。利用慢病毒感染将肝癌细胞系中的ANKRD1敲低或过表达,通过CCK-8、划痕、Transwell、EdU以及裸鼠皮下成瘤实验在体内体外检测ANKRD1对肝癌细胞增殖与迁移功能的影响。Western blot技术检测ANKRD1对HCC细胞上皮细胞-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的调控作用。结果：ANKRD1在肝癌细胞中表达明显上调,过表达ANKRD1可以促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭,而ANKRD1敲低则会抑制肝癌细胞的增殖与迁移,Western blot与皮下瘤免疫组化实验表明ANKRD1可以促进HCC细胞EMT通路激活。结论：A...     

三七总皂苷对大鼠肾小管上皮间充质转化过程的影响

目的研究三七总皂苷(PNS)对大鼠肾小管上皮间充质转化及肾间质纤维化的作用。方法建立大鼠肾纤维化的动物模型,将30只SD大鼠随机分为正常对照组、梗阻组和梗阻+PNS组,各10只。分别进行相应的处理后,观察其肾组织的间质纤维化情况,进行波形蛋白、小鼠抗大鼠细胞角蛋白(CK)、小鼠抗大鼠-平滑肌肌动蛋白(-SMA)和小鼠抗大鼠转化生长因子-1(TGF-1)的检测,并进行Gremlin检测。结果梗阻组和梗阻+PNS组大鼠肾组织均出现间质纤维化,但梗阻组的程度比梗阻+PNS组要明显。梗阻组、梗阻+PNS组中细胞角蛋白表达低于正常对照组,波形蛋白、-SMA和TGF-1以及Gremlin的表达显著高于正常对照组;而梗阻组中细胞角蛋白表达低于梗阻+PNS组,波形蛋白、-SMA和TGF-1以及Gremlin的表达则高于梗阻+PNS组,差异均有统计学意义(均<0.05)。结论三七总皂苷可能通过下调TGF-1、Gremlin等的表达,抑制肾小管上皮间充质转化,阻断了肾间质纤维化。     

上皮-间充质转化在皮肤创面愈合中的作用研究进展

创面愈合是维持皮肤完整性的关键生理过程,对 屏障功能尤为重要。然而,目前仍存在许多具有挑战 性的问题,包括急性创面,还有涉及与疾病相关的慢性 难愈合创面,如糖尿病、压力性溃疡等,都会直接或间 接地导致皮肤损害或修复障碍[1]。创面愈合障碍会给 患者带来明显不适和痛苦,严重影响生活质量,同时也 对医疗系统增加巨大压力,需投入大量资源进行治疗 和管理,给社会带来沉重的经济负担。当皮肤修复反 应出现问题时,可能导致溃疡性皮肤缺损或过度形成 瘢痕组织,因此了解其修复过程并研究愈合机制对皮 肤愈合尤为重要。     

上皮钙黏素在乳腺癌预后评价应用中的研究进展

上皮钙黏素(E-cadherin)是人类上皮细胞的普遍标志,参与形成细胞间黏附性连接。研究发现,E-cadherin表达缺失与包括乳腺癌在内的上皮源肿瘤的转移密切相关。临床研究多围绕乳腺癌不同的组织病理类型、淋巴结状况、TNM分期、组织学分级、分子分型、预后及治疗方案等展开,同时对乳腺癌患者血清中的可溶性E-cadherin意义加以阐述。实验研究则以乳腺癌细胞的侵袭和转移能力、乳腺癌干细胞的形成以及耐药等为重点。这使得E-cadherin在乳腺癌预后评价中的作用更加明确和深入,为提高乳腺癌患者的生存率,改善生存质量提供了新的思路。     

MicroRNA-21对内皮-间充质转化的影响及其在慢性阻塞性肺疾病发病机制中的作用

目的：慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一种以持续气流受限为特征的疾病。本研究旨在探讨COPD小鼠模型是否存在内皮-间充质转化(endothelial-to-mesenchymal transition,EndMT),并初步探讨微RNA(microRNA,miR)-21与EndMT的关系。方法：建立小鼠COPD模型及miR-21基因敲除COPD动物模型(均为香烟烟雾诱导),将小鼠分为3组(n=4)：对照组、COPD组和miR-21基因敲除COPD组(miR-21-/--COPD组)。采用Masson三色染色法观察血管周围胶原纤维沉积的情况,免疫组织化学染色观察肺组织切片中内皮细胞标志物血管内皮钙黏蛋白(vascular endothelial-cadherin,VE-cadherin)、内皮一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)、血小板内皮细胞黏附分子-1(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,CD31)和间...     

PLCD1对胰腺癌CAPAN-1和BXPC-3细胞上皮间充质转化的影响

目的 :进一步探索肿瘤相关基因磷脂酶Cδ1(phospholipase Cδ1,PLCD1)对胰腺癌细胞系增殖、侵袭及迁移的影响和潜在分子行为机制。方法:用脂质体法将pcDNA3.1-PLCD1质粒转入肿瘤,同时设立空载体组;综合利用CCK-8、克隆形成实验、划痕实验和Transwell验证PLCD1对胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响,Western blot实验研究其潜在机制。结果:瞬时转染过表达质粒后的胰腺癌细胞CAPAN-1和BXPC-3中,PLCD1表达明显提高(P<0.05);CCK-8和克隆形成实验结果表明,高表达的PLCD1抑制胰腺癌细胞增殖速度(P<0.05);划痕实验和Transwell实验结果表明,细胞运动、侵袭及迁移能力下降(P<0.05)。Western blot实验发现,MAPK/ERK通路中磷酸化的ERK 1/2,间质细胞标志分子N-cadherin和Vimentin表达受抑制(P<0.05),同时上皮细胞标志分子E-cadherin表达上调(P<0.05)。结论:本研究发现PLCD1可能通过抑制MAPK/ERK通路来抑制上皮间...     

特发性肺间质纤维化中TGF-β1诱导上皮-间充质细胞转化的研究

目的探讨转化生长因子-β1(tansforming growth factor-β1,TGF-β1)在特发性肺间质纤维化(idiopathicpulmonary fibrosis,IPF)中上皮-间充质细胞转化(epithelial-mesenchymal transition,EM T)的作用和机制。方法选择临床-影像-病理诊断的IPF患者25例肺石蜡组织制作组织芯片,应用免疫组化方法检测病灶组织中TGF-β1和β连环蛋白(β-catenin),间质标记物α-SMA、Desmin、Vim和上皮标记物E-cadherin及CK7的分布及表达情况。结果 TGF-β1主要分布于肌纤维母细胞、Ⅱ型肺泡上皮细胞和巨噬细胞,且其在成纤维细胞灶(fibroblast foci,FF)区域内各种细胞中的表达明显高于无FF区域(P<0.01);与无FF区域相比,β-catenin和E-cadherin在有FF区域增生的Ⅱ型肺泡上皮细胞膜表达明显减弱(P<0.01),而胞浆的表达明显增加(P<0.01);同时发现有FF区域Ⅱ型肺泡上皮细胞表达间质标记物Vim,但未发现α-SMA的表达,而无FF区域两者均无表达。结论 TGF-β1和β-catenin有可能通过相互交叉作用诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞发生EMT,从而参与肺间质纤维化的发生。     

干扰LncRNA OIP5-AS1对人乳腺癌细胞迁移、上皮间充质转化及Notch1表达的影响

目的 探讨干扰LncRNAOIP5-AS1对人乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移、上皮间充质转化及Notch1表达的影响。方法 培养MDA-MB-231细胞,转染LncRNA OIP5-AS1 siRNA为LncRNA OIP5-AS1 siRNA组,转染NC siRNA的为NC siRNA组,未作任何处理的为Control组;采用RT-qPCR方法检测各组细胞LncRNAOIP5-AS1的表达水平;采用细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力;Western blots法检测LncRNA OIP5-AS1被干扰后乳腺癌细胞上皮间充质转化相关蛋白E-cadherin和Vimentin的表达变化;T-qPCR方法检测Notch1 mRNA的表达水平。结果 通过siRNA技术使LncRNA OIP5-AS1的表达受到抑制;LncRNA OIP5-AS1被干扰后,乳腺癌细胞的迁移能力降低,与Control组和NC siRNA组比,LncRNA OIP5-AS1 siRNA组细胞迁移能力受抑制更加明显(P<0.01);Western blots结果显示：与Control组和NC siRNA组相比...     

硫化氢对博来霉素致肺纤维化大鼠TGF-β1介导上皮间充质转化过程影响

目的 观察硫化氢(H2S)对转化生长因子-β1(TGF-β1)及上皮间充质转化(EMT)过程中E-钙黏素(E-cad)、波形蛋白(VIM)、α-平滑肌蛋白(α-SMA)表达影响,探讨H2S抗纤维化机制.方法 健康雄性SD大鼠60只,随机分为对照组、博来霉素组、NaHS+博来霉素组、泼尼松+博来霉素组,15只/组.于造模...     

褪黑素抑制缺氧引起的SGC-7901人胃癌细胞上皮-间充质转化

目的:研究褪黑素对缺氧引起的SGC-7901人胃癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的作用,并初步揭示其分子机制?方法:在建立缺氧诱导SGC-7901人胃癌细胞发生EMT的基础上,通过免疫印迹方法检测蛋白表达水平?免疫荧光的方法检测蛋白在细胞中的分布和表达,研究褪黑素对EMT过程的作用?结果:缺氧使SGC-7901人胃癌细胞发生EMT,表现为形态发生改变,上皮标志物表达量减少?间充质标志物表达增加,褪黑素可抑制缺氧条件下活性氧簇(ROS)的产生和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达及EMT?结论:在缺氧条件下SGC-7901人胃癌细胞可发生EMT,褪黑素可抑制该过程?这些结果揭示了褪黑素在缺氧引起的肿瘤细胞EMT过程中发挥的抑制作用,为褪黑素的临床应用提供了重要的理论依据?     

转化生长因子-β1诱导A549细胞向间充质细胞转化的作用研究

目的:观察重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1)对人肺上皮细胞株(A549)的转化作用。方法:将体外培养的A549用不同浓度的rhTGF-β1干预后,倒置显微镜观察细胞形态学的变化,用MTT法检测rhTGF-β1对A549增殖的影响。48 h收集蛋白用蛋白质印迹和间接免疫化学方法检测间充质细胞表型Fibronectin-EDA(Fn-EDA)表达变化。结果:rhTGF-β1诱导A549向间充质细胞形态转化,在体外对A549增殖无明显影响,上调间充质细胞表型Fn-EDA表达。结论:rhTGF-β1可诱导A549发生上皮细胞-间质转化(ephethlial-mesenchymal transition,EMT),支持肺上皮细胞发生EMT的观点。