人胃蛋白酶原Ⅰ、Ⅱ的分离纯化

目的：用放射免疫方法测定血清中胃蛋白酶原。方法：从人胃粘膜分离纯化胃蛋蛋白酶原Ⅰ、Ⅱ，采用DEAE－SephadexA25离子交换层析和Seephadex G100凝胶过滤层析方法化胃蛋白酶原Ⅰ、Ⅱ。结果：纯化的胃蛋白酶原经SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳证明一条带，分子量为41kd,40kd。结论 ：用二次层次法可以纯化人胃蛋白酶原Ⅰ、Ⅱ。     

大鼠精原干细胞的分离纯化

目的:探讨分离纯化大鼠精原干细胞(SSCs)的方法.方法:取大鼠睾丸组织,通过①机械法+两步酶法,②机械法+两步酶法+Percoll分离法,③机械法+两步酶法+Percoll分离法+差速贴壁法得到细胞悬液,进行培养观察.采用免疫组织化学方法鉴定,台盼蓝排斥实验及流式细胞仪分别检测细胞活率与纯度.结果:①、②、③法所得细胞为SSCs,所得SSCs活率分别为(93.26±1.06)%,(93.50±0.85)%和(94.73±0.82)%,差异无统计学意义(P>0.05);①、②、③法所得SSCs纯度呈增高趋势(P<0.05).结论:3种方法在分离纯化过程中对SSCs 活率的影响无明显差异.①法能够分离出较高纯度的SSCs,结合Percoll分离法能够使SSCs纯度提高,再结合差速贴壁法能够进一步富集SSCs.     

门冬胰岛素类似物研究概况

胰岛素(insulin, Ins)是所有1型糖尿病和多数2型糖尿病患者的主要治疗药物.理想的胰岛素应用模式是模拟生理性胰岛素分泌的情况以满足能量代谢的需要.在糖尿病(diabetes mellitus, DM)治疗中,胰岛素强化治疗已成为较为理想的治疗方法,能有效的减少或延缓1型和2型糖尿病慢性并发症的发生和发展.普通的短效人胰岛素应用广泛,但也存在较多不足,尤其是皮下注射后吸收和达到峰值速度均较缓慢,与正常个体餐后胰岛素的分泌状态不同,因而控制餐后血糖不甚理想[1].由于药物浓度的峰值不能与餐后血糖高峰吻合,故易导致餐后高血糖和药物吸收后低血糖的发生.为减少DM不良事件的发生,使胰岛素强化治疗更为安全、有效和方便,新的短效胰岛素类似物不断得以开发.     

重组人源胰岛素原C肽在大肠杆菌中的克隆、表达与纯化(英文)

目的:构建一种新型表达载体(pEDCC),表达并纯化得到人源胰岛素原C肽。方法:将编码截短的门冬酰胺酶突变体(ansB-C),天然C肽,人IgG1铰链区(hinge),额外的酸敏感二肽(DP)以及富含碱性氨基酸的8肽(KRKRKKSR)的核苷酸序列依次分别插入pET28a载体中,构建表达载体pEDCC。在乳糖的诱导下,融合蛋白ansB-C-hinge-DPKRKRKKSRNGS-GR-C-peptide以包涵体形式高效表达。融合蛋白经洗涤和乙醇分级沉淀纯化后,通过酸水解将PKRKRKKSRNGSGR-C-peptide释放出来。C肽N端14肽用胰蛋白酶切割,通过DE52柱与C-peptide分离。结果:构建的表达载体pEDCC序列正确,融合蛋白经分离纯化得到了高纯度的重组人源胰岛素原C肽。结论:以截短的门冬酰胺酶作为融合伙伴,并以富含碱性氨基酸的8肽调节等电点是一种生产重组人源胰岛素原C肽的有效方法。     

阴沟肠杆菌Ampc酶的分离纯化

目的：分离纯化Ampc酶并对酶的理化特性进行相关研究。方法：运用离子层析等技术对酶分离纯化；运用电泳等技术研究理化特性。结果：获得纯品酶并证实为Ampc酶。结论：本实验所采用的分离纯化技术可获得纯品Ampc酶。     

门冬胰岛素联合地特胰岛素与门冬胰岛素30对新诊断2型糖尿病强化治疗效果观察

目的评价门冬胰岛素联合地特胰岛素与门冬胰岛素30对新诊断2型糖尿病患者的有效性和安全性。方法选择96例新诊断的2型糖尿病患者,分别使用门冬胰岛素联合地特胰岛素(A组,50例)和门冬胰岛素30(B组,46例)强化治疗方案,观察治疗前后的静脉空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、FPG达标率、静脉餐后2h血糖(2hour postprandial plasma glucose,2hPG)、2hPG达标率、糖化血红蛋白(glycated hemoglobin,HbAlc)、HbAlc达标率、低血糖发生率、体质量增加情况。结果治疗12w后,两组患者的FPG、2hPG、HbAlc均较基线显著降低,两组FPG、2hPG及2hPG达标率、HbAlc和HbAlc达标率差异均无统计学意义,但A组FPG达标率高于B组(P<0.05);两组低血糖发生率分别为21.3%、25.1%,B组有可记录到的夜间低血糖发生。A组患者治疗前后体质指数(body mass index,BMI)无明显变化,B组患者治疗后BMI有所增加,但差异无统计学意义。结论门冬胰岛素联合地特胰岛素与门冬胰岛素30强化治疗,均可以安全有效地控制患者的血糖,在控制夜间低血糖发生和体质量增加方面,门冬胰岛素联合地特胰岛素方案可能更具优势。     

门冬胰岛素30单独应用与门冬胰岛素、甘精胰岛素联合应用治疗2型糖尿病的有效性和安全性临床观察

目的比较门冬胰岛素30单独三餐前应用与门冬胰岛素、甘精胰岛素联合4次/d应用治疗2型糖尿病的有效性和安全性临床疗效。方法将40例服用口服降糖药血糖控制不达标的成年2型糖尿病患者随机分为两组,每组20人,A组在三餐前注射门冬胰岛素30,B组在三餐前注射门冬胰岛素,并在夜晚10点注射甘精胰岛素,比较两组患者血糖控制的效果和低血糖发生情况。结果治疗后两组的全天血糖控制均较治疗前明显下降,且两组的低血糖事件发生次数相似。结论门冬胰岛素30单独应用和门冬胰岛素及甘精胰岛素联合应用两种降糖方案都可以更好地控制口服降糖药效果欠佳的2型糖尿病患者,而且低血糖事件发生次数少,无严重低血糖事件发生。     

门冬胰岛素30单独应用与门冬胰岛素、甘精胰岛素联合应用治疗2型糖尿病的有效性和安全性临床观察

目的 比较门冬胰岛素30单独三餐前应用与门冬胰岛素、甘精胰岛素联合4次/d应用治疗2型糖尿病的有效性和安全性临床疗效.方法 将40例服用口服降糖药血糖控制不达标的成年2型糖尿病患者随机分为两组,每组20人,A组在三餐前注射门冬胰岛素30,B组在三餐前注射门冬胰岛素,并在夜晚10点注射甘精胰岛素,比较两组患者血糖控制的效果和低血糖发生情况.结果 治疗后两组的全天血糖控制均较治疗前明显下降,且两组的低血糖事件发生次数相似.结论 门冬胰岛素30单独应用和门冬胰岛素及甘精胰岛素联合应用两种降糖方案都可以更好地控制口服降糖药效果欠佳的2型糖尿病患者,而且低血糖事件发生次数少,无严重低血糖事件发生.     

门冬胰岛素过敏1例

胰岛素过敏是胰岛素治疗的并发症之一,随着基因重组人胰岛素及胰岛素类似物的应用,胰岛素过敏的发生率大大减少,但仍存在,发生率大约在1%以下[1]。门冬胰岛素是超短效胰岛素类似物的一种,具有吸收快,作用集中而短,可以餐前立即注射的优点,在临床上广泛应用于糖尿病患者的胰岛素替代治疗,但仍有引起过敏反应的可能。现报道我科遇到的门冬胰岛素过敏1例。     

门冬胰岛素联合甘精胰岛素对糖尿病的有效性及安全性评价

目的探讨和评价门冬胰岛素和甘精胰岛素联合治疗糖尿病的有效性及安全性。方法选取通过药物控制血糖不理想的糖尿病患者58例,采用门冬胰岛素和甘精胰岛素联合治疗,治疗时间为三个月,通过比较治疗前后空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血红蛋白含量评价其有效性,通过观察患者在治疗期间低血糖发生率来评价其安全性。结果治疗后,患者空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血红蛋白下降明显,与治疗前比较,差异具有统计学意义。仅发生3例轻微低血糖事件,低血糖发生率为5．17％,通过服用糖类食物自行缓解。结论采用门冬胰岛素和甘精胰岛素治疗糖尿病,血糖浓度下降明显,低血糖发牛率低．有效性和安伞性好．可在今后推广廊用．     

门冬胰岛素与地特胰岛素联合治疗2型糖尿病的疗效评价

目的：探讨门冬胰岛素与地特胰岛素联合治疗2型糖尿病的疗效。方法收集2014年1月~2015年4月期间我院收治的2型糖尿病患者146例,随机分为观察组和对照组各73例,观察组用门冬胰岛素联合地特胰岛素治疗,对照组用门冬胰岛素治疗。治疗4周后比较两组FPG、2hPG、HbA1c水平、血糖达标时间、低血糖发生率及胰岛素用量。结果治疗后观察组和对照组FPG、2hPG、HbA1c水平均明显低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗后FPG、2hPG、HbA1c水平、血糖达标时间、低血糖发生率及胰岛素用量与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论2型糖尿病患者用门冬胰岛素联合地特胰岛素治疗的临床效果与单独应用门冬胰岛素相近,均可有效降低患者的血糖水平,均有较高的安全性。     

门冬胰岛素联合地特胰岛素治疗妊娠期糖尿病的临床疗效

目的探讨门冬胰岛素联合地特胰岛素治疗妊娠期糖尿病的临床疗效,为患者临床诊疗提供相关指导。方法选取自2016年6月～2018年9月我院接诊的106例妊娠期糖尿病患者为研究对象,按照随机数字表法将所有患者分为对照组(n=53)和研究组(n=53)。对照组患者予以生物合成人胰岛素治疗,研究组患者予以门冬胰岛素与地特胰岛素联合治疗。治疗8周,观察并对比两组患者治疗前后血糖水平变化,包括空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 hPG)、糖化血红蛋白(HbA1c),分析比较两组患者血糖达标时间、低血糖发生情况。结果治疗8周后,两组患者FPG、2 hPG、HbA1c均较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P0.05);研究组患者FPG、2 hPG、HbA1c[(4.17±1.37)mmol/L、(6.19±1.55)mmol/L、(6.20±1.59)%]均明显低于对照组[(5.36±1.28)mmol/L、(7.36±1.62)mmol/L、(7.59±1.50)%],差异有统计学意义(P0.05)。研究组患者FPG、2 hPG达标时间[(4.03±1.16)d、(4.66±1.41)d]均明显短于对照组[(6.81±2.20)d、(7.50±2.27)d],差异有统计学意义(P0.05);研究组患者低血糖及严重低血糖发生率(5.66%、0)均明显低于对照组的18.87%、11.32%,差异有统计学意义(P0.05)。结论门冬胰岛素联合地特胰岛素治疗妊娠期糖尿病临床疗效理想,可有效降低患者血糖水平,加快患者血糖达标时间,并有效降低低血糖发生率,值得临床借鉴并推广实施。     

门冬胰岛素对初诊妊娠糖尿病的疗效及安全性观察

目的评价门冬胰岛素（诺和锐）治疗初诊妊娠糖尿病（GDM）的有效性及安全性。方法32例初诊GDM患者随机分为诺和锐治疗组18例（观察组）及短效生物合成人胰岛素（诺和灵R）组15例（对照组）,两组均通过胰岛素泵注射,疗程自确诊时至分娩后。观察两组治疗前后空腹及三餐后2h及睡前末梢血糖、糖化血红蛋白（HbAlc）、血糖达标时间、胰岛素用量、低血糖发生率、孕妇和婴儿围生期并发症。结果①两组治疗后空腹及三餐后2h及睡前血糖、HbAlc较治疗前均有明显下降（P〈0．01）,且观察组三餐后血糖较对照组明显下降（P〈0．05）。而空腹、睡前血糖、HbAlc组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。②观察组血糖达标时间明显短于对照组（P〈0．01）,胰岛素平均日用量明显少于对照组（P〈0．05）。低血糖发生率明显低于对照组（P〈0．01）。③两组孕妇和婴儿围生期并发症比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论诺和锐较诺和灵R能更有效控制餐后血糖,胰岛素用量较少,达标时间较短,低血糖发生率较低,治疗GDM安全有效,为GDM患者控制血糖提供了一个更好的选择。     

诺和锐治疗2型糖尿病的疗效观察

目的 观察诺和锐治疗2型糖尿病的临床疗效及安全性。方法 将80例2型糖尿病患者随机分为观察组和对照组各40例，观察组给予诺和锐治疗，对照组以诺和灵R治疗，药物剂量根据血糖调整。观察指标包括两组患者血糖控制效果、控制血糖达标所需时间和胰岛素剂量以及不良反应。结果 两组药物治疗均可有效地降低血糖（P〈0．001）；观察组降低血糖效果、控制血糖达标所需时间及胰岛素剂量均优于对照组（P均〈0．05）；观察组有1例出现中餐前低血糖，对照组有3例出现夜间低血糖，两组患者均来见明显过敏反应及其它不适。结论 诺和锐治疗2型糖尿病降低血糖效果显著，安全性高，注射方式灵活，值得临床推广应用。     

诺和锐30对2型糖尿病疗效的临床观察

目的了解诺和锐30对2型糖尿病患者的疗效及安全性。方法40例对象均是2005年1月至2006年1月就诊的2型糖尿病患者，随机分为A组及B组各20例。A组接受诺和锐30治疗，B组接受诺和灵30R治疗。结果（1）2组治疗后各时点血糖及糖化血红蛋白（HbA1c）水平分别与治疗前比较，均有所下降（P值均〈0．05）。各指标治疗前后差值（下降值）结果表明，三餐餐后血糖及HbA1c的下降值A组高于B组（P值均〈0．05）。（2）A组有2例发生低血糖，低血糖发生率为10％；B组有6例发生低血糖，低血糖发生率为30％，2组低血糖发生率差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论诺和锐30对2型糖尿病患者安全有效，值得在临床上推广。     

不同糖耐量人群中胰岛素原、真胰岛素与胰岛β细胞功能的相关性研究

目的探讨不同糖耐量人群中真胰岛素(TI)、胰岛素原(PI)与胰岛β细胞功能变化的临床意义。方法检测正常对照组(NGT)、糖耐量减退(IGT)组,糖尿病(DM)组各60例的空腹及2h血糖、免疫反应性胰岛素(IRI)、胰岛素原(PI)及真胰岛素(TI),采用稳态模型(HOMA Model)评估法计算胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。结果 DM组的空腹PI水平、PI/IRI高于NGT组及IGT组,同时其TI/IRI低于NGT组及IGT组,且PI/IRI及TI/IRI在各组间差异具有统计学意义(P<0.05)。β细胞功能指数由IRI计算HOMA-βIRI,在DM组低于IGT组和NGT组(P<0.05);由TI计算的HOMA-βTI值,DM组和IGT组低于NGT组(P<0.05)。胰岛素抵抗指数无论是用IRI还是用TI计算的HOMA-IR均显示DM组>IGT组>NGT组(P<0.05)。结论 T2DM患者测定PI、TI水平可能较IRI更能反映胰岛β细胞水平和功能状况。     

门冬胰岛素联合地特胰岛素与胰岛素泵对新诊断2型糖尿病疗效与安全性比较

目的：比较门冬胰岛素联合地特胰岛素与胰岛素泵持续皮下输注（ CSII）对新诊断2型糖尿病的疗效与安全性。方法：将56例新诊断的2型糖尿病患者随机分为门冬胰岛素联合地特胰岛素组和胰岛素泵组,治疗2周。对比2组治疗前后血糖控制情况、胰岛功能情况、血糖达标所需要的时间、胰岛素用量、低血糖发生率等情况。结果：2组治疗后空腹血糖（FPG）、空腹C肽（FC－P）、餐后2小时血糖（2h PG）、餐后2小时C肽（2h C－P）均较同组治疗前显著改善,组间比较无显著差异;2组血糖达标时间、胰岛素用量、低血糖发生率无显著差异。结论：对于新诊断的2型糖尿病患者,门冬胰岛素联合地特胰岛素皮下注射治疗,可降低患者血糖水平,改善患者的胰岛β细胞功能,与胰岛素泵同样安全、有效。     

门冬胰岛素注射液30强化治疗初诊2型糖尿病临床观察

目的:对新诊断的2型糖尿病患者应用门冬胰岛素注射液(诺和锐)30强化治疗的疗效进行观察。方法:对新诊断的2型糖尿病患者使用门冬胰岛素注射液(诺和锐)30进行皮下注射,3次/d,2周后改为预混胰岛素皮下注射,2次/d。结果:门冬胰岛素注射液(诺和锐)30强化治疗EPG达标时间(5±2)d,2HPG达标时间(8±3)d。结论:门冬胰岛素注射液(诺和锐)30强化治疗能更快、更稳地降低血糖。     

甘精胰岛素联合阿卡波糖治疗2型糖尿病效果观察

目的探讨甘精胰岛素联合阿卡波糖治疗2型糖尿病的临床效果。方法将86例2型糖尿病患者随机分为两组,各43例。对照组给予诺和锐30联合阿卡波糖治疗,观察组给予甘精胰岛素联合阿卡波糖治疗。治疗3个月后,观察两组临床疗效及低血糖事件发生率,治疗前后空腹血糖（FBG）、餐后2 h血糖（2 h PG）、糖化血红蛋白（Hb A1c）及超敏C反应蛋白（hs-CRP）指标。结果观察组患者有效率为88.37%,对照组为83.72%,两组有效率比较差异无统计学意义（P〉0.05）;观察组低血糖事件发生率为2.33%,低于对照组的18.60%（P〈0.05）。治疗前两组FBG、2 h PG、Hb A1c及hs-CRP比较差异均无统计学意义（P〉0.05）;治疗3个月后,除对照组hs-CRP外,两组上述指标均有明显下降;两组治疗后比较,观察组FBG低于对照组（P〈0.01）,其他指标两组差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论甘精胰岛素联合阿卡波糖治疗2型糖尿病效果显著,可有效降低低血糖事件发生率,平稳降糖,值得临床推广应用。     

改良酶消化法培养成骨细胞的研究

【目的】采用改良胶原酶法体外培养大鼠颅骨成骨细胞。【方法】取新生24 h SD大鼠颅骨,剔净后剪成碎块。依次以0.25%胰蛋白酶-0.02?TA和0.1%Ⅰ型胶原酶消化后,培养于-αMEM培养液中。倒置显微镜下观察形态学变化,钙钴染色法检测ALP活性,茜素红染色法观察矿化结节的形成。【结果】培养的细胞具有典型的成骨细胞形态特征,碱性磷酸酶呈阳性。【结论】采用改良胶原酶法培养的成骨细胞操作简便,成活率高,细胞具有典型的成骨细胞形态特征,且成分较单一。