Id2通过非HLH结构域促进SKOV3细胞的侵袭性

目的：观察分化抑制因子2（inhibitor of differentiation2，Id2）基因转染卵巢癌SKOV3细胞后，对细胞生长和侵袭能力的影响，探讨№基因缺失螺旋-环-螺旋（helix—loop—helix，HLH）结构域后对SKOV3细胞的影响。方法：以携带野生型，d2、Id2-DBM和Id2-DBM-δHLH基因的质粒（peDNA3．1-Id2、peDNA3．1-Id2-DBM和pcDNA3．1-Id2-DBM-8HLH）经脂质体介导转染SKOV3细胞。采用Western印迹法和RT—PCR法检测转染后SKOV3细胞Id2、Id2-DBM和Id2-DBM-8HLH的表达水平；MTT法检测SKOV3细胞的增殖曲线；划痕试验和Transwell小室检测细胞的迁移能力；Western印迹法检测Id2对MCF-7细胞上皮钙黏附素表达的影响。结果：mRNA及蛋白水平显示质粒成功转入；细胞生长曲线显示各组细胞的增殖无显著差异；与空白对照组相比，转染peDNA3．1-Id2、pcDNA3．1-Id2-DBM和peDNA3．1-Id2-DBM-δHLH后，细胞的侵袭能力增强，且peDNA3．1-Id2-DBM和peDNA3．1-Id2-DBM-δHLH组细胞明显伴有上皮钙黏附素表达水平的降低。结论：Id2蛋白的过表达可促进卵巢癌SKOV3细胞的侵袭能力，与上皮钙黏附素表达水平的降低有关，且该作用在缺失HLH结构域后依然存在。     

Id2通过非HLH结构域促进MCF-7细胞的侵袭性

目的：观察Id2基因转染乳腺癌细胞MCF-7后对细胞生长、侵袭能力的变化，探讨Id2基因缺失HLH结构域后对细胞的影响。方法：以携带Id2-DBM和Id2-DBM-8HLH基因的质粒（pCDNA3．1-Id2-DBM和pCDNA3．1-Id2-DBM-8HLH）经脂质体介导转染MCF-7细胞。RT—PCR法检测转染后Id2、Id2-DBM和Id2-DBM-6HLHmRNA表达水平；MTT法检测MCF-7细胞增殖曲线；划痕实验、transwell小室检测细胞的迁移能力；Western Blot分析Id2对MCF-7细胞E—cad表达的影响。结果：mRNA水平显示质粒均成功转入；细胞生长曲线显示增殖无显著差异；与空载组比较，转染pCDNA3．1-Id2-DBM和pCD．NA3．1-Id2-DBM-8HLH后侵袭能力增强，且E—cad表达降低。结论：Id2蛋白的过表达可以促进乳腺癌细胞MCF-7的侵袭能力，与E—cad的降低有关，且该作用在缺失HLH结构域后仍然存在。     

Id2 通过非 HLH 结构域促进 MCF-7 细胞的侵袭性

目的：观察Id2基因转染乳腺癌细胞MCF-7后对细胞生长、侵袭能力的变化，探讨Id2基因缺失HLH结构域后对细胞的影响。方法：以携带Id2-DBM和Id2-DBM-8HLH基因的质粒（pCDNA3．1-Id2-DBM和pCDNA3．1-Id2-DBM-8HLH）经脂质体介导转染MCF-7细胞。RT—PCR法检测转染后Id2、Id2-DBM和Id2-DBM-6HLHmRNA表达水平；MTT法检测MCF-7细胞增殖曲线；划痕实验、transwell小室检测细胞的迁移能力；Western Blot分析Id2对MCF-7细胞E—cad表达的影响。结果：mRNA水平显示质粒均成功转入；细胞生长曲线显示增殖无显著差异；与空载组比较，转染pCDNA3．1-Id2-DBM和pCD．NA3．1-Id2-DBM-8HLH后侵袭能力增强，且E—cad表达降低。结论：Id2蛋白的过表达可以促进乳腺癌细胞MCF-7的侵袭能力，与E—cad的降低有关，且该作用在缺失HLH结构域后仍然存在。     

PTTG1促进结肠癌SW480细胞侵袭和迁移的作用机制

目的 研究垂体肿瘤转化基因 1（pituitary tumor transforming gene 1, PTTG1）过表达促进人结肠癌细胞SW480侵袭和迁移作用及其可能机制。方法 采用脂质体转染法将pcDNA3.1(+)-PTTG1及空载pcDNA3.1(+)转染人结肠癌SW480细胞,G418法筛选阳性克隆。Western blot和Real-time PCR法鉴定稳定过表达PTTG1细胞株建立。Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力,Western blot检测MMP2、MMP9、E-cadherin、Vimentin和Snail的表达。结果 （1）成功获得稳定高表达PTTG1的SW480克隆细胞株PTTG1-SW480;（2）过表达PTTG1基因后,SW480细胞侵袭和迁移能力增强,MMP2和MMP9表达升高,上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）标记分子E-cadherin表达降低,Vimentin和Snail的表达升高,差异均有统计学意义（P<0.01）;（3）过表达PTTG1基因后,SW480细胞中PI3K/AKT信号活化增强,使用LY29400干预后,抑制细胞侵袭、迁移和EMT,E-cadherin表达上调、Vimentin和Snail的表达下调,差异均有统计学意义（P<0.01）。结论 PTTG1基因过表达可能通过活化PI3K/AKT信号诱导SW480细胞EMT发生,发挥促进SW480侵袭和迁移作用;提示PTTG1蛋白可能成为结肠癌治疗的一个潜在靶点。     

人Id3基因在肺腺癌A549细胞中的表达及其对细胞生长的抑制

目的：研究外源性分化抑制因子3（Inhibitor of differentiation3，Id3）基因表达对人肺腺癌细胞系A549细胞生长的抑制作用。方法：构建磁，和EGFP的融合基因表达载体pEGFP／Id3，采用脂质体转染技术将pEGFP／Id3导入A549细胞。FCM分析转染细胞EGFP表达效率，荧光显微镜观察EGFP表达情况；半定量RT—PCR、免疫细胞化学分析转染后A549细胞Id3mRNA和蛋白的表达。MTT法检测转染后A549细胞生长抑制情况，FCM分析A549细胞周期进程，AnnexinV／7-AAD和Hoechst33258染色检测转染后细胞的凋亡情况。结果：成功构建入肚，与EGFP融合基因表达载体pEGFP／Id3；荧光显微镜和FCM观察到EGFP的有效表达，转染48—72h时EGFP表达率最高；Id3mRNA及蛋白在转染后的A549细胞中能有效表达。转染后48h和72h，pEGFP／Id3转染组A549细胞生长受到明显抑制（P〈0．01）；细胞周期分析表明，pEGFP／Id3转染组G0／G1期细胞显著高于对照组（P〈0．05）；AnnexinV／7-AAD双染结果显示，pEGFP／Id3转染组细胞的早期凋亡率[（10．67&#177;2．60）％]显著高于pEGFP组[（3．39&#177;2．21）％]和未转染组[（2．35&#177;0．95）％]（P〈0．05）；Hoechst33258染色结果也证实pEGFP／Id3组A549细胞出现明显凋亡形态特征。结论：外源性加基因在肺腺癌A549细胞中的表达能抑制细胞增殖，并诱导细胞凋亡。     

CCL20 通过AKT/MMP3 轴而非EMT途径诱导结肠癌SW480 细胞的侵袭和转移

[摘要] 目的：探讨趋化因子CCL20/CCR6促进结肠癌SW480细胞侵袭和迁移的分子机制。方法：筛选高表达CCR6 的结肠癌SW480细胞,加入外源性重组人CCL20后,采用Transwell、划痕愈合实验检测其侵袭和迁移能力,以免疫荧光、WB实验检测SW480细胞EMT标志蛋白、AKT信号蛋白以及靶标蛋白MMP3 的表达;通过MK2206 阻断实验验证AKT信号是其作用机制,通过TCGA数据库资源（https://portal.gdc.cancer.gov/）分析CCL20和MMP3在结直肠癌组织中的表达水平及其相关性。结果：趋化因子CCL20能够明显促进结肠癌SW480细胞侵袭和迁移（均P<0.01）,其间并不伴随细胞的EMT变化,而是通过AKT信号的激活及下游靶标蛋白MMP3 表达上调是其诱因之一;阻断AKT信号能够明显抑制SW480细胞侵袭和迁移能力,且下调MMP3 的表达水平（P<0.05 或P<0.01）。TCGA 平台数据提示,结肠癌组织中CCL20 和MMP3 的表达明显高于正常肠黏膜组织,且两者呈明显正相关（r=0.051,P<0.01）。结论：趋化因子CCL20 通过AKT/MMP3 信号轴而非EMT机制促进结肠癌SW480 细胞的侵袭和迁移。     

miR-23b-3p在结直肠癌中的表达及其靶向KLF3抑制结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的机制研究

目的:研究miR-23b-3p在结直肠癌中的表达情况及对结直肠癌SW620细胞侵袭和迁移的影响机制。方法:收集2018年01月至2020年12月我院胃肠外科手术切除的58例结直肠癌组织及癌旁组织标本,以及结直肠癌细胞株SW480、SW620、HCT116、HT-29、Lovo和人正常结直肠黏膜细胞FHC,采用qPCR法检测miR-23b-3p和KLF3相对表达水平。采用脂质体转染技术将miR-23b-3p mimics、mimics-NC转染至SW620细胞,采用Transwell实验和划痕实验检测其侵袭和迁移能力的改变。利用生物信息学软件预测并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-23b-3p和KLF3的结合位点。将KLF3过表达质粒（pcDNA3.1-KLF3）或空载质粒（Vector）单独或联合miR-23b-3p mimics转染至SW620细胞,采用Transwell实验和划痕实验检测其侵袭和迁移能力的改变,采用qPCR和Western Blot实验检测SW620细胞中KLF3 mRNA及蛋白的表达。结果:miR-23b-3p在结直肠癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织（P＜0.05）,并与患者TNM分期和远处转移有关（均P＜0.05）;miR-23b-3p在结肠癌细胞系中的表达水平均显著低于FHC细胞,上调miR-23b-3p表达能显著抑制SW620细胞的侵袭和迁移能力。KLF3在结直肠癌组织和细胞中高表达,与miR-23b-3p在结直肠癌组织中的表达呈负相关（r=-0.326,P=0.013）,双荧光素酶报告基因实验证实miR-23b-3p直接靶向调节KLF3的表达, KLF3过表达能促进SW620细胞的侵袭和迁移,同时转染miR-23b-3p mimics可下调KLF3蛋白和mRNA表达,逆转KLF3过表达对SW620细胞侵袭和迁移能力的促进作用。结论:miR-23b-3p在结直肠癌中低表达并与肿瘤患者TNM分期及远处转移相关,miR-23b-3p靶向调控KLF3表达抑制结直肠癌SW620细胞的侵袭和迁移能力。     

SPRED1在结肠癌中的表达及意义

摘 要：［目的］ 探讨SPRED1在结肠癌中的表达,及其与结肠癌患者预后的相关性,以及对结肠癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。［方法］ 采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测SPRED1 mRNA在结肠癌细胞和组织标本中的表达,免疫组织化学技术检测SPRED1蛋白在结肠癌组织中的表达。使用小干扰RNA（siRNA）干扰结肠癌细胞内SPRED1表达后,CCK-8试剂盒检测结肠癌细胞增殖能力变化,Transwell小室检测结肠癌细胞迁移能力变化,Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒检测细胞凋亡水平。［结果］ SPRED1 mRNA在结肠癌细胞株和结肠癌组织中表达水平均显著上调（P均<0.001）,高表达SPRED1患者的总生存期短于低表达SPRED1患者（HR=2.326,95%CI：1.340～4.062,P<0.05）。干扰SPRED1后,干扰组结肠癌SW480和SW620细胞在36h和48h后增殖能力显著下降（P<0.05）,侵袭能力显著下降（SW480：t=42.05,P<0.0001;SW620：t=12.91,P=0.0002）,且凋亡水平显著上升（SW480：t=18.46,P<0.05;SW620：t=18.52,P<0.0001）。［结论］SPRED1在结肠癌中表达上调,促进结肠癌的增殖和侵袭。     

乳腺癌组织和细胞中低表达的LZTS2 通过PI3K/AKT信号通路抑制癌细胞增殖、迁移和EMT

[摘要] 目的：探讨亮氨酸拉链肿瘤抑制因子2（leucine zipper tumor suppressor 2, LZTS2）基因在人乳腺癌组织和细胞系中的表达及其对乳腺癌细胞增殖、迁移和EMT的影响及其作用机制。方法：收集2016 年1 月至2016 年12 月开封中心医院乳腺外科收治的50 例女性乳腺癌患者的癌及癌旁组织标本和乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-468 以及正常人乳腺上皮细胞株HBL-100,用qPCR 和Western blotting 检测乳腺癌组织和细胞中LZTS2 mRNA和蛋白表达水平。构建pcDNA-LZTS2 真核表达载体并采用脂质体转染MCF-7 细胞,同时转染pcDNA3.1 作为阴性对照。用Western blotting 检测转染48~72 h 后MCF-7 细胞中LZTS2 蛋白表达水平;用MTT法、Transwell 小室法检测LZTS2 过表达对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,同时用Western blotting检测细胞中EMT相关蛋白Cyclin D1、波形蛋白、神经钙黏蛋白、上皮钙黏蛋白以及PI3K/AKT信号通路中相关蛋白的表达。结果：人乳腺癌组织中LZTS2 mRNA和蛋白表达水平均明显低于癌旁组织（P<0.05 或P<0.01）;乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231 和MDA-MB-468 细胞中LZTS2 mRNA和蛋白表达水平显著低于乳腺上皮细胞HBL-100（P<0.05 或P<0.01）。与空白对照组和pcDNA3.1组相比,pcDNA-LZTS2 组MCF-7 细胞中LZTS2 蛋白表达水平明显上调（P<0.01）,细胞增殖、迁移和侵袭能力显著受到抑制（P<0.05 或P<0.01）,同时过表达LZTS2 细胞中Cyclin D1、波形蛋白和神经钙黏蛋白表达水平均明显降低（P<0.05 或P<0.01）、上皮钙黏蛋白表达水平明显升高（均P<0.01）,显示LZTS2 过表达通过降低p-PI3K和p-AKT 表达而抑制PI3K/AKT信号通路。结论：LZTS2 在乳腺癌中低表达,过表达LZTS2 能够抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能与抑制细胞EMT过程的PI3K/AKT信号通路有关。     

GBX2过表达促进人宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移及侵袭

[摘要] 目的：探讨GBX2 基因在人宫颈癌SiHa 细胞增殖和侵袭转移中的作用及其机制。方法：应用质粒转染技术,分别将过表达GBX2 基因重组质粒pCMV6-entry-GBX2（实验组）及空载体质粒pCMV6-entry（阴性对照组）转染到宫颈癌SiHa 细胞中,用WST-1 法、集落形成实验、流式细胞术分别检测转染细胞的增殖、集落形成和细胞周期,用划痕愈合实验、Transwell 实验检测细胞的迁移、侵袭能力,用ELISA 法检测细胞培养上清中IL-6 的表达水平,用WB检测EMT相关蛋白的表达变化并探讨其可能的作用机制。结果：与SiHa/pCMV6 组相比,上调GBX2 表达后：（1）SiHa/GBX2 组细胞的增殖、集落形成、迁移和侵袭能力明显增强（均P<0.01）,G0/G1 期的细胞比例减少、S期与G2/M期的细胞比例增加（均P<0.01）;（2）SiHa/GBX2 组细胞EMT相关蛋白上皮钙黏蛋白表达水平下降,神经钙黏蛋白、波形蛋白和snail 表达水平上调（均P<0.01）;（3）SiHa/GBX2 组细胞培养上清中IL-6 的表达水平明显增高（P<0.01）;（4）SiHa/GBX2 组细胞STAT3 磷酸化水平增强,并能被STAT3 抑制剂S31-201 抑制（P<0.01）。结论：GBX2可能通过IL-6/STAT3 通路诱导宫颈癌SiHa 细胞EMT,从而促进宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

肺癌患者Id蛋白及基因的表达及其与临床参数的关系

 目的　探讨4种分化抑制因子Id蛋白和基因在肺癌的表达及其与临床参数的关系。方法　采用组织芯片和免疫组织化学方法研究69例肺癌和34例癌旁正常肺组织中Id1、Id2、Id3、Id4蛋白表达水平;应用RT-PCR方法研究30例肺癌标本中Id1、Id2、Id3、Id4基因的表达并探讨其与各项临床病理特征的关系。 结果　肺癌中4种Id蛋白和基因的表达水平均高于癌旁正常肺组织,差异有统计学意义（P＜0.05）;患者的性别、年龄、组织类型、临床分期与4种Id蛋白和基因的高表达无关（P＞0.05）;Id1、Id2、Id3蛋白在分化差与分化好的肺癌中的表达差异有统计学意义（P＜0.05）, Id1蛋白在有淋巴结转移与无淋巴结转移肺癌中的表达差异有统计学意义（P＜0.05）; Id1、Id3基因在有淋巴结转移与无淋巴结转移以及在分化程度差与分化程度好的标本中的表达差异有统计学意义（P＜0.05）。结论　4种Id基因作为癌基因在肺癌的发生、发展中发挥作用,其表达高低与肺癌的恶性程度有关,有可能成为肺癌的预后指标。     

Id1基因与妇科肿瘤相关性的研究

分化抑制因子-1（inhibitor of differentiation-1,Id1）,属于螺旋-环-螺旋（helix-loop-helix,HLH）蛋白,研究已经证实,Id1蛋白的异常高表达与人类恶性肿瘤的增殖、侵袭和转移关系密切,是影响肿瘤患者预后的重要影响因素,同时为抗肿瘤药物提供了新的作用靶点。本文针对Id1基因与妇科肿瘤的相关性研究做一综述。     

沉默Id1基因表达对卵巢癌细胞生长影响的实验研究

目的:通过构建人卵巢癌SKOV3 Id1特异性siRNA慢病毒载体及其裸鼠移植瘤模型,观察沉默分化抑制因子（inhibitor of differentiation-1,Id1）表达对卵巢癌SKOV3生长的影响。方法:根据Id1基因序列设计并合成的siRNA片段转染SKOV3细胞,将转染细胞分为四组:cell+lv-shRNA-Id1（实验组）、cell+lv-shRNA-NC(质粒对照组)、cell+lv-control(空病毒对照组)、cell(空白对照组),筛选出稳定转染的SKOV3细胞克隆,48小时后检测细胞生长活性。将40只裸鼠随机分为四组,分别接种上述转染成功的细胞,30天后称取瘤体重量,计算抑瘤率;然后通过 Western blotting 法检测移植瘤中Id1蛋白的表达。结果:在体外试验中,实验组的细胞生长活性显著低于空白对照组,具有统计学意义（P＜0.05）,三对照组间无明显差异（P＞0.05）;体内实验显示,实验组平均瘤重均低于其他三对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）,三对照组间瘤重差异无统计学意义（P＞0.05）;实验组、质粒对照组、空病毒组抑瘤率分别为45.98%、4.84%、4.50%;Western blotting 结果显示,实验组中Id1表达较对照组明显下调（P＜0.05）。结论:沉默Id1基因能抑制卵巢癌细胞的生长,有望成为卵巢癌治疗新靶点。     

细胞分化抑制子Id1在前列腺癌中的表达及意义

目的:细胞分化抑制子Id1(inhibitor of differentiation or inhibitor of DNA binding)蛋白与肿瘤的发生、侵袭及远处转移有关。本研究主要观测人前列腺癌组织中Id1蛋白的表达,并分析其应用价值。方法:采用免疫组化SP法检测43例前列腺癌(prostate cancer,PC)、12例前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)和2例正常前列腺组织中Id1蛋白的表达。结果:Id1蛋白在正常前列腺组织中无表达;BPH组织中无或弱表达(5/12);所有前列腺癌组织都有阳性表达(43/43),而且大多数以中、高度表达为主(与BPH相比,P<0.01);前列腺癌中Id1的表达水平与Gleason分级成正比(rs=0.63P<0.01)。结论:人前列腺癌组织中,Id1蛋白有过度表达,且与前列腺癌的Gleason分级呈正相关,表明与癌组织的恶性程度有关。Id1蛋白有可能作为判断前列腺癌发展的一种新的肿瘤标志。     

基因在肺腺癌A549细胞中的表达及其对细胞生长的抑制

目的: 研究外源性分化抑制因子3（Inhibitor of differentiation 3,Id3）基因表达对人肺腺癌细胞系A549细胞生长的抑制作用。方法：构建Id3和EGFP的融合基因表达载体pEGFP/Id3,采用脂质体转染技术将pEGFP/ Id3导入A549细胞。FCM分析转染细胞EGFP表达效率，荧光显微镜观察EGFP表达情况；半定量RTPCR、免疫细胞化学分析转染后A549细胞 Id3 mRNA和蛋白的表达。MTT法检测转染后A549细胞生长抑制情况，FCM分析A549细胞周期进程，Annexin V/7AAD和Hoechst33258染色检测转染后细胞的凋亡情况。结果:成功构建人Id3与EGFP融合基因表达载体pEGFP/Id3；荧光显微镜和FCM观察到EGFP的有效表达，转染48~72 h时EGFP表达率最高；Id3 mRNA及蛋白在转染后的A549细胞中能有效表达。转染后48 h和72 h，pEGFP/Id3转染组A549细胞生长受到明显抑制（P<0.01）；细胞周期分析表明，pEGFP/Id3转染组G0/G1期细胞显著高于对照组（P<0.05）; Annexin V/7AAD双染结果显示，pEGFP/Id3转染组细胞的早期凋亡率\[（10.67±2.60）%\]显著高于pEGFP组\[（3.39± 2.21）%\]和未转染组\[（2.35 ± 0.95）%\]（P<0.05）；Hoechst33258染色结果也证实pEGFP/Id3组A549细胞出现明显凋亡形态特征。结论:外源性Id3基因在肺腺癌A549细胞中的表达能抑制细胞增殖,并诱导细胞凋亡。     

Id1 promotes lung cancer cell proliferation and tumor growth through Akt-related pathway

Overexpression of Id family proteins inhibits cell differentiation and enhances cell proliferation and invasiveness. Although Id1 is the Id family member mostly linked to tumorigenesis, its role in lung cancer is unclear. An elevated Id1 expression was observed in lung cancer cell lines as well as lung cancer tissues. Id1 overexpression increased cell proliferation while Id1 knockdown decreased cell proliferation, mostly through Akt-related pathway. Nude mice study further confirmed an increased tumor growth in Id1-overexpressing cells and a decreased tumor growth in Id1-knockdowned cells. In conclusion, inactivation of Id1 may provide a novel strategy for treatment of lung cancer patients.     

Id蛋白与肿瘤及肿瘤性血管生成关系

分化抑制因子（Id）是一组对碱性螺旋-环-螺旋（bHLH）转录因子活性起负调节作用的转录因子。目前发现在哺乳类动物细胞含Id1～Id4 4种Id因子。自1990年发现Id分子以来，有关该分子在细胞周期调控、细胞增殖、分化、死亡和肿瘤发生、发展及肿瘤性血管生成等方面的作用已进行了广泛而深入的研究。研究表明：Id蛋白在多种原发性肿瘤中均高表达，参与肿瘤的发生，为肿瘤血管生成所必需，并与肿瘤的侵袭、转移关系密切。