PARP1通过调控N-糖基转移酶FUT8影响胃癌AGS细胞的增殖与5-FU耐药

目的：探讨聚二磷酸腺苷核糖聚合酶 1（PARP1）对胃癌AGS细胞的增殖和5-FU耐药性的影响及其可能的机制。方法：收集2018年5月至2019年12月于恩施土家族苗族自治州中心医院就诊的72例胃癌患者的肿瘤组织和癌旁组织,采用qPCR和免疫组化法检测胃癌和癌旁组织中PARP1的表达状况。CCK-8法、流式细胞术和集落形成实验分别检测PARP1抑制剂AG14361对胃癌AGS细胞增殖、凋亡和集落形成的影响,MTT法检测AG14361对胃癌细胞5-FU敏感性的影响。mRNA测序分析AG14361处理AGS细胞后差异基因整体分布情况,KEGG富集分析相关信号通路。向AGS细胞转染siFUT8以敲减FUT8基因的表达,qPCR和WB法检测AGS细胞内α-1,6-岩藻糖基转移酶（FUT8）的表达状况和敲减FUT8效果,CCK-8法、流式细胞术和集落形成实验分别检测AG14361处理对敲减FUT8表达的AGS细胞增殖、凋亡和集落形成的影响。结果：与癌旁组织相比,胃癌组织中PARP1呈高表达（P<0.001）。AG14361 处理可显著抑制 AGS 细胞的增殖和细胞集落形成,促进AGS细胞凋亡（均P<0.01）。AG14361处理可降低5-FU杀伤胃癌细胞的IC50,且在 AGS 细胞中尤为明显 ,IC50 下降超过 60%。mRNA测序结果显示,N-糖基化修饰中FUT8是AG14361抑制AGS细胞增殖的关键糖基转移酶（P<0.05）。与siNC组相比,IC50浓度的AG14361可显著逆转干扰FUT8对AGS细胞增殖的增加,促进细胞凋亡和BAX蛋白表达、抑制Bcl2蛋白表达,抑制FUT8干扰所致AGS细胞集落的增加（均P<0.01）。结论：PARP1可通过调控N-糖基转移酶FUT8促进胃癌细胞恶性转化,其抑制剂AG14361可增强胃癌细胞对5-FU的敏感性,PARP1可能成为胃癌治疗的一个潜在靶标。     

莪术醇对胃癌SGC7901细胞凋亡及AIF、Endo G表达的影响

摘 要：［目的］ 观察莪术醇对胃癌细胞株SGC7901细胞凋亡及凋亡诱导因子(AIF)和核酸内切酶G (Endo G)表达的影响,探讨其作用机制。［方法］ 对体外培养的SGC7901细胞,分别加入不同浓度的莪术醇处理,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot方法检测AIF、Endo G蛋白的表达水平。利用Caspase-3抑制剂Z-VAD-FMK进一步确定AIF和Endo G在莪术醇抑制胃癌SGC7901细胞凋亡的机制。［结果］ 莪术醇能显著抑制SGC7901细胞增殖;与对照组比较,莪术醇组细胞凋亡率明显升高(P<0.01),AIF、Endo G蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）;与对照组比较,同时给予莪术醇和Z-VAD-FMK组细胞凋亡率明显升高(P<0.01),AIF、Endo G蛋白表达明显升高（P<0.01）;但与莪术醇组比较无显著差异。［结论］ 莪术醇可上调AIF、Endo G表达,通过非Caspase依赖通路诱导胃癌SGC7901细胞凋亡。     

HDAC5对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响

  目的   探讨HDAC5在胃癌细胞中的表达及其对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。  方法   通过Western blot检测HDAC5和Twist1在胃癌细胞株及正常胃黏膜上皮细胞中的表达。使用MTT及流式细胞术分别检测HDAC5和Twist1对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。  结果   HDAC5和Twist1在胃癌细胞株中的表达量均明显高于正常胃黏膜上皮细胞（P < 0.05）。沉默HDAC5的表达可使胃癌SGC-7901细胞中Twist1表达降低,并抑制其增殖、促进凋亡;而过表达HDAC5作用相反（P < 0.05）。此外,沉默Twist1可抑制SGC-7901细胞的增殖、促进其凋亡（P < 0.05）。  结论   HDAC5可能通过上调Twist1的表达水平促进胃癌细胞的增殖、抑制凋亡,从而促进胃癌的发生发展。      

神经导向分子Semaphorin5A在人胃癌形成过程中作用的研究

目的:检测神经导向分子Semaphorin 5A在胃癌组织中表达,并探讨其在胃癌发生过程中的功能作用.方法:使用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测Semaphorin 5A在不同胃癌细胞系中的表达,使用Real-time RT-PCR和蛋白质印迹法检测Semaphorin 5A在30例胃癌组织和对应的胃黏膜组织中的表达;采用RNA干扰技术建立稳定Semaphorin 5A表达抑制胃癌细胞系,使用MTT法、软琼脂克隆形成实验和流式细胞仪分别检测Semaphorin 5A基因沉默后对胃癌细胞增殖、生长和凋亡的影响.结果:Semaphorin 5A mRNA在不同胃癌细胞系中高表达,Semaphorin 5A在30例胃癌组织中的表达水平明显高于对应的正常胃黏膜组织,P＜0.05;Semaphorin 5A表达沉默后能够抑制胃癌细胞的增殖、克隆性生长和促进胃癌细胞的凋亡.结论:Semaphorin 5A在胃癌组织中高表达,通过增强胃癌细胞的增殖、克隆性生长能力和抑制胃癌细胞的凋亡在胃癌的发生过程中发挥着重要作用.     

胃癌中MPZL1的表达及其对胃癌细胞增殖能力的影响

目的 探讨MPZL1在胃癌中的表达及其与胃癌患者预后的关系和对胃癌细胞增殖、克隆形成能力的影响。方法 利用GEPIA、UALCAN在线数据库分析MPZL1在多种恶性肿瘤中的表达情况，进一步运用KM Plotter和UALCAN数据库分析MPZL1对胃癌患者总生存时间的影响；采用Western blot检测胃癌细胞中MPZL1蛋白表达情况以及凋亡信号通路蛋白的变化；运用CCK-8和平板克隆实验分别检测MPZL1的表达变化对细胞增殖和克隆形成能力的影响。结果 在线数据库GEPIA发现MPZL1在多种恶性肿瘤中呈高表达趋势。UALCAN和KM Plotter数据库分析结果显示MPZL1在胃癌组织中高表达，可能与胃癌患者的总生存时间呈负相关；CCK-8和平板克隆形成实验结果显示，过表达MPZL1促进胃癌细胞的增殖和克隆形成能力（P<0.05）；Western blot结果显示，促凋亡蛋白Bad、Caspase-7表达水平在过表达组较对照组明显减少，在敲减组的表达水平高于对照组。结论 MPZL1在胃癌组织中高表达，且促进胃癌细胞的增殖、克隆形成能力，可能与抑制凋亡信号通路有关。     

选择性COX2抑制剂对胃癌细胞增殖的影响

背景与目的：越来越多证据表明非甾体类抗炎药（NSAIDs)可以减少消化道肿瘤的危险,其化学预防作用在于抑制了环氧全酶－2（COX－2）,但选择性COX－2抑制剂对胃癌细胞生长的影响及机制目前3仍不十分清楚。本研究目的是观察选择性COX－2抑制剂尼美舒利对SGC7901胃腺癌细胞PGE2释放及增殖和凋亡的影响。方法：采用MTT比色法和放射免疫分析法观察尼美舒利对SGC7901细胞增殖及前列腺素E（PGE2）释放的影响,采用透射电镜及流式细胞仪观察尼美舒利对SGC7901细胞诱导凋亡的作用及细胞周期的影响。结果：尼美舒利呈时间,剂量依赖性方式抑制SGC7901细胞增殖,减少PGE2释放;改变细胞周期的分布,增加G0／G1期细胞比例,呈剂量依赖性非线型方式诱导其凋亡。结论：尼美舒利可能通过减少PGE2释放,影响细胞周期分布和诱导细胞凋亡,从而抑制SGC7901胃腺癌细胞的增殖,选择性抑制COX－2发挥其抑制人胃癌细胞恶性增殖和诱导凋亡的作用。     

青蒿琥酯对人胃癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究青蒿琥酯对胃癌细胞增殖和凋亡的作用,探讨其对胃癌作用机制,为进一步的临床研究及应用提供依据。方法:采用MTT噻唑蓝法观察青蒿琥酯对胃癌细胞MGC-803生长增殖的影响,流式细胞仪和透射电镜检测药物作用前后细胞凋亡,逆转录-聚合酶链反应测定药物作用前后凋亡抑制基因survivin表达的变化。结果:青蒿琥酯在3.125~50μg/ml浓度范围内呈剂量依赖性方式抑制胃癌细胞MGC-803的生长增殖,并能显著抑制胃癌细胞survivin基因的表达。流式细胞仪检测出凋亡峰,透射电镜下可见部分MGC-803细胞呈典型的凋亡形态学改变。结论:青蒿琥酯能显著抑制胃癌细胞生长,并诱导胃癌细胞凋亡。     

DKK1 对胃癌AGS细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的：探讨沉默厚体1（DKK1）基因对胃癌AGS细胞增殖、周期和凋亡的影响及其作用机制。方法：构建DickkopfsiRNA（DKK1-siRNA）稳定转染细胞株,提取稳定转染细胞的RNA及总蛋白,qPCR和WB实验分别检测DKK1 mRNA及蛋白的表达水平。实验分为空白对照（Control）组、阴性对照（shNC）组及沉默DKK1（DKK1-shRNA）组,CCK-8 实验检测各组培养0、24、48、72、96、120、144 h 后AGS细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡水平。检索HPA数据库,分析DKK1 与胃癌临床病理的关系。结果：成功建立了稳定沉默DKK1 基因的胃癌细胞株AGS,证实DKK1-shRNA组细胞中DKK1 mRNA及蛋白表达水平分别比Control 组和shNC组降低到72%和47%（均P<0.05）。细胞增殖曲线显示,与Control 和shNC组比较,DKK1-shRNA组细胞培养72 h 后其增殖显著降低（P<0.05）。与shNC组比较,DKKl-shRNA组S期细胞从32.06%降低到25.87%,G2/M期细胞由8.49%上升到21.26%,细胞凋亡率从10.34%上升到20.65%,差异均有统计学意义（均P<0.05）。HPA数据库的分析显示,胃癌组织中DKK1 mRNA水平显著高于胃正常组织,DKK1 mRNA的高表达与胃癌患者生存率呈负相关（均P<0.05）。结论：沉默DKK1基因可抑制胃癌AGS细胞的增殖,阻滞细胞于G2/M期并促进细胞凋亡;DKK1在胃癌中发挥促癌作用。     

小檗胺对胃癌细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制

目的:探讨小檗胺对胃癌细胞（AGS和SGC-7901）增殖、凋亡的影响并探讨其分子机制。方法:利用MTT 实验检测胃癌细胞的增殖,利用集落形成实验检测胃癌细胞的生长, 流式细胞技术检测胃癌细胞的凋亡率以及细胞周期, Western blot检测凋亡相关蛋白的表达水平。结果:小檗胺（0~64 μg/ml）能够剂量依赖性以及时间依赖性的抑制 AGS和SGC-7901细胞的增殖 （P＜0.05）。集落形成实验结果显示小檗胺(32 μg/ml)能够抑制AGS和SGC-7901细胞的生长 （P＜0.05）。流式细胞实验显示,小檗胺(32 μg/ml)同时能够促进AGS和SGC-7901细胞的凋亡 （P＜0.05）,增殖G0/G1期细胞比例,降低S期细胞比例 （P＜0.05）。Western blot实验结果显示小檗胺(32 μg/ml)能够增加AGS和SGC-7901细胞的cleaved caspase-3,cleaved caspase-9以及Bax的蛋白水平,同时降低Bcl-2的蛋白水平 （P＜0.05）。结论:小檗胺能够抑制胃癌细胞的增殖,其机制可能与改变细胞周期以及促进细胞凋亡有关。     

三氧化二砷对胃癌BGC-823细胞增殖及细胞周期的影响

[目的]探讨三氧化二砷（AS2O3）对胃癌BGC-823细胞增殖的抑制作用及对细胞周期的影响。[方法]应用MTT方法检测三氧化二砷对胃癌BGC-823细胞增殖的抑制作用，流式细胞仪进行细胞周期解析及凋亡检测．[结果]三氧化二砷对胃癌BGC823细胞具有杀伤作用，且呈时间-浓度依赖性抑制肿瘤细胞的增殖．72h抑制细胞50％增殖的药物浓度约为3．3μmol／L，与对照组比差异显著（P=0．0048）；5μmol／LAs2O3作用24h，细胞形态学可见典型的凋亡细胞及M期阻滞；流式细胞仪进行细胞周期解析结果提示，G2/M期细胞由正常对照的25％增加到46．3％，出现了明显的G2/M期阻滞，亚二倍体凋亡细胞由4％增加到18％。[结论]三氧化二砷抑制胃癌细胞的增殖．诱导细胞周期阻滞及凋亡。     

LINC01018 通过 miR-297 调控胃癌 HGC-27 细胞的增殖、凋亡及放射 敏感性

目的：探讨长基因间非编码 RNA（long intergene non-coding RNA,LINC）01018 是否通过抑制 miR-297 调控胃癌 HGC-27细胞的增殖、凋亡及放射敏感性。方法：收集于青海省第五人民医院接受手术的胃癌患者（21例）及化疗抵抗胃癌患者 （19例）的癌组织和癌旁组织,以qPCR检测胃癌组织、化疗抵抗胃癌组织和胃癌HGC-27细胞中LINC01018、miR-297的表达。双 荧光素酶报告基因实验验证 LINC01018 与 miR-297 之间的靶向关系。在 HGC-27 细胞中转染 LINC01018 过表达质粒 pcDNA[1]LINC01018或miR-297抑制剂,或共转染pcDNA-LINC01018和miR-297模拟物,以qPCR检测验证细胞转染效果。MTT和克隆 形成实验检测转染后HGC-27细胞的增殖活力与克隆形成能力,流式细胞术检测转染后HGC-27细胞的凋亡率,克隆形成实验检 测各组转染后HGC-27细胞的放射敏感性,WB实验检测细胞中Ki67、cleaved-caspase3、pro-caspase3蛋白的表达。结果：与癌旁 组织或胃正常黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌组织、化疗抵抗胃癌组织和胃癌HGC-27细胞中LINC01018呈低表达、miR-297呈 高表达（均P<0.01）。LINC01018与miR-297存在靶向结合关系,LINC01018负向调控miR-297的表达。过表达LINC01018或敲 减miR-297可抑制HGC-27细胞的增殖活力与克隆形成能力、降低细胞存活率,促进细胞的凋亡、下调Ki67和pro-caspase3蛋白表 达水平、上调cleaved-caspase3蛋白表达水平、提高HGC-27细胞的放射敏感性（均P<0.01）。共转染pcDNA-LINC01018和miR[1]297模拟物可逆转过表达LINC01018对HGC-27细胞的所有上述作用,尤其可逆转其对HGC-27细胞的放射增敏作用（P<0.05或P<0.01）。结论：LINC01018通过下调miR-297表达抑制胃癌HGC-27细胞增殖而促进凋亡和增强细胞的放射敏感性,该作用与 Ki67和caspase3的表达变化有关。     

PFKFB3在胃癌中的表达及对胃癌细胞生长和凋亡的影响研究

背景与目的:6-磷酸果糖激酶-2同工酶3(6-phosphofructo-2-kinase 3,PFKFB3)与肿瘤的发生、发展密切相关,且对肿瘤细胞的生物学行为具有重要的调节作用。分析PFKFB3在胃癌组织及癌旁组织中的表达,并观察其对胃癌细胞生长和凋亡的作用及机制。方法:采用TCGA数据库分析72例在南昌大学第二附属医院及第三附属医院经外科手术切除的新鲜胃癌标本及其相应的癌旁组织中PFKFB3的表达,并分析PFKFB3的表达与胃癌预后的关系。进一步通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)及免疫组织化学法分析胃癌组织标本及癌旁组织标本中PFKFB3的表达。shNC及shPFKFB3质粒转染至胃癌细胞中,采用RTFQ-PCR和Western blot验证转染效率。分别通过细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)实验、EdU实验、流式细胞术和Western blot分析PFKFB3下调后对胃癌细胞的增殖能力、细胞周期变化和细胞凋亡的影响。最后采用Western blot分析PFKFB3影响胃癌细胞生长的机制。结果:TCGA数据库分析显示,胃癌组织中PFKFB3的表达明显高于癌旁组织(P<0.05),且PFKFB3高表达与胃癌患者较差的预后密切相关。另外,RTFQ-PCR、Western blot及免疫组织化学检测也同样证实PFKFB3在胃癌组织中高表达(P<0.01),且PFKFB3的表达升高与淋巴结转移及TNM分期密切相关(P<0.05)。沉默胃癌细胞中PFKFB3的表达后,其生长能力明显减弱(P<0.01),胃癌细胞凋亡比例增加(P<0.01),细胞周期G1期阻滞(P<0.01)。PFKFB3通过激活磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路而调控胃癌细胞的生长。结论:PFKFB3在胃癌组织中高表达,且与患者预后密切相关,沉默PFKFB3的表达后抑制胃癌细胞的生长并促进其凋亡,PFKFB3可能是胃癌靶向治疗的潜在生物标志物。     

PRMT5在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移能力的影响

背景与目的:蛋白精氨酸甲基转移酶5(protein arginine methyltransferase 5,PRMT5)是一种能调控细胞周期的酶,对细胞分裂周期有影响,可以通过调控细胞分裂周期影响细胞的增殖与凋亡。探讨PRMT5在胃癌中的表达及对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移能力的影响。方法:采用蛋白质印迹法(Western blot)检测2016年5月-2019年1月在海南省肿瘤医院确诊为胃癌并进行手术治疗的患者的胃癌组织及其癌旁组织(距离癌组织>5 cm)标本(共88例)中的PRMT5的表达,分析PRMT5相对表达量与胃癌临床特征的关系;用PRMT5小干扰RNA(PRMT5-siRNA)和阴性对照(siRNA-NC)转染人胃癌细胞系SGC-7901,以未转染的SGC-7901细胞作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和Western blot检测转染后细胞中PRMT5 mRNA表达和蛋白水平;采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖;采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡;采用划痕实验检测细胞迁移能力;采用Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力;采用Western blot检测cleaved caspase 3、磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)和磷酸化AKT(phosphorylated-AKT,p-AKT)蛋白表达。结果:PRMT5在胃癌组织中的表达高于癌旁组织(P<0.01);PRMT5表达水平与胃癌的病理学分级、分期、淋巴结转移有关(P均<0.05);转染后siRNA-NC组和对照组PRMT5 mRNA和蛋白表达量、胃癌细胞的增殖率、凋亡率、cleaved caspase 3、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达量、划痕愈合率、细胞侵袭数差异均无统计学意义(P>0.05),转染后siRNA-NC组和对照组PRMT5 mRNA和蛋白表达量、胃癌细胞增殖率、PI3K、p-AKT、AKT蛋白表达量、划痕愈合率、细胞侵袭数均高于PRMT5-siRNA组,而凋亡率、cleaved caspase 3低于PRMT5-siRNA组(P均<0.05)。结论:PRMT5在胃癌组织中表达明显升高,其表达水平与胃癌的发生、发展、转移恶化密切相关,下调PRMT5的表达可明显减弱胃癌细胞的增殖、迁移能力,同时促进胃癌细胞的凋亡。     

长链非编码RNA MEG3抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖的研究

目的:探讨长链非编码RNA MEG3在临床胃癌组织及细胞中的表达情况,以及过表达MEG3对人胃癌细胞增殖能力的影响。方法:采用实时定量PCR检测人胃癌组织及细胞系中MEG3的表达,并结合病理资料分析胃癌组织MEG3表达与临床病理特征之间的关系。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和克隆形成实验检测过表达MEG3前后胃癌细胞增殖的变化。结果:相对于正常胃组织及细胞,在胃癌组织和细胞中MEG3的表达水平明显下调。胃癌组织中MEG3表达与组织学分级、肿瘤浸润深度和TNM分期相关,但与年龄、性别及区域淋巴结转移无关。在SGC-7901细胞中转染MEG3过表达质粒后能显著上调MEG3的表达水平。过表达MEG3能明显抑制胃癌细胞的增殖能力。结论:MEG3对胃癌细胞增殖的调控至关重要,过表达MEG3能明显抑制胃癌细胞的增殖能力。提示MEG3的表达下调可能在胃癌的发生、发展中起重要作用。     

胃癌组织中高表达的 miR-504 通过 TP53INP1 调控胃癌细胞 BGC-823 的生物学行为

目的：探究微小 RNA-504（miRNA-504）在胃癌（GC）组织中的表达水平及其对GC细胞生物学行为的调控机制。方法：收集2020年6月至2020年12月期间三亚中心医院外科收治的48例胃癌患者的肿瘤组织及癌旁组织标本,qPCR检测组织中 miR-504、肿瘤蛋白 53 诱导型核蛋白 1（tumor protein 53-induced nuclear protein 1,TP53INP1）mRNA 的水平 ,WB 法检测TP53INP1水平。体外培养人胃癌细胞 BGC-823,分为对照组（正常培养的 BGC-823细胞）、miR-504 mimic组、mimic-NC组、miR-504 inhibitor组、inhibitor-NC组、miR-504 inhibitor+si-NC组、miR-504 inhibitor+si-TP53INP1组,qPCR检测细胞中miR-504和TP53INP1 mRNA的表达,MTT法、流式细胞术、划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测各组细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力,WB法检测各组细胞中增殖、迁移和侵袭相关蛋白（Cyclin D1、E-cadherin、MMP-2、MMP-9）以及TP53INP1的表达。双荧光素酶报告基因实验进一步验证miR-504与TP53INP1 mRNA的靶向关系。结果：与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-504的表达显著升高（P<0.05）,而TP53INP1 mRNA 和蛋白表达水平显著降低（P<0.05 或P<0.01）,miR-504和TP53INP mRNA 两者的表达呈负相关（P<0.01）。与对照组相比,miR-504 mimic组BGC-823细胞中miR-504的表达显著升高（P<0.05）、TP53INP1 mRNA和蛋白的表达显著降低（均P<0.05）,且细胞增殖率、划痕愈合率、侵袭入Transwell小室下层的细胞数量,Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达均显著增加,细胞凋亡率和E-cadherin蛋白表达均显著降低（均P<0.05）。转染miR-504 inhibitor能显著下调BGC-823中miR-504的表达、上调TP53INP1 mRNA和蛋白的表达,抑制细胞的增殖、迁移与侵袭能力而促进细胞凋亡（均P<0.05）;而下调TP53INP1的表达可明显减弱miR-504下调对BGC-823细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用（P<0.01）。miR-504高表达能明显抑制野生型TP53INP1质粒的荧光素酶活性（P<0.05）。结论：miR-504在胃癌组织中呈高表达,下调miR-504可抑制胃癌BGC-823细胞的恶性生物学行为而促进其凋亡,其作用机制可能与靶向调控TP53INP1的表达有关。     

蒿甲醚对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用研究

目的:研究蒿甲醚对胃癌细胞（AGS和SGC-7901）的增殖、侵袭以及迁移的影响并探讨其分子机制。方法:分别利用MTT、集落形成试验检测胃癌细胞的活力和生长;流式细胞技术检测胃癌细胞的凋亡率;利用细胞侵袭和划痕愈合试验检测胃癌细胞的侵袭和迁移;Western blot检测相关蛋白的表达水平。结果:蒿甲醚（0~800 μmol/L）能够浓度和时间依赖性的抑制 AGS和SGC-7901细胞的增殖（P＜0.05）。集落形成试验以及流式细胞术结果显示蒿甲醚（400 和 600 μmol/L）能够抑制AGS和SGC-7901细胞的生长以及促进细胞凋亡（P＜0.05）。细胞侵袭和划痕愈合试验发现蒿甲醚（400 和 600 μmol/L）能够抑制AGS和SGC-7901细胞的侵袭和迁移（P＜0.05）。Western blot结果显示蒿甲醚(400 和 600 μmol/L)能够增加AGS和SGC-7901细胞的cleaved caspase-3,cleaved caspase-9以及Bax的蛋白水平（P＜0.05）;同时能够抑制N-cadherin 和vimentin的蛋白表达并促进E-cadherin蛋白的表达。结论:蒿甲醚可以显著抑制胃癌细胞的增殖、侵袭以及迁移,其机制可能是与促进细胞凋亡以及抑制上皮间质转化有关。     

CPNE7通过上皮间质转化影响胃癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨CPNE7在胃癌组织和细胞中的表达及影响胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法:基于生物信息学数据库GEPIA 从转录水平分析CPNE7在胃癌及癌旁正常组织中的表达差异。qRT-PCR法检测CPNE7在3种胃癌细胞系(AGS、MKN-45、HGC-27)和胃黏膜正常上皮细胞(GES-1)中的表达,选择表达量相对较高的AGS细胞作为后续实验细胞。通过慢病毒转染AGS细胞敲减CPNE7的表达,根据不同处理分为RNAi-vector组、RNAi-1组、RNAi-2组、RNAi-3组,qRT-PCR、Western blot验证细胞转染效率,选择敲减效率最有效的RNAi-1(实验组)和RNAi-vector(对照组)进行后续实验。采用CCK-8法检测细胞活力,EdU和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力,划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白(Caspase3、Caspase7、Caspase9、Bax、Bcl-2)及上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)的表达水平。结果:CPNE7在胃癌组织中的表达明显高于正常组织(P＜0.05)。与正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)相比较,CPNE7在胃癌细胞中明显高表达(P＜0.05),在AGS胃癌细胞中CPNE7相对表达量最高（P＜0.001)。与RNAi-vector组相比较,敲减CPNE7可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭（P＜0.05)。与RNAi-vector组相比较,敲减CPNE7可上调细胞凋亡相关蛋白Caspase3、Caspase7、Caspase9、Bax的表达,下调Bcl-2的表达（P＜0.05)。与RNAi-vector组相比较,敲减CPNE7可增加上皮标志物蛋白(E-cadherin)的表达水平(P＜0.01),降低间质标志物蛋白(N-cadherin、Vimentin)的表达水平（P＜0.01)。结论:CPNE7在胃癌组织和细胞中表达上调,敲减CPNE7可通过影响EMT进程抑制胃癌细胞增殖、迁移与侵袭,其可能成为胃癌的潜在分子标志物。     

Exogenous morphine inhibits human gastric cancer MGC- 803 cell growth by cell cycle arrest and apoptosis induction

Morphine is not only an analgesic treating pain for patients with cancer but also a potential anticancer drug inhibiting tumor growth and proliferation. To gain better insight into the involvement of morphine in the biological characteristics of gastric cancer, we investigated effects on progression of gastric carcinoma cells and the expression of some apoptosis-related genes including caspase-9, caspase-3, survivin and NF-κB using the MGC-803 human gastric cancer cell line. The viability of cells was assessed by MTT assay, proliferation by colony formation assay, cell cycle progression and apoptosis by flow cytometry and ultrastructural alteration by transmission electron microscopy. The influences of morphine on caspase-9, caspase-3, survivin and NF-κB were evaluated by semi-quantitative RT-PCR and Western blot. Our data showed that morphine could significantly inhibit cell growth and proliferation and cause cell cycle arrest in the G2/M phase. MGC-803 cells which were incubated with morphine also had a higher apoptotic rate than control cells. Morphine also led to morphological changes of gastric cancer cells. The mechanism of morphine inhibiting gastric cancer progression in vitro might be associated with activation of caspase-9 and caspase-3 and inhibition of survivin and NF-κB.     

Identification of retinoic acid-regulated nuclear matrix-associated protein as a novel regulator of gastric cancer

Background: Retinoic acid-regulated nuclear matrix-associated protein (RAMP) is a WD40 repeat-containing protein that is involved in various biological functions, but little is known about its role in human cancer. This study aims to delineate the oncogenic role of RAMP in gastric carcinogenesis.Methods: RAMP expression was examined by real-time quantitative RT-PCR, immunohistochemistry and western blotting. Inhibition of RAMP expression was performed by siRNA-mediated knockdown. The functional effects of RAMP on cell kinetics were measured by cell viability assay, colony formation assay and flow cytometry. Cell lines stably expressing RAMP were established to investigate the oncogenic effects of RAMP in vitro.Results: Ramp was readily expressed in all seven gastric cancer cell lines and was significantly increased in human gastric cancer tissues when compared with their adjacent non-cancerous tissues (P<0.001). In keeping with this, expression of RAMP protein was higher in gastric cancer tissues compared with their adjacent non-cancerous tissues, whereas moderate protein expression were noted in intestinal metaplasia. Knockdown of RAMP in gastric cancer cells significantly reduced cell proliferation (P<0.01) and soft agar colony formation (P<0.001), but induced apoptosis and G₂/M arrest. In additional, knockdown RAMP induced cell apoptosis is dependent on functional accumulation of p53 and p21 and induction of cleaved caspases-9, caspases-3 and PARP. Strikingly, overexpression of RAMP promoted anchorage-independent cell growth in soft agar.Conclusion: Our findings demonstrate that RAMP plays an oncogenic role in gastric carcinogenesis. Inhibition of RAMP may be a promising approach for gastric cancer therapy.